长链非编码RNA调控乳腺癌增殖、转移、耐药性及乳腺癌干细胞

长链非编码RNA(lncRNA)是不编码蛋白质的新型RNA分子,在表观遗传学、基因转录及转录后水平调控基因表达,并能够与蛋白质、核酸互相作用,参与多种生理和病理过程的调控。研究表明,lncRNA在多种癌细胞异常表达,并在癌症的起始、发展、侵袭及转移等过程中发挥重要功能。乳腺癌发生、发展和转移等过程受到多基因、多因素的调控,不同lncRNA分子对乳腺癌的调控功能和作用机制各异。笔者回顾了lncRNA在乳腺癌中的最新研究进展,对lncRNA参与调控乳腺癌增殖、转移、耐药以及乳腺癌干细胞等多个环节分别讨论,并对lncRNA在乳腺癌早期诊断和靶向治疗等方面的应用前景和面临的挑战进行了展望和分析。     

乳腺癌相关长链非编码RNA的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度大于200 nt、不能编码蛋白质的RNA,参与基因调控的各个层面.近年来研究发现,多种lncRNA在乳腺癌的发生、发展过程中起着重要的调控作用.该研究就lncRNA在乳腺癌中的异常表达,与乳腺癌的增殖、凋亡、侵袭、转移的关系,以及在乳腺癌早期诊断、药物耐药、判断预后中的作用等相关进展做一综述,希望为乳腺癌的预测、诊断和个体化治疗提供新的靶点和思路.     

lncRNA NEAT1通过抑制hsa-miR-450b-5p促进胃癌细胞中EZH2的表达与细胞的增殖和迁移能力

目的：筛选果蝇Zeste 基因增强子同源物2（EZH2）基因上游miRNA及lncRNA,分析其在胃癌细胞中的表达并验证其间的靶向关系,探讨它们对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法：通过ENCORI、miRDB 和Target Scan 数据库查询并分析、筛选 EZH2 上游 miRNA（has-miR-450b-5p）,ENCORI 数据库和 DAINA 数据库筛选 has-miR-450b-5p 上游 lncRNA（lncRNA NEAT1）,预测hsa-miR-450b-5p、lncRNA NEAT1 与EZH2 之间的结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证hsa-miR-450b-5p 与lncRNA NEAT1 的结合关系。采用qPCR 和WB法检测lncRNA NEAT1 和EZH2 在正常胃黏膜细胞（GES-1）与胃癌细胞（MGC-803、SGC-7901 和MKN-28）中的表达量。按转染物的不同将MGC-803 和SGC-7901 细胞分为hsa-miR-450b-5p-mimic 组、mimic-NC 组、si-NEAT1 组和si-NC 组,转染36~48 h 后qPCR 法验证过表达及敲减效果;通过qPCR、WB 法检测观察过表达hsa-miR-450b-5p 对细胞中lncRNA NEAT1 和EZH2 mRNA、蛋白表达的影响,以及敲减lncRNA NEAT1 对hsa-miR-450b-5p 和EZH2 mRNA表达的影响;CCK-8法、划痕愈合实验和流式细胞术分别检测敲减EZH2或敲减lncRNA NEAT1对细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响。结果：生物信息学分析筛选获得EZH2上游miRNA 和lncRNA 为has-miR-450b-5p和lncRNA NEAT1,双荧光素酶报告基因实验验证了两者间存在靶向关系。lncRNA NEAT1 和EZH2 mRNA、蛋白在胃癌细胞中均呈高表达（均P<0.05）。与mimic-NC 组相比,hsa-miR-450b-5p-mimic 组MGC-803、SGC-7901 细胞中miR-450b-5p水平均显著升高,而EZH2 mRNA、蛋白和lncRNA NEAT1的表达量均显著降低（P<0.05 或P<0.01）;与si-NC 组相比,si-NEAT1 组MGC-803、SGC-7901 细胞中lncRNA NEAT1 和EZH2 mRNA 的表达量均显著降低（均P<0.01）,SGC-7901 细胞中hsa-miR-450b-5p 表达量显著升高（P<0.05）。敲减EZH2或敲减lncRNA NEAT1后,MGC-803、SGC-7901 细胞的增殖、迁移能力均显著降低（均P<0.01）。结论：lncRNA NEAT1 和EZH2在胃癌细胞中均呈高表达,lncRNA NEAT1可通过hsa-miR-450b-5p促进EZH2的表达并提高胃癌MGC-803 和SGC-7901 细胞的增殖和迁移能力。     

