香烟烟雾的氧化应激效应及褪黑素的干预作用

目的通过体外实验了解香烟烟雾作用下细胞的氧化应激状况,并了解褪黑素对这种状况的影响。方法选择(200±20)g雄性Wistar大鼠,无菌采血并分离淋巴细胞。用pH值7·2的磷酸盐缓冲液(PBS)作为吸收液制备0·2支/毫升的水溶性香烟烟雾溶液(CSS),并以终浓度8×10-3支/毫升的香烟烟雾溶液作用于细胞。前期试验中用0·05和0·1mmol/L褪黑素预处理香烟烟雾作用的细胞,发现0·1mmol/L的褪黑素增加细胞活力的作用比0·05mmol/L强,因此作为后续试验的干预浓度。实验中以RPMI1640为培养液,在37℃、体积分数5%CO2的条件下孵育细胞。实验设对照组、褪黑素作用组(MLT组)、香烟作用组(CSS组)、褪黑素与香烟共同作用组(MLT+CSS组)。用0·1mmol/LMLT对MLT和MLT+CSS组细胞预处理2h后,在CSS和MLT+CSS组细胞中加入香烟烟雾溶液,再孵育2h。用AlamarBlue摄入法检测细胞活力,彗星试验检测DNA损伤,Nitrite法测定SOD活性,TBA荧光法测定脂质过氧化水平(LPO),考马斯亮蓝G250测定蛋白质水平以校正SOD及LPO值。结果CSS组彗星尾长以及LPO水平均高于对照组,SOD活性低于对照组,差异显著。与CSS组相比,MLT+CSS组细胞活力增加,DNA损伤减轻,SOD活性增强,LPO水平降低,差异显著。结论体外实验中,8×10-3支/毫升的香烟烟雾溶液处理细胞出现氧化应激反应。0·1mmol/LMLT能增强细胞活力,增加SOD活性,减轻脂质过氧化和DNA损伤,有效拮抗CSS的氧化损伤作用。     

人外周血淋巴细胞体外乙酸铅染毒后氧化应激损伤研究

目的 研究乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞致氧化应激与DNA氧化损伤情况。
方法 分别用浓度为0 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L和80 μmol/L的乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞6 h、12 h、24 h, 应用2', 7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色分析和流式细胞仪检测染毒后细胞内活性氧类(ROS)水平, 高度水溶性四唑盐(WST-1)法检测染毒后细胞内总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性, 酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒检测染毒后细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平, 并对ROS、T-SOD、8-OHdG三指标间的关系进行相关性分析。
结果 乙酸铅染毒6 h后, 各染毒组人外周血淋巴细胞ROS水平均高于对照组, 差异有统计学意义(P < 0.01);20 μmol/L染毒组人外周血淋巴细胞T-SOD和8-OHdG水平与对照组相比, 差异无统计学意义(P>0.05), 而40 μmol/L和80 μmol/L染毒组人外周血淋巴细胞T-SOD和8-OHdG水平均高于对照组, 差异有统计学意义(P < 0.01)。乙酸铅染毒12 h和24 h后, 各染毒组人外周血淋巴细胞ROS、T-SOD和8-OHdG水平均高于对照组, 差异有统计学意义(P < 0.01)。相关性分析显示, 细胞内ROS含量与T-SOD活性呈负相关(r_{6 h}=-0.865、r_{12 h}=-0.890、r_{24 h}=-0.801, P < 0.01), 与8-OHdG含量呈正相关(r_{6 h}=0.840、r_{12 h}=0.829、r_{24 h}=0.866, P < 0.01)。
结论 乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞后会诱导细胞ROS生成, 抑制细胞内抗氧化酶SOD活性, 造成人外周血淋巴细胞氧化应激状态增强和DNA氧化性损伤。
     

亚砷酸钠对人支气管上皮细胞的氧化损伤作用

目的 探讨不同浓度亚砷酸钠对永生化人支气管上皮细胞氧化损伤的影响.方法 体外培养永生化人支气管上皮(HBE)细胞,加入终浓度为0～50000 μmol/L的亚砷酸钠溶液暴露24h,测定细胞活性;加入终浓度为0～6μmol/L的亚砷酸钠溶液暴露24h,测定活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力及细胞DNA链断裂情况.结果 与对照组比较,各浓度亚砷酸钠染毒组HBE细胞内ROS、MDA含量和Olive尾矩均显著升高,细胞存活率和SOD活力均显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,HBE细胞内MDA、ROS含量和Olive尾矩均呈明显的上升趋势(P＜0.05),细胞存活率和SOD活力均呈明显的下降趋势(P＜0.05).结论 亚砷酸钠可以诱导HBE细胞氧化损伤增加,提示氧化应激可能是亚砷酸钠致HBE细胞毒作用机制之一.     

