苯并（a）芘致人支气管上皮细胞DNA损伤及与组蛋白H2A单泛素化水平的关系

[目的]通过体外细胞培养途径,探讨苯并（a）芘（benzo[a]pyrene,B[a]P）作用下人支气管上皮细胞（16HBE）DNA损伤与组蛋白H2A单泛素化表达水平的关系。[方法]取对数生长期16HBE细胞,采用2μmol/L B[a]P染毒不同时间（0、1、2、4、8、12、24、48h）进行实验,用碱性单细胞凝胶电泳实验检测细胞DNA损伤水平,并以Olive尾矩值（olivetail moments,OTM）评价DNA损伤程度;用Western-blot法检测组蛋白H2A单泛素化水平。[结果]单细胞凝胶电泳结果显示：2μmol/L B[a]P染毒不同时间时,随着染毒时间的延长,各染毒组细胞DNA损伤程度均明显增高,与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0.01）;Western-blot结果显示：2μmol/L B[a]P染毒不同时间时,与对照组相比,组蛋白H2A的单泛素化水平增高,且在染毒2h后,差异有统计学意义（P〈0.01）;回归分析显示,单泛素化H2A的表达水平与DNA损伤程度存在高度相关,决定系数（R2）为0.910,P〈0.01。[结论]B[a]P染毒致16HBE细胞DNA损伤与组蛋白H2A单泛素化水平之间存在密切关系。     

ERCC2基因多态性与焦炉工DNA损伤及肺癌易感性的关联研究

目的探讨ERCC2基因多态性与焦炉工DNA损伤及肺癌易感性的关联。方法选取821例焦化工人、1152例原发性肺癌患者为研究对象,1 152名健康体检者作为对照。焦化工人以工作状态和岗位分为暴露组、恢复组和对照组;使用反向高效液相色谱法测定尿1-羟基芘含量,采用彗星试验检测DNA损伤并以Olive尾矩(Olive Tail Moments,OTM)评价DNA损伤程度,应用TaqMan探针荧光标记聚合酶链反应方法对ERCC2基因多态性分型。结果暴露组和恢复组尿1-羟基芘水平分别为(4.41±1.06)μmol/mol肌酐和(3.79±1.05)μmol/mol肌酐,均高于对照组工人(3.33±1.03)μmol/mol肌酐;暴露组OTM为(-0.86±0.70),高于恢复组(-1.18±0.69)和对照组(-1.14±0.63)(P<0.01)。恢复组中,rs50871GT携带者的OTM(-1.28±0.62)低于TT(-1.11±0.71)(P=0.021);rs50872TC携带者的OTM(-1.33±0.69)低于CC(-1.10±0.67)(P=0.003)。其他位点基因型的OTM差异均无统计学意义,rs50871与rs50872位点多态性与肺癌易感性无显著性关联。结论 ERCC2基因多态性可影响焦炉工DNA损伤水平,与肺癌易感性无明显关联。     

焦炉工HSP70基因多态性和外周血淋巴细胞DNA损伤的关系

[目的]探讨焦炉工HSP70基因多态性和外周血淋巴细胞DNA损伤的关联。[方法]选择某焦化厂234名焦炉作业工人和130名无多环芳烃(PAHs)及其他毒物暴露者,采集外周静脉血,分离淋巴细胞,使用单细胞凝胶电泳实验评价DNA损伤;应用多聚酶链反应-限制片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测热休克蛋白70(HSP70)基因多态性;运用PHASE2.0.2遗传分析软件计算单倍型。[结果]焦炉工外周血淋巴细胞的Olive尾矩(OliveTailMoment,OTM)高于对照组(对数转换后分别为1.29±1.07、0.56±0.99),差异有极显著性(P<0.01)。焦炉工中,HSP70-1基因190位点C/C基因型携带者外周血淋巴细胞的OTM为2.19±0.65,高于G/C及G/G基因型携带者(分别为1.30±1.03、1.23±1.10),差异有极显著性(P<0.01);HSP70-2基因1267位点A/A、A/G及G/G基因型携带者OTM分别为1.23±1.02、1.27±1.06和1.42±1.18,三者间差异无显著性(P>0.05);HSP70-hom基因2437位点T/T、T/C及C/C基因型携带者OTM分别为1.32±1.09、1.25±1.01和0.83±0.96,三者间差异也无显著性(P>0.05)。焦炉工HSP70-hom基因2437位点、HSP70-1基因190位点和HSP70-2基因1267位点组成的单倍型对中,TCG/TCG单倍型对携带者DNA损伤程度较重(OTM为2.04±0.59),显著高于单倍型对中含一个TCG单倍型者(OTM为1.24±1.14)及不含TCG单倍型者(OTM为1.30±1.01),P<0.05。[结论]焦炉工外周血淋巴细胞HSP70-1基因190位点C/C基因型与TCG单倍型和DNA严重损伤有关联。     

