云南省西双版纳地区2011年蚊虫及虫媒病毒调查

目的了解云南省西双版纳地区蚊虫媒介的分布特点及当地虫媒病毒情况,为虫媒病毒病防治提供科学依据。方法在云南省西双版纳州采集蚊虫标本,用细胞培养法分离病毒,并用RTPCR法检测常见虫媒病毒核酸;在西双版纳州采集发热患者血清及脑脊液标本,并用ELISA法检测常见病毒性脑炎IgM抗体。结果共采获蚊虫5属29种13337只,其中三带喙库蚊、中华按蚊、带足按蚊分别占蚊虫标本总数的79.98%(10667/13337)、7.95%(1060/13337)和7.38%(984/13337),三带喙库蚊为当地优势蚊种。采用流行性乙型脑炎(乙脑)病毒、版纳病毒、甲病毒属、环状病毒等多种虫媒病毒引物对214批蚊虫标本进行PCR检测,结果均为阴性;采用多种细胞对蚊虫标本进行病毒分离,结果也为阴性。用相关脑炎病毒试剂盒对采集到的52份急性期血清标本及54份脑脊液标本进行ELISA检测,发现乙脑病毒IgM阳性16例,单纯疱疹病毒IgM抗体阳性4例,腮腺炎病毒IgM抗体阳性13例,埃可病毒IgM抗体阳性3例,登革热病毒IgM抗体阳性1例。结论 2011年西双版纳地区采集到的蚊虫标本中未检测到乙脑、版纳及环状病毒等虫媒病毒,但血清学检测结果表明当地发热患者存在乙脑等多种病毒性脑炎感染。     

乙型脑炎病毒微滴式数字PCR检测方法的建立

目的 建立乙型脑炎病毒微滴式数字PCR (droplet digital PCR,ddPCR)检测方法.方法 根据乙型脑炎病毒基因的NS3序列设计特异性引物和TaqMan探针,用于ddPCR和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR).优化ddPCR的退火温度、引物和探针浓度后,比较ddPCR和qPCR灵敏度和重复性,并用多种虫媒病毒进行特异性验证.结果 该方法特异性良好,灵敏度可以达到16.1 copies/μL,重复性良好.结论 本研究建立的ddRT-PCR能够高度敏感地检测乙型脑炎病毒核酸,将该方法用于临床乙型脑炎病毒感染的检测,可提高检测的准确性.     

酶联免疫吸附试验定量检测人抗流行性乙型脑炎病毒IgG抗体方法的研究

为建立快速检测人抗流行性乙型脑炎 (乙脑 )病毒抗体的方法 ,用纯化乙脑病毒选择实验条件 ,通过与蚀斑减少中和试验 (PRNT)的比较 ,确定保护性抗体的酶联免疫吸附试验 (ELISA)的尺度 ,再对两种方法进行比较。结果 :ELISA比PRNT法灵敏度高 16～ 32倍。两种方法有良好的线性关系 (r=0 771,P<0 0 0 1)。PRNT法 1∶10抗体滴度对应的ELISA结果为 0 331U ,两种方法差异无显著的统计学意义 (χ2 =0 14 2 ,P >0 0 5 ) ,总符合率为 81 3%。     

快速检测日本脑炎病毒胶体金免疫层析试纸条方法的建立

[目的]建立一种能快速区分、简便诊断日本脑炎病毒的胶体金标记免疫层析试纸条方法,并对其进行评价。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记日本脑炎病毒的NS1的抗体,制成免疫层析检测试纸条。对试纸条进行特异性和敏感性评价,并对三带喙库蚊进行模拟添加日本脑炎病毒检测。[结果]用三带喙库蚊研磨悬液上清、正常的昆虫细胞液进行测试,呈阴性反应;检测日本脑炎病毒的灵敏度均为1×10^5pfu／ml,对三带喙库蚊添加日本脑炎病毒进行检测也取得同样结果,并在10～15min即可得到结果。[结论]初步建立了一种可以用于现场快速检测日本脑炎病毒的胶体金免疫层析方法,为进一步大规模应用奠定了基础。     

