地卓西平对甲基汞致大鼠脑皮质细胞内钙稳态失调的影响

目的研究地卓西平对甲基汞致大鼠脑皮质细胞内钙稳态失调的影响。方法 Wistar大鼠32只,按体重随机分成4组,每组8只。第1组为对照组,腹腔注射0.9%氯化钠;第2组为低剂量甲基汞染毒组,腹腔注射4μmol/kg的甲基汞溶液;第3组为高剂量甲基汞染毒组,腹腔注射12μmol/kg的甲基汞溶液;第4组为地卓西平预处理组,隔日皮下注射0.3μmol/kg地卓西平,2 h后腹腔注射12μmol/kg的甲基汞溶液;注射容量均为5 ml/kg,染毒4周,每周5次。观察神经细胞内Ca2＋浓度及其凋亡情况,同时测定脑皮质Hg含量和与维持钙稳态相关的酶Na＋-K＋-ATPase和Ca2＋-ATPase活性。结果染毒4周后,随着染毒剂量的增加,脑皮质Hg含量和细胞内Ca2＋浓度均明显升高（P〈0.01）;细胞凋亡率明显高于对照组（P〈0.01）;脑皮质Na＋-K＋-ATPase和Ca2＋-ATPase活性均不同程度的受到抑制。地卓西平预处理可以明显缓解神经细胞凋亡和细胞内Ca2＋超载,对Na＋-K＋-ATPase和Ca2＋-ATPase活性也有一定程度的恢复作用。结论甲基汞通过抑制与维持钙稳态相关的酶Na＋-K＋-ATPase和Ca2＋-ATPase活性,干扰神经细胞内钙稳态,进而造成神经细胞凋亡。地卓西平可以阻断Ca2＋通道对钙稳态失调引起的细胞损伤有拮抗作用。     

锰对神经元细胞内钙稳态影响的研究

目的研究锰对神经细胞内钙稳态的影响,重点观察神经元细胞钙离子浓度、Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性的改变。方法选用原代培养神经元为模型,待细胞生长至最佳状态时,予以分组处理:锰处理组为含不同浓度氯化锰(0,25,100,400μmol/L)的培养液,培养神经细胞12h后,通过倒置相差显微镜观察细胞形态的改变,并检测神经元细胞内钙离子浓度、Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性的变化。结果随着染Mn剂量的加大,神经元形态出现异常,细胞内钙离子浓度逐渐升高;细胞Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性也逐渐下降。结论锰通过影响与维持钙稳态相关的酶(Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase)活性,干扰神经元细胞内钙稳态,进而造成神经元细胞损伤。     

钙稳态失调在肝细胞损伤中的作用

钙离子(Ca2+)是一个多功能的信号载体,是细胞生理活动的重要物质基础.胞内Ca2+浓度及其稳态对细胞的生存极为重要[1],也是细胞生物学研究的一个热点问题.近年来,随着Ca2+测定技术的提高和研究的深入,细胞内钙稳态失调在细胞损伤机制中的作用受到广泛关注,尤其是以肝脏为主要靶器官的化学物引起的细胞损伤.我们将就钙稳态失调在肝脏细胞损伤中的作用进行综述.     

钙视网膜蛋白的结构与功能

钙视网膜蛋白(Calretinin)是钙结合蛋白(CaBP)家族成员,是神经细胞内重要的活性物质,对细胞质内Ca2+浓度具有缓冲作用.Ca2是细胞内重要的第二信使,在细胞内激活许多具有生理功能的酶或蛋白质,如依赖于Ca2+的蛋白激酶C和钙结合蛋白,参与多种代谢、骨骼肌/心肌收缩、神经反应冲动传导.Calretinin优势表达于中枢神经组织,此外还表达在睾丸(主要在Leydig细胞)、卵巢、肾上腺等合成类固醇的器官.Calretinin表达于不同的部位,其功能亦有异同,在细胞质调节激素合成,在细胞核内对细胞分化、发育、增殖、凋亡等也有调节作用.因此,Calretinin在生殖内分泌领域的作用逐步受到重视.     

