雷帕霉素和罗格列酮对人乳腺癌细胞生长的影响*

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）特异性抑制剂雷帕霉素和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR γ）激动剂罗格列酮对人乳腺癌细胞株MCF-7 体外培养的抑制作用,为临床靶向治疗提供试验依据。方法:取对数生长期的乳腺癌MCF-7 细胞株,按2.0 × 10 6细胞/孔接种24孔板,按照析因试验安排4 个试验组:①雷帕霉素组（8 ×10-5 mg/L）;②罗格列酮组（50μ mol/L）;③联合组;④、实验对照组（不做任何处理的常规培养细胞）。 各组各浓度分别设3 个复孔,实验重复3 次。采用MTT 比色法观察雷帕霉素和罗格列酮对体外培养的MCF-7 细胞系生长的抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化。结果:罗格列酮和雷帕霉素均能有效的抑制体外培养的乳腺癌细胞株MCF-7 的生长,雷帕霉素的抑制率最大（P<0.05）。 联合用药不增加细胞生长抑制率（P<0.05）。 结论:体外培养抑制试验证明雷帕霉素、罗格列酮均能有效的抑制乳腺癌细胞株MCF-7 的生长。雷帕霉素联合罗格列酮不增加细胞凋亡。雷帕霉素和罗格列酮对MCF-7 细胞株的干预作用是通过周期阻滞完成的。      

雷帕霉素联合5-脱氧氮杂胞苷干预乳腺癌MCF-7细胞株体外培养效应

背景与目的:靶向治疗是乳腺癌等实体瘤治疗的又一有效手段,靶向药物的开发是临床治疗的需要。本文探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)特异性抑制剂雷帕霉素和甲基转移酶抑制剂5-脱氧氮杂胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-cdR)对雌激素受体阴性人乳腺癌细胞株MCF-7体外培养的抑制作用,为临床靶向治疗提供实验依据。方法:取对数生长期生长良好的乳腺癌MCF-7细胞株,按2.0×106细胞/孔接种于24孔板,按析因试验设置4个组:雷帕霉素组(R组)、5-Aza-cdR组(Aza组)、两药联合组和对照组。采用MTT法观察雷帕霉素、5-Aza-cdR对体外培养的MCF-7细胞系生长的抑制作用;应用流式细胞仪检测凋亡细胞和细胞周期。结果:与对照组相比,R组和Aza组均有一定的抑制乳腺癌细胞MCF-7细胞体外培养生长的作用(P<0.05),联合组对乳腺癌细胞生长的抑制作用与R组相同(P>0.05)。在干预48h时,R组和联合组即达到有效抑制率。Aza组干预120h达到有效抑制率。Aza组细胞抑制率低于联合组(P<0.05),R组与联合组细胞抑制率差异无显著性(P>0.05)。在72h时间点,R组、Aza组、联合组、对照组的早期凋亡细胞百分率分别为40.9%、22.7%、37.3%、24.1%;晚期凋亡细胞分别为17.8%、43.7%、27%、40.2%;与对照组相比,R组、联合组均能有效地诱导MCF-7早期细胞凋亡(P<0.05)。Aza组早期细胞凋亡率均较R组和联合组低(P<0.05),但晚期细胞凋亡率较R组和联合组高(P<0.05);与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。雷帕霉素4.0×10-5mg/L与5-Aza-cdR25μmol/L干预无明显交互作用(P>0.05)。联用组与R组比较,细胞早期凋亡率下降(P<0.05)。在72h时间点,4组的G0、G1期细胞分别为60.1%、67.3%、66.8%和6%;S期细胞分别为34.2%、17.1%、22.2%和38.5%;G2期细胞分别为5.8%、15.6%、11.1%和55.4%。与对照组比较,R组、Aza组、联合组对乳腺癌MCF-7细胞均有较强的G0、G1期阻滞作用(P<0.05)。与联合组相比联合用药不增强G0、G1期周期阻滞作用(P>0.05)。雷帕霉素4.0×10-5mg/L与5-Aza-cdR25μmol/L干预在细胞G0、G1期无明显的交互作用(P>0.05)。结论:体外培养抑制试验证明,雷帕霉素、5-Aza-cdR均能抑制乳腺癌细胞株MCF-7的生长。两药无交互作用,临床无联合用药价值。雷帕霉素联合5-Aza-cdR不增加细胞凋亡。5-Aza-cdR能干预细胞周期,其可能的机制是诱导细胞成熟分化。联合用药不增强MCF-7细胞的周期阻滞和凋亡。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对MCF-7乳腺癌细胞生物学行为影响的研究

