玛咖水提物在PC12细胞对抗化学性缺氧损伤中作用

目的探讨玛咖水提物在PC12细胞对抗二氯化钴(CoCl_2)诱导化学性缺氧损伤中的作用及机制。方法应用不同浓度的CoCl_2处理PC12细胞不同时间,建立化学性缺氧损伤模型。应用细胞增殖检验试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率;试剂盒法测定细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合酶(NOS)的活性,检测丙二醛、一氧化氮(NO)及乳酸脱氢酶(LDH)的含量;NO荧光探针(DAF-FM DA)染色流式细胞术检测细胞内NO含量;Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡率。结果与对照组比较,CoCl_2组PC12细胞存活率明显受到抑制,且呈现一定的浓度与时间依赖性;与对照组比较,300μmol/L CoCl_2组PC12细胞存活率[(51.55±2.71)%]明显降低,细胞培养液中SOD、NOS活性升高,丙二醛、NO和LDH含量增加;与CoCl_2组比较,60、120μg/mL玛咖组PC12细胞存活率[分别为(63.99±3.24)%、(69.95±2.25)%]明显升高,细胞培养液中NOS活性降低,丙二醛、NO和LDH含量降低。与对照组比较,500μmol/L CoCl_2组PC12细胞内NO含量[(61.5±5.7)%]明显升高,细胞凋亡率[(41.33±3.83)%]明显增加;与500μmol/L CoCl_2组比较,60、120μg/mL玛咖组细胞内NO含量[分别为(36.5±4.7)%、(33.4±3.8)%]明显降低,细胞凋亡率[分别为(34.87±2.50)%、(31.33±3.44)%]明显下降。结论玛咖水提物对CoCl_2诱导的化学性缺氧损伤具有一定拮抗作用,其机制可能与抑制NO的产生、减轻氧化应激反应,抑制细胞凋亡有关。     

信号转导和转录激活因子3及小凹蛋白1在X射线诱导肺腺癌A549细胞早衰中的调控关系研究

目的:探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)和小凹蛋白1(Cav-1)在X射线诱导A549细胞早衰过程中的调控关系,完善X射线诱导A549细胞早衰的分子机制。方法:利用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测不同肿瘤细胞A875、BGC-823、A549细胞和正常细胞株Hacat细胞中STAT3和Cav-1蛋白表达水平,并检测X射线照射和STAT3过表达及抑制剂处理后A549细胞中p53蛋白、Cav-1蛋白表达水平。结果:肿瘤细胞A875、BGC-823、A549细胞及正常细胞Hacat细胞中STAT3、Cav-1蛋白呈现阳性表达;X射线照射A549细胞后p53蛋白表达增加,STAT3过表达及活化可引起p53蛋白表达水平升高,同时抑制Cav-1蛋白的表达。结论:X射线诱导的A549细胞p53蛋白早衰通路部分依赖于STAT3激活,STAT3负向调控Cav-1蛋白表达。     

黄酒对TNF-α诱导的大鼠血管内皮细胞功能及动脉粥样硬化的影响

目的观测黄酒对TNF-α诱导的大鼠血管内皮细胞的作用,分析其对动脉粥样硬化的影响。方法大鼠原代主动脉VECs经分离培养及纯化鉴定后,取第3~4代细胞用于实验。根据前期实验,分为对照组、TNF-α组、TNF-α+瑞舒伐他汀组(10μmol/L)、TNF-α+酒精组(0.5%、1.0%、1.5%)、TNF-α+黄酒组(0.5%、1.0%、1.5%),共有5种不同处理的9个水平组。培养24 h后收集样品,硝酸还原酶法测定培养液上清液NO的含量;培养48 h后用免疫印迹法检测e NOS和i NOS蛋白的表达量。结果与TNF-α组相比,瑞舒伐他汀组、黄酒1.0%组、黄酒1.5%组内皮上清中NO含量升高,e NOS活性增加,e NOS蛋白的表达升高,i NOS蛋白表达降低(P0.05);与瑞舒伐他汀组相比,黄酒1.0%组和黄酒1.5%组的e NOS蛋白表达降低,i NOS蛋白表达升高(P0.05);相比酒精组(1.0%或1.5%),其对应酒精度的黄酒中e NOS蛋白表达升高(P0.05),i NOS蛋白表达降低(P0.05)。结论小剂量黄酒能够使上清NO含量增加,增强e NOS的活性及其蛋白表达,抑制i NOS蛋白表达,具有类他汀样作用,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