丙烯酰胺对NB-1细胞钙稳态的影响

目的研究丙烯酰胺(AM)对神经细胞钙稳态的影响,探讨AM致神经损伤的可能机制。方法将人神经母细胞瘤(NB-1)细胞诱导分化成熟后,以不同浓度AM进行体外染毒,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测神经元损伤程度,并应用ATP酶检测试剂盒测定不同损伤程度的细胞Ca2+-ATP酶和Na+-K+-ATP酶活力的变化。以Fluo-3/AM为荧光指示剂,用激光共聚焦方法检测细胞内游离钙离子浓度的瞬时变化情况。结果 AM染毒组成熟NB-1细胞存活率有明显下降,提示AM对神经细胞有毒性作用;AM染毒组Ca2+-ATP酶和Na+-K+-ATP酶活力值也均下降,差异具有统计学意义(P<0.05);AM作用于成熟NB-1细胞可立即引起细胞内钙离子浓度升高。结论 AM可能通过影响神经细胞钙稳态产生毒性作用。     

衰老与海马神经元细胞内钙离子水平升高和钙稳态改变的相关性

衰老与神经退行性疾病如帕金森综合征和阿尔茨海默征引起的神经易损性增高及中风和癫痫引起的神经元丧失相关联.一些研究揭示,细胞内钙离子浓度([Ca2 ]I)升高引起神经元丧失与衰老相关疾病的发生有关.然而,以幼年和中年动物海马神经元为标本,直接进行[Ca2 ]I和Ca2 稳态机制的比较研究尚未见报道.该研究应用Fura-2检测了幼年(4～5月)和中年(12～16月)SD大鼠快速分离的CA1区海马神经元[Ca2 ]I.结果发现,中年大鼠神经元基础[Ca2 ]I的水平明显高于幼年大鼠.用谷氨酸盐诱导胞内Ca2 超载,中年大鼠神经元转运多余Ca2 所需的时间比幼年大鼠长,这些研究结果为动物出现Ca2 稳态改变的年龄明显早于以往认为的老年阶段(≥24月)提供了直接的证据.Ca2 动力学的改变使衰老神经元对中风、癫痫或头部损伤相对于引起的神经元死亡更为敏感.阐明钙稳态机制不仅有助于理解衰老引起神经元丧失增多,而且也有助于开发靶向降低[Ca2 ]I,进而维持衰老神经元正常钙稳态的临床药物.     

2,5-己二酮对大鼠大脑中CaM及CaMKⅡα影响

长期职业接触正己烷可引起以感觉运动型周围神经病为主要临床症状的慢性中毒.2,5-己二酮(2.5-HexanedLione,HD)是正己烷的最终代谢产物和终毒物形式,介导了正己烷中毒性周围神经病的发生.但其发生机制尚不清楚.目前普遍认为神经化学毒物引起神经病变及其他神经损伤与轴浆Ca2 稳态失调有关[1.2].Ca2 稳态维持是认识各种Ca2 依赖性神经生物学过程的共同基础,Ca2 超载是细胞结构、功能改变以及最后死亡的必需步骤和最终原因[3].本文通过建立大鼠HD亚慢性中毒模型,测定大鼠大脑组织中钙调蛋白(CaM)和Ca2 -CaM依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)的变化.为进一步探讨HD中毒性神经病的发病机制提供依据.     

纳米硫化铅对大鼠海马中神经元钙稳态及肿瘤坏死因子-α水平的影响

目的探讨纳米硫化铅对大鼠海马中神经细胞钙稳态及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响。方法清洁级SD雄性大鼠随机分为对照组、纳米硫化铅低、高剂量组,每组10只,低、高剂量组气管灌注剂量分别为15、30mg/kg粒径20nm的硫化铅混悬液1ml,对照组灌注等体积生理盐水,每周1次,连续3个月。流式细胞仪测定大鼠海马中神经细胞内Ca2+浓度;采用试剂盒测定TNF-α水平。结果各剂量组海马中神经细胞内Ca2+浓度比较,差异有统计学意义(P<0.05),染毒组海马中神经细胞内Ca2+浓度较对照组升高。各组血清及海马中组织匀浆TNF-α含量比较,随着染毒剂量的升高,TNF-α含量也随之升高。结论纳米硫化铅可导致大鼠海马中神经元钙稳态失调,TNF-α水平升高。     

090 雌激素与神经毒性

雌激素作为一种内分泌激素,在神经系统中发挥着重要的作用,除了对性别分化和神经内分泌的调节外,还表现出对神经毒性的防护作用.其神经保护作用与雌激素受体途径、调节兴奋性氨基酸受体功能、维持胞内钙稳态、与神经生长因子相互作用、抑制细胞凋亡、调节质膜功能和免疫炎症反应等有关.本文拟就雌激素对神经毒性的作用及途径进行综述.     