目的:研究5-氮杂2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对MCF-7乳腺癌细胞株生长周期及凋亡的影响,探讨其临床治疗乳腺癌的可能性.方法:分别使用浓度为0.4、1.6、6.4、25.6和102.4 μmol/L的甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理MCF-7乳腺癌细胞株.通过MTT检测5-Aza-CdR对MCF-7乳腺癌细胞株存活率的影响.应用流式细胞仪检测5-Aza-CdR对MCF-7乳腺癌细胞株生长周期及凋亡的影响.RT-PCR检测处理前后抑癌基因RASSF1A mRNA在MCF-7乳腺癌细胞株表达的变化.结果:5-Aza-CdR 6.4 μmol/L作用1 d或0.4 μmol/L作用3 d就可以显著抑制MCF-7乳腺癌细胞的增殖,P<0.05.作用3 d后,在6.4 μmol/L时细胞周期中处于G0/G1期的细胞的显著增加(P<0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期;在0.4 μmol/L时细胞的凋亡率为(11.80±0.30)%,与对照组比较有显著升高,P<0.01.以上作用呈时间-剂量依赖性关系.5-Aza-CdR处理后,无RASSF1A表达的MCF-7乳腺癌细胞株可检测出基因RASSF1A的重新表达.结论:5-Aza-CdR可消除RASSF1A启动子甲基化状态,使其重新表达而抑制MCF-7乳腺癌细胞株的生长,使细胞周期阻滞于G0/G1期,并促进其凋亡.     

4-氨基吡啶与多西紫杉醇抗人乳腺癌细胞MCF-7 作用及相互关系探讨*

目的:通过研究钾离子通道阻断剂4- 氨基吡啶（4-AP ）对肿瘤化疗药物多西紫杉醇（docetaxel ,DOC ）的抗人乳腺癌细胞MCF-7 作用的影响,探讨4-AP 能否增强DOC 的作用。方法:用MTT 比色法分析DOC 、4-AP 以及两药联合应用对人乳腺癌细胞MCF-7 增殖的影响;用流式细胞术PI 单染法及Annexin V-FITC/PI双染法检测上述两种药物对人乳腺癌细胞MCF-7 的细胞周期及早期凋亡的影响。结果:DOC 能明显抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖,并呈剂量和时间依赖性。4-AP 对MCF-7 细胞增殖亦具有一定的抑制作用,在用药后24h、48h 及72h 的抑制率分别为11.9%±1.7% 、42.1%±3.2% 、44.2%±1.6% 。且5mmol/L 4-AP 可使DOC 的作用增强,使25μ mol/L DOC 对人乳腺癌细胞株MCF-7 最大杀伤作用时间从72h 提前至24h。5 μ mol/L DOC 能够使MCF-7 G2/M期细胞比率明显增加（53.58%±1.44% 与对照组8.83%±0.44% 相比,P<0.01）,使G0/G1 期细胞减少（11.48%±0.14% 与对照组63.89%±0.98% 相比,P<0.01）,说明DOC 主要在G2/M期阻滞MCF-7 细胞的增殖。5mmol/L 4-AP 作用于MCF-7 使其G0/G1 期细胞比率增加,G2/M期细胞明显减少,甚至消失（0.42%±0.17% 与对照组8.83%±0.44% 相比,P<0.05）。 而两药联用可见4-AP 使MCF-7 G2/M期细胞比率有所减少,而G0/G1 期细胞比率有所增加。DOC 单独作用于人乳腺癌细胞株MCF-7 细胞24h 后,能明显增加晚期凋亡和死亡率（由6.97%±0.75% 增加到20.77%±0.75% ,P<0.05）;而两药联合时,与对照组相比,早期凋亡比例由4.60%±0.91% 增加到12.20%±0.82%（P<0.05）,晚期凋亡和死亡细胞比例由6.97%±0.75% 增加到58.42%±0.31%（P<0.05）,提示4-AP（5mmol/L ）能明显增加DOC 诱导的MCF-7 早期凋亡。结论:DOC 和4-AP 分别在G2/M期和G0/G1 期抑制MCF-7 细胞增殖,4-AP 通过促进DOC 诱导细胞凋亡发挥抑制MCF-7 细胞增殖的作用。      