吸烟者淋巴细胞DNA与血清SOD、LPO的检测

目的 探讨烟毒(尼古丁等)对人体淋巴细胞DNA的损伤，以及对人体内脂质过氧化水平的影响。方法 对61名吸烟人员和30名非吸烟人员进行外周血淋巴细胞培养，观察姐妹染色体单体互换率(SCE)；同时测定血清超氧化物歧化酶(SOD)和脂质过氧化物(LPO)。结果吸烟组SCE、LPO显增高，SOD显降低；SCE与LPO呈显正相关，与SOD呈显负相关。结论 烟毒(尼古丁等)使机体抗氧化能力下降、DNA损伤。     

硒和抗坏血酸对砷致大鼠细胞毒性拮抗作用

目的 观察不同浓度的亚砷酸钠(NaAsO2)对体外培养的大鼠淋巴活性氧群(ROS)和细胞内脂质过氧化物(LPO)含量的影响,并探讨亚硒酸钠(NaSeO3)和维生素C对砷毒性的拮抗作用.方法 体外分离大鼠外周血淋巴细胞后,施加处理因素,在37℃条件下恒温培养,用2'7'-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)染色法检测细胞内的ROS水平,用硫代巴比妥酸荧光法测定细胞内LPO含量.结果 NaAsO2浓度>10μmol/L时,ROS和乙二醛(MDA)含量明显高于对照组;用抗氧化剂预处理使细胞内ROS和MDA含量减少.结论 亚砷酸钠可引起细胞内氧化应激,抗氧化物可一定程度拮抗砷的细胞毒性作用.     

香烟烟雾溶液对人淋巴细胞的损伤及修复

目的　了解香烟烟雾溶液作用于人淋巴细胞后DNA的损伤及修复状况。方法　以 8× 10 - 3 支 /ml香烟烟雾溶液作用于正常人淋巴细胞 ,用彗星试验检测 0 ,0 5,1,2 ,3 ,4,5,6h时点细胞的DNA损伤状况。结果　与 0h组相比 ,2h至 6h组彗星尾长均显著增长 (P <0 0 0 1) ,3h达到最长 ,之后逐渐降低 ,但到 6h未恢复至正常水平。结论　香烟烟雾溶液能直接引起人淋巴细胞的DNA损伤 ,且细胞能在一定程度上修复这种损伤     

香烟烟气溶液对大鼠淋巴细胞活力的影响及抗氧化物质的干预作用

目的　了解香烟烟气溶液对大鼠淋巴细胞活力的影响 ,并探讨多种抗氧化物质的干预作用。方法以PBS作吸收液 ,用大包氏管收集香烟主流烟气 ,分别以 0、1× 10 - 3、2× 10 - 3、4× 10 - 3、8× 10 - 3、12× 10 - 3和16× 10 - 3支 毫升的香烟烟气溶液 (CSS)作用于大鼠淋巴细胞 ,2小时后加入AlamarBlue ,以其还原率评价细胞的活力。选择中作用剂量 8× 10 - 3支 毫升的香烟烟气溶液处理细胞 ,之前用维生素C(VC)、维生素E(VE)、谷胱甘肽 (GSH)、褪黑素 (MLT)、二甲基亚砜 (DMSO)等抗氧化物质预处理 ,检测细胞的AlamarBlue还原率。结果　 2× 10 - 3～ 16× 10 - 3支 毫升各组AlamarBlue还原率均显著低于对照组 ,且随CSS浓度的增高而下降。 0 0 5mmol LVC、0 2mmol LVE、0 1mmol LMLT、1mmol LGSH、1%DMSO均能显著增加CSS染毒组细胞的AlamarBlue还原率。结论　CSS能使大鼠淋巴细胞活力下降 ,VC、VE、MLT、GSH、DMSO等抗氧化物质能拮抗这种损伤作用。     

