干扰mTOR表达增强食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素的敏感性

目的：观察哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR)特异性小干扰RNA（mTOR-siRNA）干扰mTOR表达后,食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素(rapamycin)敏感性的变化。方法：mTOR-siRNA转染EC9706细胞, RT-PCR检测干扰效果。mTOR-siRNA转染前后的EC9706细胞用雷帕霉素处理,Western blotting检测EC9706细胞中mTOR及其下游p70S6K蛋白的表达;流式细胞术检测EC9706细胞的周期及凋亡,CCK-8试剂盒检测EC9706细胞的增殖。结果：mTOR-siRNA下调EC9706细胞中mTOR mRNA的表达（P<0.05或P<0.01);雷帕霉素抑制EC9706细胞中mTOR和p-p70S6K蛋白的表达（P<0.05),并促进p70S6K蛋白表达(P<0.01),且mTOR-siRNA转染后此作用更明显（P<0.05）。雷帕霉素可诱导EC9706细胞凋亡(P<0.01)、抑制EC9706细胞增殖(P<0.05或P<0.01)、使EC9706细胞阻滞于G1期(P<0.01),且mTOR-siRNA转染后这些作用更强（P<0.05）。结论：mTOR-siRNA能特异性下调食管鳞癌EC9706细胞中mTOR表达,提高EC9706细胞对雷帕霉素的敏感性。     

EphB1通过PI3K/AKT信号通路促进食管鳞状细胞癌EC-9706细胞增殖、迁移、侵袭并抑制其凋亡

目的:研究促红细胞生成素产肝细胞受体B1(erythropoietin-producing human hepatocellular receptor B1,EphB1)对食管鳞状细胞癌EC-9706细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并探索其可能的作用机制。方法:qRT-PCR法分析40对食管鳞状细胞癌手术患者的癌组织及邻近正常组织中EphB1表达情况,并分析其临床特征。在EC-9706细胞中分别转染si-EphB1 RNA和oe-EphB1 RNA及其阴性对照。通过qRT-PCR和蛋白免疫印迹实验检测转染效率;CCK-8实验分析EphB1对细胞活力的影响;Hoechst 33258染色和流式细胞学实验检测细胞凋亡;划痕愈合实验及Transwell侵袭实验明确细胞迁移及侵袭能力;蛋白免疫印迹实验检测EphB1蛋白、增殖相关蛋白［增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）］、凋亡相关蛋白［Bad、Bcl-2、Caspase 3 及剪切型-Caspase 3（cleaved-Caspase 3）］、侵袭转移相关蛋白［基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2）、Snail、波形蛋白(Vimentin)、N-cadherin、E-cadherin］以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白（PI3K、AKT、p-AKT）的表达水平。结果:EphB1在食管鳞状细胞癌组织及细胞系中高表达(P均＜0.05),EphB1的表达水平与食管鳞状细胞癌患者的TNM分期、有无淋巴结转移和远处转移具有显著相关性(P均＜0.05)。与对照组相比,通过细胞转染技术沉默EphB1和过表达EphB1使EC-9706细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显降低或增强,并诱导或抑制细胞凋亡(P均＜0.05)。在蛋白水平上,si-EphB1和oe-EphB1处理EC-9706细胞48 h后,增殖相关蛋白PCNA蛋白表达水平分别显著降低或增加（P均＜0.05）,并分别增加或降低促凋亡相关蛋白Bad、cleaved-Caspase 3的表达水平（P均＜0.05）,下调或上调抗凋亡蛋白Bcl-2、Caspase 3的蛋白表达（P均＜0.05）,抑制或促进侵袭转移相关蛋白MMP-9、MMP-2、Snail、Vimentin、N-cadherin的蛋白活性,但却上调或下调 E-cadherin的表达水平（P均＜0.05）。同时,Western blotting实验结果还证实EphB1可诱导食管鳞状细胞癌EC-9706细胞中通路蛋白PI3K、p-AKT的活性增强（P均＜0.05）。结论:EphB1可能通过调控PI3K/AKT信号通路促进食管鳞状细胞癌EC-9706细胞的增殖、迁移及侵袭,并抑制其凋亡。     