青蒿琥酯对乳腺癌MCF-7细胞株增殖功能及形态结构的影响

目的探讨青蒿琥酯（Artesunate,ART）对乳腺癌MCF-7细胞株的增殖、分化功能及细胞形态和结构的影响。方法ART作用乳腺癌MCF-7细胞后,采用MTT（四唑盐）比色法检测细胞增殖功能,观察细胞形态和结构的改变,流式细胞仪分析细胞周期相分布及细胞凋亡率。统计学分析采用重复测量设计资料的方差分析。结果ART对乳腺癌细胞MCF-7有抑制作用,随浓度增加和时间延长抑制作用增强（P〈0．05）,呈浓度依赖及时间依赖,并可导致细胞形态和结构的改变,抑制MCF-7细胞增殖,阻滞MCF-7细胞于S期和G2／M期。6 μmol／L和8 μmol／LART诱导MCF-7细胞的凋亡率分别为3．15％和8．43％。结论ART可导致MCF-7细胞形态的改变,抑制MCF-7细胞增殖和生长,阻滞MCF-7细胞于S期和G2／M期,并有诱导细胞凋亡的作用。     

（125）I联合ADM对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响

目的研究放射性粒子125I联合化疗药物多柔比星（阿霉素,ADM）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响。方法按2×2析因设计将乳腺癌敏感株MCF-7细胞随机分成A、B、C、D 4组,A组：空白对照组;B组：单纯125I粒子组;C组：单纯ADM组;D组：125I粒子＋ADM组。采用流式细胞术检测各组干预后的细胞周期分布及细胞凋亡率。结果 （1）单纯125I粒子近距离低剂量率持续照射后将MCF-7细胞阻滞于G2~M期1。25I联合ADM将MCF-7细胞周期主要集中在G0~G1期,同时伴有较大比例的细胞凋亡。（2）各组细胞的早期凋亡率分别为：A组（0.99±0.05）%、B组（19.22±4.92）%、C组（16.57±4.73）%、D组（3.16±1.08）%;各组晚期凋亡及坏死率为：A组（0.32±0.18）%、B组（3.16±1.39）%、C组（3.24±0.75）%、D组（28.99±7.96）%,D组晚期凋亡及死亡率明显提高。结论 125I放射性粒子能有效诱导乳腺癌细胞凋亡,与化疗药物ADM联合作用除诱导细胞凋亡,还可导致大量细胞死亡,具有协同、增效的作用。     

NP方案联合不同间隔时间放疗对乳腺癌MCF-7细胞凋亡影响的研究

目的：研究NP方案[顺铂（DDP）＋盖诺（NVB）]联合不同间隔时间放射治疗对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响。方法：采用流式细胞仪技术定性定量研究NP方案联合不同间隔时间放疗对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响，并观察NP方案作用后不同时间周期阻滞情况。结果：MCF-7细胞单独NP方案化疗组或放化联合作用组均可诱导细胞凋亡，随时间增加呈不可逆转增加，放化疗组凋亡指数明显高于单独化疗组，P〈0．05。NP化疗后不同间隔时间G2／M期阻滞比例不同。结论：化放不同间隔组凋亡指数随间隔时间延长而增加，间隔72h达到峰值。     

