浙江省2013年病毒性脑膜脑炎病原学及分子流行病学特征

目的 分析2013年浙江省监测点病毒性脑膜脑炎病原学及分子流行病学特征。方法 从浙南和浙北监测点医院采集疑似病毒性脑膜脑炎患者脑脊液和/或粪便样本,用荧光定量PCR方法检测样本中人类肠道病毒(HEV)、流行性乙型脑炎病毒(JEV)、腮腺炎病毒(MuV)、单纯疱疹病毒(HSV)和巨细胞病毒(CMV)核酸,采用人横纹肌瘤细胞(RD)和人喉表皮样癌细胞(Hep-2)分离HEV,对HEV阳性分离物或核酸阳性样本扩增VP1基因并测序,然后进行同源性与进化分析。结果 在229例患者共计239份样本中检测到病毒核酸阳性92份(38.5%),其中HEV阳性87份,MuV、HSV和CMV阳性分别为1、2和2份;87份HEV中柯萨奇病毒(CV)38份和埃可病毒(E)49份;239份样本中分离到56株(23.4%)HEV;在31份HEV核酸阳性但病毒分离阴性的脑脊液样本中,检出最多的为E9(9份),其次为CVA9(8份);HEV血清型分别为CVA9、CVB4、CVB5、E6、E7、E9、E11、E14、E16、E25和E30;浙南监测点优势流行株为CVB5,浙北为E6。VP1区进化分析显示,浙江省HEV均为B组EV。结论 2013年浙江省监测点病毒性脑膜脑炎的主要病原为HEV-B,涉及11个血清型,首次在浙江省分离到E7;浙南优势流行株为CVB5,浙北为E6;核酸检出率明显高于病毒分离率,采用常规EV分离法存在漏检E9和CVA9的风险。     

浙江省2008-2012年肠道病毒相关病毒性脑炎病原谱及分子流行病学特征分析

目的 了解2008--2012年浙汀省肠道病毒相关病毒性脑炎病原谱及分子流行病学特征。方法从监测点采集疑似病毒性脑炎患者脑脊液和粪便样本利用RD和HeP-2细胞分离病毒,采用肠道病毒标准血清定型,并对分离株VPI基因测序,进行同源性与进化分析。结果从610例患者616份样本中分离到人类肠道病毒(HEY)127株(20.6%),其中柯萨奇病毒(CV)60株,埃可病毒(ECHO：E)67株,病毒血清型分别为CVA9、CVBl、CVB3～5、E3、E4、E6、E9、E14、E25、E30。2008～2012年优势株分别为CVB3、CVB5、E6、E30和E30。各分离株VPl基因序列全长834～918个核苷酸,与相应原型株核苷酸(nt)和氨基酸(aa)的同源性分别为76.7%～85.0%和91.1%。97.9%；浙江分离株型内差异最大为E6,nt和aa差异分别为20.4%和4.8%。基于VPl基因的进化分析结果表明。浙江分离株均位于HEV-B分支上,并显示出一定地域和时问效应；E6血清型内部又分成2小分支。结论2008-2012年浙江省病毒性脑炎的主要病原为HEV-B,涉及12个血清型；不同年份优势流行株不断变化,E30为绝对优势株；浙江E6分离株存在2个亚类流行株。     

宁夏地区1997-2011年急性弛缓性麻痹病例非脊髓灰质炎肠道病毒分型鉴定分析

目的 对1997-2011年宁夏地区急性弛缓性麻痹(AFP)病例中分离的73株非脊髓灰质炎肠道病毒(NPEV)进行分型鉴定.方法 采用简并引物RT-PCR对分离株进行VP1区基因扩增和序列测定,测序结果进行BLAST比较和基因进化分析.结果 经过基因测序分析鉴定,73株NPEV中,有4株无法定型,另69株共包括27个血清型,分别属于A组肠道病毒(HEV-A)和HEV-B组,无HEV-C和HEV-D组毒株,其中HEV-A组毒株包括8个血清型23株,HEV-B组毒株包括19个血清型46株.69株病毒中,以EV71所占比例最大(9/69),以CVA4、CVA16、Echo24、Echo6和CoxA9所占比例较高.结论 1997-2011年宁夏地区AFP病例分离的NPEV以HEV-B组为主要型别66.7％(46/69).     