姜黄素通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制TGF-β1诱导的肺癌细胞上皮间质转化

摘 要：［目的］ 探讨姜黄素对TGF-β诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化、侵袭转移的影响及其可能的机制。［方法］ 通过转化生长因子TGF-β1诱导肺癌细胞株A549发生上皮间质转化;利用不同浓度姜黄素干预由TGF-β1诱导的肺癌 A549细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,细胞划痕实验、Transwell 侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力变化,Western blot法检测上皮表型标记蛋白E-cadherin和间质表型标记蛋白N-cadherin、Vimentin的表达及PI3K/AKT/mTOR信号通路中AKT、mTOR磷酸化的情况,并利用PI3K抑制剂LY290004、mTOR抑制剂Rapamycin通过上述方法对姜黄素的作用进行印证。［结果］ 与对照组相比,姜黄素显著增加A549细胞E-cadherin的表达,抑制N-cadherin和Vimentin蛋白及TGF-β1刺激p-AKT和p-mTOR的表达,且呈明显的剂量—时间依赖关系;同时抑制TGF-β诱导的侵袭迁移。［结论］ 姜黄素可通过PI3K/AKT/mTOR通路明显抑制TGF-β1诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化,降低其侵袭迁移能力。     

雷帕霉素对人淋巴瘤Raji细胞增殖、VEGF-A及HIF-1α表达的影响

目的:探讨雷帕霉素对人淋巴瘤细胞株Raji细胞体外增殖、VEGF-A及HIF-1α表达的影响及其临床意义.方法:不同浓度(0、10、50、100、250、500nmol/L)雷帕霉素对Raji细胞作用不同时间(24、48、72h)后,使用CCK8法检测细胞增殖的变化;采用蛋白质印记法(Western blot,WB)检测72h组不同浓度mTOR、VEGF-A、HIF-1α蛋白变化;采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测其mRNA的变化.结果:雷帕霉素对Raji细胞增殖具有显著抑制作用(P＜0.01);雷帕霉素处理72h后的Raji细胞,随着药物浓度增加,mTOR、VEGF-A和HIF-1 α蛋白明显减少(P＜0.01);雷帕霉素处理后的Raji细胞,随着药物浓度和作用时间的增加,mTOR、VEGF-A和HIF-1α的mRNA明显减少(P＜0.01);mTOR、VEGF-A及HIF-1α的mR-NA表达两两之间呈正相关性.结论:雷帕霉素通过mTOR通路,能明显抑制人淋巴瘤Raji细胞增殖过程,表现出明显的时间、剂量效应依赖关系;同时也可明显减少mTOR、VEGF-A、HIF-1α的mRNA的转录表达,减少p-mTOR、VEGF-A、HIF-1α等蛋白的翻译表达,从而抑制Raji细胞的生长及其血管新生.     

肿瘤坏死因子-β1通过诱导上皮-间质转化促进人膀胱癌T24细胞株的侵袭

目的:体外实验研究TGF-β1诱导人膀胱癌细胞T24发生上皮-间质转化（EMT）的作用及其机制。方法:以人膀胱癌细胞T24作为研究对象,使用不同浓度TGF-β1干预24 h,光镜下观察T24细胞形态学变化;分别采用Real time-PCR（RT-PCR）和Western blot 法检测细胞中上皮表型蛋白E-cadherin和间质表型蛋白Vimentin mRNA 和总蛋白的表达。Transwell小室实验检测细胞的侵袭与迁移潜能。结果:TGF-β1可激活T24细胞的EMT程序,并上调Vimentin mRNA 和蛋白的表达水平和下调E-cadherin mRNA 和蛋白的表达水平。此外,TGF-β1可促进T24细胞体外侵袭潜能,而TGF-β1拮抗剂LY2109761可阻断这一过程。结论:EMT过程的激活参与了TGF-β1介导的人膀胱癌T24细胞的侵袭。     

