国产与进口胎牛血清培养MDCK细胞及分离流感病毒的效果比较

目的比较某品牌国产与进口胎牛血清用于培养MDCK细胞及分离流感病毒的效果。方法除胎牛血清外,在其它条件相同的情况下培养同批MDCK细胞,比较贴壁情况和细胞形态。选择在两种培养条件下形态良好的细胞,接种流感阳性标本,比较二者的阳性分离率差异及病毒效价。结果在细胞贴壁情况、形态（χ2=22.76,P〈0.05）及标本阳性分离率、病毒效价方面（χ2=7.52,P〈0.05）,进口胎牛血清优于国产试剂,试验结果差异有统计学意义。结论为提高流感监测的阳性分离率,提倡使用进口试剂。     

连云港市流感流行期病毒分离结果分析

目的:了解连云港市流感流行动态,探索流行规律,为流感防治提供科学依据.方法:采集流感样病例鼻咽拭子标本,用狗肾细胞(MDCK)进行病毒分离,采用血凝抑制方法(HI)进行流感病毒型别鉴定.结果:490份哨点医院流感样病例鼻咽拭子标本,分离流感病毒49株,阳性分离率为10.00%;经分型鉴定,新甲H1N1亚型14株(占28...     

2012-2013年上海市普陀区流感病原学分析

目的 了解上海市普陀区流行性感冒流行病学特征,评价流感检测方法并为流感防控提供科学依据。方法 对2012年1月至2013年12月上海市普陀区流感监测哨点医院流感样病例(Influent Like Illness,ILI)采集鼻咽拭子,采用实时荧光定量PCR对鼻咽拭子进行核酸检测,流感病毒核酸检测阳性标本采用MDCK细胞进行分离培养,对分离到的毒株采用血凝抑制试验(HI)进行型别和亚型鉴定。结果 2012年1月至2013年12月共采集流感样病例鼻咽拭子1 707例,其中流感病毒核酸检测阳性449例,总检出率26.30%,其中BV(B型Victoria系)、BY(B型Yamagata系)、甲型H3、甲型H1N1分别占总检出率的25.84%、6.68%、66.37%、7.31%。上海市普陀区流感流行高峰期为冬季和春季,不同年龄组之间流感病毒分离阳性率差异有统计学意义(χ2=17.252,P<0.001),5岁~年龄组流感病毒分离阳性率最高;男性和女性对流感病毒的易感程度差异无统计学意义(χ2=0.215,P=0.643);B型流感病毒在MDCK细胞上的分离培养敏感性最好。结论 流感监测工作应重点关注季节性H3和甲型H1N1流行时,加强流感病毒监测防控;5岁~年龄组流感病毒分离阳性率最高,应特别加强中小学学校暴发监测;流感病毒不同型别在MDCK细胞培养中的敏感性有待进一步探索。     

2010-2012年深圳市福田区流感监测分析

目的了解福田区流感流行动态及流感病毒毒株的变异情况,为流感的防治提供科学依据。方法每周统计监测点流感样病例（ILI）数据,采集流感样病例鼻咽拭子标本,采用MDCK细胞进行流感病毒分离,采用血凝抑制实验进行流感病毒型别的鉴定。结果 2010-2012年共监测到流感样病例18 605例,占监测门诊总数的3.49%;分离阳性毒株201份,分离率23.67%,各年度ILI%趋势与病毒分离率一致;发生暴发疫情65宗,主要发生在中小学和托幼机构。结论福田区流感流行高峰在5～7月,各亚型交替出现,应进一步加强流感的监测工作。     

随州市2012年流感监测结果分析

目的分析随州市2012年流感监测结果,了解流感流行特征,为随州市流感防控工作提供科学依据。方法在流感监测哨点医院采集流感样病例(ILI)咽拭子标本,采用实时荧光定量PCR方法检测流感病毒核酸,核酸阳性标本用MDCK细胞进行病毒分离,采用血凝抑制方法(HI)进行流感病毒型别鉴定。结果 2012年共监测流感样病例692例,流感哨点医院流感样病例就诊百分比为0.69%,流感样病例主要集中在15岁以下儿童,占73.70%。检测流感样病例咽拭子标本635例,测得流感病毒核酸阳性195例,总阳性率为30.71%。核酸阳性样本分离到54株流感病毒毒株。随州市2012年流感活动高峰主要集中在1-3月份和7-10月份。结论随州市曾都区2012年春季以乙型流感流行为主,然后夏季逐渐过渡为甲型H3流感。     

