PCR-SSP法检测29种HLA-B27基因亚型

目的采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)高分辨技术检测29种HLA-B27基因亚型。方法设计并合成HLA-B27亚型特异性引物35条(配对组成上下游引物组合29对)以及一对内对照引物,建立PCR-SSP方法,用于B27亚型分型。检测标本为117例HLA-B27阳性研究对象(男79名,女38名)外周血DNA。结果 117例标本的PCR-SSP扩增均获得成功,成功构建了PCR-SSP检测反应体系。共检测出6种亚型:B*2702、B*2703、B*2704、B*2705、B*2706及B*2713,六种亚型的构成比分别为:0.85%、6.84%、64.10%、25.64%、1.71%和0.85%,其中B*2704和B*2705为中国汉族人群中主要亚型。结论应用该新型PCR-SSP高分辨技术进行HLA-B27基因亚型检测,能检测出较多HLA-B27亚型,且该法进行B27亚型分型分辨度高,特异性强,成本较低,适合于临床应用。     

江西省艾滋病病毒感染者HLA-B*5701阳性率的研究

目的研究江西省人免疫缺陷病毒(HIV)感染者中的HLA-B*5701阳性率,并比较国内外其他民族的相关研究数据。方法样品来自部分2010江西省11个设区市新报告的HIV阳性人群中确证后首次CD4细胞计数在400-500个/UL之间者,提取其全血基因组DNA,采用序列特异性引物(SSP)进行聚合酶链反应(PCR),并对HLA-B*5701阳性样本结果通过测序进行HLA-B基因分型验证。结果 500名艾滋病病毒(HIV)感染者中,3人携带HLA-B*5701等位基因,阳性率为0.6%。结论江西省人群HIV感染者中的HLA-B*5701阳性率低于黑种人及白种人的研究数据,江西汉族人群与中国南方其他汉族人群相比较差异无统计学意义。     

肇庆地区血小板供者库的建立及应用

目的建立肇庆地区已知人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因分型及人类血小板抗原(human platelet alloantigen,HPA)HPA-1~6、9、15基因型的无偿机采血小板供者库,为临床血小板输注无效(platelet transfusion refractory,PTR)患者提供HLA及HPA相合的血小板。方法采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(polymerase chain reaction-sequence specific olignuliotide probe,PCR-SSO)检测血小板供者的HLA基因分型及聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)检测HPA-1~6、9、15基因型。对杂合度高的HPA-3、15随机抽样20个标本进行测序。对3例患者进行HLA-I分型。结果成功检测出101名无偿血小板捐献者HLA及HPA-1~6、9、15基因型;HPA-3、15的测序结果与PCR-SSP一致。HLA-A位点等位基因共检出11个;HLA-B位点共检出等位基因20个。3例患者中的1例从已知的HLA血小板库中找到完全一致供者,另外2例也找到三位点吻合的血小板供者。结论建立基于HLA-I类抗原及HPA基因分型的血小板供者资料库,有助于给PTR患者提供HLA和HPA相合的单采血小板。     

两种方法对HLA-Ⅰ、Ⅱ类分型结果的比较

目的比较PCR—SSP基因分型与血清学抗原分型两种HLA分型方法的应用结果。方法对62例已进行HLA血清学分型的肾脏移植患者,应用PCR-SSP法进行HLA—I类(A、B位点)、Ⅱ类(DR、DQ位点)基因进行扩增分型。结果基因分型结果与血清学分型一致者52例,基因分型能明显判断而血清学分型无法判断者10例,其中B位点6例,DR位点3例,DQ位点1例。结论 PCR-SSP方法具有操作简单、快速、结果可靠的特点,特别是对HLA-I类的B位点及II类的结果判定比血清学分型方法更准确,能满足组织配型的需要。血清学方法操作简单、快捷,但存在一定错配现象。     

3例cisAB血型分子生物学鉴定及输血策略探讨

目的 鉴定cisAB血型,了解其血清学及基因型特点,探讨cisAB血型患者输血策略.方法 采用血型血清学方法检测5例标本的ABO血型;运用特异性序列引物聚合酶链反应技术进行ABO和cisAB血型基因分型;采用序列测定分型技术对3例ABO亚型样本进行1-7号外显子基因序列分析.结果 样本1血清学分型为A2Bx,基因分型为...     