沉默锌指蛋白217基因对食管鳞癌EC9706细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨锌指蛋白217基因(ZNF217)在食管鳞癌侵袭转移中的作用.方法 合成ZENF217基因的siRNA序列并转染对数生长期食管鳞癌EC9706细胞.设置转染无义序列siRNA和未转染EC9706细胞为阴性对照和空白对照.半定量RT-PCR和Western blot方法分别检测转染48 h后3组细胞ZNF217 mRNA和蛋白的表达变化;侵袭小室检测3组细胞穿膜细胞数变化;MTT法分析3组细胞增殖能力的变化.结果 与空白对照组和阴性对照组比较,转染ZNF217 siRNA组EC9706细胞ZNF217 mRNA和蛋白表达均显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05);转染ZNF217 siRNA组EC9706细胞穿膜细胞数显著下降,差异有统计学意义(P ＜0.05);ZNF217 siRNA能明显抑制EC9706细胞体外增殖能力(P＜0.05).结论 ZNF217基因表达下降能显著抑制EC9706细胞体外侵袭力和增殖能力,ZNF217基因有望成为食管癌基因治疗的有效靶点.     

Gli-1信号通路对TGF-β1诱导的人胃癌细胞上皮间质转化和侵袭的影响

目的:探讨核转录因子神经胶质瘤关联癌基因同源物1（glioma associated oncogene homolog 1,Gli-1）对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的作用机制。方法:体外采用10 ng/ml TGF-β1对胃癌SGC-7901细胞进行处理,使用倒置显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR和Western blot检测EMT上皮表型蛋白E-cadherin和间质表型蛋白Vimentin的表达水平;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力变化,检测TGF-β1 对SGC-7901细胞发生EMT 的影响;同时采用RT-PCR和Western blot检测Gli-1的mRNA和蛋白表达水平。随后进一步采用Gli-1基因特异性阻断剂GANT 61阻断Gli-1表达,并使用TGF-β1（10 ng/ml）对SGC-7901细胞进行处理,RT-PCR 和Western blot检测Gli-1、E-cadherin和Vimentin mRNA 及其蛋白表达水平的改变,并使用Transwell细胞侵袭实验检测阻断Gli-1对SGC-7901细胞侵袭能力的影响。结果:TGF-β1可以诱导人胃癌SGC-7901细胞发生上皮间质转化并促进细胞侵袭。TGF-β1可以在mRNA和蛋白水平下调上皮表型蛋白E-cadherin的表达、提高Gli-1和间质表型蛋白Vimentin的表达。TGF-β1可以明显提高SGC-7901细胞侵袭,而阻断Gli-1后可以抑制TGF-β1诱导的人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化和细胞侵袭。结论:胃癌SGC-7901细胞中Gli-1 可能参与TGF-β1 介导的EMT 的发生,Gli-1 可能作为胃癌基因治疗中的有效靶点发挥作用。     

Akt抑制剂MK-2206在缺氧环境下对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响

目的:探讨Akt抑制剂MK-2206在缺氧环境下对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭的影响。方法:根据CCK-8实验结果选择CoCl2和MK-2206的浓度,最后分成空白组、MK-2206组、CoCl2组、MK-2206+CoCl2组;Transwell小室实验检测四组细胞的迁移和侵袭能力;RT-PCR法检测各细胞组中Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA表达水平;Western blot技术检测各细胞组中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、HIF-1α蛋白表达的差异性情况。结果:CoCl2诱导的缺氧环境可以促进SW480细胞的侵袭、迁移(P＜0.05),同时能够促进HIF-1α的mRNA和蛋白表达(P＜0.05),但是低浓度范围内的CoCl2对SW480细胞增殖活性无明显影响(P＞0.05);MK-2206可以在体外的常氧和缺氧环境中抑制SW480细胞的增殖活性和侵袭、迁移能力(P＜0.05);MK-2206能在体外的常氧环境下抑制SW480细胞的Akt、mTOR、HIF-1α的mRNA表达(P＜0.05),缺氧环境无明显作用;同时MK-2206能够在常氧和缺氧环境中显著降低p-Akt、p-mTOR、HIF-1α的蛋白表达水平(P＜0.05)。 结论:Akt抑制剂MK-2206可以在体外的常氧和缺氧环境下抑制SW480细胞的增殖活性和侵袭能力,但缺氧环境可能会弱化MK-2206对SW480细胞迁移的抑制作用。     