5氮杂胞苷诱导NB细胞Caspase 8表达及对TRAIL敏感性的研究

目的探讨5氮杂胞苷(5-Azacytidine)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞株SH-SY5Y凋亡的影响及其发生机制.方法应用RT-PCR方法检测5氮杂胞苷作用前后SY5Y细胞Caspase 8的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪(FCM)检测TRAIL、5氮杂胞苷+TRAIL、5氮杂胞苷+Caspase 8抑制剂+TRAIL对SY5Y细胞生长及凋亡的影响.结果SY5Y细胞不表达Caspase 8,5氮杂胞苷作用1、3和5d的SY5Y细胞Caspase 8表达逐渐增加;SY5Y细胞对TRAIL不敏感,经5氮杂胞苷诱导表达Caspase 8的 SY5Y 细胞对TRAIL敏感,并呈现一定的时间和剂量依赖性.联合用药组细胞凋亡率分别为(28.6±4.0)%、(38.5±4.2)%和(42.3±6.2)%,与单独用TRAIL组[(9.5±2.0)%、(10.7±1.8)%和(11.2±1.5)%]比较,差异有统计学意义,F值分别为41.131、45.014和49.405,P值均为0.000;Caspase 8抑制剂组细胞凋亡率分别为(11.8±2.0)%、(13.5±2.9)%和(15.1±3.4)%,与相应浓度的5氮杂胞苷+TRAIL组相比,细胞凋亡率明显降低,F值分别为41.131、45.014和49.405,P值均为0.000,说明Caspase 8抑制剂可明显降低TRAIL对表达Caspase 8的SY5Y细胞的杀伤作用.结论5氮杂胞苷能增强SY5Y细胞对TRAIL的敏感性,其发生机制可能与Caspase 8表达上调有关.     

1,25二羟基维生素D3对乳腺癌细胞放射敏感性的影响

目的：研究1，25二羟基维生素D3[1，25（OH）2D3]与γ射线对乳腺癌细胞株MCF-γ生长及凋亡的联合作用及其机制。方法：本研究分对照组、辐射组、1，25（OH）2D3组及联合作用组。活细胞计数测定细胞存活率，克隆形成法检测细胞抑制率，TUNEL法计数凋亡细胞，流式细胞仪测定细胞周期。结果：辐射组、1，25（OH）2D3组及联合作用组的细胞存活率分别为59．8％，62．3％和11．5％，联合作用组下降最为显著（P〈0．01）；细胞克隆形成抑制率分别为21％、29％和63％，联合作用组高于任何一个单因素处理组（P〈0．05）；TUNEL检测结果显示，与对照组相比，辐射组细胞凋亡率没有显著增加（P〉0．05），而联合作用组显著高于任何一个单一因素作用组（P〈0．01）；流式细胞仪检测显示，1，25（OH），D，和辐射联合作用后，MCF-7细胞在G1期和G2都出现阻滞，S期延迟。结论：1，25（OH）2D3增加γ射线对乳腺癌细胞的杀伤能力。     

丁酸钠对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖及p27Kip1蛋白表达影响的研究

目的:通过观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histon-deacetylase inhibitors,HDACIs)丁酸钠(sodium butyrate,NaB)对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的增殖影响以及p27Kip1蛋白表达改变,探讨NaB调控乳腺癌细胞增殖的分子机制.方法:乳腺癌MCF-7细胞经不同浓度NaB作用后,相差显微镜观察细胞形态变化和细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布,免疫组化检测p27Kip1蛋白表达.结果:NaB对MCF-7细胞有显著的增殖抑制作用,呈时间剂量依赖性,处理后的MCF-7细胞出现凋亡形态变化;细胞周期阻滞于G0/G1期,NaB 2 mmol/L组G0/G1期达(62.2±2.2)%,4 mmol/L组G0/G1期达(78.1±3.8)%,空白组G0/G1期达(53.1±2.4)%,P<0.05;p27蛋白表达水平上调.结论:NaB可抑制乳腺癌细胞的生长,该作用可能与p27蛋白表达增加有关.     

