牛血清蛋白修饰的CdTe量子点作为铜离子检测探针的实验研究

目的探讨采用牛血清蛋白(BSA)修饰的水溶性碲化镉(CdTe)量子点作为荧光探针,基于荧光猝灭法建立了一种更为灵敏的铜离子检测体系。方法实验首先考察了缓冲液pH值、反应时间、铜离子浓度等因素对量子点荧光强度的影响,进一步比较了经BSA修饰的CdTe量子点与纯CdTe量子点在荧光特性以及对铜离子的响应情况等方面的差异,同时还采用铜离子反向测定量子点浓度的方法进行验证。结果在pH值为7.3的磷酸盐缓冲液中,当反应时间为20 min时,经BSA修饰过的CdTe量子点对铜离子的亲和性得到了增强,对铜离子浓度的依赖性更明显,分辨率更高。其发生荧光猝灭的线性范围为6.4~518.4μg/L,线性回归方程为△F(F0/F)=1.0497+0.0073c(μg/L),线性相关系数为R=0.9716。并且当用铜离子反向测定量子点浓度时,在一定范围内也同样呈现出良好的线性关系。结论BSA修饰的CdTe量子点有可能成为检测铜离子的更好探针。     

量子点荧光探针法检测环境水样中的挥发酚

目的采用CdTe纳米量子点为荧光探针,建立一种快速测定环境水样中挥发酚总量的检测方法。方法采用电化学方法合成硫普罗宁表面配位的CdTe荧光量子点,环境水样中的挥发酚对此CdTe量子点具有灵敏的荧光猝灭作用,挥发酚的浓度和量子点荧光强度的降低呈线性相关,根据量子点的荧光猝灭程度来计算水样中挥发酚的浓度。结果在0.01μg/L~0.54μg/L时,所得挥发酚的线性回归方程为y=1.09+5.31x,相关系数(r)=0.997。方法的检出限为0.27 ng/L,平均回收率为92.5%~96.8%,相对标准偏差(RSD)5%。结论该方法具有快速、重现性好、定量准确和检测灵敏度高等优点,适用于环境水样中痕量挥发酚的测定。     

水中微囊藻毒素-RR的量子点荧光猝灭快速测定法

目的建立水中微囊藻毒素-RR(MC-RR)的量子点(QDs)荧光猝灭法快速测定法。方法在p H 7.17、反应温度37℃,Cd Se-Cd S量子点浓度2.0 mg/ml条件下,将Cd Se-Cd S量子点与MC-RR单克隆抗体共价连接,形成QDs-MC-RR单克隆抗体生物共轭体。加入含MC-RR水样,测定生物共轭体的荧光强度,根据体系荧光强度与浓度的关系,求出水样中MCRR的含量。结果 MC-RR浓度在0.24~4 nmol/L的线性范围内,所得QDs-MC-RR体系的回归方程为(F0-Fn)/F0=0.110 3c+0.022 93,r=0.994 6,呈较好的线性关系,且符合Lambert-Beer公式。方法的检出限为2.4×10-10 mol/L,RSD为4.2%~9.4%,加标回收率在84.0%~90.7%之间。结论该方法具有操作更为简便快速,检测成本低,易于推广普及的优点,可以满足实际水样中MC-RR的检测需要。     

荧光猝灭法定量检测镉离子浓度的可行性研究

目的应用荧光猝灭法研究镉离子(Cd2+)与人血清白蛋白(HSA)之间的结合特征及机理,确认荧光猝灭法定量检测镉离子浓度的可行性。方法采用荧光猝灭法测定4种温度(25℃、31℃、37℃、41℃)时、不同镉离子浓度下HSA的荧光猝灭情况,然后根据Stern-Volmer方程描述HSA的荧光强度与Cd2+的浓度、反应体系温度之间的作用规律以及作用参数,并推理Cd2+对HSA荧光的猝灭机理。结果固定HSA的浓度为1×10-5mol/L,Cd2+(浓度为0.67×10-3mol/L~4.67×10-3mol/L)对HSA的荧光猝灭程度随Cd2+浓度的增加而加大,并呈良好的线性关系(r≥0.999 00),而且在4种温度中,随着温度的增加,猝灭常数越来越小。结论 Cd2+对HSA荧光的猝灭机理为静态猝灭,且在一定条件下有规律地猝灭,所以可以运用荧光猝灭法定量检测镉离子的浓度。     