葫芦素B对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的影响

目的了解葫芦素B(CuB)对脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的影响及其分子机制。方法将小鼠肺泡巨噬细胞分为对照组、LPS组和LPS+不同浓度CuB组,对照组不作任何处理,LPS组用1μg/m L LPS诱导,另外3组加入不同浓度CuB使浓度分别为1、2.5和5μM,培养2 h后用1μg/m L LPS诱导。采用CCK-8法检测细胞活性,ELISA法检测细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2)水平,Griess Reagent法检测NO浓度,WB法检测i NOS、COX-2、Nrf2和HO-1的蛋白表达水平。结果分组培养24 h后各组细胞活性差异无统计学意义(P0.05),本实验浓度下的LPS和CuB对细胞无明显毒性。LPS组细胞上清液中细胞因子和NO水平均高于对照组(P0.05);经CuB处理的LPS组细胞上清液中炎症因子浓度较LPS组明显降低(均P0.05),并呈剂量依赖性。LPS刺激后,细胞中i NOS、COX-2、Nrf-2和HO-1表达量均增加,CuB可抑制i NOS和COX-2的表达,促进Nrf-2和HO-1的表达。结论 CuB能抑制LPS诱导后巨噬细胞炎症因子的释放,作用机制可能是抑制i NOS和COX-2表达,促进Nrf-2和HO-1表达。     

阿司匹林对缺氧诱导人HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡及sFlt-1、HIF-1α表达的影响

目的：探讨阿司匹林对缺氧诱导人HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡及可溶性类fms酪氨酸激酶-1(sFLT-1)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法：人HTR-8/SVneo滋养细胞分为正常对照组、缺氧模型组(2%O₂、5%CO₂、93%N₂)、阿司匹林低(0.05mmol/L)、中(0.1mmol/L)、高剂量组(0.2mmol/L);培养结束后，MTT法测定细胞活力，流式细胞仪测定细胞凋亡水平及细胞周期，血清培养基基质胶培养测定细胞血管形成能力，RT-PCR法及蛋白印记法测定细胞sFlt-1、HIF-1α水平。结果：缺氧模型组OD值、存活率、血管形成能力、HIF-1α mRNA和蛋白表达均低于正常对照组及阿司匹林各剂量组，但随着阿司匹林剂量增上述各指标逐渐降低；缺氧模型组凋亡率、G1期、sFlt-1 mRNA和蛋白表达均高于正常对照组和阿司匹林各剂量组，但随着阿司匹林剂量增加凋亡率、G1期、sFlt-1 mRNA和蛋白表达逐渐升高(均P<0.05)。结论：低剂量阿司匹林可促进缺氧环境下HTR-8/S...     

人巨细胞病毒影响绒毛外细胞滋养细胞增殖功能的体外研究

目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)对绒毛外细胞滋养细胞增殖功能的影响。方法:选择绒毛外细胞滋养细胞株HPT-8进行研究,体外培养时加入HCMV,免疫荧光法检测HCMV PP65,MTT法检测不同浓度HCMV、不同作用时间对HPT-8增殖的影响。结果:病毒感染组HPT-8细胞内可见大量红色HCMV PP65抗原信号;与正常对照组比较,10～100μl病毒液作用12 h HPT-8增殖均无异常(P>0.05),70μl和100μl病毒液作用24 h HPT-8增殖明显抑制(P<0.05),20、30、40、50μl病毒液作用48 h HPT-8增殖均明显抑制(P<0.05),10μl病毒液作用72 h HPT-8增殖明显抑制(P<0.05);其中,48 h和72 h时间点,20μl、30μl、40μl病毒液导致的细胞增殖异常差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HCMV可感染HPT-8并在细胞内复制,抑制细胞增殖。     