共济失调毛细血管扩张突变基因对氢醌诱导人外周血淋巴细胞DNA损伤及S期阻滞的影响

目的 探讨共济失调毛细血管扩张突变基因（ataxia telangiectasia-mutated gene，ATM）对氢醌（hydroquinone，HQ）诱导人外周血淋巴细胞（JHP）DNA损伤及细胞周期S期阻滞的影响。方法 以不同浓度的HQ（0、1、5、10 μmol/L）处理JHP 12 h后，采用流式细胞术检测细胞周期分布情况，活细胞成像技术检测活性氧（reactive oxygen species，ROS）释放水平，Western blot法检测DNA损伤标志蛋白γ-H2AX、抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO1以及细胞周期相关蛋白CyclinA、CDK2、CyclinE的表达；利用ATM化学抑制剂KU-60019预处理JHP 1 h，以10 μmol/L HQ处理12 h后观察上述指标的变化。结果 （1）与0 μmol/L HQ组相比，随着HQ浓度的增加，ROS释放水平逐渐升高，ATM、γ-H2AX及抗氧化相关蛋白Nrf2、HO-1、NQO1表达水平呈剂量依赖性增加，CDK2蛋白表达呈剂量依赖性降低（P<0.05）；10 μmol/L HQ组S期细胞比例显著增加，CyclinA表达水平显著降低，与0 μmol/L HQ组相比差异有统计学意义（P<0.05）。（2）与HQ组相比，HQ+KU-60019组ROS的释放水平显著升高，S期阻滞减轻（P<0.05）；HQ+KU-60019组γ-H2AX、Nrf2、HO-1、NQO1和CDK2蛋白的表达均显著升高（P<0.05）。结论 HQ可诱导JHP的ROS释放，促进ATM蛋白、DNA损伤标志蛋白γ-H2AX以及抗氧化相关蛋白表达升高，诱导细胞发生S期阻滞；ATM表达抑制后，ROS释放增多，γ-H2AX以及抗氧化相关蛋白表达进一步升高，S期阻滞减轻。     

氧化应激损伤对内耳毛细胞内游离钙离子和钙调蛋白表达的影响

目的通过分析氧化应激损伤的内耳毛细胞内游离Ca~(2+)浓度和钙调蛋白(CaM)表达水平,探讨感音性耳聋的氧化应激损伤机制。方法采用不同浓度(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)双氧水染毒培养内耳毛细胞,24 h后检测细胞过氧化氢酶(CAT)活性,Fluo-3 AM荧光探针定量检测细胞内Ca~(2+)浓度,免疫荧光法分析CaM表达水平。结果氧化损伤的毛细胞CAT活性明显下降,随着染毒浓度的增加下降更明显(F=689.9,P0.01);氧化损伤毛细胞游离Ca~(2+)浓度随着染毒浓度的增加而增加(F=716.107,P0.01);氧化损伤的毛细胞CaM表达水平明显增加,50μmol/L和100μmol/L H_2O_2染毒组随浓度增加表达增强,但200μmol/L H_2O_2染毒组表达水平有所回落(F=732.727,P0.01)。结论氧化应激损伤导致毛细胞内游离Ca~(2+)浓度和CaM表达增加诱发细胞凋亡是多类型感音性耳聋的重要发病机制,严重的氧化应激损伤可抑制细胞CaM表达。     

香烟烟雾对A549与A549-R细胞的氧化损伤

目的探讨hOGG1基因低表达对香烟烟雾作用下细胞氧化损伤效应的影响。方法不同浓度香烟烟雾暴露A549细胞和hOGG1基因低表达的A549-R细胞,MTT实验检测两种细胞存活率,彗星实验观察两种细胞DNA损伤,荧光法测定两种细胞内活性氧(ROS)含量,高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)检测细胞基因组DNA中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量。结果随着香烟烟雾暴露浓度的增加,两种细胞的存活率均下降,且A549-R细胞IC50显著小于A549细胞,差异有统计学意义(P<0.05);两种细胞ROS生成量与香烟烟雾浓度呈剂量-效应关系,当香烟烟雾浓度≥1.25支/升时,A549-R细胞ROS含量显著高于A549细胞(P<0.05);不同香烟烟雾浓度下,A549-R细胞拖尾率、尾长、OTM值均大于A549细胞,差异有统计学意义(P<0.05);A549细胞与A549-R细胞基因组DNA8-OHdG含量随香烟烟雾浓度的增加而升高,当香烟烟雾浓度为2.5支/升和5支/升时,A549-R细胞8-OHdG含量显著高于A549细胞(P<0.05)。结论香烟烟雾可导致A549细胞与A549-R细胞的氧化损伤,hOGG1基因低表达可增加A549-R细胞对香烟烟雾引起的氧化损伤的敏感性。     