6种虫媒病毒微孔膜芯片检测方法的研制与应用

目的研制能同时检测6种口岸重要虫媒病毒的微孔膜芯片。方法针对包括1—4型登革病毒、乙型脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、基孔肯雅病毒和裂谷热病毒等6种虫媒病毒,选择合适的保守基因,设计特异性的PCR引物（5’端标记生物素）和检测探针,通过参数优化建立单管多重RT—PCR扩增体系;然后按每个阵列5X5的格式,并确保点样区域为96孔板的微孔大小,将探针喷点到处理后的尼龙膜上,通过条件优化建立稳定的PCR产物与固化探针的杂交体系;采用碱性磷酸酯酶标记链亲和素和化学显色底物NBT／BCIP来检测特异性的PCR杂交产物。选取2012年1—6月份从口岸输入的疑似登革热发热病例的临床血清标本,提取RNA后,直接采用本研究建立的微孔膜芯片进行未知虫媒病毒的快速检测。结果用1～4型登革病毒、乙型脑炎病毒、西尼罗病毒和基孔肯雅病毒等7种毒株、1种黄热病毒疫苗株和1种裂谷热病毒核酸体外转录的RNA模板验证已建立的微孔膜芯片,获得比较特异和稳定的实验结果。应用该研究建立的方法,从3份疑似登革热发热病例的临床血清标本中检出了1例登革1型病毒和2例登革2型病毒,与实时荧光PCR检测结果相符。结论该研究建立的6种虫媒病毒微孔膜芯片检测方法,具有快速、准确、自动化和高通量等特点,为快速应对口岸输入性发热病例提供了非常有价值的检测手段,也为进一步开发更多指标的病原体检测方法提供良好的示范作用。     

虫媒病毒及狂犬病毒

2897中国虫媒病毒研究概况〔综述」李其平(新疆维吾尔自治区地方病防治研究所)/厂中国媒介生物学及控制杂志/中华预防医学会一1994.5(3)·一233~239 虫媒病毒是近年来国际上研究的重点课题.中国对此项的研究起步较晚.迄今仅发现虫媒病毒8种、虫媒病毒抗体28种及35株甲属披膜病毒和17株非乙型脑炎病毒。本文对流行性乙型脑炎病毒、森林脑炎病毒、登革热病毒、新祖出血热病毒、基孔肯雅病毒、新环状病毒、辛德毕斯病毒、东方马脑炎病毒的病毒学特征.实验室检测方法、流行病学及感染病毒后的临床表现进行了综述。(郑淑鹏)所卜·行广后医学/广州…     

我国新分离虫媒病毒的研究概况

虫媒病毒是近年发展较快的一组病毒,50年代全世界只发现35种,到1974年在国际虫媒病毒中心登记的已有359种,1989年发展为532种,其中125种对人畜致病。我国虫媒病毒研究起步较晚,截止70年代只发现4种(流行性乙型脑炎、森林脑炎、新疆出血热和登革热病毒1～4型)。近年又分离到多株在我国首次发现的虫媒病毒,如最近在云南分离到的基孔肯雅病毒(Chikungunya virus)和引起发热的环状病毒(Orbivirus)。现将有关资料介绍如下。     

江阴市一般人群流行性乙型脑炎抗体水平调查

目的 :了解一般人群流行性乙型脑炎的免疫状况 ,为制订免疫策略和疫情预警预报提供依据。方法 :用整群抽样方法抽取部分一般人群检测血清乙型脑炎病毒抗体水平。结果 :检测2 5 7人 ,乙脑抗体总阳性率 78.99% ,GMT为 1∶2 8.10 ;其中 30岁以上组抗体阳性率最高 ,0～ 4岁组抗体阳性率最低。结论 :江阴市一般人群对流行性乙型脑炎已经形成了较好的免疫屏障。     

宿迁市2000年乙型脑炎人群免疫水平监测

为了解健康人群对流行性乙型脑炎 (乙脑 )的免疫水平 ,我们于 2 0 0 0年 5月在本市的沭阳县开展了乙脑人群免疫水平监测 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1.1　对象　用随机抽样的方法抽取沭阳县两个乡镇 ,并对其部分 4 0岁以下人群采血、分离血清标本待检。1.2　方法　所有标本均送江苏省疾病预防控制中心实验室采用反向被动血凝抑制试验检测。试验结果判别 :血清 Ig G抗体滴度在 1∶ 2 0以下为阴性 ,1∶ 4 0以上为阳性。2　结果2 .1　一般情况　本次共采集合格标本 2 76份 ,经检测乙脑血清抗体 ( Ig G)阳性 173份 ,阳性率为 62 .7%。其…     