一起疑似病毒性脑膜炎暴发病原学检测分析

目的 2014年10月浙江省金华市荣光小学发生疑似病毒性脑膜炎暴发疫情,为及时查明病因,分析病原的分子特征并进行病原溯源。方法开展流行病学调查,采集患者脑脊液和咽拭子样本6份,检测人类肠道病毒(HEV)核酸和分离病毒,对HEV分离株VP1基因测序,进行同源性与进化分析。结果在全校328名学生中,发病7例,罹患率2.13%。患者年龄7~8岁;临床症状为发热、头痛、呕吐等;从5例患者6份样本中均检测到HEV核酸,其中3份脑脊液中分离到3株肠道病毒埃可30型(echovirus 30,E30);新分离株与E30原型株之间VP1区核苷酸和氨基酸同源性分别为81.8%和91.8%~92.1%;进化分析显示:新分离株位于E30 G基因亚型分支上,与2013年浙江省CHN/ZJ/RA-72/13株亲缘关系最近。结论引起2014年10月浙江省金华市荣光小学聚集性病毒性脑膜炎暴发疫情的病原为E30 G基因亚型病毒。     

肠道病毒相关小儿病毒性脑炎病原谱及分子流行病学特征分析

目的:探讨肠道病毒(HEV)相关小儿病毒性脑炎病原谱及分子流行病学特征,为临床治疗提供依据。方法:选取2010年1月~2012年12月珠海市各监测点中的样本,患儿均疑似患病毒性脑炎。病毒株均采用WTO《病毒试验室操作手册》检测,脑脊液或粪便0.2 ml接种RD细胞,操作步骤按说明书进行。结果:观察的545份样本中,分离到HEV115株,分离率为21.1%。在375份脑脊液样本中,分离HEV 72株,分离率为19.2%;在170份粪便样本中,分离HEV 43株,分离率为25.3%。分离的115株病毒共涉及12个血清型,CVB3-5、E25和E30在近3年中均有检出,且分离株最多,为绝对优势株。9例同时采集脑脊液和粪便样本的患儿中,有7例在两类样本均分离到同一血清型病毒,CVB3和CVB5各2例,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);住院天数比较,差异有统计学意义(P<0.05);PICS评分比较,差异有统计学意义(P<0.05);综合疗效比较,差异有统计学意义(P<0.01)。测序株各血清型内nt和aa同源性分别为79.3%~99.8%和89.1%~99.9%,与各原型株的nt和aa的同源性分别为79.1%~99.90%和88.4%~99.8%。结论:由于病原体的基因重组和变异,易使其致病病原改变,各地医务工作者对于HEV的基因变异应做好高度的准备,以防范各地的病毒性脑炎的暴发。     

柯萨奇B5病毒引起山东省一起无菌性脑膜炎暴发的鉴定及其亲缘进化分析

目的 鉴定引起2005年山东省兖州市一起无菌性脑膜炎暴发的病原体,并对分离的柯萨奇B5病毒(CVB5)进行基因特征分析.方法 从兖州市无菌性脑膜炎暴发期间部分住院患者中采集78份粪便标本和58份脑脊液标本进行病毒分离和血清型鉴定;同时对其阳性分离物采用反转录-聚合酶链反应进行分子定型,对其中的CVB5进行全长VP1区核苷酸序列测定和亲缘进化分析.结果 78份粪便标本和58份脑脊液标本的病毒分离率分别为38.5%(30/78)和48.3%(28/58).58株阳性分离物的血清型鉴定和分子定型结果显示,其中54株为CVB5,2株为ECHO24,CVB3和CVA9各1株.病原学结果显示引起此次无菌性脑膜炎暴发的病原体主要为CVB5.同源性分析显示,CVB5分离株与2002年浙江分离株(Zhejiang/12/02株)在核苷酸水平上同源性最近,为97.5%～97.8%;与CVB5原型株(Faulkner株)相比核苷酸同源性为78.3%～78.6%.VP1区亲缘进化树显示CVB5可以分为A、B、C、D 4个基因型,引起本次暴发的CVB5属于基因型D.结论 CVB5是引起兖州市无菌性脑膜炎暴发的病原体.优势基因型的变迁可能是造成无菌性脑膜炎反复暴发的因素之一.     