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白小分子干扰RNA对食管鳞癌细胞中mTOR-p70S6K信号通路及裸鼠移植瘤生长的影响

目的 检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)小分子干扰RNA(siRNA)对食管鳞癌中mTOR-p70S6K信号通路的阻断作用以及对裸鼠移植瘤生长的影响.方法 以食管鳞癌细胞株EC9706为研究对象,采用siRNA干扰、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot、流式细胞术及CCK-8等方法,观察mTOR-p70S6K信号通路被阻断后,通路中各因子蛋白及mRNA表达的变化,及其对细胞增殖和凋亡的影响.进行裸鼠成瘤实验,观察mTOR siRNA对肿瘤生长的影响.结果 与未转染细胞相比,转染mTOR siRNA的细胞中mTOR和磷酸化p70S6K的表达水平降低(P<0.05),而pTOS6K的表达水平升高(P<0.05).转染mTOR siRNA后,细胞凋亡增加,细胞增殖能力降低,且对顺铂的敏感性增高,细胞被阻滞在G,期(P<0.05).mTOR siRNA能明显抑制裸鼠移植瘤的生长,siRNA组和siRNA+顺铂组的肿瘤抑制率分别为50.9%和62.3%.结论 mTOR siRNA能有效抑制mTOR-pTOS6K信号通路,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,在裸鼠体内能显著抑制肿瘤的生长.mTOR-pVOSSK信号通路在食管鳞癌发生发展中起重要作用.     

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白小分子干扰RNA对食管鳞癌细胞中mTOR-p70S6K信号通路及裸鼠移植瘤生长的影响

目的 检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)小分子干扰RNA(siRNA)对食管鳞癌中mTOR-p70S6K信号通路的阻断作用以及对裸鼠移植瘤生长的影响.方法 以食管鳞癌细胞株EC9706为研究对象,采用siRNA干扰、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot、流式细胞术及CCK-8等方法,观察mTOR-p70S6K信号通路被阻断后,通路中各因子蛋白及mRNA表达的变化,及其对细胞增殖和凋亡的影响.进行裸鼠成瘤实验,观察mTOR siRNA对肿瘤生长的影响.结果 与未转染细胞相比,转染mTOR siRNA的细胞中mTOR和磷酸化p70S6K的表达水平降低(P<0.05),而pTOS6K的表达水平升高(P<0.05).转染mTOR siRNA后,细胞凋亡增加,细胞增殖能力降低,且对顺铂的敏感性增高,细胞被阻滞在G,期(P<0.05).mTOR siRNA能明显抑制裸鼠移植瘤的生长,siRNA组和siRNA+顺铂组的肿瘤抑制率分别为50.9%和62.3%.结论 mTOR siRNA能有效抑制mTOR-pTOS6K信号通路,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,在裸鼠体内能显著抑制肿瘤的生长.mTOR-pVOSSK信号通路在食管鳞癌发生发展中起重要作用.     