焦炉工人周围血细胞p16基因甲基化研究

目的分析焦炉工人周围血细胞中p16基因启动子区CpG岛异常甲基化状态,寻找焦炉工人肺癌辅助筛查的生物标志物。方法以74名男性焦炉工人为接触组,以47名供水厂男性职工为对照组。采集2组人员的班后尿,用高效液相色谱法检测其内暴露指标1-羟基芘(1-OH-Py)的水平;同时采集晨起空腹肘静脉血,分离周围血单个核细胞,用彗星实验检测DNA损伤情况;并提取基因组DNA,用甲基化特异性聚合酶链反应技术检测p16基因启动子区CpG岛甲基化发生情况。结果接触组尿1-OH-Py水平[(0.46±0.12)μmol/mol Cr]和DNA拖尾的Olive尾距[(0.41±0.25)μm]高于对照组[(0.17±0.06)μmol/mol Cr、(0.32±0.12)μm],差异有统计学意义(P<0.05)。接触组p16基因的异常甲基化的检出率(36.49%)高于对照组(4.26%),差异有统计学意义(P<0.01);并且p16基因的异常甲基化检出率随着尿1-OH-Py的水平升高逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论周围血p16基因异常甲基化可能是焦炉工人肺癌早期筛查有效的生物标志物。     

DDB2基因单核苷酸多态性与焦炉工外周血淋巴细胞DNA损伤的关联

[目的]探讨DDB2基因单核苷酸多态性与焦炉工外周血淋巴细胞DNA损伤的关联。[方法]选取焦化厂在岗焦炉工325名作为接触组,选择同厂无职业多环芳烃暴露者150人作为对照组,使用反向高效液相色谱法测定尿1-羟基芘含量,采用碱性单细胞凝胶电泳技术检测淋巴细胞DNA损伤情况,应用TaqMan探针荧光标记聚合酶链反应方法对DDB2基因进行分型。[结果]接触组尿1-羟基芘含量[（4.41±1.06）μmol/mol肌酐]高于对照组[（3.33±1.03）μmol/mol肌酐],差异有统计学意义（P〈0.05）;接触组外周血淋巴细胞彗星尾距（olive tail moment,OTM）[0.41（0.08～4.28）]也高于对照组[0.31（0.08～3.16）],差异有统计学意义（P〈0.05）。两组中DDB2基因SNPs的不同基因型携带者OTM差异均无统计学意义。分层结果表明,对照组年龄〈39岁个体中,启动子区rs2029298位点AA基因型携带者DNA损伤高于GG基因型携带者,差异有统计学意义（P〈0.05）;其他差异均无统计学意义。[结论]DDB2基因多态性对焦炉工外周血淋巴细胞DNA损伤程度无影响,在对照组低年龄个体中rs2029298位点AA基因型携带者的DNA损伤程度高于GG基因型携带者。     