长链非编码RNA作为竞争性内源RNA在食管癌中的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)具有与DNA、RNA、蛋白质直接相互作用的能力,在基因表达调控中具有促进或抑制作用。大量的研究表明,lncRNA在多种肿瘤中表达失调,且对肿瘤的发生、发展具有重要作用。然而,lncRNA在食管癌中的作用机制仍然不清楚。近期的一些研究表明,lncRNA可与微小RNA(miRNA)结合,作为其竞争性内源RNA(ceRNA)发挥作用,调控其靶基因的表达,从而参与基因表达的调控。这为揭示lncRNA在食管癌中的分子机制提供了新的思路,也为食管癌的诊断、治疗、预后评估提供了新的生物标志物。本文就lncRNA作为ceRNA在食管癌中的研究进展作一综述。     

lncRNA NEAT1调控miR-4262表达影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:研究长链非编码RNA NEAT1（lncRNA NEAT1）对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:qPCR检测NEAT1和miR-4262在人正常甲状腺滤泡上皮细胞株Nthy-ori 3-1与甲状腺癌细胞株FTC-133、ML-1、SW579中的表达。用si-NEAT1或miR-4262 mimic转染SW579细胞，考察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。生物学信息预测结合双荧光素酶报告实验分析NEAT1和miR-4262之间的靶向关系。MTT法检测细胞增殖抑制率；Western blot检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达；Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。共转染si-NEAT1和anti-miR-4262，观察抑制miR-4262表达对抑制NEAT1表达诱导的SW579细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:NEAT1在甲状腺癌细胞中的表达显著上调（P＜0.05），miR-4262表达下调（P＜0.05）。抑制NEAT1表达或过表达miR-4262显著增加SW579细胞增殖抑制率和p21蛋白表达量（P＜0.05），显著降低迁移细胞数、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量（P＜0.05）。miR-4262是NEAT1的靶基因。上调或下调NEAT1表达明显调控miR-4262表达（P＜0.05）。抑制miR-4262表达能逆转抑制NEAT1表达对SW579细胞增殖抑制率和p21蛋白表达的促进作用，以及对细胞迁移、侵袭及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达的抑制作用。结论:lncRNA NEAT1通过靶向miR-4262影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

lncRNA NEAT1 通过抑制DNA损伤促进肺腺癌PC-9 细胞的增殖

[摘要] 目的：研究长链非编码RNA核富集转录体1（lncRNA NEAT1）对肺腺癌PC-9 细胞增殖能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法：qPCR 检测人肺腺癌PC-9 细胞与人胚肺二倍体2BS 细胞中lncRNA NEAT1 的表达水平;设计并合成lncRNA NEAT1 的小干扰RNA（siRNA）序列,采用脂质体法转染PC-9 细胞,通过qPCR 检测转染前后PC-9 细胞NEAT1 的表达水平。MTT法、流式细胞术分别检测lncRNA NEAT1 敲低对PC-9 细胞增殖及细胞周期的影响;WB检测转染前后DNA损伤相关蛋白,即共济失调毛细血管扩张突变蛋白（ATM）和双链DNA损伤标志物γ-H2AX的表达水平。结果：与2BS细胞相比,PC-9 细胞中lncRNA NEAT1 呈高表达（P<0.05）。成功建立NEAT1 敲低的PC-9 细胞,转染siRNA 12 h 后siNEAT1-1 及siNEAT1-2 干扰组细胞增殖能力较空白对照组及空转染组明显下降（P<0.05）;干扰组细胞周期被阻滞在G1 期［（88.97±2.64）%,（88.15±1.48）% vs（84.5±1.72）%,P<0.05］和G2/M期［（8.35±2.02）%（, 8.11±1.36）% vs（4.28±1.28）%,P<0.05］;干扰组细胞中DNA损伤相关蛋白ATM和γ-H2AX表达水平显著升高（均P<0.05）。结论：lncRNA NETA1 在肺腺癌PC-9 细胞呈高表达,其可通过抑制DNA损伤导致细胞周期G1/M期转变促进肺腺癌细胞PC-9 的增殖能力。     