FAM83H在食管鳞癌中的表达及对癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：食管鳞癌是常见的消化道恶性肿瘤，基因异常表达参与食管鳞癌的恶性生物学行为。探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）诱导的FAM83H在食管鳞癌组织中的表达水平，以及其表达水平与临床病理学参数之间的关系，初步研究FAM83H对食管癌细胞生物学行为的影响。方法：用TGF-β1处理食管癌细胞Eca109后，在倒置显微镜下观察Eca109细胞形态学的变化。应用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）检测TGF-β1处理前后食管癌细胞中上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）相关标志物以及FAM83H表达水平的变化。应用RTFQ-PCR检测FAM83H在不同食管癌细胞系、67例2015—2017年河北医科大学第四医院生物样本库收集的食管鳞癌组织及癌旁正常组织中的表达情况，并分析其表达水平与临床病理学参数之间的关系。应用MTS实验以及transwell小室迁移、侵袭实验检测FAM83H在体外对食管癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果：TGF-β1处理后，Eca109细胞的形态变为细长梭形、纺锤形，呈现出明显的间充质细胞形态；Eca109细胞中E-cadherin表达水平降低，而N-cadherin、vimentin、Snail、Twist 1表达水平均显著升高（P<0.05）。同时，TGF-β1处理后，FAM83H表达水平上调（P<0.01）。FAM83H在食管鳞癌组织中表达升高（P<0.05），与食管鳞癌患者病理学分化程度相关（P<0.05）。FAM83H在食管癌细胞系中表达升高（P<0.01）。转染针对FAM83H的小干扰RNA后，可以显著抑制FAM83H的表达水平（P<0.05）。在体外FAM83H促进食管癌细胞的增殖、迁移及侵袭（P<0.05）。结论：TGF-β1诱导EMT过程以及FAM83H表达，FAM83H表达水平升高可能与食管鳞癌的发生、发展相关，且在体外促进食管癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

TGF-β1上调MTA1促进人舌癌Tca8113细胞侵袭转移

目的:研究TGF-β1上调MTA1能否促进人舌癌Tca8113细胞侵袭转移。方法:蛋白印迹和实时定量PCR检测TGF-β1刺激或者不刺激的Tca8113细胞中MTA1和E-cadherin的表达。β-actin作为实验的内参对照。光学显微镜拍摄TGF-β1刺激的Tca8113细胞形态。侵袭实验检测TGF-β1刺激的Tca8113细胞。结果:TGF-β1上调MTA1蛋白和mRNA表达,下调E-cadherin表达水平。Tca8113细胞是呈多边形的口腔鳞状上皮细胞癌,经TGF-β1刺激的Tca8113细胞形态变成长梭形。同时,TGF-β1刺激的Tca8113细胞与对照相比较具有更强的侵袭能力。结论:TGF-β1信号能通过MTA1下调E-cadherin表达,这可能是促进舌癌侵袭和转移的机制之一。     

E-cadherin和β-catenin在食管鳞癌组织中的表达及其临床病理学意义

背景与目的:上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)不仅在介导钙离子依赖的同型细胞间的黏附中发挥作用,而且在细胞的迁徙和肿瘤浸润转移方面也有着重要的作用.许多研究表明,E-cadherin是作为一种抑癌基因发挥作用的.而最近研究表明,和E-cadherin相反,β-连环蛋白(β-catenin)在促进肿瘤的浸润转移方面具有重要作用.本研究重点探讨E-cadherin和β-catenin在食管鳞癌组织中的表达及其临床病理意义.方法:采用免疫组织化学PV法检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织中E-cadherin和β-catenin的蛋白表达.结果:(1)正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中E-cadherin的阳性表达率依次降低,分别为95.2%、71.0%、40.3%;随着正常食管黏膜组织向癌组织的转化,β-catenin的膜表达阳性率依次降低,而胞质表达阳性率则依次增高,在低分化癌组织中甚至出现了核表达;E-cadherin的阴性表达率及β-catenin的胞质阳性表达率与食管鳞癌的浸润深度、分化程度及淋巴结转移密切相关(P＜0.05).(2)E-cadherin和β-catenin在食管鳞癌组织中的表达呈负相关(r=-0.453,P＜0.05).结论:食管鳞癌组织中E-cadherin的低表达及β-catenin的胞质高表达与食管鳞癌的浸润、转移有密切的关系.     