碲化镉量子点与酸性磷酸酶相互作用效应研究

目的研究CdTe量子点与酸性磷酸酶之间的相互作用。方法测定CdTe量子点与APase在不同温度下发生相互作用后的荧光变化,计算二者结合的热力学常数,利用非辐射能量转移理论计算CdTe量子点与酸性磷酸酶作用的距离,测定CdTe量子点-酸性磷酸酶复合体系的活性。结果 CdTe量子点对酸性磷酸酶自身荧光的猝灭方式为静态猝灭,二者可以通过静电引力形成复合物,作用距离为2.80 nm,该复合物可以使量子点的荧光和酸性磷酸酶的活性同时得以保留。结论根据研究结果可以设计出荧光性能优异且具有生物活性的酶探针,在生物标记方面具有良好的应用前景。     

吖啶橙-罗丹明6G共振能量转移荧光猝灭法测定铅

目的根据吖啶橙和罗丹明6 G两分子间能够有效地发生荧光共振能量转移,建立一种检测铅离子的新方法。方法在表面活性剂SDS的存在下,吖啶橙和罗丹明6 G分子间发生荧光共振能量转移,使罗丹明6 G的荧光强度增大;加入铅离子后能对AO-R6 G体系的荧光产生猝灭作用,其荧光猝灭程度随着铅离子浓度的增大而增强,据此建立了检测Pb2+的新方法。结果当Pb2+浓度为2.0×10-7mol/L~3.0×10-6mol/L时,与荧光猝灭程度ΔF有良好的线性关系,线性回归方程为y=16.34x+42.79,相关系数(r)=0.998,检出限为6.06×10-8mol/L,相对标准偏差(RSD)为3.4%~5.3%,加标回收率为95.1%~96.5%。结论本方法操作简便、灵敏,可用于实际水样中铅含量的测定。     

采用纳米荧光材料检测鱼中痕量六价铬的含量

目的采用Cd S纳米量子点为荧光探针,建立一种简单快速测定鱼类样品中痕量六价铬含量的测定方法。方法采用电化学法合成还原性谷胱甘肽(GSH)稳定的Cd S纳米荧光材料,痕量的六价铬对这种Cd S纳米荧光材料具有灵敏的荧光猝灭作用。结果在0.5~20.0μg/L范围内,Cd S纳米材料的荧光响应值与六价铬的含量呈线性关系,检出限在为0.1μg/L,测定的相对标准偏差小于5%,加标回收率在92%~107%之间。结论该方法能够快速灵敏检测鱼类样品中的痕量六价铬,具有重现性好,定量准确灵敏等优点。     

人血清白蛋白荧光猝灭法测定水环境中Cu(Ⅱ)

〔目的〕建立环境水样Cu(Ⅱ )的分析新方法。〔方法〕人血清白蛋白荧光猝灭法。〔结果〕根据Cu(Ⅱ )在pH=7.43的KH2 PO4 -Na2 HPO4 缓冲溶液中对HSA荧光的猝灭效应 ,建立了HSA荧光猝灭法测定Cu(Ⅱ )的分析新方法。在实验最适条件下Cu(Ⅱ )浓度在 0 .13 -6.0 0 μg/ml范围内有良好的线性关系 (r =0 .997)。方法检出限 3 8ng/ml;相对标准偏差 6.4%-1.5 %;样品加标回收率 94.5 %-10 1.0 %。〔结论〕方法简便 ,特异 ,灵敏度高。可直接用于环境水样中Cu(Ⅱ )的测定。     

