贵州省即食米面制品食源性致病菌污染及病原特征分析

目的 了解贵州省即食米面制品中食源性致病菌污染状况和病原学特征,为细菌性食源性疾病的防治提供参考依据。方法 2014—2019年在贵州省的88个县（市、区）采集即食米面制品1128份,依据食品安全国家标准（GB4789）进行五种食源性致病菌的检测;采用荧光定量PCR法和ELISA法分别检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因及蛋白,普通PCR法检测蜡样芽胞杆菌毒力基因。结果 1128份即食米面制品有130份样品检出食源性致病菌,检出率为11.52%,分别是蜡样芽胞杆菌7.71%,金黄色葡萄球菌3.10%,沙门氏菌0.27%,单核细胞增生李斯特氏菌0.44%,未检出致泻大肠埃希氏菌。分离的35株金黄色葡萄球菌有65.71%携带肠毒素基因,54.29%呈肠毒素蛋白阳性。87株蜡样芽胞杆菌都至少携带两种以上毒力基因,同时携带hblACD及nheABC的有29.88%。结论 贵州省即食米面制品存在多种食源性致病菌污染,蜡样芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌污染率较高且携带多种毒力基因,存在较大食源性疾病风险,监管部门应加强对即食米面制品的加工制作管理。     

食品中金黄色葡萄球菌检出率及肠毒素与耐药性分析

目的研究温州市龙湾区6类食品中金黄色葡萄球菌污染状况及产肠毒素特性与耐药性,为防止金黄色葡萄球菌引起的食物中毒及为临床用药提供依据。方法按照《食品微生物学检验》(GB 4789.1—2010)对样品进行金黄色葡萄球菌检测,分离出的菌株用PCR法分析肠毒素基因(SEA~SEE),同时用VITEK2 Compact进行药敏试验。结果在540份食品样品中分离出金黄色葡萄球菌31株,检出率为5.74%,其中肉与肉制品和餐饮食品中检出率较高,分别为11.25%和6.88%。对31株金黄色葡萄球菌进行肠毒素PCR基因检测,检出12株产肠毒素菌株,占38.71%;10株携带SEA,其中2株同时携带SEC,2株携带SEB。31株金黄色葡萄球菌对氨苄西林、青霉素、红霉素和头孢西丁的耐药率为90.32%、87.10%、48.39%和48.39%,并表现出多种耐药谱。结论食品中存在金黄色葡萄球菌污染,尤其在肉与肉制品和餐饮食品中较严重;检出产肠毒素金黄色葡萄球菌的比例较高,应引起足够重视;食品中金黄色葡萄球菌对多种药物耐药,临床治疗应选择敏感药物。     

89株不同来源金黄色葡萄球菌耐药及肠毒素基因分析

目的分析宁波市不同来源(食品、食物中毒、环境物表)金黄色葡萄球菌对常用抗生素的耐药性及肠毒素基因携带情况,为临床合理用药提供依据,预防和控制由该菌引起的相关疾病。方法采用Kirby-Bauer纸片扩散法检测金黄色葡萄球菌对17种临床常用抗生素的敏感性。采用mini-VIDAS检测肠毒素,同时用常规PCR方法扩增分析不同来源金黄色葡萄球菌携带sea、seb、sec、sed、see 5种肠毒素基因情况。结果 89株金黄色葡萄球菌菌株有26株检出肠毒素基因,检出率为29.2%,而来源于食物中毒、食品、环境物表菌株肠毒素基因检出率分别为100.0%、22.9%、10.3%。食物中毒菌株肠毒素基因主要为seb。药敏检测结果显示对青霉素(83.1%)和红霉素(33.7%)耐药性较高,菌株存在多重耐药性。结论食源性金黄色葡萄球菌产毒素能力较强,宁波地区食物中毒菌株肠毒素基因主要为seb。金黄色葡萄球菌对多种药物耐药,提示安全用药的重要性。     

食品中金黄色葡萄球菌污染状况及其肠毒素基因分析

目的了解南平市食品中金黄色葡萄球菌污染状况及该菌携带肠毒素的基因分型,为食源性疾病的防控提供依据。方法共采集8大类食物样品共454份,依据GB 4789.10-2010对样品进行金黄色葡萄球菌培养、分离和鉴定,用Real-time PCR法检测菌株携带肠毒素SEA-SEE情况。结果454份样品中检出金黄色葡萄球菌38株(8.4%),其中肉与肉制品和速冻米面制品的检出率13.3%,其次是餐饮食品(9.3%)、自制饮料和食用冰(8.8%)、冷冻饮品(3.3%),婴幼儿食品、乳及乳制品和膨化食品均未检出。38株金黄色葡萄球菌中,产肠毒素阳性8株(21.1%),主要携带SEA、SEB和SED。结论南平市部分食品受一定程度金黄色葡萄球菌的污染,肉与肉制品和速冻米面制品的污染情况较严重,控制生肉制品类的污染,特别应防止其交叉污染,可有效控制该菌引起食物中毒的发生,但更应重视的直接入口食品的污染。     