急性脑膜炎病原学及临床特征

目的分析儿童脑膜炎的临床流行特征及脑脊液病原菌特点,为中枢神经系统感染的诊断和治疗提供证据。方法选取山东省滕州市中心人民医院2014年7月-2019年7月收治的208例急性脑膜炎患者作为研究对象,通过查阅病历信息的方法对患者的临床流行特征、血清病毒特异性抗体和脑脊液病原菌特点进行回顾性分析。结果在纳入患者中,5～9岁年龄段的病例数最多,占45.19%,男性患者数量占63.94%,患者发病季节多为夏秋季,占69.71%。有142例为病毒性脑膜炎,占68.27%,66例为细菌性脑膜炎,占31.73%。细菌性脑膜炎患者出现恶心、精神萎靡、嗜睡、抽搐、颈项强直、角弓反张、瘀斑的比例及脑脊液白细胞计数、蛋白水平高于病毒性脑膜炎患者,脑脊液葡萄糖水平低于病毒性脑膜炎患者,差异均有统计学意义(P0.05)。103例病毒性脑膜炎患者检出血清单一病毒特异性(Ig)M阳性,占72.54%,其中,以人类肠道病毒(HEV)-IgM阳性例数最多,占30.28%,其次为单纯疱疹病毒(HSV)-IgM阳性病例和流行性腮腺炎病毒(MuV)IgM阳性病例;有39例患者检出血清多种病毒特异性IgM阳性,占27.46%,其中,以HEV+HSV-IgM阳性例数最多,占12.68%;细菌性脑膜炎患者脑脊液样本共检出66株病原菌,其中,革兰阳性菌39株占59.09%,以凝固酶阴性葡萄球菌和肺炎链球菌为主;革兰阴性菌24株占36.36%,以大肠埃希菌和脑膜炎奈瑟菌为主;真菌3株占4.55%。结论急性脑膜炎好发于5～9岁儿童人群,细菌性脑膜炎患者中枢神经系统受累症状更多见,脑脊液指标变化具有特征性,HEV、HSV、MuV是病毒性脑膜炎的主要病原体,凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌等革兰阳性菌是细菌性脑膜炎患者脑脊液中的主要病原菌。     

云南省新型肠道病毒EV93的分子生物学鉴定

人类肠道病毒（HEV）分为5个组别：HEV-A、HEV-B、HEV-C、HEV-D和脊髓灰质炎病毒（PV）。HEV-A由柯萨奇A2（CV-A2）-CV-A8、CV-A10、CV-A12、CV-A14、CV-A16、EV71和4种新型病毒EV76、Ev89、Ev90、EV91组成^[1]。HEV-B由CV-A9、CV-B1-6、艾柯病毒（E）E1-7、E9、E11-21、E24-27、E29-33、EV69以及6个新发现的病毒EV73、     

浙江省病毒性脑炎病原柯萨奇B1病毒分子特征研究

目的:为了查明引起2008-2009年浙江省疑似病毒性脑炎的病原,分析病原的分子特征。方法:采用Hep-2和RD细胞从疑似患者脑脊液样本中分离肠道病毒,对分离株扩增VP1基因,测序并进行同源性与进化分析。结果:从患者11份脑脊液样本中分离到4株柯萨奇B1病毒(CVB1);测得VP1基因全长为834核苷酸(nt),无插入和缺失,推导编码278个氨基酸(aa)。4株浙江CVB1分离株(ZJ/CVB1)之间在VP1区nt和aa的同源性分别为96.3%~99.9%和100%。浙江CVB1分离株BLAST比对nt同源性最高的毒株为2006年山东株(SD/168/06),同源性为98.7%;与CVB1原型株(Conn-5/86)的nt同源性为78.9%。VP1区氨基酸进化树显示浙江CVB1分离株在CVB1 Clade3进化支上,与浙江株亲缘关系最近的毒株为山东CVB1株,均在同一进化支上。结论:从病毒分离结果证实浙江省疑似病毒性脑炎是由肠道病毒CVB1引起,2008-2009年在浙江循环的CVB1病毒之间没有明显差异,浙江CVB1流行株与山东株亲缘关系最近。     