乳腺癌分化拮抗非蛋白编码RNA表达及作用研究进展

摘 要：长链非编码 RNA(long non-coding RNA,lncRNA )是一种包含长于200个核苷酸序列且无法编码为蛋白的非编码RNA。已有较多研究证实lncRNA在乳腺癌中表达失调,参与乳腺癌的进展。分化拮抗非蛋白编码RNA是人类染色体4q12上编码的lncRNA,在乳腺癌中呈异常上调表达并广泛参与乳腺癌进展的多种信号通路。全文就分化拮抗非蛋白编码RNA在乳腺癌中的表达、功能及作用机制作简要综述。     

lncRNA Xist/miR-215-5p下调LPAR4表达对乳腺癌细胞增殖与转移的影响

目的:探讨溶血磷脂酸受体4（LPAR4)在乳腺癌组织中的表达水平及与乳腺癌发生发展的关系,探究lncRNA Xist/miR-215-5p对LPAR4的调控作用。方法:通过Targetscan和Starbase预测LPAR4的上游通路lncRNA Xist/miR-215-5p。使用慢病毒转染LPAR4和miR-215-5p;使用质粒转染lncRNA Xist。在MDA-MB-231细胞系中,通过MTT和划痕实验检测细胞的增殖和转移能力。结果:LPAR4在乳腺癌细胞系中高表达,miR-215-5p和lncRNA Xist为低表达。Western blot显示LPAR4在乳腺癌细胞系中高表达。MTT和划痕实验提示上调LPAR4可以促进MDA-MB-231细胞的增殖和转移能力。进一步实验发现lncRNA Xist可以上调miR-215-5p,并且负性调控LPAR4;且lncRNA Xist可以抑制MDA-MB-231细胞的增殖能力。除此之外,在lncRNA Xist下调细胞中,上调miR-215-5p可以抑制lncRNA Xist下调介导的细胞增殖能力增强。结论:lncRNA Xist/miR-215-5p可能通过调控LPAR4的表达,为治疗乳腺癌提供可能的新靶点。LPAR4在乳腺癌细胞中高表达,可能成为乳腺癌潜在的肿瘤标志物。     

长链非编码RNALUCAT1在恶性肿瘤中作用及机制的研究进展

长链非编码RNA（lncRNA）是一种长度超过200个核苷酸且不具备蛋白质编码功能的RNA分子,目前认为lncRNA可以从多个维度对DNA、RNA和蛋白质的功能进行调控。肺癌相关转录物1（LUCAT1）是最早在吸烟的肺癌患者组织中发现的一种lncRNA,越来越多的研究发现,LUCAT1在多种类型肿瘤中表达异常,可通过DNA甲基化、竞争性结合靶基因mRNA和蛋白质等多种形式参与分子调控,促进肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等过程,在恶性肿瘤的发生和发展中发挥重要作用,是临床肿瘤诊断的生物标志物及治疗的潜在靶点。此外,LUCAT1在胃癌、肝细胞癌、肾癌、卵巢癌及乳腺癌等多种类型肿瘤细胞中表达上调,并与肿瘤大小、组织学分级、TNM分期和OS等临床特征显著相关。本文综述了近年来LUCAT1在促进肿瘤发生和发展的作用机制及其在不同类型肿瘤中的表达和功能,以及在预后评估中作用的研究进展。     

ABHD11-AS1在肿瘤中表达及调控作用研究

摘 要：长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）是一类长度>200 nt且不具备编码蛋白质能力的非编码RNA。大量研究表明lncRNA在恶性肿瘤发生发展中起着重要作用。ABHD11-AS1作为一种lncRNA在诸多人类肿瘤中呈现异常表达,并能够调控肿瘤增殖和侵袭、迁移等恶性生物学行为。全文对ABHD11-AS1在肿瘤中的表达及调控作用进行综述。     

NEAT expression is associated with tumor recurrence and unfavorable prognosis in colorectal cancer

Long noncoding RNAs (lncRNAs) have recently been identified to be involved in various diseases including cancer. NEAT1 is a recently identified lncRNA with its function largely unknown in human malignancy. In the present study, we investigated NEAT1 expression in 239 cases of clinical colorectal cancer specimens and matched normal tissues. Statistical methods were utilized to analyze the association of NEAT1 with clinical features, disease-free and overall survival of patients. Results showed that NEAT1 expression in colorectal cancer was up-regulated in 72.0% (172/239) cases compared with corresponding normal counterparts, and related to tumor differentiation, invasion, metastasis and TNM stage. Kaplan-Meier analysis proved that NEAT1 was associated with both disease-free survival and overall survival of patients with colorectal cancer that patients with high NEAT1 expression tend to have unfavorable outcome. Moreover, cox’s proportional hazards analysis showed that high NEAT1 expression was an independent prognostic marker of poor outcome. These results provided the first evidence that the expression of NEAT1 in colorectal cancer may play an oncogenic role in colorectal cancer differentiation, invasion and metastasis. It also proved that NEAT1 may serve as an indicator of tumor recurrence and prognosis of colorectal cancer.     