HLA-B27聚合酶链反应体系的建立和初步临床应用

目的:建立一种快速、廉价、特异性高、准确检测强直性脊柱炎(AS)患者人类白细胞抗原B27(HLA-B27)的方法.方法:选择人类门细胞抗原B27蛋白基因组保守区域设计上游引物,下游引物,优化PCR反应体系.对450例AS疑似标本和50例健康体检标本同时采用流式细胞技术(FCM)检测对照其结果进行方法学评价.结果:(1)成功的构建rPCR反应体系.(2)450例AS疑似标本聚合酶链反应(PCR)法检出HLA-B27 阳性247例,阳性率54.89%,流式细胞技术检出HLA-B27阳性250例,阳性率55.56%,50例健康体检标本HLA-B27两种检测方法均为阴性.两者复合率达98%以上,对20例阳性标本进行多次PCR实验,重复性一致,未见批问和批内差异.(3)初步临床应用证实该方法结果准确、灵敏度高.结论:采用聚合酶链反应检测HLA-B27的方法灵敏度高、特异性强、操作简便、廉价、快速,更适合临床检验诊断的要求.     

一例CisAB血型样本的鉴定

目的对1例术前备血ABO血型血清学鉴定疑为Cis AB型的血样进行分子确认。方法应用单克隆抗体和人源抗体检测该患者红细胞ABO血型抗原,用ABO标准红细胞检测其血清中的ABO抗体,采用序列特异性聚合酶链反应(PCR-SSP)技术进行ABO基因的初步分型检测,并对ABO基因第6和第7外显子的核苷酸序列采用聚合酶链反应进行扩增,并对扩增产物进行纯化,然后进行测序反应,测序结果运用相关软件进行分析,最后将分析结果与红细胞血型基因突变数据库进行比对。结果血型血清学鉴定为Cis AB亚型,PCR-SSP技术基因分型为A/O型;ABO基因第6、第7外显子测序结果经与A101核苷酸序列比对发现如下杂合位点:261A/G,467T/C,803C/G。结论血型血清学对Cis AB和AB亚型判定有一定的局限性,分子手段可明确该样本的血型为cis AB型,基因型为Cis AB01/O01。     

血型系统中罕见B(A)亚型的鉴定及血清学特性分析

目的对罕见B(A)亚型进行血清学和基因定型,探讨该类血型患者的输血策略。方法采用试管凝集法鉴定血型,采用序列特异性引物-聚合酶链式反应法进行ABO基因分型,采用凝聚胺法进行交叉配血试验。结果试管凝集法检测3例样本定型为A弱B强,其血清中存在抗-A抗体;3例样本经血型抗原基因突变数据库比对,基因型均为B(A)亚型,其中1种样本为B(A)04/O01单体型,2种样本为B(A)04/O02单体型,3例样本均在第640位碱基发生了AG的突变;3例样本与A、B、O、AB型供血者进行交叉配血,结果主侧或次侧不合,与O型、B型红细胞交叉配血结果相合,与AB型血浆交叉配血结果相合。结论罕见B(A)亚型的鉴定及血清学特性分析对后续患者的输血策略具有较大影响。     

中国深圳地区丙型肝炎病毒RNA阳性与人类白细胞抗原分型的关联研究

目的探讨深圳地区丙型肝炎病毒感染情况,病毒载量,基因分型与人类白细胞抗原分型的关联。方法收集2005年7月至2006年7月深圳市血液中心与深圳市肝病研究所的丙型肝炎病毒RNA阳性的献血者和病人血清152人份,采用特异性引物进行丙型肝炎病毒定量分析后,再设计特异性引物进行基因分型和采用序列特异性引物聚合酶链反应(sequencespecificprimerspolymerasechainreaction,PCR-SSP)技术进行人类白细胞抗原分型。结果丙型肝炎病毒RNA阳性者中,定量水平在4×106~6×106copies/ml左右,基因分型以2B为主,HLA-A3相对危险度(RR)为4.3,P<0.05,HLA-B46(RR=5.2,P<0.02)和HLA-DRB4(RR=1.61,P<0.01)与丙型肝炎病毒持续感染有关,HLA-B58(RR=0.37,P<0.01),HLA-B*60(RR=0.37,P<0.01),HLA-DRB13(RR=0.28,P<0.01)和HLA-DRB15(RR=0.02,P<0.01)似乎具有保护性意义。结论在深圳汉族人群中,HLA等位基因可能会影响丙型肝炎的持续感染与转归。     

番禺献血人群B亚型的筛查与基因分型研究

目的随机抽取广州番禺地区的献血者开展B亚型筛查,了解该地区B亚型的分类特征。方法采用96孔微量板法,使用单克隆抗-A/抗-B血型定型试剂和人ABO血型反定型用红细胞定型试剂检测盒,对献血者样本进行ABO血型正反定型检测,凡是正定型凝集强度少于4+或正反定型不一致的样本,使用人源抗-A/抗-B、抗-H等试剂进行血清学亚型鉴定;采用PCR-SSP法对亚型样本进行基因分型。结果在13 028例B型样本中检出1例血清学B3亚型,发生频率约为0.008%(1/13 028),基因分型为杂合型B303/O2。结论本地区献血人群中存在B3亚型,使用PCR-SSP法能准确鉴定亚型的基因型。     