乳腺癌组织中转化生长因子β1的表达及其介导乳腺癌侵袭和转移的机制

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白和mRNA在乳腺痛组织中的表达,及其与明胶酶和明胶酶抑制物的关系.方法 建它组织芯片平台,应用免疫组化SP法检测160例乳腺痛组织TGF-β1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、组织金属蛋白酶抑制物(TIMP)-1和TIMP-2蛋白的表达;应用原位分子杂交方法检测乳腺癌组织中TGF-β1 mRNA的表达.结果 160例乳腺癌TGF-β1、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白表达的阳性率分别为73.7%、96.9%、95.0%、87.5%和89.4%,TGF-β1 mRNA表达的阳性率为56.2%.TGF-β1的蛋白表达与腋窝淋巴结转移、TNM分期和c-erbB-2表达有关(P＜0.05,P＜0.05和P＜0.01),TGF-β1的mRNA表达与腋窝淋巴结转移有关(P＜0.05).TGF-β1蛋白表达阳性组中位总生存期(OS)为60个月,中位无复发生存期(RFS)为59个月;TGF-β1蛋白表达阴性组中位OS为61个月,中位RFS为61个月,两组生存率差异无统计学意义(P=0.090),无复发生存率有统计学意义(P=0.023).TGF-β1的蛋白表达与MMP-2和MMP-9的表达均呈正相关(r=0.170,P＜0.05;r=0.221,P＜0.01).结论 TGF-β1的表达与乳腺癌侵袭和转移密切相关,TGF-β1的蛋白产物通过调控MMP-2和MMP-9促进乳腺癌的侵袭和转移.     

抑制酰基-辅酶A去饱和酶1表达对食管鳞癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制探讨

目的:检测酰基-辅酶A去饱和酶1(stearoyl-CoA desaturase-1,SCD-1)在食管鳞癌组织和细胞中的表达,分析其表达下调对食管鳞癌EC1细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其相关的分子机制.方法:采用免疫组织化学和原位杂交法检测60例食管鳞癌组织及其相应癌旁正常食管黏膜组织中SCD-1 mRNA和蛋白的表达,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测正常食管组织(作为阴性对照)和食管鳞癌细胞株中SCD-1 mRNA和蛋白的表达.不同浓度SCD-1小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)转染食管鳞癌EC1细胞后,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测SCD-1 mRNA和蛋白的表达,应用CCK-8法检测转染前后EC1细胞增殖的变化,FCM检测转染前后EC1细胞凋亡的改变,蛋白质印迹法检测总Akt、p-Akt、bcl-2和bax蛋白的表达.结果:食管鳞癌组织中SCD-1 mRNA和蛋白表达的阳性率显著高于正常食管黏膜组织(P＜0.05),其表达上调与肿瘤组织分级、TNM分期和淋巴结转移密切相关(P＜0.05).此外,与正常食管组织相比,食管鳞癌EC9706、Eca109和EC1细胞中SCD-1 mRNA和蛋白表达均显著上调(P＜0.05),其中EC1细胞中SCD-1的表达水平最高.50 nmol/L SCD-1 siRNA能显著下调EC1细胞中SCD-1 mRNA和蛋白的表达.SCD-1表达下调可显著抑制EC1细胞的增殖,诱导细胞凋亡;同时,显著上调bax蛋白的表达,并下调p-Akt和bcl-2蛋白的表达,但不改变总Akt的表达水平.结论:SCD-1可能在食管鳞癌的发生和发展中具有重要作用,抑制SCD-1的表达有望成为食管鳞癌重要的分子治疗策略之一.     

