昆明鼠自体卵丘细胞与早期胚胎序贯共培养对胚胎体外发育潜能的影响

目的:评价昆明鼠胚胎与自体卵丘细胞序贯共培养对提高早期胚胎体外发育潜能的影响。方法:分两组进行实验,序贯共培养组使用分离培养的卵丘细胞与序贯培养液构建培养体系,与昆明鼠早期胚胎进行共培养;序贯培养组使用序贯培养液对早期胚胎进行序贯培养,观察两组胚胎各阶段囊胚形成率,检测囊胚总细胞数、囊胚细胞凋亡数,囊胚进一步培养获得的干细胞系数。结果:序贯共培养3d后总的囊胚形成率为68.13%,序贯培养组囊胚形成率为45.31%(P<0.05);囊胚总细胞数分别为76.52和38.57(P<0.05),细胞凋亡率分别为7.44%和16.28%(P<0.05)。将囊胚进一步培养,共培养组干细胞建系率为12.50%,序贯培养组未能建系。结论:昆明鼠胚胎与自体卵丘细胞序贯共培养与序贯培养比较,前者能更好地模拟体内环境,提高早期胚胎体外发育潜能。     

小鼠成熟卵子重构及胚胎发育

目的：使用小鼠的卵丘细胞为供核，去核的成熟卵浆为受体进行卵子重构，观察受精、胚胎发育情况。方法：昆明小鼠超排卵后获取生殖泡期卵子，进行体外成熟。成熟卵子去核后将卵丘细胞核与精于直接注入，观察其受精和胚胎发育情况。结果：卵子去核存活率为69．2％(258／373)，注核存活率为44．1％(112／254)。20．9％(19／91)重构卵子排出1个极体并形成两原核，卵裂率为78．9％(15／19)。15个重构卵子于D2分裂至2—3个细胞后阻滞，无囊胚形成。结论：将小鼠的卵丘细胞核移植到成熟的去核卵浆中，同时注射精于进行激活，可以形成重构卵子并受精，但出现2细胞阻滞，发育潜能较差。     

D3形态学低评分胚胎囊胚形成的影响因素分析

目的：探讨取卵后第3天（D3）形态学低评分胚胎体外囊胚培养的发育潜能,分析影响囊胚形成的临床及胚胎因素。方法：通过序贯培养将D3低评分胚胎继续培养至囊胚期,观察囊胚形成率及优质囊胚形成率。分析年龄、基础窦卵泡数、基础卵泡刺激素（bFSH）、促性腺激素（Gn）总剂量、人绒毛膜促性腺激素（hCG）日雌二醇（E2）水平、获卵数、D3卵裂细胞数、D3胚胎碎片与囊胚形成的关系。结果：共收集422个取卵周期1 745个低评分胚胎进行囊胚培养,共形成1 046个（59.9%）囊胚,763个（43.7%）优质囊胚。不同基础窦卵泡、bFSH、Gn总剂量、hCG日E2水平、获卵数组间囊胚形成率及优质囊胚形成率差异均无统计学意义（P＞0.05）;不同年龄组间囊胚形成率差异无统计学意义（P＞0.05）,但优质囊胚形成率差异有统计学意义（P＜0.05）;不同D3卵裂细胞数、D3胚胎碎片组间囊胚形成率及优质囊胚形成率差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：低评分胚胎有不同程度的发育潜能,D3卵裂细胞数、D3胚胎碎片影响低评分胚胎的囊胚形成;年龄、D3卵裂细胞数、D3胚胎碎片影响低评分胚胎优质囊胚的形成。     

人类早期胚胎与体细胞共培养的研究进展

人早期胚胎共培养是模拟早期胚胎在体内的发育环境,将体细胞作为营养细胞与胚胎共同培养,一般利用人的输卵管上皮细胞、子宫内膜细胞、卵丘细胞等作为营养细胞;共培养体系通过分泌一些对早期胚胎发育有利的物质和代谢降解胚胎发育过程中产生的有毒物质等,在体外为胚胎发育提供一种更类似于体内的环境,能在一定程度上克服胚胎体外发育阻滞,促进早期胚胎发育,提高胚胎质量,增加胚胎种植率和妊娠率,降低流产率。但共培养涉及到大量的干扰因素,致使对培养液的营养成分和胚胎代谢的研究非常困难。进一步深入研究体细胞共培养对早期胚胎体外发育的影响及其作用机制将为改善体外培养环境和研制复杂培养液提供模型。     