狗肾传代细胞分离培养流感病毒单因素分析

目的对影响狗肾传代细胞(MDCK细胞)分离流感病毒阳性率的相关因素进行单因素分析。方法选择2013年-2016年南阳市哨点医院送检流感样病例(ILI)咽拭子中PCR检测阳性的标本,采用MDCK细胞培养法进行流感病毒的分离培养,并对咽拭子标本从采样、核酸检测和细胞分离等环节中的一些因素进行卡方检验和分析。结果不同监测年度、新甲型H1N1流感病毒核酸检测Ct值大小对病毒分离结果影响差异有统计学意义(P0.05);不同流感病毒型别(或系)的MDCK细胞一代分离培养阳性率差异有统计学意义(P0.05)。结论不同的监测年度,病毒分离阳性率也不同;新甲型H1N1流感病毒核酸检测Ct值大小影响其病毒分离阳性率,Ct值越小,病毒分离阳性率越高;不同流感病毒型别MDCK细胞一代病毒分离阳性率不同,季甲型H3流感病毒MDCK细胞分离培养第一代阳性率明显低于B型和新甲型H1N1流感病毒。     

2016年1～4月乌兰察布市流感病毒分离鉴定结果分析

目的分析2016年乌兰察布市流感病原学分离鉴定结果,进一步加强本市流感监测工作,探索流感病毒的流行与变异情况,为本市未来的流感防控工作提供准确的理论依据。方法 2016年1月～4月哨点医院送检的流感样病例(ILI)患者咽拭子标本,接种MDCK细胞分离培养,采用血凝抑制方法(HAI),鉴定流感病毒的型别和亚型。结果共检测ILI咽拭子标本294份,分离出32株流感病毒,阳性率为10.88%,其中A型H3N2亚型2株,新甲H1N1型4株,B型Yamagata系6株,B型Victoria系20株。结论 2016年1月～4月乌兰察布市流感病毒不同毒株型交替出现,优势毒株为B型Victoria系。这也是乌兰察布市首次利用细胞培养技术成功分离出流感病毒毒株,为本市传染病防控工作提供了新的技术支撑。     

流感病毒细胞培养阳性相关影响因素分析

目的研究流感病毒细胞分离培养阳性的影响因素。方法收集陕西省2010年-2013年2家流感监测哨点医院的鼻咽拭子标本进行细胞分离培养,用卡方进行影响因素筛选,用Logisitic回归进行影响因素分析。结果共采集2 046份流感样病例标本,经MDCK细胞分离培养共有311份阳性标本,阳性率为15.20%。发病年龄、采样时期、采样到送检时间、不同监测年度、监测医院标本放置温度这些因素对流感病毒分离培养阳性结果差异均有统计学意义(P0.05)。非条件Logistic多因素回归分析显示:采样时期、采样到送检时间、不同监测年度、监测医院标本放置温度是影响流感病毒分离培养阳性结果的主要因素(P0.05)。结论流感样病例标本采集后应放置在4℃并尽早送到流感实验室进行病毒分离培养,在流感流行时期应尽量多采集标本,可以提高流感病毒的阳性分离率。     

2005～2006年广西流感样病例暴发分析

目的对广西2005～2006年流感样病例暴发进行分析,以便制定有效的防治措施。方法采集流感样病例咽拭子标本,采用MDCK细胞培养法分离流感病毒,微量血凝抑制实验进行鉴定。结果2005～2006年广西共报告流感样病例疫情93起,其中2005年报告53起,2006年报告40起。本次共采集标本888份,分离到流感病毒317株,分离率为35.7%。流感暴发占流感样病例暴发的46.9%,以中、小学流感暴发为主(80.0%)。流感样病例暴发主要集中在冬春季节。结论流感暴发是流感样病例暴发的主要原因,且以中小学流感暴发为主(80.0%)。流感样病例暴发主要集中在冬春季节。     

2005-2008年株洲市流感监测结果分析

目的 了解株洲市区流感活动情况及流感病毒型别特征. 方法 采集流感监测点的流感样病例咽拭子标本,用MDCK细胞法分离流感病毒. 结果 2005-2008年共检测2 487份咽拭子标本,分离流感病毒181株,阳性率7.28%,其中甲1型64株,乙型35株,甲3型54株,未分型28株. 结论 2005-2008年株洲市区全年流感散发流行,7、8月有发病高峰.     