温度和浓度对镉离子与人血清白蛋白结合作用的影响

目的运用荧光光谱法研究镉离子(Cd2+)与人血清白蛋白在不同温度、浓度下的相互作用。方法温度为298 K、304 K、310 K、314 K时,在HSA中逐步加入Cd2+,分别测定各条件下HSA及混合样品的荧光光谱。结果随着Cd2+浓度的增大,HSA发射峰略有红移,荧光强度降低;随着温度增高,HSA猝灭程度加大;温度从298 K升至310 K时,KSV逐步减小,结合常数、结合位点逐步增大,而当温度升高至314 K时,结合常数、结合位点数反而下降;反应中的焓变ΔH0、熵变ΔS0且吉布斯自由能变ΔG0。结论 Cd2+对HSA荧光猝灭机制可能为静态猝灭和动态猝灭同时存在。温度升高至310 K时,Cd2+与HSA的作用增强,两者之间的作用力主要为疏水作用,而到314 K时则表现出动态猝灭的特征。     

基于铅离子-苯基荧光酮-TritonX-100体系的氡荧光猝灭检测新方法

目的研究铅离子对苯基荧光酮-Triton X-100体系的荧光猝灭特性,建立基于子体铅的氡无辐射危害荧光猝灭检测新方法。方法用0.2%HAc溶液采集氡辐射的子体铅。在Tris-HAc缓冲介质中,Pb~(2+)与PF形成配位物,经非离子表面活性剂Triton X-100敏化,体系发生灵敏的荧光猝灭效应,ΔF与Pb~(2+)浓度呈良好的线性关系,与氡的辐射强度之间具有良好的数学定量关系。据此,建立氡的荧光猝灭检测新方法。结果 Pb~(2+)浓度为1.44 ng/ml~300 ng/ml时,铅离子-苯基荧光酮-Triton X-100体系ΔF与ρ之间呈现良好的线性关系,标准曲线的回归方程为ΔF=8.78ρ+82.02,相关系数(r)=0.999 1,检出限为0.43 ng/ml。氡辐射强度[D,×10~3(Bq·h)/m~3]为8.76、17.90、56.49、66.38时,氡样品测定溶液的ΔF值与D值之间呈现良好的线性关系,回归方程为ΔF=10.37D+365.25,r=0.990 6。结论本方法灵敏、准确,操作简单,在无辐射危害的条件下可检测放射性气体氡。     

Ca~(2+) Mg~(2+)对柔红霉素结合心肌肌球蛋白影响的荧光法研究

利用荧光光谱法研究了生理pH下,Ca2+、Mg2+对柔红霉素(Daunorubicin,DNR)与心肌肌球蛋白(car-diac myosin,CM)结合作用的影响。求得20℃,cCa2+=2.0×10-3mol/L,cMg2+=1.2×10-3mol/L时,Ca2+-DNR-CM、Mg2+-DNR-CM和Ca2++Mg2+-DNR-CM的猝灭常数和结合常数分别为:1.280×105L/mol、1.469×105L/mol和2.237×105L/mol和1.165×105L/mol、1.274×106L/mol和1.848×103L/mol。结果表明:Ca2+、Mg2+对DNR-CM均有荧光猝灭作用,且混合离子能竞争性抑制DNR与CM的结合,而异常的Ca2+、Mg2+浓度增强了DNR对CM的荧光猝灭作用,导致其心脏毒性。     

均匀设计优化人血白蛋白荧光猝灭法测定水中Cu(Ⅱ)