TNFα通过非神经钙调蛋白途径介导皮层神经细胞损伤

目的：探讨在TNFa诱导的脑皮层神经细胞损伤机制中神经钙调蛋白的作用。方法：用TNFn诱导原代培养的胎鼠皮层神经细胞损伤;通过MTT法、LDH释放率测定观察细胞生存力和损伤程度;通过膜联蛋白（Annexinv）和碘化丙啶（PI）免疫荧光法观察细胞凋亡或坏死程度。结果：MTT和LDH释放率测定结果表明．TNFa可引起神经细胞的生存力明显下降,并呈量艘、时效依赖关系。TNFd与CsA联合应用组,皮层神经元的生存力则提高不明显,无统计学意义。AnnexinV和PI免疫荧光检测表明,CsA不能减轻TNFa诱导的神经细胞的凋亡和坏死。结论：神经钙调蛋白途径在TNFa引起皮质神经元损伤并不起主要作用。说明TNFa可通过非神经钙调蛋白途径引起神经元损伤。     

人参皂甙Rb1对香烟烟雾诱导大鼠神经细胞损伤的保护作用

[目的]探讨人参皂甙Rb1(GRb1)对香烟烟雾诱导大鼠神经细胞损伤的保护作用和机制。[方法]制备烟灌注大鼠模型,吸烟量分别为8、20、40支/d,12周后腹腔注射不同剂量的GRb1(10、20、40 mg/kg)。各组大鼠同时制备皮层神经细胞培养液,24 h后应用Annexin V联合流式细胞仪检测细胞凋亡率和坏死率,Western-Blot检测存活素(Survivin)的表达水平,Fura-2/AM负载及荧光标记检测神经细胞内游离Ca2+浓度。[结果]香烟烟雾刺激诱导神经细胞发生凋亡和坏死,与对照组相比凋亡率和坏死率显著增高。与对照组相比,8支/d香烟烟雾刺激使Survivin表达增强34%,20、40支/d香烟烟雾刺激使Survivin表达分别下降48%和67%;20、40 mg/kg的GRb1使细胞凋亡率分别下降30.6%和40.3%,细胞坏死率分别下降32.5%和39.4%,Survivin表达水平上调45.1%和54.8%。香烟烟雾可使神经细胞内游离Ca2+浓度显著升高,GRb1使神经细胞内Ca2+浓度显著下降(P﹤0.01)。[结论]GRb1通过抑制细胞内Ca2+超载,调节Survivin表达,减轻香烟烟雾对神经细胞的损伤。     

镧对小鼠皮层细胞内游离钙和代谢活力的影响

目的探讨镧离子对神经细胞内游离钙和代谢活力的影响。方法测定Ｆｕｒａ２负载的小鼠皮层单个细胞的钙荧光比值,ＭＴＴ比色法测定小鼠皮层培养细胞的代谢活力。结果０．５～１．０ｍｍｏｌ／Ｌ氯化镧不影响皮层细胞的静息荧光比值,但明显拮抗谷氨酸和地塞米松及胞外高钾诱发的荧光比值增加;３．０ｍｍｏｌ／Ｌ氯化镧直接升高皮层细胞的钙荧光比值,并加剧谷氨酸引起皮层细胞代谢活力的抑制。结论皮层细胞内钙受不同浓度镧暴露的影响,高浓度镧可直接干扰皮层细胞钙稳态并加剧兴奋性神经毒性损伤     