较低剂量甲醛诱导人脐静脉内皮细胞损伤的时相特征及机制

目的观察较低剂量甲醛(formaldehyde,FA,浓度为40μmol/L)诱导人脐静脉内皮细胞损伤时相特征及一氧化氮(NO)含量变化的时相规律,分析甲醛在诱导内皮细胞损伤中的作用机制。方法将人脐静脉内皮细胞(HU-VEC-12株)与甲醛浓度为40μmol/L的DMEM培养基孵育。分别处理一定时间后(0,4,12,24,48,72h)H-E染色-光学显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定细胞的活性;丙酮酸二硝基苯腙比色-分光光度法检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;硫代巴比妥法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)浓度;硝酸还原酶法测定培养液中NO浓度;生化分析法测定内皮细胞一氧化氮合酶活性;免疫细胞化学法测定内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱生型一氧化氮合酶(i NOS)的蛋白表达;RT-PCR法测定eNOS和i NOS的mRNA表达。结果较低浓度甲醛呈时间依赖性地促进细胞LDH漏出,以及内皮细胞上清液MDA和NO的产生;降低eNOS的活性,抑制eNOS在蛋白和基因水平的表达;增加i NOS活性,促进i N-OS在蛋白和基因水平的表达。结论甲醛诱导HUVEC-12细胞损伤,机制可能与其抑制eNOS的活性及表达,诱导i NOS的活性及表达,增加病理性NO产生,从而导致内皮细胞损伤。     

一氧化氮合酶在氟致大鼠原代海马神经细胞氧化损伤及细胞凋亡中的作用

目的采用一氧化氮合酶(e NOS)抑制剂L-亚氨基乙基鸟氨酸(L-NIO)探讨一氧化氮合酶在氟致大鼠原代海马神经细胞氧化损伤及细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的大鼠海马神经细胞分为对照(空白培养基)组和Na F(0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、1、2、4 mmol/L)单独染毒组及L-NIO(1、2、3、4、5、10μmol/L)单独染毒组,染毒48 h后,采用CCK-8法测定细胞活性。将大鼠海马神经细胞分为对照(空白培养基)组、Na F(0.2、1 mmol/L)单独染毒组、Na F和L-NIO联合染毒组(0.2 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO和1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO),染毒48 h后,检测细胞中e NOS蛋白和m RNA的表达水平及细胞凋亡情况以及细胞培养液中一氧化氮(NO)含量和NOS活力。结果与对照组相比,0.02~4 mmol/L Na F染毒组及4~10 mmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,仅0.2、1 mmol/L Na F染毒组大鼠海马神经细胞中e NOS蛋白和m RNA的表达水平升高,除0.2 mmol/L Na F染毒组e NOS蛋白的表达水平外,差异均有统计学意义(P0.05)。与相同浓度Na F染毒组相比,0.2、1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞中e NOS蛋白和m RNA的表达水平降低,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,仅1 mmol/L Na F染毒组大鼠海马神经细胞的凋亡率升高,差异有统计学意义(P0.05)。与相同浓度Na F染毒组相比,0.2、1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞的凋亡率较低,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,0.2、1 mmol/L Na F染毒组大鼠海马神经细胞培养液中NO含量和NOS活力较高。与相同浓度Na F染毒组相比,0.2、1 mmol/L Na F+3μmol/L L-NIO组大鼠海马神经细胞培养液中NO含量和NOS活力较低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论过量氟可致大鼠原代海马神经细胞NOS活力上升,NO合成增强,导致氧化损伤及细胞凋亡;L-NIO可以拮抗过量氟引起的原代海马神经细胞e NOS蛋白、m RNA表达及细胞凋亡率增高,起到一定的神经保护作用。     