实时荧光RT—PCR快速检测蚊体内乙型脑炎病毒及福建省基因Ⅰ型乙型脑炎病毒的发现

目的:应用实时荧光RT-PCR方法快速检测蚊体内乙型脑炎病毒,并对蚊体内携带的乙型脑炎病毒进行基因分型。方法:从蚊媒监测点采集蚊标本,研磨后提取RNA,用新型的LNA探针实时荧光RT-PCR方法进行高通量快速筛查蚊体携带的乙型脑炎病毒,对核酸阳性的标本进一步用乙型脑炎病毒E基因特异引物进行RT-PCR扩增和序列测定,根据所测序列与GenBank中不同地理来源乙型脑炎病毒株E基因核苷酸序列分析的结果进行基因型别的判定。结果:12575只蚊子分成254份,用实时荧光RT-PCR方法从来源于福州的2份三带喙库蚊标本中检出乙型脑炎病毒核酸阳性,经RT-PCR及核苷酸序列测定,得到一段长1500nt的E基因核苷酸序列,序列分析结果显示,其核苷酸同源性最大的是来源于上海(DQ404100)和浙江(EU258742)的毒株,分别是99.1%和99.0%,均属于基因Ⅰ型病毒。结论:实时荧光RT-PCR方法是快速检测蚊体内乙型脑炎病毒的理想方法,此次调查发现的乙型脑炎病毒是以往福建省内未见报道的基因Ⅰ型病毒。     

陕西省2005～2006年流行性乙型脑炎报告病例实验室复核检测

目的 对陕西省2005～2006年流行性乙型脑炎(乙脑)报告病例标本进行复核检测,并对乙脑阴性标本检测其它病毒性脑炎病毒IgM抗体.方法 对陕西省两年乙脑报告病例的血清及脑脊液标本,用两种国产乙脑病毒IgM抗体捕获酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒,澳大利亚Panbio公司生产的乙脑/登革病毒IgM抗体ELISA试剂盒,以及间接免疫荧光方法进行复核检测,并用10种引起病毒性脑炎病毒的IgM抗体ELISA检测试剂盒检测乙脑阴性标本.结果 陕西省2005～2006年送检的9I份标本中,乙脑病毒IgM抗体阳性54份,乙脑病毒IgM抗体检测复核一致率分别为92.68%和100%.24份乙脑病毒IgM抗体阴性血清标本中,13份对7种其它病毒性脑炎病毒的IgM抗体阳性,总检出率为21.67%.结论 陕西省乙脑报告病例的实验室检测复核一致率较高,乙脑检测阴性病例中可能有其它脑炎病毒感染,提高乙脑报告病例的实验室检测率非常重要.     

我国从节肢动物中新分离的虫媒病毒

20世E80年代以来在我国不同地区先后分离到14种虫媒病毒,其中甲病毒6种（辛德毕斯、基孔肯雅、盖塔、西方马脑炎、东方马脑炎和罗斯河病毒）、黄病毒3种（流行性乙型脑炎、登革热和蜱传脑炎病毒）、布尼安病毒3种（克里米亚－刚果出血热、巴泰和阿卡斑病毒）和呼肠孤病毒2种（东南亚十二节段RNA病毒和环状病毒）,并有数十株病毒未确定种类。现就我国近几年新分离的虫媒病毒及其分布、媒介等方面的研究进展进行综述。     

森林脑炎的病原学诊断方法及研究进展

森林脑炎是经硬蜱叮咬传播的自然疫源性疾病, 其病原为黄病毒科中蜱传脑炎病毒。森林脑炎病死率较高, 实验室检测对此病诊断有重要意义。本文对森林脑炎的病原学诊断方法及研究新进展进行阐述。森林脑炎实验室检测主要为常规检查、血清学检测、病毒分离、分子生物学检测。森林脑炎病毒血清特异性IgM抗体对早期诊断有重要价值, 特异性IgG抗体可作为与其他疾病鉴别的"金标准"。酶联免疫吸附试验或间接免疫荧光法测血清和/或脑脊液中特异性IgM抗体, 血清血凝抑制试验或血清补体结合试验, 双份血清血凝抑制试验或补体结合试验均有助于早期诊断。分子技术检测方法发展迅速, 代谢组学、数字PCR、基质金属蛋白酶亦应用于森林脑炎的早期诊断。     

中和抗体阳性血浆治疗乙型脑炎疗效观察

目的　了解流行性乙型脑炎病毒中和抗体阳性血浆治疗乙型脑炎的疗效。方法　对 2 8例发病 5日内的流行性乙型脑炎患儿入院当日及次日各静脉给予 1次流行性乙型脑炎病毒中和抗体阳性血浆 ,同时给予综合治疗 ,对照组 2 7例患儿仅给予综合治疗 ,对比两组患儿的退热时间 ,惊厥消失时间 ,有无并发症 ,有无恢复期症状及死亡人数。结果　治疗组比对照组退热时间明显缩短 ,并发症及死亡人数显著减少 ,治疗 3天后惊厥消失例数与对照组有显著差异。结论　应用乙型脑炎病毒中和抗体阳性血浆可显著改善乙脑患者临床症状 ,降低病死率 ,可作为治疗乙型脑炎的新方法。     