广州市食源性金黄色葡萄球菌肠毒素及耐药分析

目的 了解广州地区食品和食物中毒样品中金黄色葡萄球菌产肠毒素和耐药性情况。 方法 按食品安全国家标准和相关文献对2010-2016年广州市疾病预防控制中心微生物实验室从食品和食物中毒样品中分离并保存的118株金黄色葡萄球菌进行了肠毒素和药敏试验。 结果 118株金黄色葡萄球菌有70株产肠毒素,产毒率为59.32%,快餐类食品和食物中毒样品的产毒率偏高。以荧光PCR方法对70株肠毒素阳性的菌株进行肠毒素A-E分型,其中SEA检出率为29.20%、SEB 17.70%、SEC 11.50%、SED 15.93%、SEE 25.67%;携带两种或以上毒力基因的产毒菌株占41.42%。在受检的菌株中,有104株菌不同程度的对一种或多种的抗生素有抗性,占88.14%;青霉素G耐药率高达71.19%;检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)5株,占4.24%,mecA耐药基因检测阳性。 结论 广州市食源性金黄色葡萄球菌中产肠毒素菌株较多,且存在耐药株,甚至MRSA,应加强对广州市食品安全风险的监管。     

市售生鲜肉食品中金黄色葡萄球菌基因分型与毒素基因检测

【目的】了解市售生鲜肉中金黄色葡萄球菌的污染、群体遗传多样性和毒素基因携带规律,为金黄色葡萄球菌的污染防控提供依据。【方法】按照GB4789.10—2016对金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,采用多位点序列分型方法(MLST)进行分子分型,利用PCR方法检测11种毒素基因的携带情况。【结果】148份样品中有56份检出金黄色葡萄球菌,污染率为30.1%,分离到56株菌。56株菌可分成11种序列型(STs),其中ST7(28.6%)是主要流行的序列型,其他优势序列型分别为ST188(23.2%),ST1(8.93%)和ST88(8.93%)。6种毒素基因在27株菌(48.2%)中检出阳性结果,其中杀白细胞素基因pvl(26.8%)检出率最高,其次为肠毒素基因sec(12.5%),seh(10.7%),sea(7.1%)和sed(5.4%)。【结论】金黄色葡萄球菌在市售生鲜肉中具有较高的污染率,丰富的遗传多样性表明菌株污染来源广泛,与食物中毒和临床感染相关的毒素基因具有较高的分布比例,应加强对生鲜食品中金黄色葡萄球菌的监控。     

温州市食源性金黄色葡萄球菌耐药分析及肠毒素、毒素基因研究

目的了解温州市食源性金黄色葡萄球菌的耐药趋势、肠毒素及其基因分布情况,为金黄色葡萄球菌食源性疾病的预防控制提供参考。方法采用纸片法进行药敏试验,用mini-VIDAS法和PCR法分别进行肠毒素及其基因的检测。结果 100株金黄色葡萄球菌,其中97株(97.00%)均有不同程度的耐药,对青霉素耐药率最高(92.00%),其次为甲氧苄啶(42.00%)、红霉素(34.00%),多重耐药率达29.90%;43株(43.00%)肠毒素阳性,奶粉及餐食阳性率较高;40株检出肠毒素基因,总检出率为40.00%,其中seb基因检出率最高。形成16种基因组合,以seb基因型为主(10.00%),同时检出2种及以上肠毒素基因的菌株占20.00%。结论温州市食源性金黄色葡萄球菌具有较强耐药性,且其产肠毒素率及毒素基因携带率较高,存在潜在的食品安全隐患。     

金黄色葡萄球菌食物中毒的多重PCR快速检测及产肠毒素耐药分析

目的对一起疑似金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒事件进行实验室检测和鉴定。方法采集7份环境涂抹物,4份食品和1份病例样本,提取样品总DNA进行14种食源性致病菌的多重PCR检测,对样品进行葡萄球菌肠毒素的ELISA检测。同时按照《食品安全国家标准食品卫生微生物学检验》进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定,分离得到菌株进行耐药分析和肠毒素基因分型(SEA-SEE)。结果多重PCR和ELISA检测台面涂抹物和病例样本中金黄色葡萄球菌和肠毒素均为阳性。分离出3株和10株金黄色葡萄球菌,分别携带肠毒素基因sea和seb。其中台面涂抹物和病例样本都有携带sea毒素基因的分离株,携带同种肠毒素基因的菌株耐药结果一致,所有分离株对氨苄西林和青霉素耐药。结论该起食物中毒由金黄色葡萄球菌肠毒素引起,并存在耐药现象,相关部门应加强对小型饭馆的卫生监督管理。     