目的：建立了HSA荧光猝灭法测定Cu（Ⅱ）的分析新方法。方法：在均匀设计优化的反应条件下，研究了Cu（Ⅱ）对HSA的荧光猝灭效应。结果：在pH=8．0的KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液中，一定量的Cu（Ⅱ）对HSA荧光的猝灭有良好的线性关系。检出限为19．7ng／ml；相对标准偏差0．9％-1．3％；样品加标回收率93．0％～102．7％；线性范围0．07～6．00μg／ml。结论：方法与单因素轮换法实验结果比较，实验条件更优化，方法更简便、灵敏。可直接用于环境水样中Cu（Ⅱ）的测定。     

核酸探针长度对量子点微生物传感器的影响

目的探讨并明确量子点核酸传感器检测微生物核酸样本时探针长度对杂交效率和检测结果的影响。方法首先合成金黄色葡萄球菌16S rDNA探针,然后在其5′端添加不同长度的重复碱基序列,分别合成5条长度不同的以胸腺嘧啶结尾的探针;采用巯基法固定金黄色葡萄球菌16S rDNA探针于石英晶体微阵列上,并用石英晶体微天平(QCM)检测样品频率漂移量以判断不同核酸长度时的杂交效率,并用荧光显微镜观察形成不同双链复合物的荧光强度和荧光效率,以此判断不同碱基序列长度探针对荧光效率和杂交效率的影响,并运用SPSS软件对数据进行统计分析。结果对于普通的短链核酸杂交反应,随着探针长度增加,杂交效率呈现依次递增的趋势,当离子强度为40mmol/L时,杂交效率和荧光强度增加最快,其后再增加探针长度,杂交效率增加速度变缓。结论探针长度是影响杂交效率的主要原因之一,通过增加探针长度可以提高杂交效率和荧光强度,但同时也会增加二聚体产生概率,故应根据实际需要设计长度适合的探针。     

罗丹明6G-PAN能量转移荧光猝灭法测定痕量锌

目的：建立一种荧光法测定头发中痕量锌的新方法。方法：在无水乙醇介质中,Zn^2＋与1-（2-吡啶偶氮）-2萘酚（PAN）形成配合物PAN-Zn^2＋,其吸收光谱与罗丹明6G（Rh6G）的发射光谱有效重叠,在λex/λem=543 nm/558 nm处发生能量转移,使Rh6G荧光猝灭,从而建立痕量锌的荧光猝灭测定新方法。结果：在优化实验条件下,在13～360 ng/ml浓度范围内,荧光猝灭程度与Zn^2＋浓度呈现良好的线性关系（r=0.9991）。方法的检出限为4.05 ng/ml;相对标准偏差为0.88%～2.72%（n=11）;样品加标回收率为97.5%～102.5%。结论：方法加入试剂简单,稳定性好,灵敏度高,操作简便,用于头发中痕量锌的测定,结果满意。     

稀土钐离子与人血清白蛋白的相互作用

目的:通过对稀土钐离子(Sm3+)和人血清白蛋白(HSA)的结合反应研究,进一步探讨Sm3+在生物体内与蛋白质相互作用的机理。方法:用荧光光谱、紫外-可见吸收光谱法研究了稀土金属离子与人血清白蛋白的相互作用。结果:Sm3+对HSA有荧光猝灭作用,属于静态猝灭,Sm3+与HSA反应生成了新的复合物,荧光猝灭发生了分子内的非辐射能量转移。Sm3+与HSA的结合常数Kb分别为4.12×105L.mol-1(298K)和2.26×105L.mol-1(318K),结合位点数n为1.24(298 K)和1.20(318 K)。结论:Sm3+和HSA之间有很强的结合作用,这为Sm3+在体内被蛋白质储存和转运提供了条件。     

乳制品中核黄素荧快速荧光测定法

根据Na_2 S_2O_4可使VB_2产生的荧光熄灭性质,以国产930型荧光光度计测定样品加Ne_2S_2O_4前后的荧光强度,按照前后两次荧光强度的差值,求出样品中VB_2含量,从而清除杂质荧光对测定的干扰。将样品加温加压酸解提取改进为室温常压下酸解提取。并用pH4.6醋酸盐缓冲液沉淀样品中蛋白质。本方法测定不同乳制品的平均回收率为93％～100％,变异系数为5.75％～12.8％。     