基于VP4基因扩增和序列测定快速检测鉴别人肠道病毒的研究

目的建立基于小核糖核酸(RNA)病毒结构蛋白HVP4基因序列测定,对人肠道病毒(HEV)进行快速检测和分型的分子生物学方法。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对2004年321例急性弛缓性麻痹(AFP)病例粪便标本进行病毒核酸提取和扩增VP4基因,然后对扩增产物测序,通过序列的分析鉴定病毒型别。结果321份AFP病例粪便标本上清液,共检出阳性134份。获得VP4有效序列54条,其中37例RD、L20B细胞培养未检出的样本,检出HEV10例,脊髓灰质炎病毒(PV)5例,柯萨奇病毒(CV)9例,人鼻病毒(HRV)12例,埃可病毒(ECV)1例;9例细胞培养为其它HEV的样本,检出CV5例,EV2例,HRV2例;RD、L20B细胞培养结果6例与VP4测序结果相符。结论应用VP4序列测定对HEV进行快速诊断和分型是一种快速简单的分子生物学方法,可用于HEV感染引起的爆发疫情的病原学诊断。     

2015-2016年贵州省手足口病非EV71、非CVA16肠道病毒型别鉴定和分析

目的 探讨2015-2016年贵州省手足口病非EV71(Enterovirus 71,EV 71)、非CVA16(Coxsackievirus A16,CVA16)肠道病毒株的病原构成及优势型别。方法 共收集2015-2016年贵州省儿童手足口病疑似患者肛拭子350例标本,应用实时荧光定量PCR法筛选出非EV71、非CVA16型肠道病毒,采用 RT-PCR法扩增病毒VP1区序列,PCR阳性扩增产物进行测序,对测得序列进行型别鉴定并与国内外各型代表株进行核苷酸同源性分析,构建系统进化树。结果 从收集到的手足口病疑似患者肛拭子标本中,共分离到21株其他肠道病毒,分别为:CVA5、CVA7、CVA9、CVB3(Coxsackievirus B3,CVB3)、 CVB4 、E11(Echovirus11,ECHO11)、 E17各1株,CVA10 、CVB1各2株,CVB5、E7各5株。通过系统发育树揭示,分离到的同型别毒株之间具有同源性,而非同型别的毒株与国内外各代表株之间具有同源性。结论 贵州省引起手足口病的非EV71、非CVA16型肠道病毒型别分布较广,包括CVB组,CVA组和ECHO病毒,其中CVB5、E7为非EV71、非CVA16型肠道病毒主要病原体。     

2012年云南省及缅甸籍入境健康儿童肠道病毒的分子生物学检测

目的了解2012年云南省和缅甸籍入境健康儿童肠道病毒（Enterovirus,EV）带毒情况及病毒型别。方法采集6个边境设区的市（州、地区,下同）10个县和7个非边境市10个县〈15岁健康儿童粪便标本600份（单份粪便标本,其中缅甸籍入境儿童100份）,进行病毒分离和基因测序定型。结果600份粪便标本共检测到EV53株,带毒率为8．83％。其中脊髓灰质炎病毒5株,阳性率0．83％,均为疫苗株,未发现脊灰野病毒。检测到非脊灰肠道病毒（Non．polioEV,NPEV）48株,阳性率8．00％,其中人类肠道病毒（HumanEV,HEV）A组5株（3个血清型,占10．42％）,HEVB组（GroupB）（HEV．B）42株（14个血清型,占87．50％）,HEVC组6株（4个血清型,占11．32％）,未分离到HEVD组。结论2012年600份健康儿童粪便标本中,从中国籍儿童分离到EV48株,分离率8．00％,缅甸籍儿童中分离到EV5株,分离率0．83％,中国籍儿童EV携带率较高,并以HEV．B组为主。     