HLA-B27 3种检测方法的比较

目的：比较3种HLA-B27检测方法的敏感度、特异性、适用性。方法：采用微量淋巴细胞毒试验、PCR-SSP和流式细胞仪方法同时检测128份待检标本HLA-B27。结果：淋巴细胞毒试验、PCR-SSP和流式细胞仪方法敏感度、特异性、阳性预测价值、阴性预测价值分别为0.468、0.975、0.917、0.759;1.000、0.988、0.979、1.000;0.978、1.000、1.000、0.988。PCR-SSP和流式细胞仪方法敏感度显著性高于淋巴细胞毒试验,两两比较P〈0.01;阴性预测价值优于淋巴细胞毒试验,两两比较P〈0.05。结论：PCR-SSP和流式细胞仪方法均优于淋巴细胞毒试验,具有较好的临床适用性。     

湖南地区强直性脊柱炎与HLA-B27关联性的观察

目的　探讨湖南地区 HL A- B2 7对强直性脊柱炎的诊断意义。　方法　对临床疑为强直性脊柱炎的患者静脉血采用玻璃珠抗凝分离淋巴细胞并用标准的 Terasaki软滴法作微量淋巴细胞毒试验。结果疑为强直性脊柱炎患者 6 47例 ,其中男性 481例 ,女性 16 6例 ,男女比例为 3:1。 B2 7阳性率为 5 6 .5 7% ,其中男性占 6 7.15 % ,女性占 2 5 .90 %。发病年龄主要集中在青少年时期。　结论　 HL A- B2 7血清学检测对强直性脊柱炎的诊断和鉴别诊断具有重要意义。     

HLA-Ⅰ等位基因对HIV-1特异性细胞毒性T细胞免疫应答的影响

目的 探讨中国人群HLA-Ⅰ等位基因对HIV-1抗原特异性CTL免疫应答的影响.方法 采用酶联免疫斑点(ELISPOT)技术,以HIV-1 P24区域的12个重叠肽段作为特异性肽段表位,刺激100例HIV-1感染者的外周血单核细胞(PBMC),检测IFN-γ分泌细胞频率;并用PCR特异性引物扩增法测定上述研究对象的HL...     

Role of HLA-B51 and HLA-B52 in susceptibility to pulmonary tuberculosis

MHC class I-restricted CD8+ T cells are important for the generation of protective immune responses in MTB infection. CD8+ CTL (cytotoxic T-lymphocyte)-derived IFN-g may be especially important both for cells lacking MHC class II molecules, e.g. in the lung and for macrophages where mycobacteria can evade recognition during chronic infection by sequestering their antigens away from sensitized CD4+ T cells. This study was designed to detect any association of MHC class I (HLA-B) molecules with pulmonary tuberculosis. A total of 75 individuals, comprising of 33 patients with pulmonary tuberculosis; 12 HIV patients who developed tuberculosis and 30 healthy controls, were included in the study. They were typed for HLA-B by the PCR-SSP method. The results of only HLA-B alleles, which are highly significant, are presented here. The number of healthy individuals with HLA-B52 was significantly high when compared to the patient groups (healthy versus TB: 21.2% versus 0.0%, OR=0.0, P<0.0001, P(c)=0.003; healthy versus HIV-TB: 21.2% versus 16.7%; OR=0.74; P<0.001; P(c)=0.003). In contrast, the number of patients, both TB- and HIV-TB-positive, with HLA-B51 was significantly high when compared to the healthy group of individuals (TB versus healthy: 36.7% versus 3%; OR=18.53; P<0.0001; P(c)=0.001; HIV-TB versus healthy: 41.7% versus 3%; OR=22.86; P<0.0001; P(c)=0.001). Only one healthy control was positive to HLA-B51; however this individual also had HLA-B52. The results of this study suggest that HLA-B52(5) has a negative, i.e. a protective association and HLA-B51(5) has a positive (susceptible) association, for pulmonary tuberculosis. Studies on HLA-B51 and HLA-B52 in a larger population to assess their role in tuberculosis may be useful for TB-vaccination strategies, since HLA profiles are likely to be related to vaccine efficacy.     