汞对大鼠三叉神经节电压依赖性钙通道电流及[Ca2+]i的影响

目的 观察Hg2+对大鼠三叉神经细胞膜电压依赖性钙通道电流(Ica)及胞内游离Ca,2+浓度的影响,探讨汞对三叉神经细胞毒性作用的机制.方法 全细胞膜片钳方法记录不同剂量的H2+作用下三叉神经细胞膜Ica的变化,并用激光共聚焦和Fluo-3/AM荧光探针标记技术,从单个细胞水平检测H2+寸胞内游离Ca2+浓度瞬间动态变化的影响.结果 0.01、0.10、1.00、10.00μmol/L H2+可使三叉神经细胞Ica电流幅值分别减少(1.80±0.32)%、(23.04±9.46)%、(58.20±7.90)%、(82.00±5.77)%,给Hg2+5min之内抑制作用即可达最大效应,洗脱未见明显电流恢复.0.01、0.10、1.00μmol/LH2+可使三叉神经细胞游离Ca2+浓度即时增加(2.500±83)%、(82.81±35.36)%、(222.70±62.48)%;预先用10 μmol/Lnifedipine处理细胞10 min,可在一定程度上减弱Hg2+的升钙作用,并延缓升钙的时间.结论 Hg2+对神经细胞膜Ica幅度的抑制作用与H2+抑制电压依赖性钙通道有关;H2+导致的神经细胞内游离Ca2+度升高与细胞内钙库释放有关.     

细胞外低钙对培养心肌细胞内游离钙和膜脂流动性的影响

Ca2 与心肌细胞损伤的关系已被确认 ,细胞内Ca2 超负荷是细胞发生不可逆损伤的共同途径。肝细胞培养模型证实细胞外钙同样影响细胞死亡过程 [1] ,向培养基中加入 Ca2 ,可减少培养细胞死亡率 [2 ] ,高钙培养的细胞比低钙培养的活力强[3 ] 。本研究利用原代培养心肌细胞 ,观察不同浓度的钙水平对心肌细胞膜流动性等影响 ,探讨低钙对心肌细胞的损伤机制。1　材　料　与　方　法1 .1　试剂　　 Ca Cl2 (北京化学试剂厂 ) ;MEM培养基( Sigma) ;荧光探针 1 ,6-二苯基己三烯 ( DPH,Sigma) ;Fura- 2 /AM( Sigma) ;胰蛋白酶 ( Sigma)。1…     

牛磺酸对海马神经细胞的营养和保护作用

目的 :　利用无血清培养的新生大鼠原代海马神经细胞 ,观察牛磺酸 ,谷氨酸和过氧化氢对神经细胞损伤的保护作用。方法 :　用含不同剂量牛磺酸的培养基培养神经元 ,动态观察神经细胞的生长情况以了解牛磺酸对神经细胞的营养作用 ;不同剂量牛磺酸与神经细胞预孵育 2 4 h后 ,分别加入损伤剂 (谷氨酸和过氧化氢 ) ,观察神经细胞存活数及乳酸脱氢酶的漏出率的变化 ;并且利用双波长荧光分光光度计观察谷氨酸对神经细胞内钙稳态的改变及牛磺酸的拮抗作用。结果 :　牛磺酸能促进体外培养的海马神经元的生长 ,并延长其存活时间 ;而且能剂量依赖性地拮抗过氧化氢和谷氨酸引起的神经细胞存活数下降及乳酸脱氢酶漏出率增高 ;牛磺酸还可抑制谷氨酸引起的升钙作用。结论 :　牛磺酸能促进神经细胞的生长 ,对谷氨酸和过氧化氢引起的细胞损伤均有明显的保护作用。     

铅对三叉神经细胞胞内游离钙[Ca^2＋]i及电压依赖性钙通道ICa的影响

目的 观察铅对SD大鼠三叉神经细胞内游离钙的影响及其对电压依赖性钙通道作用,以探讨铅对三叉神经细胞毒性作用的机制.方法 用全细胞膜片钳方法检测铅对三叉神经细胞电压依赖性钙通道的作用,并用激光共聚焦和FLUO-3/AM荧光探针标记技术,从单个细胞水平检测铅对胞内游离Ca2 瞬间动态变化的影响.结果 铅可致三叉神经细胞内游离钙[Ca2 ]i升高,铅又可抑制三叉神经细胞电压依赖性钙通道电流ICa.结论 铅致三叉神经细胞内游离钙[Ca2 ]i升高作用与胞内钙库释放有关;铅抑制三叉神经细胞电压依赖性钙通道ICa作用与其抑制高电压激活(HVA)钙通道有关.     