人类早期胚胎与体细胞共培养的研究进展

人早期胚胎共培养是模拟早期胚胎在体内的发育环境,将体细胞作为营养细胞与胚胎共同培养,一般利用人的输卵管上皮细胞、子宫内膜细胞、卵丘细胞等作为营养细胞;共培养体系通过分泌一些对早期胚胎发育有利的物质和代谢降解胚胎发育过程中产生的有毒物质等,在体外为胚胎发育提供一种更类似于体内的环境,能在一定程度上克服胚胎体外发育阻滞,促进早期胚胎发育,提高胚胎质量,增加胚胎种植率和妊娠率,降低流产率.但共培养涉及到大量的干扰因素,致使对培养液的营养成分和胚胎代谢的研究非常困难.进一步深入研究体细胞共培养对早期胚胎体外发育的影响及其作用机制将为改善体外培养环境和研制复杂培养液提供模型.     

颗粒细胞与卵母细胞关系研究进展

颗粒细胞与卵母细胞共处于同一个微环境中,颗粒细胞通过复杂的缝隙连接与卵母细胞进行细胞之间的“对话”,并调控卵母细胞的生长与成熟。卵母细胞成熟后发生排卵,卵丘细胞通过自身及分泌作用影响着精卵结合及雄原核的形成。在哺乳动物的研究中发现,卵丘细胞与胚胎共培养能够克服发育阻滞,并对胚胎的发育起很好的支持作用。随着人类辅助生殖技术的发展,学者们越来越重视在基因及转录水平上对卵丘细胞的检测,从而对卵子及胚胎质量进行预测。综述颗粒细胞在卵子生长与成熟、受精及胚胎发育等方面的作用。     

重组人钙调素对小鼠早期胚胎体外发育的影响

目的:探讨外源重组人钙调素(recombinant human calmodulin rhCAM)对小鼠早期胚胎体外发育的影响。方法:小鼠超数排卵,收集2-细胞胚胎放入含有不同浓度rhCAM的CZB培养液中,观察并记录胚胎形态及测定囊胚细胞数。结果:HCG(human chorionic gonadotropin)注射120h后,20μg/mlrhCAM添加组囊胚率、扩张囊胚率和孵化囊胚率显著高于对照组(P<0.05),200μg/mlrhCAM添加组囊胚率、扩张囊胚率和孵化囊胚率显著低于其它各组(P<0.05)。各组囊胚细胞计数无显著差异。结论:rhCAM可促进早期胚胎体外发育,但高浓度rhCAM抑制胚胎发育。     

冷冻胚胎经序贯共培养用于建立人胚胎干细胞系

目的:利用长期冷冻人卵裂期胚胎经序贯共培养形成的囊胚建立人类胚胎干细胞系。方法:将冷冻≥10年的卵裂期胚胎复苏后,采用单层卵丘细胞序贯共培养至囊胚期,经辅助孵出,置鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层全胚培养,原代培养6d后加入20%MEF条件培养基培养至形成原代克隆。观察人胚胎干细胞集落的生长状态并通过碱性磷酸酶染色、Oct-4基因表达、核型分析及体外分化实验等方法进行生物学鉴定。结果:9枚冷冻卵裂期胚胎经序贯共培养,有6枚发育到囊胚期,最终获得1株胚胎干细胞系。经鉴定该细胞系具有碱性磷酸酶活性、表达Oct-4胚胎干细胞特异标记、形成拟胚体、在体外形成具有自动节律性的心肌细胞、并具有46,XY核型等5种特性。结论:冷冻胚胎经序贯共培养能够改善胚胎发育潜能,有助于建立人胚胎干细胞系。     