脑脊液免疫球蛋白及白蛋白对脑膜炎的鉴别诊断意义

目的　分析脑脊液 (CSF)免疫球蛋白 (Ig)和白蛋白 (Alb)对病毒性脑膜炎 (VM )、结核性脑膜炎 (TM )、化脓性脑膜炎(PM )的鉴别诊断意义。方法　用速率散射比浊法测定VM 5 3例 ,TM 40例 ,PM 14例患者CSFIg和Alb的含量。结果　IgG、IgM和Alb在TM和PM中均显著高于VM组 (P <0 0 0 1) ,且以PM升高最明显 ,但TM和PM间 ,Alb及比值变化无显著性意义 ;与VM相比 ,TM以IgG变化最突出 ( 75 %) ,PM以IgM变化为显著 ( 78%) ;Alb在TM和PM升高比例最高 ( 10 0 %)。PM 14例中有 12例 ( 85 .7%)、TM 40例中仅 6例 ( 15 %)符合典型CSF常规和生化改变。如果把CSFAlb >3 0 0mg/L和IgG >61mg/L作为条件 ,则TM的诊断阳性率达 3 8/ 40 ( 95 %)。结论　TM和PM血脑屏障的破坏明显大于VM ,CSFIg和Alb的含量检测弥补了CSF常规分析的不足 ,有助于颅内感染的诊断和鉴别诊断     

咀嚼肌外感受抑制试验在紧张型头痛患者中的应用

目的探讨三叉神经颞肌、咬肌外感受抑制试验（ES）检测紧张型头痛的应用价值。方法对30名紧张型头痛和30名正常志愿者利用肌电图（EMG）刺激眶下神经进行ES试验,检测颞肌、咬肌的潜伏期和时限。结果与对照组相比,紧张型头痛患者的第2抑制期（ES2）潜伏期延长,时限缩短现象。经t检验,紧张型头痛组左右侧颞肌和咬肌EF2潜伏期、左侧颞肌时限与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论咀嚼肌外感受抑制试验对紧张型头痛具有诊断和研究价值。     

克山病患者的抗氧化酶活性及血管内皮功能

目的 观察山东省克山病患者的抗氧化酶活性和血管内皮功能，探讨二者与克山病发生发展的关系。方法 选择慢型、潜在型克山病患者57人、病区健康人34人、非病区健康人36人，分别采集清晨空腹外周血按试剂盒要求检测血清及红细胞GSH—Px、SOD、LPO、LT、NO、NOS含量及活性。结果 ①病区人群红细胞GSH—Px活性较非病区健康人明显降低（P＜0．01）；RBCSOD含量也较非病区健康人明显减少（P＜0．01）、RBCSOD活性减低（P＜0．01）；②克山病患者血清LPO含量明显升高，与病区和非病区健康人之间差异有统计学意义（P＜0．01），病区健康人又较非病区健康人明显升高（P＜0．01）；③克山病患者LT、NO和NOS含量明显高于病区健康人（P＜0．01），且慢型克山病患者与潜在型克山病患者之间差异有统计学意义（P＜0．01）。结论 克山病患者和病区健康人的红细胞抗氧化功能明显降低；血管内皮功能失调，二者在克山病发生发展中存在某种联动关系，加重心肌缺血、缺氧，导致心肌变性、坏死和瘢痕形成。     

传统凝血试验与血栓弹力图检测诊断腹部创伤患者凝血功能障碍的比较研究

目的比较传统凝血试验(conventional coagulation test, CCT)和血栓弹力图分析仪(thromboelastography,TEG)在诊断腹部创伤患者凝血功能障碍的价值。 方法选择2017年1月至2018年1月东南大学医学院附属江阴市人民医院普通外科收治的38例以腹部创伤为主患者同时进行CCT与TEG监测,比较两种检测方法诊断凝血功能障碍的敏感性与特异性;并对发现创伤后早期(≤6 h)患者亚组进行比较分析。 结果腹部创伤患者凝血功能障碍CCT阳性率(8例,21.1%)明显低于TEG(阳性21,55.2%,P<0.05);创伤后早期凝血功能障碍CCT阳性率(3/13,23.1%)亦明显低于TEG(9/13,69.2%,P<0.05)。 结论TEG诊断创伤后凝血功能障碍的敏感性与特异性明显优于CCT方法,特别是对于创伤后早期凝血功能障碍的诊断TEG更具有优势。     

Production of various disinfection byproducts in indoor swimming pool waters treated with different disinfection methods