Wnt信号通路在姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡中作用机制

目的 探讨Wnt通路在姜黄素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的作用机制.方法 将MCF-7细胞培养液随机分为5组,分别加入15、30、60、120μmol/L的姜黄素,对照组不加,培养12,24,48 h后采用CCK-8法检测细胞增殖能力.分A、B两组(剂量组、时间组)采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术(FCM)观测细胞凋亡及细胞周期分布;Western Blotting法检测A、B两组的Wnt通路相关蛋白,并进行相应的相关性分析探讨Wnt通路与乳腺癌MCF-7细胞凋亡的关系.结果 CCK-8结果显示,随培养时间延长,姜黄素各浓度组MCF-7细胞增殖抑制率逐渐增高(均P<0.05);在同一时间点,随着姜黄素浓度升高,细胞增殖抑制率逐渐增高(均P<0.05).FCM染色结果显示,随着姜黄素浓度增加、作用时间延长MCF-7细胞凋亡指数逐渐上升(均P<0.05),且G1/S期细胞增加越多(P<0.05).Western Blotting实验结果显示MCF-7细胞中Wnt1、β-catenin的表达下调程度呈现剂量时间依赖性(P<0.05).相关性分析显示细胞抑制率、G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率均与Wnt通路相关蛋白Wnt1、β-catenin的表达呈现较明显的相关性(P<0.05).结论 姜黄素的抗癌活性与抗增殖能力具有明显的剂量时间依赖性,且Wnt通路在姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞抑制、凋亡过程中发挥了重要作用.     

苏林酸在NF-κB对人乳腺癌TNF-α诱导细胞凋亡增敏中的相关作用

目的 探讨苏林酸在NF-κB对人乳腺癌TNF-α诱导细胞凋亡增敏中的相关作用。方法 取对数生长期的人乳腺癌细胞系MCF-7,加入苏林酸,使其终浓度分别为0.5mmol/L和1.0mmol/L,并设不加苏林酸的对照组进行培养;苏林酸处理48h后进行MTT、流式细胞实验和Western blot法检测,分析苏林酸对肿瘤细胞生长的作用与相关机制。结果 0.5mmol/L和1.0mmol/L苏林酸分别刺激MCF-7细胞48h后,对应的MCF-7细胞的增殖抑制率为(29.17±1.23)%、(38.15±1.51)%,对照组为(1.15±0.02)%(P＜0.05)。与对照组相比,0.5mmol/L和1.0mmol/L苏林酸作用后均可导致滞留在G₀~G₁期的MCF-7细胞显著增加(P＜0.05);0.5mmol/L和1.0mmol/L苏林酸作用后MCF-7细胞的凋亡率明显增加(P＜0.05);0.5mmol/L和1.0mmol/L苏林酸作用后TNF-α的相对表达量分别为2.09±0.67、1.18±0.09,明显低于对照组的7.42±0.56(P＜0.05)。结论 苏林酸具有一定抗人乳腺癌细胞生长的作用,能促使细胞周期G₀~G₁期延长,提高细胞凋亡增敏作用,其作用机制可能与抑制TNF-α活性有关。     