人卵丘细胞内基因表达与胚胎发育潜能的关系

缺乏准确、客观、非侵入性的胚胎评估标准是目前体外受精-胚胎移植技术所面临的主要挑战之一。本文对卵丘细胞内基因表达与胚胎及卵子发育潜能之间的相关研究进行了总结,发现卵丘细胞内特定基因的表达与胚胎发育、成熟及发育潜能之间存在紧密的联系。近年来,通过实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）及微阵列技术筛选出一系列颗粒细胞中能够预测受精结局、胚胎形态学评分、妊娠结局等胚胎发育潜能的候选标记基因,这些基因主要涉及卵丘扩展、脂类代谢、细胞凋亡等过程。然而,卵母细胞及胚胎的发育受卵泡内、外多种因素的影响。欲确立一种全面、准确、非侵入性的胚胎发育潜能评估方法仍需更深入的研究。     

子宫内膜异位症对体外受精或卵胞质内单精子注射-胚胎移植周期胚胎发育及临床结局的影响

目的 探究子宫内膜异位症(EMs)对行辅助生殖技术助孕后不孕患者胚胎发育及临床结局的影响。方法 选取行IVF/ICSI-ET治疗的90例EMs不孕患者及276例输卵管因素不孕患者,回顾性分析2组胚胎发育及临床结局的差异。结果 2组的女方年龄、不孕年限、BMI、基础激素浓度、Gn用量、Gn天数及合并男方因素差异均无统计学意义(P>0.05),但EMs组的原发性不孕占比(53.30%)高于对照组(31.50%),差异有统计学意义(P<0.05);EMs组的MⅡ数、卵子成熟率、正常受精数、优质胚胎数、优质胚胎率、有效胚胎数均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2组的获卵数、正常受精率、有效胚胎率、优质囊胚率、有效囊胚率及临床结局差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 EMs对IVF/ICSI-ET后胚胎发育具有负面影响,但对妊娠结局无明显影响。     

玻璃化冷冻法在未成熟卵子冷冻技术中的应用

目的:探讨玻璃化冷冻法在未成熟卵子冷冻方面的应用价值。方法:选取GV期卵母细胞744枚,随机分为5组,A组(128枚),GV期卵子直接进行未成熟卵母细胞体外培养(IVM);B组(220枚),GV期卵子直接行玻璃化冷冻;C组(155枚),GV期卵子直接行IVM,待培养至MⅡ期,再行玻璃化冷冻;D组(112枚),GV期卵子去除冠-丘细胞,行玻璃化冷冻;E组(129枚),GV期卵子保留除冠-丘细胞行玻璃化冷冻。比较各组卵母细胞的存活率、成熟率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:与A组相比,B组和C组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率均降低(P<0.05);B组与C组间存活率、成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率无差异(P>0.05)。E组的成熟卵子率较D组提高(P<0.05),但两组在解冻卵子存活率、受精率、2细胞数和>2细胞数方面无差异(P>0.05)。结论:未成熟卵子的玻璃化冷冻保留冠-丘细胞可显著提高冻融效果。     

裸核注入法在小鼠体细胞核移植中的应用

目的：探讨供核细胞的处理方式对小鼠体细胞核移植胚胎体内外发育潜能的影响。方法：对供核细胞采用供体胞浆内完整注入和裸核注入两种不同的注核方式,观察重构胚的激活、卵裂及囊胚发育情况;并设立体外受精组通过胚胎受体内移植观察2种注核方式所获重构胚的发育结局。结果：完整细胞组的卵裂率和囊胚率均低于裸核组,差异有统计学意义（χ2卵裂=5.785,P=0.016;χ2囊胚=6.092,P=0.014）;3组所获仔鼠质量比较差异有统计学意义（F=14.331,P=0.00）,体外受精组最轻,完整细胞组最重,而完整细胞组所获得胎盘的质量高于裸核组及体外受精组,差异有统计学意义（与体外受精组相比,t=-8.786,P=0.00;与裸核组相比,t=-6.573,P=0.00）。结论：裸核注入法可提高小鼠体细胞核移植胚胎的体内外发育潜能。     