四种长链非编码RNA在乳腺癌中的表达及与患者预后的关系CSCD

目的探讨EGOT、MEG3、KCNQ1OT1和NEAT1四种LncRNA在不同亚型乳腺癌患者中的表达及与患者临床病理特征及预后的关系。方法利用UALCAN网站挖掘TCGA数据库等大数据,分析四种LncRNA在1097个乳腺癌组织样本和114个正常组织样本中的表达,用Kaplan-Meier Plotter法绘制生存曲线,分析四种LncRNA与乳腺癌患者预后的关系。通过LinkedOmics网站和ClueGO工具分析与它们表达相关的蛋白质的主要功能。结果EGOT、MEG3在乳腺癌组织中的表达显著低于正常组织(P<0.05);HER2阳性乳腺癌中KCNQ1OT1显著低表达(P<0.05);NEAT1在Ⅳ期、HER2阳性和三阴性乳腺癌中的表达显著低于正常组织(P<0.05)。四种LncRNA的表达水平与乳腺癌患者的无复发生存时间(RFS)均有显著相关性(P<0.05),且LncRNA低表达时乳腺癌患者的RFS和预后较差。通过功能富集分析发现与四种LncRNA表达相关的蛋白质均与重要生物过程或通路相关。结论四种LncRNA在乳腺癌或部分亚型中表达下调,它们可能是乳腺癌中潜在的抑癌因子,且可成为判断乳腺癌患者预后的生物学指标。     

雄激素受体在乳腺癌他莫昔芬耐药中的作用和机制研究进展

他莫昔芬(tamoxifen,TAM)为人工合成的非甾体类抗雌激素药物,被普遍的应用于雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性的乳腺癌患者中。但大约一半的ER阳性的患者会出现耐药。可见内分泌耐药是当前临床迫切需要解决的问题。随着对耐药机制的深入研究:发现雄激素受体(androgen receptor,AR)在 72.9%的原发性乳腺癌病例中表达,并在约65%的乳腺癌中与ER同时表达。有研究显示:AR/ER越高预示着TAM治疗率越低;AR与人类表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor 2,HER2）之间所形成的正反馈循环能够增加TAM耐药;AR、髓样细胞白血病-1蛋白(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)与TAM耐药有可能相关。所以探讨AR在TAM耐药中的作用和机制是非常有意义的。为乳腺癌的靶向治疗掀开了新的一页。     

BRCA1/2突变和同源重组修复缺陷（HRD）检测在乳腺癌中的临床研究进展

乳腺癌已成为发病率最高的癌症。DNA修复缺陷是乳腺癌最重要的特征之一。先前的研究表明,乳腺癌易感基因1/2（breast cancer susceptibility gene 1/2,BRCA1/2）突变是预测乳腺癌同源重组修复缺陷（homologous recombination deficiency,HRD）最主要的生物标志物,能识别铂类药物和多腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP ribose polymerase,PARP)抑制剂治疗的获益人群。美国食品药品监督管理局（FDA）已批准Olaparib和Talazoparib两种PARP抑制剂,用于BRCA1/2突变的早期和晚期乳腺癌的辅助治疗。但中国尚未获批。现有研究表明,一部分非BRCA1/2突变的乳腺癌患者也具有HRD特征,可以从铂类药物或PARP抑制剂中获益。本综述总结了涉及到BRCA1/2突变、同源重组修复（homologous recombination repair,HRR）基因突变和HRD状态检测的临床研究。阐明了各种检测方法在识别乳腺癌患者HRD状态和预测疗效方面的价值,并提出应尽快开发用于中国乳腺癌HRD的检测方法。     

B7-H3的作用机制及其在非小细胞肺癌中的研究新进展

肺癌是目前世界上癌症相关性死亡的主要原因之一。其中最常见的类型为非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）。肺癌患者预后不佳,因此探索新型治疗方案对提高患者预后来说是非常必要的。据研究,共刺激分子B7-H3（CD276）在抗肿瘤免疫中起着重要的作用,而免疫系统的调节机制在抑制肿瘤微环境中的抗肿瘤T细胞介导的免疫反应中起着重要作用。本文阐述了B7-H3的作用机制及其在非小细胞肺癌微环境中表达的临床意义。     