福州某养殖场金黄色葡萄球菌的污染现状及耐药性研究

目的了解福州某养殖场中金黄色葡萄球菌的污染状况及耐药情况。方法 2015、2016年于某养殖场猪育肥前期后期分别采集生猪活体的猪生物活体、猪场环境表面涂抹、饲料等样品158份,进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定、肠毒素的分型及耐药性实验。结果 158份样品中共有13份样品检出金黄色葡萄球菌,检出率为8.23%,其中育肥前期的79份样品中检出3株金黄色葡萄球菌,检出率为3.80%;育肥后期的79份样品检出10株金黄色葡萄球菌,检出率为12.66%(P0.05)。13株菌株中产肠毒素阳性率为92.31%,以SEE型居多占50.00%,SEA的检出率为25.00%、SEC和SEB的检出率为41.67%、SED的检出率为33.33%。13株菌株中对环丙沙星、阿莫西林、青霉素、四环素、氯霉素、庆大霉素、苯唑西林、链霉素、头孢他啶、红霉素等常见抗生素表现出高度耐药,高达100%;头孢噻肟耐药率53.80%、磺胺复合物耐药率为46.15%。结论养殖场育肥后期金黄色葡萄球菌的污染率高于育肥前期;13株金黄色葡萄球菌多重耐药现象较严重,产肠毒素特性较高。     

2010年三门峡市食品中食源性致病菌污染监测

目的了解三门峡市食品中食源性致病菌的污染状况及分布,为预防和控制食源性疾病提供依据。方法按照GB4789-2010食品卫生微生物学检验》方法及《河南省食源性致病菌作业指导书》技术要求进行增菌、分离、鉴定及菌种保存。2010年对市区及辖区县农贸市场、超市食品进行沙门菌、单增李斯特菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、空肠弯曲菌、大肠杆菌O157等致病菌进行抽样监测,共132份。结果 132份样品中共检出致病菌12株,总检出率为9.10%(12/132)。其中单增李斯特菌检出5株,检出率最高(3.80%),其次为金黄色葡萄球菌检出4株(3.03%)、副溶血性弧菌2株(1.52%),沙门菌检出1株(0.76%),未检出空肠弯曲菌和大肠艾希氏菌O157。10大类食品中,速冻米面制品和生鲜肉污染率最高,分别为25.00%和16.70%。结论三门峡市居民消费食品中存在食源性致病菌污染,其中速冻米面制品、生鲜肉、凉拌菜、沙拉和冰激凌是主要污染食品品种,单增李斯特、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌和沙门氏菌是污染食品的主要病原菌。     

金黄色葡萄球菌食物中毒菌株肠毒素检测及基因分析

目的:了解一起食物中毒中分离到的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)的生物学特性及其肠毒素基因检测。方法:采用VITEK-32全自动微生物鉴定/药敏分析系统对分离到的金黄色葡萄球菌菌株进行生化鉴定和药敏试验,并采用mini-VIDAS全自动荧光酶标免疫仪对菌株进行肠毒素检测,再采用PCR技术对产肠毒素的菌株进行基因分型。结果:总共分离到的19株金黄色葡萄球菌,所有分离株均对青霉素G耐药,均分泌β-内酰胺酶,肠毒素基因分型检测均为SEA与SEE。结论:19株分离株均携带肠毒素,经鉴定均为SEA与SEE肠毒素混合型,由此对食物中毒的原因有一个较圆满的解释。     

多重PCR技术在检测食源性金黄色葡萄球菌 肠毒素基因中的应用

摘要:目的　金黄色葡萄球菌A、B、C、D和E型肠毒素是引起食源性疾病的主要类型,采用多重PCR技术分析食源性金黄色葡萄球菌分离株肠毒素基因携带状况。方法　以19株食源性金黄色葡萄球菌分离株为研究对象,利用多重PCR技术对核酸酶基因以及肠毒素A、B、C、D和E型基因进行检测。结果　19株菌中均检出金黄色葡萄球菌特异性核酸酶基因,与传统菌落分离培养鉴定结果一致;9株菌含肠毒素SEA基因,1株同时含SEA和SEB基因,没有检测到肠毒素C、D和E基因。结论　在19株食源性金黄色葡萄球菌分离株中,10株携带肠毒素基因,以携带肠毒素A基因为主。     