DNA 甲基化抑制剂对肿瘤细胞中核糖核酸酶抑制因子表达下调的影响

背景与目的:人核糖核酸酶抑制因子 (ribonucleasE-inhibitor, RI) RI能有效抑制血管生成因子诱导的血管形成及某些可移植性实体瘤在动物体内的生长.然而, RI抗肿瘤的分子机制还未完全阐明.许多抑癌基因通过启动子区域异常的甲基化而使表达缺失,去甲基化抑制能使其表达恢复.为了进一步了解 RI的功能以及探讨 RI与肿瘤发生的关系,本实验拟研究甲基化抑制剂 5-aza-2′-deoxycytidinE-(5-Aza-CdR)对肿瘤细胞中 RI表达的影响.方法:用 5-Aza-CdR作用人乳腺癌细胞系 MCF-7、人胃癌细胞系 BGC-823、人的前列腺癌细胞系 DU-145和人结肠癌细胞系 HT-29.通过 RT PCR,蛋白免疫印迹法( Western blot) ,免疫荧光( immunofluorescence)和免疫细胞化学( immunocytochemistry)技术分析 RI基因的表达.结果:与对照组比较, 5-Aza-CdR能显著提高 RI基因在 MCF-7、 BGC-823和 DU 145细胞中的表达, RT PCR检测结果分别为 37.2%、 46.0%和 32.4%, Western blot检测结果分别为 26.4%、 20.9%和 24.4%( P< 0.01);但对 HT-29细胞没有明显的影响.结论: RI基因可能与胃癌、前列腺癌和乳腺癌的发生有关.     

致康胶囊对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨致康胶囊对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖及凋亡的影响。方法:采用0（对照组）、0.5、1.0、2.0 mg/ml 致康胶囊培养液分别处理乳腺癌细胞MCF-7,分别于培养后24、48和72 h计数MCF-7细胞数。采用MTT法检测致康胶囊对乳腺癌MCF-7细胞生长增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期;PI 单染流式细胞仪检测致康胶囊对MCF-7细胞凋亡的影响。结果:不同浓度致康胶囊能有效地抑制MCF-7细胞增殖,且随浓度增加和作用时间延长,细胞的增殖抑制率增加。0.5、1.0、2.0 mg/ml的致康胶囊作用MCF-7细胞72 h后,G0/G1期细胞所占细胞周期的比例分别为19.33%±10.38%、14.12%±5.37%和26.84%±2.13%;而对照组G0/G1期比例为51.83%±1.90%。0.5、1.0、2.0 mg/ml致康胶囊处理48 h后细胞的凋亡率分别为2.09%±0.74%、3.84%±0.78%和 5.35%±0.83%。结论:致康胶囊能抑制MCF-7细胞的体外增殖,且抑制作用表现为时效和量效关系;并能通过阻滞细胞周期于G2/M期,促进乳腺癌细胞凋亡。     

BAX 对Hep2 细胞系的凋亡及化疗敏感性的影响*

目的:研究BAX 基因对人喉鳞状细胞癌Hep2 细胞系凋亡和对化疗药5- 氮杂-2'- 脱氧胞苷（5-Aza-CdR）敏感性的影响。方法:通过溴化二甲噻唑二苯四氨唑（MTT）比色法检测5-Aza-CdR对喉癌Hep2 细胞体外增殖的影响。采用脂质体转染方法将BAX 基因转入Hep2 细胞后,应用RT-PCR 法检测BAX 基因在Hep2 细胞中的表达。用流式细胞术检测Hep2 细胞凋亡以及细胞周期变化情况。结果:通过用不同浓度的5-Aza-CdR处理喉Hep2 细胞发现,5-Aza-CdR能抑制Hep2 细胞体外生长,且呈时间与剂量依赖性,发现体外增殖的半数抑制浓度（IC 50）为4 μ mol/L。通过流式细胞术检测发现5-Aza-CdR和BAX 均可以使Hep2细胞发生G1/S 期细胞阻滞,并且能促进细胞凋亡。5-Aza-CdR处理后,与对照组相比,Hep2 细胞G0/G1 期的细胞数量明显增加,由对照组的51.57% 增高到71.17% ,凋亡率也由对照组的1.67% 增加到13.96% 。转染BAX 后,RT-PCR 结果显示转染BAX 基因的喉鳞状细胞癌Hep2 细胞中BAX 表达显著增加（P<0.05）,S 期Hep2 细胞百分比由空白对照组的33.29% 、转染空载体组的32.42% 分别减少至16.07% 和13.58% ,细胞凋亡率相对于空白对照组的1.67% 、转染空载体组2.04% ,转染BAX 基因组的7.13% 增加到23.74% ,具有显著性差异（P<0.05）。 本研究结果还表明同时转染BAX 基因及加药组的喉鳞状细胞癌Hep2 细胞凋亡率明显增加。结论:转染BAX 基因能诱导Hep2 细胞的凋亡,并能增加Hep2 细胞对药物5-Aza-CdR杀伤作用的敏感性。      