荧光法研究曲克芦丁和人血清白蛋白的相互作用

[目的]研究曲克芦丁（Troxerutin）与人血清白蛋白（HsA）的相互结合作用。[方法]以HSA为荧光剂,Troxerutin为荧光猝灭剂,在激发波长为220nm,发射波长为345nm下测定两者结合后的荧光强度,推测其猝灭机理;分别测定相同浓度的HSA的荧光发射光谱图和的紫外可见吸收光谱图,来推断两者结合的作用力类型。[结果]Troxerutin与HSA的相互作用为静态猝灭过程,平衡常数K0（25℃）=6．18×10^5L／mol、K0（37℃）=3．76×10^5L／mol,供体（HSA）与受体（Troxerutin）间的作用距离r=4．66nm。Troxerutin和HSA的作用力类型为疏水作用力。[结论]通过两种分析方法清楚的研究了曲克芦丁与血清白蛋白的相互作用。     

水中小诺霉素的碲化镉量子点增强荧光测定法

目的建立水中小诺霉素的碲化镉(CdTe)量子点荧光增强测定法。方法向1 ml小诺霉素溶液中加入1.0 ml的CdTe量子点溶液,用PBS缓冲溶液(p H 6.5)定容到5 ml,混合均匀后在室温下反应30 min,测定其荧光强度(F)。结果当小诺霉素在0.28~4.17 mg/L线性范围内,所得线性方程为F/F0=0.074 6c+0.984 4,r=0.995 4,呈良好的线性关系。该方法的检出限为0.27 mg/L,平均回收率为102.0%~106.3%,RSD为1.1%~4.2%。结论该方法具有快速简便,灵敏度和精密度较高的优点,适用于水样中小诺霉素的检测。     

水中汞离子(Ⅱ)的纳米生物传感器检测法

目的 运用汞离子特异性寡核苷酸探针和纳米金,构建一种能快速比色检测水中Hg2+的纳米生物传感器.方法 对已有的汞离子特异性核苷酸探针进行优化设计,并吸附到纳米金颗粒表面,实现生物传感器的组装.利用汞离子特异性稳定T-T错配和纳米金颗粒在高盐条件下的颜色变化,从而实现对Hg2+的定量分析.结果 制备的纳米金粒径为15 nm,浓度为2.97 nmol/L;成功获得2条截短的汞离子特异性核苷酸探针(9 bp);构建的汞离子纳米生物传感器,最佳盐浓度为0.5 mol/L,检测Hg2+仅需数分钟,检出限为10 μmol/L,特异性为100％.结论 本研究构建的纳米生物传感器,不需要标记探针或者修饰纳米金,在不使用任何特殊条件下就可以实现对汞离子可视化便捷分析,具有操作简便、检测时间短、灵敏度较高、特异性强等优点,易于推广使用.     

PAN-Rh6G能量转移荧光猝灭法测定水样中痕量镉(Ⅱ)

目的：根据能量转移荧光猝灭程度,建立一种荧光猝灭法测定环境水样中痕量镉的新方法.方法：在无水乙醇介质中,Cd^2＋与1-（2-吡啶偶氮）-2-萘酚（PAN）形成PAN-Cd^2＋配合物,其吸收光谱与罗丹明6G（Rh6G）的发射光谱有效重叠,发生能量转移,使Rh6G荧光猝灭,从而建立了痕量镉的荧光猝灭测定新方法.结果：在优化实验条件下,在31～800 ng/ml浓度范围内,Rh6G荧光猝灭程度与PCd^2＋呈现良好的线性关系（r=0.9999）.方法的检出限为9.0 ng/ml.结论：方法灵敏、快速、简便,用于环境水样中痕量镉的测定,结果满意.