脑炎病例中虫媒病毒感染的血清流行病学研究

本文对虫媒病毒作为我国病毒性脑炎病原的作用进行了血清流行病学研究。1988～1990年在我国15个地区搜集了614例疑似病毒性脑炎病例的急性期和恢复期血清;对3种主要虫媒病毒群(黄病毒群、甲群、加里福尼亚(CAL)血清群病毒)抗原的血凝抑制(HI)抗体进行了测定,结果大部分地区的病例双份血清对黄病毒群和甲群虫媒病毒 HI 的滴度呈4倍升高。未发现对 CAL 病毒群中的 SSH 病毒HI 滴度呈4倍升高的病例。甲群虫媒病毒感染病例的年龄为50天～32岁。黄病毒感染的病例年龄为6个月～50岁。严重的中枢神经系统症状在黄病毒感染病例中较多。本研究肯定了黄病毒作为我国病毒性脑炎病原的重要性。并提供了在我国可能存在1种或1种以上可引起神经症状的甲群虫媒病毒感染的证据,并阐述了甲群虫媒病毒症状性感染在我国地理分布的概貌。     

乙型脑炎病毒NS1基因片段的克隆、表达及鉴定

目的构建乙型脑炎病毒NS1基因的重组原核表达质粒,诱导重组蛋白表达及免疫学鉴定。方法以乙型脑炎病毒基因组为模板,RT-PCR扩增NS1基因片段,构建其重组原核表达载体,并采用WesternBlot方法初步鉴定该蛋白的特异性。结果成功扩增出乙型脑炎病毒NS1基因片段,该基因在大肠杆菌表达系统中得到表达,并且特异性识别乙型脑炎患者血清。结论在大肠杆菌中成功表达乙型脑炎病毒NS1基因片段,为乙型脑炎病毒的诊断提供了新的特异性抗原。     

云南省虫媒病毒研究进展

目前,全世界共发现537种虫媒病毒,其中135种对人、畜致病,在人群中可引起脑炎、肝炎、肾综合征出血热(HFRS)、关节炎和失明等症候群,在畜间可引起脑炎、流产等疾病。由于全球气候变暖,生态环境改变,近几年许多虫媒病毒病不断流行,新的虫媒病毒也在出现,成为日益严重的公共卫生问题。20世纪80年代以来,经过大量的调查和研究,证实云南省存在流行性乙型脑炎、登革热、森林脑炎、HFRS4种属虫媒病毒病的法定报告传染病。还从病原学证实存在基孔肯雅、辛德毕斯、Colti病毒、环状病毒和巴泰病毒病等非法定报告自然疫源性虫媒病毒病。血清学调查…     

ELISA方法检测血吸虫抗体的研究

目的 :血吸虫病患者血清中 Ig G和 Ig M抗体检测方法的改进。方法 :用纯化的血吸虫虫卵抗原作包被抗原 ,用辣根过氧化物酶标记的抗人 Ig G和抗人 Ig M(μ链 )单克隆抗体作标记抗体 ,采用间接 EL ISA检测血清中 Ig G和 Ig M抗体。结果 :此法检测血吸虫病疫区患者 Ig G的阳性检出率为 84.1% (5 3/ 6 3) ,与 IHA结果 (5 2 / 6 3)基本一致。其灵敏度高达 1∶ 2 5 6 0 0。对 2例急感病人 Ig M检测均为阳性 ,而 90例正常人血清有87份为阴性 ,其灵敏度为 1∶ 16 0 0。两种检测方法的精密性好 ,CV值均在 5 %以下。结论 :此方法特异性强 ,灵敏度高 ,快速、简便 ,适合于广大农村疫区进行血吸虫病流行病普查和临床诊断     

2012年吉林省森林脑炎病例检验结果与分析

目的对2012年吉林省森林脑炎疑似病例进行实验室检验和结果分析,为临床诊断、治疗以及森林脑炎的防控提供科学依据。方法采集森林脑炎临床诊断病例的血清标本10份,通过酶联免疫吸附实验检测森林脑炎特异性IgM和IgG抗体。结果实验结果显示:5例患者新近感染森林脑炎病毒;1例患者可能曾经感染森林脑炎病毒,正处于恢复期;其余4例患者未感染森林脑炎病毒。结论经过实验室检验,可以确诊部分森林脑炎临床诊断病例;5-7月吉林省长白山林区存在森林脑炎病例。