焦炉工人血清谷胱甘肽硫转移酶活力和尿8-羟基脱氧鸟苷水平

目的 探讨血清谷胱甘肽硫转移酶（GST）和尿8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）作为焦炉工人多环芳烃（PAHs）暴露生物监测标志的可行性.方法 用高效液相色谱-电化学方法和试剂盒分别检测47名男性焦炉工和31名男性对照者尿8-OHdG水平和血清GST活力;尿1-羟基芘（1-OHP）作为PAHs接触的内暴露标志,采用碱水解-高效液相色谱方法分析.结果 焦炉工人尿1-OHP浓度的中位数（P25～P75）为[5.7（1.4～12.0）μmol/mol Cr],血清GST活力为[22.1（14.9～31.2）U/ml],尿8-O-HdG水平为[1.9（1.4～15.4）μmol/mol Cr],均高于对照组工人[3.0（0.5～6.4）μmol/mol Cr、13.1（9.5～16.7）U/ml、1.3（1.0～4.0）μmol/mol Cr],差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.以吸烟分层,两组工人尿1-OHP浓度和血清GST活力仅在吸烟者中、尿8-OHdG水平仅在非吸烟者中差异有统计学意义（均P＜0.01）.焦炉工人血清GST活力和尿1-OHP浓度呈正相关（rs=0.31,P＜0.01,n=78）.多元Logistic回归分析显示,与对照工人相比,焦炉工人血清GST活力＞16.7 U/ml和尿8-OHdG水平＞1.8 μmol/mol Cr的OR值分别为13.2和4.4;高体重指数是影响尿8-OHdG水平下降的独立因素.结论 焦炉工人血清GST活力增强和氧化性DNA损伤增加,吸烟和职业暴露有交互作用;血清GST有可能作为PAHs暴露评价的生物标志;尿8-OHdG检测有助于焦炉工肺癌危险度评价.     

焦炉工GSTM1、GSTT1基因多态性和外周血淋巴细胞DNA损伤的关系

[目的]探讨GSTM1和GSTT1基因多态性与外周血淋巴细胞DNA损伤的关系。[方法]选择某焦化厂248名焦炉作业工人,其中炉顶区作业工人99人,炉侧作业78人,炉底作业71人。120名与之相匹配的对照人群选自该厂非职业多环芳烃(PAHs)暴露者。采用单细胞凝胶电泳实验观察外周血淋巴细胞DNA损伤;运用多重PCR方法检测GSTM1、GSTT1基因多态性。同时,通过问卷调查的方式了解被调查者的年龄、吸烟、饮酒和个人职业暴露史。[结果]炉顶和炉侧区作业工人外周血淋巴细胞的Olive尾矩(OliveTailMoment,OTM)经对数转换后分别为1.37±1.16和1.46±0.97,均明显高于炉底区和对照组(OTM分别为0.98±1.18、0.56±0.99),差异显著(P<0.05)。经调整年龄、吸烟、暴露等级等因素后,焦炉作业组中GSTM1(-)基因型和GSTM1( )基因型的外周血淋巴细胞DNA损伤分别为1.36±1.15和1.15±1.10,差异无显著性(P>0.05)。其中炉顶区作业工人GSTM1(-)基因型OTM明显高于GSTM1( )基因型(分别为1.56±1.08、1.09±1.25,P<0.05)。此外,在焦炉作业组中,GSTM1(-)GSTT1( )基因型OTM为1.44±1.13,明显高于GSTM1( )GSTT1( )基因型0.94±1.06,差异具有显著性(P<0.05);GSTM1( )GSTT1(-)和GSTM1(-)GSTT1(-)基因型OTM分别为1.36±1.10、1.28±1.17,两者差异无显著性。[结论]在炉顶作业工人中,GSTM1基因型可以明显影响外周血淋巴细胞DNA损伤程度。GSTM1和GSTT1基因存在交互作用,同时携带GSTM1( )和GSTT1( )基因型的焦炉作业工人淋巴细胞DNA损伤水平较低。     

焦化厂工人ERCC8基因多态性与外周血淋巴细胞DNA损伤的关系

[目的]探讨焦化厂工人ERCC8基因多态性与外周血淋巴细胞DNA损伤的关系。[方法]选择某焦化厂多环芳烃（PAHs）接触者207名焦炉作业工人和115名无PAHs接触及其他毒物暴露者，采集外周静脉血，分离淋巴细胞，使用单细胞凝胶电泳实验观察DNA损伤情况；采用TaqMan—MGB探针检测ERCC8基因分型；运用PHASE2．0．2遗传分析软件计算单倍型。[结果]接触组外周血淋巴细胞的Olive尾矩（Olive Tail Moment，OTM）高于对照组（经对数转换后分别为1．25±1．17和0．53±0．98），差异有极显著性（P〈0．01）。在接触组中，ERCC8基因Rs3117位点CT＋CC和TT基因型携带者外周血淋巴细胞的OTM分别为1．57±1．13和1．15±1．67，差异有统计学意义（P〈0．05）；启动区Rs158920位点CT＋TT和CC基因型携带者外周血淋巴细胞的OTM分别为1．14±1．21和1．24±1，17，差异无统计学意义（P〉0．05）。对照组中相应位点的OTM分别为0．54±0．93和0．56±1．00以及0．52±0．86和0．54±1．02，差异均无统计学意义（P〉0．05）。在接触组中，两个位点组成的单倍型对中CT／CT单倍型对和其他单倍型对携带者外周血淋巴细胞的OTM分别为1．20±1．17和1．36±1．17；对照组分别为0．54±1．02和0．51±0．91，两组差异均无统计学意义。[结论]接触组外周血淋巴细胞ERCC8基因Rs3117位点的不同基因型和DNA损伤的严重程度有关联。     