金黄色葡萄球菌食品和病人分离株肠毒素基因和耐药性比较

目的：对金黄色葡萄球菌食品（不含生牛奶）分离株和病人分离株的肠毒素基因进行分型和耐药性检测,比较两种分离菌株的肠毒素基因分布和耐药性差异。方法：用国标方法分离鉴定金黄色葡萄球菌,VITEK32生化验证,PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因（肠毒素SEA-SEJ基因）,VITEK32测定分离菌株抗生素的耐药性。结果：从病人分离的80株金黄色葡萄球菌检测到9种基因。肠毒素基因携带率为85.0%,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占76.3%,含传统肠毒素基因（SEA-SEE）的菌株占43.8%,有新发现肠毒素基因（SEG-SEJ）的菌株占71.3%。从食品中分离的51株金黄色葡萄球菌检测到7种肠毒素基因。肠毒素基因携带率为68.7%,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占21.6%。有SEA基因的占27.5%,含其它传统的毒素基因类型（SEB-SEE）基因的菌株占23.5%,携带新发现的毒素基因SEG、SEH、SEI的菌株只占9.8%。金黄色葡萄球菌病人分离株与食品分离株的耐药谱和耐药率有较大差异。结论：金黄色葡萄球菌食品分离株和病人分离株的肠毒素基因分布不同,其耐药性有明显区别。     

Phenotypic characterization and prevalence of enterotoxin genes in Staphylococcus aureus isolates from outbreaks of illness in Chengdu City

Staphylococcus aureus produces a spectrum of enterotoxin that is recognized as the main reason for causing staphylococcal food poisoning. The aim of the current study was to investigate the phenotypic characteristics and enterotoxin genotypes of S. aureus isolated from food poisoning sufferers. On the basis of the amplification of 16S rRNA and nuc gene specific to S. aureus assay and the phenotype (hemolytic activity, thermal stable nuclease [Tnase] test, and biofilm formation), all isolates were identified as S. aureus. To genotypically characterize S. aureus isolates, genes encoding staphylococcal enterotoxin (sea, seb, sec, sed, see, seg, seh, sei, sej, sek, sem, sen, ser, and seu) were investigated by using polymerase chain reaction technique. The results showed that the eight isolates of S. aureus had different enterotoxin genotypic characteristics, which was the main cause of food poisoning. One isolate contained 10 enterotoxin genes, and the other 7 isolates carried 3 or more enterotoxin genes. The frequency of the newly identified enterotoxin genes (seg-seu) was higher than classical genes (sea-see). Overall, multi-gene detection rates were 75% (for sek, ser, and seu); 50% (for sea and sem); 37.5% (for sen, seg, and sei); and 12.5% (for seb, sec, sed, and sej), respectively. The see and seh gene were not detected in any isolates. The current study provided the exact distribution of enterotoxin genes in eight S. aureus strains from food poisoning sufferers, which indicated that the pathogenicity of the newly identified enterotoxin should be highlighted. The need for prevention of food poisoning occurrences caused by enterotoxin of S. aureus should be reinforced.     

日常食品及食物中毒样本中金黄色葡萄球菌肠毒素的分型检测分析

目的通过对北京市海淀区日常食品及食物中毒样本检出的金黄色葡萄球菌进行肠毒素分型检测,比较两种分离菌株的肠毒素分布差异。方法实验所用的金黄色葡萄球菌为2007-2012年海淀区日常食品和食物中毒样本中分离检出的菌株,依据GB 4789.10-2010采用ELISA方法测定金黄色葡萄球菌肠毒素(SEA-SEE)。结果 127株金黄色葡萄球菌中有108株肠毒素阳性,产肠毒素阳性率为85.0%。日常食品检出金黄色葡萄球菌93株,76株菌产肠毒素,产肠毒素阳性率为81.7%;食物中毒样本检出金黄色葡萄球菌34株,32株菌产肠毒素,产肠毒素阳性率为94.1%。产1种肠毒素和同时产3种肠毒素的菌株分别是47、37株,在产毒株中分别占43.5%和34.3%。食物中毒分离株产SEA和SED的比例(65.6%、65.6%)大于日常食品分离株(32.9%、30.3%).共有98株菌产SEE,在产毒株中占90.7%,肠毒素类型分布由高到低依次为E、A、D、C、B。结论食源性金黄色葡萄球菌产毒素能力较强,金黄色葡萄球菌食物中毒分离株和日常食品分离株在肠毒素分布上有差异。     

一起食物中毒金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测

目的：检测从食物中毒中分离的金黄色葡萄球菌的肠毒素基因，明确肠毒素的基因型。对所分离的金黄色葡萄球菌进行药敏试验，检测其耐药性。方法：应用PCR扩增金黄色葡萄球菌SEA—SEJ基因，电泳检测扩增结果；用VITEK32检测药敏结果。结果：检测到金黄色葡萄球菌的肠毒素基因SEG和SEI，菌株的耐药性不强。结论：金黄色葡萄球菌的肠毒索SEG和SEI可能是这起食物中毒的因子。     

Enterotoxin A and B production in strains of Staphylococcus aureus isolated from human beings and foods.