Coronin 3蛋白对恶性肿瘤作用机制的研究进展

冠蛋白（Coronins）是一个高度进化的保守蛋白家族。Coronin 3（Coronin 1c,CRN2）是其家族中的一员,其在肌动蛋白网络的重组中起重要作用,并与突起形成、分泌、迁移和侵袭等细胞过程有关。多项研究表明其在胶质瘤、前列腺癌、胃癌、黑色素瘤、肺癌、肝癌、三阴乳腺癌、食管癌等多种恶性肿瘤中表达上升。有研究显示Coronin 3蛋白对恶性肿瘤有促进转移和侵袭的作用。本文就目前研究Coronin 3对不同恶性肿瘤的作用及其作用机制的进展进行综述。     

基于Oncomine和GEO数据库分析RCAN1基因在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨钙调磷酸酶调节因子1(regulator of calcineurin 1,RCAN1)基因在乳腺癌中的表达及临床意义。方法:检索Oncomine和GEO数据库中有关RCAN1的信息,并对所获取的数据资料挖掘并进行二次分析,对RCAN1在乳腺癌中的作用进行荟萃分析。结果:Oncomine数据库中共收集了454项不同类型RCAN1的研究结果,关于在肿瘤与对照组织中RCAN1表达有统计学差异的结果有64项,其中RCAN1表达增高的有20项,表达降低的有44项。涉及到乳腺癌的研究数据集共有13项。乳腺癌中高表达的研究有0项、低表达的有13项。共有6项研究,9个乳腺癌分型数据集涉及RCAN1在乳腺癌组织和正常组织中的表达,包括2 508例样本。在数据库中综合比较9项研究成果,发现与正常组织相比,RCAN1在乳腺癌中的表达量低于正常组织（P<0.05）。不仅如此,通过挖掘GEO数据库,发现低表达RCAN1的患者总体死亡率较高,高表达RCAN1的患者预后较好（P<0.05）。结论:通过深入挖掘Oncomine和GEO基因芯片数据库中肿瘤相关的基因信息,提示RCAN1的mRNA水平在乳腺癌组织中呈现低表达,并与乳腺癌预后相关,有望成为抗乳腺癌靶向治疗药物的重要靶点。     

公共数据库分析RACGAP1在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨Rac GTP酶活性蛋白-1（RACGAP1）基因在乳腺癌中的表达及临床意义。方法:检索Oncomine数据库中有关RACGAP1信息，对所获取的数据资料进行二次分析，对其在乳腺癌中的作用进行荟萃分析。通过GOBO数据库分析该基因在乳腺癌亚型中的表达情况。利用 Kaplan-Meier Plotters数据库进行患者的生存周期分析。结果:Oncomine数据库中共收集了349项不同类型的研究结果，其中关于RACGAP1表达差异有统计学意义的研究共有74项，RACGAP1表达增高的有69项，表达降低的有5项。共有3项研究，10个数据集涉及RACGAP1在乳腺癌组织和正常组织中的表达，包括2 776个样本。综合比较3项研究成果，发现RACGAP1在乳腺癌中的表达量高于正常组(P<0.05)。此外，通过GOBO数据库分析发现RACGAP1表达水平在激素受体（HR）敏感亚型、三阴性（TN）和HER-2亚型间有统计学差异（P<0.05）。不仅如此，RACGAP1表达量与乳腺癌患者总体生存率存在相关性，高表达者总体生存率较差，低表达者预后较好。结论:RACGAP1在乳腺癌组织中呈现高表达，且与乳腺癌预后有关，可为乳腺癌的药物开发和预后预测提供一定的理论依据。     

免疫治疗相关单克隆抗体靶点在三阴性乳腺癌中的研究现状

乳腺癌是女性常见肿瘤之一，其中ER、PR、HER-2均为阴性的乳腺癌为三阴乳腺癌，肿瘤免疫疗法是三阴乳腺癌的治疗手段之一。FDA已经批准靶向于PD-L1的单克隆抗体Atezolizumab（Tecentriq）联合Abraxane治疗三阴乳腺癌。本文综述了目前处于不同临床阶段单克隆抗体的常用免疫治疗靶点，根据作用机制的不同，这些靶点在免疫系统中起到免疫抑制或激活作用，前者如PD-1/PD-L1、CTLA-4、LAG-3、TIM-3、CD112R及Siglec-15等；后者如GITR、OX40和4-1BB等。除Tecentriq外，靶向于这些靶点的抗体多处于临床Ⅰ期和临床Ⅱ期研究，虽然发现了具有较好的安全性和一定的治疗效果，但是这些抗体能否最终应用于临床治疗则需要更深入的研究。此外，免疫治疗相关抗体多与其他靶点单抗、小分子抑制剂或化疗药物等药物联合使用，进一步增加了三阴乳腺癌的治疗手段。