胶质瘤细胞HIF1α和VEGF高表达模型的建立

目的建立胶质瘤细胞HIF1α和VEGF高表达模型。方法通过MTT及荧光显微镜,观察缺氧(1%O2)对细胞增殖及凋亡的影响;应用免疫印迹观察缺氧对胶质瘤细胞HIF1α表达的影响;采用Real-timeRT-PCR和ELISA检测缺氧胶质瘤细胞VEGF的表达和分泌。结果缺氧24h或48h,细胞均不出现凋亡;缺氧24h仅轻微减少细胞增殖(下降3.23%,P<0.01),缺氧48h明显抑制细胞增殖(减少22.53%,P<0.001)。1%O2处理细胞2h或4h,HIF1α蛋白表达均显著增加(P<0.01)。与此一致,缺氧暴露10h,U87细胞VEGFmRNA水平升高4.24倍(P<0.01)。同时,缺氧24h诱导了VEGF蛋白的分泌(P<0.01)。结论 1%O2模拟了在体胶质瘤缺氧微环境,诱导了HIF1α和VEGF高表达。     

缺氧对滋养细胞E-钙黏蛋白表达的影响

目的:了解在缺氧条件下,单层贴壁培养的滋养细胞系TEV-1中,E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)的表达在mRNA水平和蛋白水平变化情况,探讨缺氧环境对滋养细胞迁移能力的影响,深入了解缺氧环境诱发子痫前期发病的潜在分子机制。方法:体外贴壁培养的滋养细胞系(TEV-1),分别直接接种于24孔板进行细胞爬片和培养瓶内,分为常氧组和缺氧组。常氧组加新鲜DMEM/F12培养基,缺氧组加含终浓度为300μmol/L二氯化钴的培养基,然后在正常条件下(37℃,5%CO2)培养。两组细胞培养48 h后,分别收集细胞,采用Trizol法抽提mRNA,并进行RT-PCR,检测E-钙黏蛋白的mRNA表达水平;细胞爬片采用免疫组织化学法进行染色,检测E-钙黏蛋白的蛋白表达水平。统计数据分析两组差异性。结果:二氯化钴化学缺氧条件下培养后,滋养细胞E-钙黏蛋白的mRNA和蛋白表达水平均较常氧对照组升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:缺氧环境可能导致滋养细胞E-钙黏蛋白的mRNA和蛋白的表达水平升高,由此降低了滋养细胞的迁移能力。这可能是缺氧造成胎盘浅着床、继而发生子痫前期的重要分子机制。     

低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸NO含量、NOS活性及AIF基因的变化

目的 研究低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性及凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)基因的变化。方法 酶法检测不同剂量(0、0.025、0.05、0.075、0.1及0.2Gy)及0.075Gy照射后不同时间(0、3、6、12、18和24h)小鼠睾丸组织中NO含量及NOS活性的变化;Real-time PCR和Western blot法检测不同剂量(0、0.05、0.075、0.1及0.2Gy)及0.075Gy照射后不同时间(0、6、12和24h)小鼠睾丸组织中AIF mRNA表达及蛋白的表达。结果 不同剂量X射线照射后12h,小鼠睾丸组织中NO含量及NOS活性随照射剂量增加而增加,0.075Gy增至最大(P<0.05),0.1~0.2Gy一直维持较高水平(P<0.05);AIF mRNA随剂量增加而增加,0.1Gy时达到最大(P<0.05);而AIF蛋白在0.075Gy时达到最大。0.075Gy X射线照射后,NO含量与NOS活性随时间延长而增加,NO含量在24h时增到峰值(P<0.05),而NOS活性在12h时达到峰值(P<0.05);AIFmRNA随时间延长而增加,在24h时达到峰值(P<0.05);其蛋白表达在12h时达到峰值。结论 低剂量电离辐射照射后,小鼠睾丸生精细胞中NO含量、NOS活性及AIF基因表达增加,具有时程和剂量效应规律性。     