天水市2005～2008年度流行性感冒监测分析

目的观察天水市流行性感冒（流感）流行状况及流感病毒类型,分析流行趋势,为流感预防控制提供依据。方法2005年11月-2008年10月,采集流感监测点医院和辖区内流感样病例爆发疫情典型病例咽拭子标本,送甘肃省疾病预防控制中心（CDC）,采用鸡胚和狗肾传代细胞分离流感病毒,并用血凝和血凝抑制试验对病毒进行鉴定,分离的毒株送中国CDC病毒病预防控制所国家流感中心进行复核鉴定。结果共采集流感样病例咽拭子标本1819份,分离出流感病毒247株,分离率为13．58％。其中甲,型36株,占14．57％;甲,型75株,占30．36％;乙型136株,占55．06％[维多利亚（Victoria）系121株、山形（Yamagata）系15株]。结论天水市存在甲,型、甲3型和乙型流感病毒活动,在不同年度以不同强度同时或交替活动,爆发疫情均发生在农村中小学校,以乙型为主。     

Isolation of influenza viruses in MDCK 33016PF cells and clearance of contaminating respiratory viruses

This paper summarizes results obtained by multiplex PCR screening of human clinical samples for respiratory viruses and corresponding data obtained after passaging of virus-positive samples in MDCK 33016PF cells. Using the ResPlexII v2.0 (Qiagen) multiplex PCR, 393 positive results were obtained in 468 clinical samples collected during an influenza season in Germany. The overall distribution of positive results was influenza A 42.0%, influenza B 38.7%, adenovirus 1.5%, bocavirus 0.5%, coronavirus 3.3%, enterovirus 5.6%, metapneumovirus 1.0%, parainfluenza virus 0.8%, rhinovirus 4.1%, and respiratory syncytial virus (RSV) 2.5%. Double infections of influenza virus together with another virus were found for adenovirus B and E, bocavirus, coronavirus, enterovirus and for rhinovirus. These other viruses were rapidly lost upon passages in MDCK 33016PF cells and under conditions as applied to influenza virus passaging. Clinical samples, in which no influenza virus but other viruses were found, were also subject to passages in MDCK 33016PF cells. Using lower inoculum dilutions than those normally applied for preparations containing influenza virus (total dilution of the original sample of ∼10⁴), the positive results for the different viruses turned negative already after 2 or 3 passages in MDCK 33016PF cells. These results demonstrate that, under practical conditions as applied to grow influenza viruses, contaminating viruses can be effectively removed by passages in MDCK cells. In combination with their superior isolation efficiency, MDCK cells appear highly suitable to be used as an alternative to embryonated eggs to isolate and propagate influenza vaccine candidate viruses.     

2007-2008年度山东省流感监测资料分析

[目的]了解山东省流感流行特点,掌握流感病毒优势毒株的变异动态,为及早发现和控制疫情提供科学依据。[方法]2007年10月至2008年3月,山东省各哨点医院报告的门诊流感样病例（ILI）和门急诊病例就诊总数统计资料和部分医院采集的ILI鼻咽拭子标本流感病毒检测资料进行分析。[结果]监测期间,全省52家哨点医院合计,内科（儿内科）门诊病例1267783例,其中ILI23023例,占1.82％。ILI％,2007年10月至2008年3月分别为1．79％、1．68％、1．87％、2．18％、1．88％、1．50％（P〈0．05）;55．72％的ILI集中在5岁以下年龄组;不同地区ILI就诊百分比不同,滨州市、潍坊市、泰安市分别为5．30％、3．88％、3．37％,菏泽市、临沂市、德州市分别为0．17％、0．34％、0．53％,其他11个市为0．56％～2．97％。合计检测ILI标本941份,检出流感病毒246株（H1N1型3株,H3N2型114株,B型124株,H3N2型和B型混合感染5株）。阳性率为26．14％。流感病毒检测阳性率,各月分别为18．60％、15．57％、28．81％、36．20％、17．43％、17．46％（P〈0．05）。[结论]2007～2008年度山东ILI疫情平稳,以H3N2和B型为优势流行株。     

亳州市2013年甲型H1N1流感病毒基因分析

目的分析亳州市2013年一所学校流感暴发疫情甲型H1N1流感病毒基因及抗原变异情况。方法从132名具有流感症状的学生当中随机采集10份标本,用Realtime RT-PCR方法鉴定甲型H1N1流感病毒,对阳性标本接种MDCK细胞,分离流感病毒,并对甲型H1N1流感病毒株进行血凝素（HA）作基因测序,分析基因及氨基酸位点变异情况。结果 10份标本中Realtime RT-PCR鉴定有8份为甲型H1N1流感病毒核酸阳性,病毒分离培养6份阳性,并对其进行基因测序,HA基因与疫苗株同源性为98.4%,HA基因氨基酸变异分析显示,有多个位点发生变异。结论此次暴发的甲型H1N1流感病毒的基因组HA序列与我国及其他国家的甲型H1N1流感病毒具有较高的同源性,HA基因氨基酸序列发生变异情况,需密切关注甲型H1N1的流行状况。     

惠州市2009年流感监测结果分析

目的了解惠州市2009年度流感的流行特征,探索流行规律,为流感的防治提供科学依据。方法采集哨点医院和暴发疫情流感样病例咽拭子标本,用MDCK细胞进行流感病毒分离,采用实时荧光定量PCR进行流感病毒分型。结果从哨点医院采集的1 482例标本中共分离271份流感病毒,其中A型265株,B(Victoria)型6株;在22起流感样病例暴发疫情中,由新甲型H1N1引起的有16起,86.4%都集中在中小学学校。结论 2009年惠州市流感监测医院的流感样病例全年均有发生,以秋、冬季为高发季节。2009年主要流行毒株为新甲型H1N1毒株。     