选择性单囊胚移植在降低多胎率中的应用

目的：探讨选择性囊胚培养与单囊胚移植（eBC-SBT）对妊娠结局、多胎妊娠率和单卵双胎率的影响。方法：按实施选择性囊胚培养与单囊胚移植技术的前、后,分为干预组（对预后良好、高危多胎妊娠风险的患者建议行选择性囊胚培养,自愿者行囊胚培养,其余患者于第3天移植）和非干预组（全部患者移植第3天卵裂期胚胎）。第5天或第6天对接受eBC-SBT患者的囊胚进行评级,评为BB及其以上级别的囊胚,予单囊胚移植;评为BC及以下级别的囊胚,予双囊胚移植。分析eBC-SBT对种植率、临床妊娠率、多胎率及单卵双胎率等的影响。结果：①干预组和非干预组患者的年龄、获卵数及受精率差异无统计学意义（P〉0.05）,干预后移植胚胎数降低（[1.60±0.56）vs（.2.17±0.51）,P〈0.01],种植率（33.75%vs.25.69%）和临床妊娠率（47.31%vs.40.84%）均提高（P〈0.05）,多胎率降低（15.38%vs.29.37%,P〈0.01）。②干预后,选择性单囊胚移植组移植胚胎数低于卵裂期胚胎移植组（[1.09±0.28）vs（.1.96±0.40）,P〈0.01],前者种植率提高（43.99%vs.30.18%,P〈0.01）,2组临床妊娠率差异无统计学意义（47.35%vs.47.29%,P〉0.05）,但多胎率降低（0.86%vs.24.59%,P〈0.01）。③干预组和非干预组的单卵双胎发生率差异无统计学意义（1.32%vs.1.67%,P〉0.05）。在干预组中,选择性单囊胚移植患者的单卵双胎率与卵裂期胚胎移植组的差异亦无统计学意义（2.59%vs.1.09%,P〉0.05）。结论：eBC-SBT能显著降低多胎率,有效维持总体临床妊娠率,且未见单卵双胎率异常增高。     

冻融优质胚胎体外培养时间对临床结局的影响

目的:探讨玻璃化冷冻复苏后优质胚胎的培养时间对临床结局的影响。方法:采用回顾性研究方法,将2011~2012年在本院实施冻融胚胎移植(FET)的1061例分为3组,其中冷冻胚胎复苏后的优质胚胎培养2~4h移植为A组(96例);培养4~8h移植为B组(615例);培养8h移植为C组(350例),比较各组胚胎植入率、临床妊娠率、流产率及活产率。结果:3组患者年龄、不孕年限、体重指数、移植日子宫内膜厚度、移植胚胎个数无统计学差异(P0.05);胚胎植入率(24.7%、23.4%、28.2%)、临床妊娠率(43.8%、40.8%、44.9%)、早期流产率(4.8%、10.4%、12.1%)、活产率(40.6%、32.7%、37.4%)均无统计学差异(P均0.05)。结论:玻璃化冷冻胚胎复苏后培养时间对FET周期临床结局无明显影响,可根据临床和患者情况,具体安排胚胎移植时间。     

短时受精后补救ICSI的临床应用研究

目的:探讨降低体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中受精失败的有效方法。方法:对行IVF治疗的600个周期进行短时受精观察,于受精后5h左右去除卵丘细胞,观察卵子第二极体的排出情况;对第二极体排出率低于1/2的周期追加观察至受精后9h,如果存在可疑受精低下及全卵受精失败,则予以早补救卵细胞浆内单精子注射(ICSI)治疗(观察组);选择同时期连续进行ICSI治疗的患者共49个周期(对照组);比较两组的受精及妊娠情况。结果:两组的正常受精率、多精受精率、正常卵裂率及优质胚胎率差异有统计学意义(P<0.01);临床妊娠率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:IVF-ET中短时受精后早补救ICSI不影响临床妊娠率,对预防及降低受精失败有重要意义。     