铝对新生大鼠海马细胞内游离钙浓度的影响

目的 探讨铝对新生大鼠海马细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i)的影响.方法 采用体外实验的方法,将分离的新生Wistar大鼠海马细胞制成2×106个/ml的细胞悬液,经Fura-2-AM负载后,与氯化铝溶液(Al3 终浓度分别为0、10、100、1 000 μmol/L)一起孵育,分别测定孵育15、30、45 min后海马细胞悬液的荧光强度值(F')、最大荧光强度值(Fmax)、最小荧光强度值(Fmin),并计算海马神经细胞内[Ca2 ]i.结果 孵育15、30和45 min后,1 000 μmol/L Al3 海马细胞中[Ca2 ]i均高于对照组(0 μmol/L Al3 组),差异有统计学意义(P＜0.05).而10、100 μmol/L Al3 组[Ca2 ]i与对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 铝可通过增加新生大鼠海马神经细胞内[Ca2 ]i而发挥神经毒性作用.     

雌激素与神经毒性

雌激素作为一种内分泌激素 ,在神经系统中发挥着重要的作用 ,除了对性别分化和神经内分泌的调节外 ,还表现出对神经毒性的防护作用。其神经保护作用与雌激素受体途径、调节兴奋性氨基酸受体功能、维持胞内钙稳态、与神经生长因子相互作用、抑制细胞凋亡、调节质膜功能和免疫炎症反应等有关。本文拟就雌激素对神经毒性的作用及途径进行综述     

Aβ对大鼠海马细胞钙浓度和线粒体膜电位影响

目的 探讨β-淀粉样蛋白(Aβ25～35)对原代培养大鼠脑海马细胞内游离钙离子浓度和线粒体膜电位影响.方法 原代培养8d的SD大鼠脑海马神经细胞,利用老化的Aβ25 ～35 1、10和20 μmol/L对其染毒,分别观察染毒后24、48和72 h时海马细胞形态改变、细胞内游离钙离子浓度和线粒体膜电位.结果 随着染毒剂量增加,海马神经细胞开始变形、萎缩、神经元胞体模糊,突起变细、变短、分支减少,边缘模糊,神经网络破裂中断;电镜结果显示,随着染毒剂量增加和染毒时间延长,海马细胞凋亡比例增加;20 μmol/L Aβ25～35染毒24、48和72 h后,细胞内Ca2+浓度分别为(30.79±1.28)、(38.19±2.13)和(41.65±3.60),细胞内线粒体膜电位分别为(46.94±9.55)、(39.98±6.51)和(34.52±5.67),与对照组比较,Ca2+浓度均升高,膜电位均降低(P＜0.01).结论 Aβ25～ 35可以通过破坏细胞内钙稳态和线粒体膜电位而发挥神经毒性作用.     

脑脉Ⅱ号口服液减轻高血压脑出血大鼠神经细胞凋亡的作用及机制研究

目的 探讨中药复方制剂脑脉Ⅱ号口服液对高血压脑出血大鼠血肿周围组织神经细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)和细胞凋亡的影响.方法 将85只大鼠随机分为假手术组、对照组和中药组.向双肾双夹肾血管性高血压大鼠右侧尾状核注入胶原酶诱导脑出血.注射后2 h开始,每天灌胃给予脑脉Ⅱ号口服液(8 ml/d)或等容积蒸馏水直至处死.注射后6、12、24、72、168 h取脑,用流式细胞术检测细胞凋亡百分率,用Fura-2/AM荧光标记法测定突触体内[Ca2+]i.结果 与假手术组比较,对照组细胞凋亡百分率在注射6 h后显著增加(P<0.01),72 h达到高峰,168 h后明显下降;突触体内[Ca2+],的变化规律与细胞凋亡百分率的变化规律类似.脑脉Ⅱ号口服液治疗后,中药组细胞凋亡百分率和突触体内[Ca2+].均显著低于对照组(P<0.05). 结论 脑脉Ⅱ号口服液能够降低高血压脑出血大鼠神经细胞凋亡发生率,其机制可能与抑制神经细胞内钙超载有关.