2010-2012年长沙市流感流行情况及B型流感病毒基因特性分析

目的分析2010-2012年长沙市流感流行情况,并探讨B型流感病毒分离株血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的分子流行病学特征。方法采集长沙市流感网络监测哨点医院及暴发点流感样病例(ILI)咽拭子样本,狗肾传代细胞(MDCK)进行病毒分离,血凝和血凝抑制实验进行型别和亚型鉴定;提取B型流感病毒核酸,一步法RT-PCR扩增HA和NA基因片段,双向测定扩增产物核苷酸序列,对基因序列和氨基酸序列进行分析。结果 2010-2012年间,长沙市甲型H1N1、H3N2、B型流感交替流行,流行高峰为冬春季。3年间共分离到B型流感病毒78株,其中79.5%为Victoria系,20.5%为Yamagata系,以Victoria系为主。与WHO推荐疫苗株B/Brisbane/60/2008相比,HA基因的同源性在87.2%~98.4%之间,NA基因的同源性在94.5%~97.5%之间。氨基酸序列分析发现,与疫苗株相比,HA蛋白主要存在单个氨基酸的突变;种系进化分析发现,所有毒株HA和NA蛋白位于相应的谱系内,无抗原重排发生。结论 2010-2012年间长沙市甲型H1N1、H3N2、B型流感交替流行,B型流感病毒HA基因出现抗原漂移,但无重组毒株的出现。     

2013年北京市中心城区流感病原学特征

目的了解北京市中心城区流感病原学特征,为流感防治提供依据。方法采集北京市两家国家级流感监测哨点医院全年流感样病例(ILI)咽拭子标本,对北京市中心城区的病例标本进行分析,采用狗肾传代细胞(MDCK)进行流感病毒分离,采用血凝抑制试验(HI)进行型别鉴定。结果全年共检测北京市中心城区ILI咽拭子标本1 968件,分离到流感病毒162株,分离阳性率为8.2%,经分离鉴定,其中新甲型H1N1亚型96株,A(H3N2)亚型60株,B/Y亚型6株,分别占总株数的59.3%、37.0%和3.7%。结论 2013年1~2月为北京市中心城区流感发病高峰,流行株为新甲型H1N1亚型和A(H3N2)亚型,流感在5岁年龄均有分布且存在性别差异。     

2009年南平市流感监测点病原监测结果分析

目的分析南平市流感监测点分离的流感毒株,探讨流行规律,为防治提供依据。方法选择南平市两所流感哨点监测医院,采集流感样病例（ILI）呼吸道咽拭子,利用MDCK细胞法分离病毒及用红细胞凝集抑制试验对病毒进行型和亚型的鉴定分析。结果 2009年采集流感样病例（ILI）样品1 848份,分离到240株流感病毒,分离率为13.0%。其中H1N1型流感病毒株85株,H3N2型流感病毒株42株,B型流感病毒株56株,新H1N1型流感病毒株57株。呈现5-9月和11-12月两个活动高峰。结论 2009年南平市流感病毒优势株在5-9月以A型（H1N1,H3N2）及B型（B-yamagata,B-victoria）共存。11-12月由优势株亚型逐渐过渡为A（新甲型H1N1）,少数样品检出B型（B-yamagata,B-victoria）流感。     

2005—2012年无锡市流感流行特征分析

目的掌握2005-2012年无锡市流感流行规律和流感病毒优势株的变化。方法分别采用实时荧光聚合酶链反应（Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR）方法和狗肾传代细胞（Madin-Darby canine kid-ney,MDCK）细胞培养法进行流感病毒检测和流感病毒分离。结果 2005年10月～2012年12月,无锡市流感样病例（influenza like illness,ILI）年龄构成以0～5岁为主（62.31%）,流感病毒分离平均阳性率为19.29%,其中季节性A（H1N1）占11.99%,季节性A（H3N2）占28.15%,B型占34.17%,甲型H1N1占25.70%。各年龄组人群感染流感毒株型别不同（2=250.60,P〈0.001）。总阳性率每隔2年升高一次,ILI与流感病毒活动度之间呈正相关（r=0.241,P=0.024）。ILI暴发疫情主要集中在2006年3～4月份和2009年9月份,主要由B型和甲型H1N1引起。结论 ILI、ILI%和流感病毒阳性率三者的高峰基本吻合,并与流感优势毒株交替变化一致,上述验证了流感哨点监测在预警预测流感流行趋势和暴发疫情中的实际作用。