解整合素金属蛋白酶10通过介导Wnt/β-catenin信号通路促进子宫内膜癌细胞上皮-间质转化

目的:探讨解整合素金属蛋白酶10（ADAM10）对子宫内膜癌（EC）细胞上皮-间质转化（EMT）的影响及其作用机制。方法:收集84例EC患者的新鲜癌组织及癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测癌组织及其癌旁组织中ADAM10 mRNA表达水平。以人EC细胞株HEC-1B作为研究对象,采用ADAM10过表达慢病毒感染HEC-1B细胞,并联合Wnt/β-catenin信号通路特异性抑制剂XAV939进行干预,再将细胞分为空白对照组（blank）、慢病毒阴性对照组（Lv-NC）、ADAM10过表达慢病毒组（Lv-ADAM10）和Lv-ADAM10+XAV939组。采用qRT-PCR检测感染后各组细胞中ADAM10 mRNA表达水平;划痕和Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力;Western blot法分析各组细胞中ADAM10及EMT相关蛋白和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果:EC患者癌组织中ADAM10 mRNA表达水平显著高于癌旁组织（P＜0.05）。与blank组或Lv-NC组比较,Lv-ADAM10组细胞中ADAM10 mRNA和蛋白表达水平以及N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Snail、MMP2和MMP9等蛋白表达水平均显著升高（均P＜0.05）,而E-cadherin蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）,同时细胞迁移和侵袭能力显著增强（均P＜0.05）。与Lv-ADAM10组比较,Lv-ADAM10+XAV939组细胞中N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Snail、MMP2和MMP9等蛋白表达水平显著降低（均P＜0.05）,E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）,且细胞迁移和侵袭能力明显降低（均P＜0.05）。结论:ADAM10在EC组织中高表达,其过表达可促进HEC-1B细胞的EMT进程,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

RACK1对食管鳞癌细胞侵袭转移能力的抑制作用

目的:探讨RACK1表达水平与食管鳞状细胞癌不同转移潜能细胞侵袭转移能力的关系.方法:Transwell实验检测食管鳞癌EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L细胞的转移潜能;利用RT-PCR和Western blot方法,检测食管鳞癌高低转移细胞系EC9706-H、EC9706-L和EC109-H、EC109-L中RACK1的mRNA和蛋白表达水平.利用慢病毒转染技术上调RACK1低表达细胞中RACK1的表达后,采用Transwell实验检测其侵袭和迁移能力的变化.结果:EC9706-H细胞和EC109-H细胞的体外侵袭和迁移能力显著高于EC9706-L和EC109-L细胞系.RT-PCR和Western blot实验结果显示,RACK1在EC9706-H细胞和EC109-H细胞中呈低表达;而在EC9706-L细胞和EC109-L细胞中呈高表达.通过慢病毒转染技术上调EC9706-H和EC109-H细胞系中RACK1的表达,二者的侵袭转移能力明显降低.结论:RACK1表达水平与食管鳞癌细胞的侵袭转移能力负相关,过表达RACK1能够抑制食管鳞癌细胞的侵袭转移能力.这提示,RACK1在食管鳞癌的侵袭转移中发挥重要作用,有可能成为其诊断、治疗及预后评估的新靶点.     

Bmi-1 shRNA对膀胱癌5637细胞的侵袭和转移抑制及其机制

目的:探讨特异性抑制Bmi-1基因表达对膀胱癌5637细胞侵袭和转移的影响.方法:将Bmi-1短发夹RNA(shRNA)真核表达载体、脂质体转染膀胱癌5637细胞.Transwell侵袭实验和细胞划痕实验观察Bmi-1 shRNA对膀胱癌5637细胞侵袭和转移的影响.RT-PCR方法检测Bmi-1shRNA对基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA表达的影响.蛋白质印迹法检测Bmi-1 shRNA对E-cadherin和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.结果:Transwell侵袭实验结果显示,实验组细胞的穿膜细胞数为78.0±5.8,空质粒组为158.0±6.7,未转染组为153.0±4.6.细胞划痕实验结果显示,实验组细胞迁移能力明显降低,P＜0.05.RT-PCR结果显示,与不加转化生长因子-β(TGF-β1)组相比,TGF-β1作用后,未转染组和空质粒组中MMP-2表达明显升高,P＜0.05.蛋白质印迹结果显示,与不加TGF-β1组相比,TGF-β1作用后,未转染组和空质粒组中E-cadherin表达明显降低,α-SMA表达明显升高,P＜0.05.结论:Bmi-1 shRNA可以抑制膀胱癌5637细胞侵袭和转移,其机制是通过阻断TGF-β1促进肿瘤细胞侵袭和转移作用完成的.     