2014年湖南省郴州市手足口病病原谱及CVA16基因特征分析

目的 了解2014年湖南省郴州市手足口病病原谱和优势毒株的基因特征,为郴州市手足口病的防治提供科学依据。 方法 采集2014年郴州市手足口病监测病例标本,应用荧光PCR方法检测HEV71、CVA16、CVA6、CVA10和其他肠道病毒。未能分型的其他HEV阳性标本进行RT-PCR扩增,通过基因测序鉴定病原体型别。 结果 共检测854份标本,阳性检出率为55.62%。病原谱中已知型别的前5位分别为CVA16(28.00%)、HEV71(25.05%)、CVA6(13.89%)、CVA10(12.42%)、CVB5(0.84%),仍有20.63%的其他HEV未分型。不同月份、不同年龄组、不同病例类型的病原体型别的构成比差异均有统计学意义(均P<0.05);男女性别的病原体型别的构成比差异无统计学意义(P>0.05)。郴州市的6株CVA16分离株均为B1基因亚型。 结论 2014年郴州市的手足口病流行毒株显示了一定的季节性分布特征,主要的几种优势毒株相互交替流行,并与人群的免疫基础相互作用体现在月份和年龄组的分布上。郴州市的CVA16分离株与国内流行株的基因型别一致。     

济南市2011年急性脑膜炎/脑炎症候群病例哨点监测分析

目的了解济南市2011年急性脑膜炎/脑炎症候群（Acute Meningitis/Encephalitis Syndrome,AMES）哨点监测病例的主要病毒性病原及其流行病学特征。方法在济南市选取省、市、县级各2所医院作为哨点医院,收集2011年AMES病例血清和脑脊液（Cerebrospinal Fluid,CSF）标本,采用酶联免疫吸附试验对4种病毒特异性免疫球蛋白（Immunoglobilin,Ig）M进行血清学诊断。结果济南市2011年报告的AMES病例集中在5-9月,高峰出现在6-8月,峰值出现在7月,但≥15岁的病例数无季节性高峰。所有病例的血清和CSF标本均检测了流行性乙型脑炎病毒（Japanese Encephalitis Virus,JEV）IgM,阳性率为7.1%（46/647例）,比2008-2010年明显下降,其差异有统计学意义（χ2=12.6,P〈0.05）。其余血清标本IgM检测结果为：人类肠道病毒（Human Enterovirus,HEV）阳性率为18.5%（61/330例）,流行性腮腺炎病毒（Mumps Virus,MuV）阳性率为13.9%（46/330例）,单纯疱疹病毒（Herpes Simplex Virus,HSV）阳性率为13.0%（43/330例）。不同年龄组病例的主要病原存在差异,〈5岁以HEV感染为主,而≥15岁则以HSV为主。与其他3种病毒的季节分布不同,MuV感染全年无明显差异（χ2=5.4,P=0.36）。4种病毒中,仅HSV感染有明显的性别差异（χ2=5.1,P=0.02）,女性感染较多。结论济南市2011年6所哨点医院AMES病例的主要病毒性病原体依次为HEV、MuV、HSV、JEV。由于不同病毒的流行病学特征不同,需针对病毒的特性制定个性化监测方案,并加强实验室检测。     

2002年云南非脊灰病毒测序定型和ECHO13病毒基因特征分析

目的对云南省2002年急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例中非脊灰病毒(non-polio,NPV)的带毒情况及埃柯病毒13型(echovirus 13,E13)的基因特征进行描述。方法按Obster等介绍的方法,对2002年云南省脊灰实验室分离到的21株NPV进行基因测序定型。结果 2002年云南省共报告267例AFP病例,共采集到<15岁AFP病例的合格粪便标本257份,257份便标本中共检测到NPV43株(带毒率为16.7%),其中脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)22株(阳性率8.6%),均为疫苗株,未发现脊灰野病毒;检测到非脊灰病毒(NPV)21株(阳性率8.2%)。21株EV中,12株为人类肠道病毒B组(HEV-B,11个血清型,其中3株为E13),3株为人类肠道病毒C组(HEV-C,1个血清型),未分离到HEV-A和HEV-D组病毒。结论 2002年云南省AFP病例中非脊灰病毒携带率不高。对3株常见的E13进行基因进化分析,表明E13病毒存在基因多样性特点(即存在不同的基因型)。     