The production of enterotoxin A and B by strains of Staphylococcus aureus isolated from nasal swabs of healthy carriers, from lesions of hospital patients and from foods unconnected with outbreaks of food-poisoning was investigated. Sixty-six strains of S. aureus were obtained from human beings, two produced enterotoxin A, 45 produced enterotoxin B, seven produced enterotoxins A + B. Thirty-six strains were isolated from 111 samples of food, one produced enterotoxin A, 16 produced enterotoxin B. The relative incidence of A, B and A + B enterotoxigenicity was assessed.     

四起金黄色葡萄球菌引起的食物中毒及毒素分析

目的对4起食物中毒的10株菌株进行金黄色葡萄球菌的鉴定及毒素分析。方法按照食品卫生检测标准GB 4789.10-94、《葡萄球菌食物中毒诊断标准及处理原则》W S/T 80-1996及葡萄球菌肠毒素检测试剂盒说明书进行操作。结果这10株菌均鉴定为金黄色葡萄球菌,并检出葡萄球菌A型肠毒素,且其中1株同时检出葡萄球菌C型肠毒素。结论应加强食品卫生的管理工作,防止金黄色葡萄球菌污染食品,防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成。     

一起金黄色葡萄球菌食物中毒病原学检测及耐药分析

目的实验室检测分析福州市一起食物中毒的病原菌及耐药情况。方法参照WS/T 81-1996、WS/T 13-1996、WS/T 80-1996、WS 271-2007附录B2和GB/T 4789. 5-2012标准。结果该起食物中毒标本共检出3株金黄色葡萄球菌。这些菌株均产肠毒素,其中ZD2017-13和ZD2017-14 2株菌产肠毒素C,ZD2017-16产肠毒素B。这3株菌均为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MARS),均对头孢西丁、氨苄西林、苯唑西林和青霉素耐药。结论从该起食物中毒标本中分离得到的金黄色葡萄球菌均产肠毒素,为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,且对多种抗生素耐药。     

Prevalence of enterotoxin and toxic shock syndrome toxin genes in Staphylococcus aureus isolated from milk of cows with mastitis

Staphylococcus aureus isolated from milk of cows with mastitis were evaluated for the prevalence of 16 enterotoxin genes (sea-see and seg-seq) and toxic shock syndrome toxin gene (tsst-1). Of 78 S. aureus examined, 73 (93.6%) were positive for one or more enterotoxin genes and these were divided into 36 groups by the presence of different enterotoxin genes. Enterotoxin genes including sen (84.6%), sem (71.8%), sei (60.3%) and sed (52.6%) were found frequently, while seg (24.4%), seq (16.7%), seo (12.8%), and seb (1.3%) were found at lower frequencies. Toxic shock syndrome toxin (tsst-1) gene was detected in 20 (25.6%) isolates and was always found in combination with other enterotoxin genes. The majority (88.5%) harbored more than one enterotoxin gene in different combinations. Eight S. aureus isolates (10.3%) were positive for sed, sei, sem, and sen; six (7.7%) possessed sed, seg, sei, sem, sen, and tsst-1; five (6.4%) had sei, sem, and sen; and four (5.1%) had sei, and sen. One isolate was positive for seb along with other SE genes including sed, seh, sem, sen, seq, and tsst-1. None of the isolates carried other enterotoxin genes (sea, sec, see, sej, sek, sel, and sep). PFGE profiles revealed 15 distinct pulsotypes among the 78 S. aureus isolates evaluated. PFGE and enterotoxin gene profiles did not match with each other because a single pulsotype carried different combinations of enterotoxin genes. The majority of S. aureus isolated from milk of mastitic cows carried newly described SE genes sem, sen and sei along with classical SE genes, sed and tsst-1. This is the first report describing the high prevalence of newly described enterotoxin genes, sem and sen in S. aureus from bovine mastitis. The high prevalence of enterotoxin genes and tsst-1 in S. aureus may be important as it is relevant to udder pathogenicity and food hygiene.