三阴性乳腺癌细胞源性外泌体活化的巨噬细胞促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的:研究三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）细胞来源的外泌体对巨噬细胞极化作用以及经外泌体活化的巨噬细胞对TNBC细胞迁移和侵袭能力的影响及作用机制。方法:提取TNBC细胞BT-549和MDA-MB-231外泌体,透射电镜、纳米颗粒跟踪分析（nanoparticle tracking analysis,NTA）、蛋白质印记(Western blot)鉴定外泌体;流式细胞术检测经外泌体处理后巨噬细胞分子标志物CD206、CD80的表达;实时荧光定量PCR检测单核细胞THP-1、巨噬细胞M0及外泌体处理后巨噬细胞中CD163、转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,iNOS)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)的mRNA水平;Transwell实验分析外泌体活化的巨噬细胞对TNBC细胞迁移和侵袭的影响,Western blot方法检测MMP-2、MMP-9、N-cadherin、E-cadherin的蛋白水平。结果:透射电镜下BT-549和MDA-MB-231细胞的外泌体具有膜结构囊状小泡并表达外泌体的分子标记物CD81、CD63;BT-549细胞来源的外泌体直径分布为80~150 nm,MDA-MB-231细胞来源的外泌体直径分布为100~200 nm;经BT-549和MDA-MB-231细胞源性外泌体处理的巨噬细胞与M0相比,CD206均有稳定表达（P＜0.05),而CD80表达未见明显差异;外泌体处理后巨噬细胞的CD163、TGF-β mRNA表达水平均增加（P＜0.01),iNOS mRNA表达水平降低（P＜0.05),TNF-α mRNA表达水平未见明显变化;外泌体处理后的巨噬细胞使得TNBC细胞的迁移、侵袭穿膜数目增加(P＜0.01),N-cadherin、MMP-2和MMP-9蛋白表达增加（P＜0.05),E-cadherin 蛋白表达降低（P＜0.05)。结论:TNBC细胞分泌的外泌体可以诱导巨噬细胞向M2极化,进而促进TNBC细胞间质转化,增强TNBC细胞的迁移和侵袭能力。     

乳腺癌MCF-7细胞通过TGF-β诱导的上皮-间质转化获得耐药北大核心CSCD

目的:通过研究高侵袭转移性乳腺癌细胞株MDA-MB-231和低侵袭转移性细胞株MCF-7中上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和耐药的相关性,以探讨乳腺癌耐药的机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测MDA-MB-231和MCF-7细胞中EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和纤黏蛋白(bronectin)以及转录因子Snail、Slug和锌指E-box同源结合框1(Zincnger E-box binding homeobox 1,ZEB1)mRNA的表达水平;划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测MDA-MB-231和MCF-7细胞的迁移和侵袭能力;CCK-8法检测MDA-MB-231和MCF-7细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶、顺铂和紫杉醇的敏感性,并采用实时荧光定量PCR法检测耐药基因多重耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MDR1)和MDR相关蛋白1(MDR-associated protein,MRP1)mRNA的表达水平。用转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)诱导MCF-7细胞发生EMT,或用靶向E-cadherin基因的E-cadherin-siRNA沉默EMT相关标志物E-cadherin的表达,再用CCK-8法检测MCF-7细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的变化。结果:MDA-MB-231细胞中vimentin、fibronectin、Slug和ZEB1 mRNA的表达水平均高于MCF-7细胞(P值均<0.000 1),E-cadherin mRNA的表达水平明显低于MCF-7细胞(P=0.000 2),Snail mRNA的表达水平无明显差异。与MCF-7细胞相比,MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显更强(P值均<0.000 1);5-氟尿嘧啶、顺铂和紫杉醇对MDAMB-231细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值明显高于MCF-7细胞(P值均<0.05);MDA-MB-231细胞中耐药相关基因MDR1和MRP1 mRNA表达水平明显更高(P值均<0.000 1)。TGF-β诱导MCF-7细胞发生EMT后,5-氟尿嘧啶对MCF-7细胞的IC50值明显上升(P<0.05);沉默E-cadherin表达后,MCF-7细胞对5-氟尿嘧啶的耐药性明显增强(P<0.05)。结论:乳腺癌中EMT和耐药存在相关性,诱导EMT发生可导致细胞耐药。