人正常早孕滋养细胞体外培养株的系统鉴定

目的 建立人早孕滋养细胞株（HPT-8）的系统鉴定方法。方法 通过光镜、扫描电镜、透射电镜、免疫组化和免疫荧光激光共聚焦的方法对体外培养出的HPT-8进行系统鉴定评价。结果 电镜下可见细胞表面微绒毛丰富；胞质丰富；内质网扩张明显，细胞间紧密的桥粒样结构连接；检测细胞胞浆中角蛋白18和波形蛋白均为阳性，细胞胞浆中角蛋白7为阳性，细胞膜上移动相关蛋白为阳性。表皮生长因子受体、滋养细胞趋化因子和胎盘碱性磷酸酶结果均阳性，而人绒毛促性腺激素和胎盘催乳素结果均为阴性。结论 通过多种方法对HPT-8进行形态、超微结构、蛋白骨架和功能指标的综合评价，可以较全面的确定体外传至72代的细胞株HPT-8为具有部分内分泌功能的滋养细胞株，为进一步开展实验研究建立细胞模型。     

地塞米松对羊水过少胎盘和胎膜组织中水通道蛋白8表达的影响及其机制研究

目的探讨地塞米松对羊水过少胎盘和胎膜组织中水通道蛋白8(AQP8)表达的影响及其可能机制。方法选取2014年1月-12月间在该院产科住院的足月羊水过少孕妇20例为研究组,选取同期足月正常妊娠孕妇20例为对照组。采用RTPCR技术、免疫组化法检测2组孕妇羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养细胞、胎盘合体滋养细胞中AQP8 mRNA及蛋白的表达情况;在研究组胎盘和胎膜组织细胞中分别加入不同剂量的地塞米松,孵育24 h后再次检测胎膜和胎盘组织中AQP8 mRNA的表达水平。结果研究组羊膜上皮细胞、胎盘合体滋养细胞的AQP8 mRNA表达强度均明显低于对照组(t值分别为6.931、8.550,均P0.05);研究组绒毛膜滋养细胞AQP8 mRNA表达强度与对照组之间差异无统计学意义(t=0.439,P0.05)。2组AQP8蛋白在3种细胞中均有表达,均位于细胞膜和细胞质中,表现为棕黄色颗粒。研究组羊膜上皮细胞和胎盘合体滋养细胞的AQP8蛋白表达水平明显低于对照组(t值分别为9.660、7.135,均P0.05);2组AQP8蛋白在绒毛膜滋养细胞中的表达差异无统计学意义(t=0.193,P0.05)。2组羊膜上皮细胞、胎盘合体滋养细胞的AQP8 mRNA的表达水平随着地塞米松浓度的增加而逐渐提升;当浓度为50μg/ml时,2组羊膜上皮细胞、胎盘合体滋养细胞的表达水平明显高于浓度为0μg/ml时,差异有统计学意义(t值分别为18.924、25.037,均P0.01)。结论羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养细胞和羊水量存在一定相关性;地塞米松可促进AQP8mRNA的表达,其可能机制为通过上调羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养细胞中AQP8的表达而影响羊水量的稳态。     

Fas表达异常与重度子痫前期的关系研究

目的:探讨重度子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞Fas(又称APO-1,CD95)的表达及意义。方法:采用免疫组化法观察24例Fas在重度子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞的表达,并与24例正常晚期妊娠胎盘比较。结果:Fas主要表达于胎盘绒毛合体滋养细胞及细胞滋养细胞的胞浆及胞膜内。与正常对照组比较,Fas在重度子痫前期组胎盘绒毛滋养细胞的表达水平显著增加(P<0.05),差异有显著性。Fas在重度子痫前期组胎盘绒毛滋养细胞的表达与新生儿出生体重和胎盘重量均有明显相关性。结论:Fas在重度子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞中表达失衡,通过免疫途径诱导滋养细胞发生级联凋亡反应及滋养细胞对螺旋小动脉的浸润过浅,影响“血管重铸”过程,导致胎盘缺血、缺氧,可能与重度子痫前期的病因及病理过程有关。     