Effects of Rapamycin on Cell Apoptosis in MCF-7 Human Breast Cancer Cells

Background: Rapamycin is an effective anti-angiogenic drug. However, the mode of its action remainsunclear. Therefore, in this study, we aimed to elucidate the antitumor mechanism of rapamycin, hypotheticallyvia apoptotic promotion, using MCF-7 breast cancer cells. Materials and Methods: MCF-7 cells were platedat a density of 15105 cells/well in 6-well plates. After 24h, cells were treated with a series of concentrations ofrapamycin while only adding DMEM medium with PEG for the control regiment and grown at 37oC, 5% CO2and 95% air for 72h. Trypan blue was used to determine the cell viability and proliferation. Untreated andrapamycin-treated MCF-7 cells were also examined for morphological changes with an inverted-phase contrastmicroscope. Alteration in cell morphology was ascertained, along with a stage in the cell cycle and proliferation.In addition, cytotoxicity testing was performed using normal mouse breast mammary pads. Results: Our resultsclearly showed that rapamycin exhibited inhibitory activity on MCF-7 cell lines. The IC50 value of rapamycin onthe MCF-7 cells was determined as 0.4μg/ml (p<0.05). Direct observation by inverted microscopy demonstratedthat the MCF-7 cells treated with rapamycin showed characteristic features of apoptosis including cell shrinkage,vascularization and autophagy. Cells underwent early apoptosis up to 24% after 72h. Analysis of the cell cycleshowed an increase in the G0G1 phase cell population and a corresponding decrease in the S and G2M phasepopulations, from 81.5% to 91.3% and 17.3% to 7.9%, respectively. Conclusions: This study demonstrated thatrapamycin may potentially act as an anti-cancer agent via the inhibition of growth with some morphologicalchanges of the MCF-7 cancer cells, arrest cell cycle progression at G0/G1 phase and induction of apoptosis inlate stage of apoptosis. Further studies are needed to further characterize the mode of action of rapamycin asan anti-cancer agent.     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷联合低浓度顺铂对肺癌细胞增殖影响的实验研究

目的 探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）与低浓度顺铂（DDP）联合用药对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖的影响。方法 选择1μmol／L DDP、10μmol／L 5-Aza-CdR及两者联合分别处理体外培养的A549细胞,MTT法检测处理前后的细胞增殖活性,流式细胞仪、Hoechst 33258染色分别观察处理前后的细胞周期、凋亡率及凋亡形态学变化。结果 MTT法显示,与单独1μmol／L DDP组比较,联合组能够明显抑制A549细胞的增殖,A549细胞的凋亡率亦明显增加;流式细胞仪显示,联合组作用于细胞G0／G1期,使A549细胞生长阻滞在此期,细胞的增殖指数降低;与单独1μmol／L DDP组比较,联合组A549细胞的凋亡形态学改变更明显。结论5-Aza-CdR联合低浓度DDP能够明显抑制NSCLC A549细胞的增殖和诱导A549细胞的凋亡。