重组人生长激素联合5-氟尿嘧啶对表达或不表达生长激素受体人肝癌细胞的体外干预

目的研究重组人生长激素（rhGH）在体外对表达或不表达生长激素受体（GHR）的人肝癌细胞系的影响。方法采用免疫组织化学方法检测人肝癌细胞系的GHR表达。每种肿瘤细胞系分4组进行处理：未处理组、5-氟尿嘧啶（5-Fu）处理组、rhGH处理组及5-Fu＋rhGH联合处理组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及流式细胞术分析不同浓度rhGH及其与5-Fu合用对人肝癌细胞系的生长抑制、凋亡、细胞周期及增殖指数（PJ）等的影响。结果Bel-7402细胞表达GHR；与未处理组相比，各浓度rhGH组的生长率、G2／M期比例和PI显著升高，细胞凋亡率显著降低（P均〈0．05）；与5-Fu处理组相比，各浓度rhGH＋5-Fu组的G2／M期比例和PI显著升高，抑制率和细胞凋亡率显著降低（P均〈0．05）。SMMC7721不表达GHR；不同浓度rhGH对该细胞系的分裂增殖无明显影响（P均〉0．05）；rhGH＋5-Fu联合处理组与5-Fu处理组问的细胞抑制率、凋亡率及Pl差异也无显著性（P均〉0．05）。结论rhGH在体外能促进GHR^＋的肝癌细胞增殖，减弱5-Fu对GHR^＋细胞的抗癌作用，但对GHR^-的肝癌细胞无明显影响，也不能明显干扰5-Fu对GHR^-细胞的抗癌功能。     

复方苦参注射液联合化疗治疗非小细胞肺癌临床观察

目的观察复方苦参注射液联合化疔治疗非小细胞肺癌的疗效及毒副反应。方法144例非小细胞肺癌患者随机分成复方苦参注射液联合化疗的治疗组76例,单纯化疗的对照组68例,经2个周期治疗后比较两组的近期疗效,止痛效果及毒副反应。结果治疗组近期疗效有效率为39．47％（30／76）高于对照组35．29％（24／68）,两组无差异性（P〉0．05）。治疗组止痛缓解率、总有效率分别为69．70％（23／33）、93．94％（31／33）均高于对照组68．75％（22／32）、90．63％（29／32）,两组无差异性（P〉0．05）。毒副反应主要为骨髓抑制,以白细胞减少最明冠,治疗组发生率78．95％低于对照组（82．35％）,其中治疗组Ⅲ、Ⅳ度白细胞减少发生率明显低于对照组,但两组均无差异性（P〉0．05）。两组血红蛋白、血小板减少、胃肠道反应及心肝。肾功能异常等发生率均相近,均无差异性。结论复方苦参注射液联合化疗治疗非小细胞肺癌可以提高疗效,减轻毒副反应。     

鼠神经生长因子联合椎旁阻滞技术治疗肺癌并发带状疱疹神经痛的临床研究

目的：分析鼠神经生长因子联合椎旁神经根组织在肺癌合并带状疱疹神经痛中的应用价值,为临床诊疗提供参考。方法：将62例肺癌合并带状疱疹神经痛的患者随机分为观察组和对照组,每组31例。观察组给予鼠神经生长因子联合椎旁神经根阻滞治疗;对照组给予加巴喷丁联合椎旁神经根阻滞治疗。观察两组患者治疗前及治疗后1周、2周、3周、4周的视觉模拟评分（VAS）及治疗效果。结果：治疗前,两组患者VAS无显著差异,治疗后1-4周,观察组患者VAS均低于对照组,差异有统计学意义（t=5.885,t=8.566,t=6.659,t=8.751;P〈0.05）;观察组有效31例（占96.8%）,对照组有效25例（占80.6%）,观察组总有效率高于对照组,差异有统计学意义（x^2=4.47,P〈0.05）。结论：鼠神经生长因子联合椎旁神经根治疗肺癌合并带状疱疹神经痛的有效率为96.8%,且不增加不良反应的发生,是安全、有效的治疗方法,值得临床借鉴。