子痫前期胎盘组织中LAMA4蛋白表达量及其与滋养细胞侵袭、胎盘缺氧的相关性

目的探讨子痫前期胎盘组织中层粘连蛋白α4链(LAMA4)蛋白表达量及其与滋养细胞侵袭、胎盘缺氧的相关性。方法收集2012年5月-2016年5月在该院接受治疗及分娩的子痫前期患者56例作为观察组;另选取同期进行产检及分娩的正常产妇50例作为正常对照组。根据胎盘组织中LAMA4蛋白表达中位数,观察组患者被分为高LAMA4蛋白组和低LAMA4蛋白组,每组各28例。采用Western-Blot法检测胎盘组织中LAMA4蛋白表达量;采用荧光定量PCR法检测胎盘组织中滋养细胞侵袭相关基因mRNA表达量;采用化学发光法检测脐血中胎盘缺氧相关指标含量。结果观察组胎盘组织LAMA4蛋白表达量低于正常对照组(P0.05);高LAMA4蛋白组、低LAMA4蛋白组胎盘组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PLGF)mRNA表达量低于正常对照组,可溶性fms-样酪氨酸激酶受体-1(sFlt1)mRNA表达量高于正常对照组,脐血胎盘缺氧指标,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶-1(HPH-1)、瘦素含量均高于正常对照组(P0.05);高LAMA4蛋白组胎盘组织中MMP-9、VEGF、PLGFmRNA表达量高于低LAMA4蛋白组,sFlt1mRNA表达量低于低LAMA4蛋白组,脐血胎盘缺氧指标HIF-1α、HPH-1、瘦素含量低于低LAMA4蛋白组(P0.05)。结论子痫前期胎盘组织中LAMA4蛋白表达量减少,具体LAMA4蛋白表达水平与滋养细胞侵袭呈正相关,与胎盘缺氧程度呈负相关。     

缺氧-复氧对肾小管上皮细胞内DRP1及OPA1表达的影响

目的:探讨缺氧-复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)后人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)内动力相关蛋白1(Dynamin related protein 1,DRP1)及视神经萎缩症蛋白1(optic atrophy,OPA1)表达的变化。方法:以人近曲肾小管上皮细胞株为研究对象,将培养细胞随机分为正常对照组和H/R组。正常对照组常规培养,H/R组先缺氧24h,然后复氧培养6h。光镜观察细胞形态变化,CCK-8检测细胞活力,透射电子显微镜观察线粒体形态改变,免疫组织化学法检测细胞内DRP1和OPA1蛋白表达。结果:H/R组与对照组相比,细胞活力下降,线粒体出现凋亡相关改变,OPA1表达减少而DRP1的表达增加。结论:缺氧-复氧可导致HK-2细胞发生凋亡相关改变,其机制可能与诱导线粒体形态相关蛋白DRP1、OPA1的表达改变相关。     

维生素C对染镍肺泡巨噬细胞iNOS的影响

目的 探讨镍在大鼠肺泡巨噬细胞诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)基因诱导表达中的作用，以及维生素C对巨噬细胞iNOS诱导表达的影响及其机制。方法 采用体外细胞培养法测定在维生素C(25，50，100μmol／L)作用下，体外染镍肺泡巨噬细胞的存活率及活力。同时观察细胞内一氧化氮(nitric oxide，NO)和活性氧的产生，以及一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)活力的变化。以逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)法测定iNOS mRNA的表达。结果 在体外染镍肺泡巨噬细胞中加入不同浓度的维生素C后可提高该细胞的存活率和活力，可减少NO和活性氧的产生，降低NOS和活性，还可抑制镍诱导的iNOS mRNA的表达水平。结论 镍可通过诱导大鼠肺泡巨噬细胞．NOS基因表达，产生大量NO，导致细胞脂质过氧化，而维生素C可通过抑制iNOS mRNA的表达，拮抗镍对肺泡巨噬细胞的细胞毒作用。     