实时荧光定量PCR在HLA-B~*5801等位基因检测中的性能评价

目的:评价采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测人类白细胞抗原B位点5801(HLA-B*5801)等位基因的重复性、准确性和最低检出限。方法:选取HLA-B*5801阳性和阴性样本各2例,每一样本每批内测定5次,连续测定2 d,共重复测定10次,评价方法的重复性。收集20例已知阳性和阴性样本,实时荧光定量PCR方法进行检测,同时与金标准DNA测序法的结果进行比对,评价方法的准确性。同时进一步选取其中1例阳性DNA样本进行梯度稀释后再行检测,评价方法的最低检出限。结果:4例样本重复性检测阳性和阴性符合率为100%;实时荧光定量PCR法与DNA测序法检测结果符合率为100%,收集的20例已知阳性和阴性样本中HLA-B*5801阳性8例,阴性12例;实时荧光定量PCR的最低检出限为2.5 ng/μl DNA。结论:实时荧光定量PCR可方便、快捷地检测HLA-B*5801等位基因,其准确度高,重复性好,适用于临床常规样本的检测。     

先兆子痫患者HLA-DQHLA-DPA1基因多态性分析

目的:探讨人类白细胞抗原HLA-DQ、HLA-DPA1基因多态性与先兆子痫发病的关系。方法:采用序列特异性引物技术(PCR-SSP)对46例先兆子痫患者和105例正常孕妇及其新生儿进行HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DPA1等位基因分型,比较其基因频率。结果:所有标本共检出11种HLA-DQA1基因表型、16种HLA-DQB1基因表型,6种HLA-DPA1基因表型。先兆子痫患者HLA-DQB1*0301基因频率高于正常孕妇,差异有显著性(Pc=0·032,RR=2·43,AR=0·30),其余各基因表型频率两组比较差异均无显著性。结论:HLA-DQ81*0301基因可能是一种先兆子痫发病的易感基因。     

HLA-DQA_1基因多态性与妊娠期肝内胆汁瘀积症的相关性

目的:探讨妊娠期肝内胆汁瘀积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)与人类白细胞抗原-DQA1(human leucocyte antigen-DQA1,HLA-DQA1)等位基因多态性的关系。方法:采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法研究遵义地区11例ICP孕妇和7例正常孕妇的HLA-DQA1基因的多态性。结果:所有标本共检出11种HLA-DQA1基因表型,ICP患者HLA-DQA1?0302基因频率高于正常孕妇(38.09%与14.28%),但二者差异无显著性(P>0.05)。结论:HLA-DQA1等位基因可能与遵义地区ICP的发病无明显关联性。     

抗癫痫药物皮肤不良反应与HLA-B＊1502基因的相关性研究

目的：探讨江西省汉族人群中芳香族抗癫痫药物所致皮肤不良反应与HLA-B＊1502基因的相关性。方法：采用病例对照研究,一共收集样本46例,其中Stevens-Johnson综合征（SJS）组13例,轻微皮肤反应（MPE）组19例,对照组（包括耐受者和正常志愿者）14例。采用序列特异性引物聚合酶链反应（SSPPCR）技术检测HLA-B＊1502的基因型。采用Fisher确切概率法检验分析HLA-B＊1502与抗癫痫药物皮肤不良反应的相关性。结果：HLA-B＊1502基因频率分别为SJS组100%（13/13）,MPE组10.5%（2/19）,对照组7.1%（1/14）。SJS组分别与MPE组和对照组比较差异具有统计学意义（P〈0.05）,MPE组与对照组比较差异无统计学意义（P〈0.05）。结论：江西汉族人群中芳香族AEDs导致的SJS与HLA-B＊1502基因具有强相关性,而MPE与之无相关性。建议江西汉族人群在采用AEDs治疗前应该进行HLA-B＊1502基因型检测,阳性者应避免服用芳香族AEDs,此外还需警惕阴性者发生SJS等严重皮肤不良反应。     

浙江沿海地区汉族人A型及AB型血型的基因亚型研究

目的:探讨浙江沿海地区汉族人A型及AB型血型的基因亚型分布情况,为输血及血库血量储存提供理论依据。方法:采用序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)检测该地区汉族成人体检者血样本DNA基因亚型,A型280份,AB型110份,根据PCR-SSP反应产生的特异性阳性条带判定相应的基因亚型。结果:A型样本分型成功278份,AB型样本分型成功107份。A型血基因亚型以A/A201、A/O及A201/O较多,占97.84%,而A201/A201及A/A占2.16%;AB型血中基因亚型A/B型(51.40%)及A201/B型(48.60%)所占比例较为接近。A型及AB型血型的基因亚型分布在男女性别之间无显著性差异(P>0.05)。结论:浙江沿海地区汉族人群A型血中存在多种基因亚型,A型血型遗传多态性以及不同亚型之间的抗原性差异需进一步研究。