In this study, the concentrations of disinfection byproducts (DBPs), including trihalomethanes (THMs; chloroform, bromodichloromethane, dibromochloromethane, and bromoform), haloacetic acids (HAAs; dichloroacetic acid and trichloroacetic acid), haloacetonitriles (HANs; dichloroacetonitrile, trichloroacetonitrile, bromochloroacetonitrile, and dibromoacetonitrile), and chloral hydrate (CH) were measured in 86 indoor swimming pools in Seoul, Korea, treated using different disinfection methods, such as chlorine, ozone and chlorine, and a technique that uses electrochemically generated mixed oxidants (EGMOs). The correlations between DBPs and other environmental factors such as with total organic carbon (TOC), KMnO(4) consumption, free residual chlorine, pH, and nitrate (NO(3)(-)) in the pools were examined. The geometric mean concentrations of total DBPs in swimming pool waters were 183.1±2.5μg/L, 32.6±2.1μg/L, and 139.9±2.4μg/L in pools disinfected with chlorine, ozone/chlorine, and EGMO, respectively. The mean concentrations of total THMs (TTHMs), total HAAs (THAAs), total HANs (THANs), and CH differed significantly depending on the disinfection method used (P<0.01). Interestingly, THAAs concentrations were the highest, followed by TTHMs, CH, and THANs in all swimming pools regardless of disinfection method. TOC showed a good correlation with the concentrations of DBPs in all swimming pools (chlorine; r=0.82, P<0.01; ozone/chlorine; r=0.52, P<0.01, EGMO; r=0.39, P<0.05). In addition, nitrate was positively correlated with the concentrations of total DBPs in swimming pools disinfected with chlorine and ozone/chlorine (chlorine; r=0.58; ozone/chlorine; r=0.60, P<0.01), whereas was negative correlated with the concentrations of total DBPs (r=-0.53, P<0.01) in the EGMO-treated pools.     

丙烯腈对男工性激素水平的影响

目的探讨丙烯腈(ACN)对男工性激素水平的影响,全面评价ACN生殖危害,为保护工人及子代健康提供科学依据。方法选112名职业性接触ACN的男工为接触组,同时选择地理位置和经济条件相近的128名不接触ACN男工为对照组,用放射免疫分析法(RIA)测定其血清中睾酮(T)、黄体生成素(FSH)、卵泡刺激素(LH)和雌二醇(E2)浓度。结果接触组男工血清中T和FSH浓度明显低于对照组(P<0.05),LH和E2浓度两组之间差异无显著性。当按车间分组时,ACN浓度较低的溶剂车间的男工血清中T浓度高于其他3个车间,但差异无显著性。当接触组按个人累计外接触剂量(包括吸烟)分组时,接触组男工血清中FSH和T浓度随接触剂量增加呈下降趋势。当外接触剂量≥50g时,T浓度明显降低(P<0.05),E2浓度明显升高(P<0.05);当外接触累计剂量≥100g时,血清中FSH浓度也明显低于对照组(P<0.05)。结论ACN及其代谢产物(CEO)能诱导男工血清中FSH、T和E2水平发生改变;提示,接触ACN可能对内分泌功能和睾丸中支持细胞和间质细胞有损伤,从而可能引起性功能障碍。     

异位妊娠药物治疗研究进展

近年异位妊娠(ectopic pregnancy,EP)的发病日趋年轻化,剖宫产率增加致剖宫产切口疤痕妊娠(cesarean scar pregnancy,CSP)显著增加,使异位妊娠的药物治疗,成为目前研究的热点。本文聚焦异位妊娠的药物治疗研究进展,旨在探索更为安全、简便、有效、低毒且能保留生育功能的异位妊娠治疗方法。     

低氧动物血清的EPO生成拮抗效应

实验表明慢性间断低氧（０．４２ａｔｍ，２２ｈ／ｄａｙ）可致小鼠血清促红细胞生成素（ＥＰＯ）浓度早期增加，其后迅速减低；而红细胞生成持续递增。将低氧６天小鼠的血清注入同种小鼠体内，低氧３天后血清ＥＰＯ浓度显著低下。表明低氧动物血清中存在某种拮抗ＥＰＯ生成的体液性因子。     

托泊替康治疗复发性卵巢癌的系统评价

为评价托泊替康在复发性卵巢癌化疗中的疗效、安全性以及成本效果,通过计算机检索MEDLINE(1966～2005年)等多个数据库资料及互联网相关文献,并用手工检索相关领域的杂志,用循证医学的方法收集有关托泊替康与其他药物相比较治疗复发性卵巢癌的随机对照试验文献.文献检索结果,纳入符合标准的RCT共4个(9篇文献),包括病人1032例,其方法学质量等级为A或B.通过评价:关于托泊替康在复发性卵巢癌的二线化疗中的临床应用,推荐用于耐药性、难治性的卵巢癌,选用治疗效果足够、毒性可以耐受的5天静脉滴注的标准治疗方案.