牙龈卟啉单胞菌对感染流感病毒肺上皮细胞一氧化氮合酶的影响

目的观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)对感染流感病毒(H1N1)肺上皮细胞一氧化氮合酶的影响,以期为探讨牙周病在肺疾病发病机制中的作用提供临床依据。方法利用不同MOI值P.gingivalis与MOI值为2的H1N1共同感染于肺上皮细胞,未感染的细胞作为阴性对照。利用硝酸还原酶法测定上清液中NO的浓度;Westernblot检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)表达水平。结果各组细胞在4 h、8 h、12 h、24 h内NO生成均有增加。4 h、8 h、12 h、24 h后E组NO的量分别为41.404±3.079、78.945±3.001、592.983±1.690、2360.660±4.199μmol/L,8 h、12 h、24 h与对照组比较差异有显著性(P0.05)。12 h、24 h P.gingivalis促进H1N1感染的肺上皮细胞i NOS蛋白水平的表达,与对照组相比差异有显著性(P0.05)。结论 P.gingivalis与H1N1共同作用于肺上皮细胞能够促进i NOS的表达,最终促进NO的生成。     

胶体金探针对HBV全基因转染滋养细胞中HBsAg的示踪研究

目的通过胶体金探针标记乙肝病毒（HBV）全基因转染的人胎盘滋养细胞（HPT-8-HBV）,示踪乙肝表面抗原（HBsAg）在HPT-8-HBV细胞中的分布。方法通过脂质体介导的方法将HBV全基因转染HPT-8细胞,G418筛选,通过ELISA、免疫组化对转染细胞进行检测;采用胶体金标记的HBsAg单克隆抗体作为探针（简称胶体金探针）对转染细胞中的HBsAg进行标记示踪。结果成功将质粒pcDNA3—3HBV转染到HPT-8,转染后第1、2代培养上清ELISA检测显示HBsAg阳性,免疫组化检测第2代转染细胞中HBsAg阳性;通过胶体金探针标记发现HBsAg存在于转染滋养细胞中的粗面内质网、分泌泡、空泡和溶酶体内,以及细胞膜和绒毛上。结论可以从重组质粒pcDNA3—3HBV转染的滋养细胞的树脂切片中获得HBsAg的超微结构定位。     

诱导分化剂和热应激对K562细胞JWA和热应激蛋白70表达的影响

目的　研究诱导K5 6 2细胞分化和热应激过程中 ,JWA表达的特点 ,探讨JWA与热应激蛋白 (Hsp70 )表达的关系以及参与诱导分化和热应激可能的机制。方法　分别建立K5 6 2细胞诱导分化和热应激模型 ,采用Western blot方法检测JWA、Hsp70、热休克转录因子 (HSF1)、HSF2蛋白表达水平。结果　 (1)佛波酯 (TPA ,10 0ng ml)、氯化高铁血红素 (hemin ,3× 10 - 5mol L)、阿糖胞苷 (Ara C ,80ng ml)、阿霉素 (adriamycin ,4× 10 - 8mol L)、全反式维甲酸 (ATRA ,1× 10 - 6 mol L)、三氧化二砷 (As2 O3,1× 10 - 6 mol L)分别诱导K5 6 2细胞 4 8h ,JWA、Hsp70蛋白表达水平均明显增加 ;HSF2在hemin、Ara C、ad riamycin诱导下表达增加 ;(2 )在 4 2℃不同时间 (10、2 0、30、4 5、6 0、90min)和不同温度 (39℃、4 2℃、4 5℃ )处理下 ,Hsp70表达水平的变化与JWA蛋白表达水平的变化趋势基本相似 ,且HSF1在热应激早期表达。结论　在诱导分化、热应激过程中 ,JWA与Hsp70蛋白表达水平均明显上调 ,且变化趋势有一定的相似 ,但所涉及的细胞内信号转导通路可能不是惟一的。JWA表达与HSF1或HSF2似乎没有直接的特征性联系。