宜昌市2006—2012年急性脑炎／脑膜炎患者的病毒学检测

目的了解急性脑炎／脑膜炎病例病毒感染病原谱构成及流行病学特征。方法在宜昌市选取4家城区和2家周边区县医院作为哨点医院,收集2006—2012年急性脑炎／脑膜炎病例血清和脑脊液标本,采用ELISA方法检测乙脑病毒（JEV）、柯萨奇病毒（COX）、埃可病毒（ECHO）、单纯性疱疹病毒I／Ⅱ型（HSV）、腮腺炎病毒（MuV）的IgM抗体。结果2006—2012年共检测病例2085份,JEV感染率呈逐年缓慢波动下降趋势,而MuV感染率呈逐年上升趋势。7～8月为病毒感染高峰。血清和脑脊液中JEVIgM抗体阳性率为2．49％（53／2085）。在698份患者血清标本中MuV、HSV、COX、ECHO的IgM抗体阳性率分别为20．63％,18．77％,10．17％,8．60％。结论MuV、HSV、COX、ECHO是宜昌市6所哨点医院急性脑炎／脑膜炎病例病毒性感染的主要病原,应加强此类病例的监测,特别是实验室病原学检测。     

2013-2015年郴州市手足口病病原谱及柯萨奇病毒A6基因特征分析

目的 了解2013-2015年湖南省郴州市手足口病(hand, foot, and mouth disease,HFMD)病原谱和优势毒株基因特征,为该病的防控提供科学依据。 方法 采集2013-2015年郴州市HFMD临床诊断病例肛拭子或粪便标本,用荧光定量PCR方法检测人肠道病毒71型(human enterovirus 71, HEV71)、柯萨奇病毒A组16型(coxasckievirus A16, CVA16)、CVA6、CVA10和其他肠道病毒(HEV)。除上述型别外无法分型的其他HEV阳性标本再进行RT-PCR扩增,通过基因测序比对,鉴定病原体型别。 结果 郴州市2013-2015年共检测HFMD标本2 343 份,肠道病毒阳性1 325份,阳性检出率为56.55%;HFMD病原谱包括16种肠道病毒,已知型别中前5位分别为CVA6(31.77%),CVA16(16.45%),HEV71(13.74%),CVA10(11.47%),柯萨奇B组5型(CVB5)(0.30%),仍有25.13%的其他HEV未分型;聚集性病例以CVA16和其他HEV为主,重症及死亡病例以HEV71和其他HEV为主,不同年份(χ²=64.90,P<0.001)、不同类型( χ²=56.41,P<0.001)。郴州市的CVA6分离株均分布于同一进化簇, 与长沙市分离株亲缘关系最近。 结论 2013-2015年,CVA6已成为郴州地区引发手足口病的主要病原型别,在手足口病监测中应加强非HEV71和非CVA16型肠道病毒检测。     

2011-2013年龙岩市手足口病流行病学 及病原学特征分析

摘要:目的　分析2011-2013年龙岩市手足口病（HFMD）流行病学和病原学特征。方法　运用描述流行病学方法对龙岩市2011-2013年HFMD资料进行分析。选取部分经实时荧光RT-PCR法检测,其他肠道病毒（Enterovirus,EV）阳性咽拭标本,用人横纹肌肉瘤（RD）细胞进行病毒分离,用RT-PCR法进行检测、序列测定和同源性分析,对分离到的病毒进行分析鉴定。结果　2011-2013年龙岩市HFMD发病率均处于较高水平。发病高峰出现在5-7月,男性多于女性。＜5岁儿童病例占报告总病例的93.6%,散居儿童占75.4%。104份其他EV阳性标本病毒分离培养物,经RT-PCR法检测EV阳性88份（84.6%）,其中29份肠道病毒71型（EV71）阳性,4份EV71和柯萨奇病毒A16型（CVA16）同时阳性,3份柯萨奇病毒B5型（CVB5）阳性,2份柯萨奇病毒A10型（CVA10）阳性,50份EV阳性培养物仍未能分型。分离到的EV71型属于C4a基因亚型。CVA16型属于B1b基因型。结论　龙岩市HFMD 疫情处于高流行态势,＜5岁散居儿童是主要发病人群,病原仍以EV71和CVA16为主,同时发现了CVB5和CVA10病毒。