芳烃受体表达在焦炉工多环芳烃暴露致DNA氧化损伤中的作用

[目的]探讨芳烃受体(Ah R)基因表达在焦炉工多环芳烃(PAH)暴露致DNA氧化损伤中的作用。[方法]选择某钢铁厂焦炉工312人为研究对象,问卷调查工人的基本信息,并采集其血液和尿液。以尿中PAH代谢物2-羟基萘(2-NAP)、2-羟基芴(2-FLU)、9-羟基菲(9-PHE)和1-羟基芘(1-OHP)作为PAH暴露的生物标志物,8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)作为DNA氧化损伤的指标,采用高效液相色谱法检测2-NAP、2-FLU、9-PHE、1-OHP和8-OHd G的水平。逆转录PCR法测定血液Ah R的表达量。[结果]根据尿中1-OHP的水平(P25,P25~P75,P75)将工人分为低、中、高暴露组,随着尿中1-OHP水平的升高,2-FLU和9-PHE的水平也逐渐升高。logistic回归显示,校正了性别、年龄、吸烟、饮酒、2-NAP、2-FLU和9-PHE等因素后,尿中1-OHP水平与Ah R表达量、8-OHd G水平相关,OR值分别为2.08(95%CI:1.21~3.58)、2.98(95%CI:1.65~5.32),尿中1-OHP水平与Ah R表达量和8-OHd G水平均呈线性剂量反应关系(P趋势0.05);尿中8-OHd G水平与Ah R表达量相关,OR值为2.18(95%CI:1.35~3.51),并且Ah R表达与8-OHd G水平呈线性剂量反应关系(P趋势=0.001)。中介效应分析结果显示:a、b、c和c’4个回归系数(分别为1.59、0.32、0.36和1.61)的检验均具有统计学意义(P0.05),其中c和c’均有意义,说明存在中介效应和直接效应;ab与c’同号,则说明是部分中介效应。可以认为Ah R表达在PAH致DNA氧化损伤作用中起到中介作用,且为部分中介效应。[结论]PAH暴露、Ah R表达与DNA氧化损伤之间具有线性剂量反应关系,并且PAH可能通过影响Ah R表达引起DNA的氧化损伤。     

焦炉工人血浆BPDE-白蛋白加合物与尿中1-羟基芘浓度的关系

[目的]探讨血浆中苯并(a)芘二氢二醇环氧化物(BPDE)-白蛋白加合物作为焦炉工人多环芳烃长期暴露的生物标志物的可行性及其与尿中1-羟基芘(1-OHP)浓度之间的关系.[方法]采用反相高效液相色谱方法,对焦化厂37名焦炉作业工人(接触组)和47名非焦炉作业人员(对照组)血浆中BPDE-白蛋白加合物和尿中1-羟基芘浓度分别进行测定.[结果]接触组血浆中BPDE-白蛋白加合物和尿中1-羟基芘浓度的中位数分别为42.10fmol/mg白蛋白和5.46 μmol/mol肌酐,均显著高于对照组(14.16fmol/mg白蛋白,2.96 μmol/mol 肌酐,P＜0.01).校正了个体的年龄、吸烟和饮酒状况后,接触组BPDE-白蛋白加合物浓度增高的危险度是对照组的1.79倍(P＜0.05).接触组1-羟基芘浓度增高的危险度是对照组的2.45倍(P＜0.05).并且在所有研究对象中,BPDE-白蛋白加合物与尿中1-羟基芘浓度存在显著的正相关关系(rs=0.349,P＜0.01).[结论]血浆中BPDE-白蛋白加合物与尿中1-羟基芘水平显著相关,BPDE-白蛋白加合物可作为反映多环芳烃较长时期暴露的接触生物标志物.