ERK5和MMP-9在骨肉瘤中的表达及其临床意义

  目的  探讨细胞外信号调节激酶5（extracellular signal-regulated kinase 5,ERK5）蛋白和基质金属蛋白酶-9（matrix metallo proteinase-9,MMP-9）在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义。  方法  选取71例骨肉瘤组织和40例正常骨组织,采用免疫组织化学法检测ERK5和MMP-9的表达,并分析ERK5和MMP-9的表达与骨肉瘤患者临床病理特征及预后之间的关系。  结果  骨肉瘤组织中ERK5和MMP-9阳性表达率分别为85.9%（61/71）、74.65%（53/71）,均明显高于正常骨组织中阳性表达率12.5%（5/40）、10.0%（4/40）,差异均具有统计学意义（均P < 0.05）。ERK5和MMP-9的阳性表达与Enneking分期和转移相关（均P < 0.05）。Ka-plan-Meier生存分析显示在骨肉瘤组织中ERK5、MMP-9的阳性表达组患者生存时间均短于阴性表达组（均P < 0.05）。单因素Cox回归分析发现,肿瘤大小、Enneking分期、转移、ERK5和MMP-9阳性表达与患者总生存时间相关（均P < 0.05）;多因素分析证实Enneking分期、转移、ERK5和MMP-9蛋白的阳性表达可作为骨肉瘤患者独立的预后因子（均P < 0.05）。  结论  ERK5和MMP-9在骨肉瘤组织中高表达,与骨肉瘤的病理特征及预后相关;二者可能在骨肉瘤发生发展的过程中起着重要作用。      

人脑胶质瘤中miR-106b~25基因簇表达的研究

  目的  检测胶质瘤细胞系及组织中miR-106b~25基因簇成员miR-106b、miR-93、miR-25的表达情况。  方法  运用实时定量PCR的方法检测不同人脑胶质母细胞瘤细胞系及不同病理级别胶质瘤标本中miR-106b~25基因簇成员miR-106b、miR-93和miR-25的表达水平。原位杂交技术检测含不同病理级别及瘤旁正常脑组织的胶质瘤组织芯片中miR-106b~25基因簇成员的表达情况,进而分析该簇miRNAs的表达与胶质瘤病理级别的相关性。  结果  以正常脑组织表达量为基准,3种miRNA在所有检测细胞系中均有增高的趋势。收集43例胶质瘤标本中,RT-PCR结果显示,随着肿瘤病理级别的升高,3种miRNA在各组中的平均表达量也逐步升高。其中,miR-106b（F=4.479,P=0.018）和miR-93（F=3.493,P=0.040）各组间的表达差异均有统计学意义。而miR-25表达无明显的统计学差异（F=2.766,P=0.075）。原位杂交结果显示3种miRNA的表达在高级别胶质瘤中的表达量明显高于低级别肿瘤。Spearman等级相关分析表明3种miRNA的表达信号强度分布均与胶质瘤的WHO病理分级呈正相关,在miR-106b、-93、-25中的相关系数分别为r_s=0.617（P＜0.001）、r_s=0.438（P＜0.001）、r_s=0.463（P＜40.001）。  结论  miR-106b~25在胶质瘤中表达呈不同程度增高,并与肿瘤分级呈正相关。      

miR-30通过调节CD90表达抑制肝细胞肝癌

  目的  miRNA能通过转录后调节靶基因的表达量,并在致癌过程中发挥抑癌或促癌作用。研究发现miR-30家族在人类肿瘤中起着重要作用,并参与维持干细胞特性的上皮细胞间质化过程,本研究主要识别miR-30家族与肝细胞肝癌的关系。  方法  应用qRT-PCR实验方法检测93例肝细胞肝癌患者癌组织和癌旁正常组织中miR-30c,miR-30b和miR-30e表达水平,另对121例肝细胞肝癌患者癌组织进行miR-30家族的表达及CD90免疫组织化学表达检测,分析miR-30家族与CD90在肝细胞肝癌中的相关性。  结果  本研究发现miR-30c(P < 0.001)、miR-30b(P=0.004)和miR-30e(P < 0.001)与癌旁正常组织相比,癌组织中表达显著下调。CD90蛋白在癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织(P=0.007)。MiR-30c(P=0.032)和miR-30e(P=0.015)在CD90阴性表达的患者中表达水平显著高于CD90阳性表达的患者。  结论  miR-30家族在肝细胞肝癌中可作为抑癌miRNA,并通过调节CD90蛋白来发挥这一作用。      

骨肉瘤中RUNX2基因拷贝数扩增及其蛋白过表达的研究

  目的  通过微阵列-比较基因组杂交(aCGH)和免疫组织化学技术(IHC), 检测RUNX2基因在骨肉瘤组织中的拷贝数变化及蛋白表达情况, 探讨RUNX2基因在骨肉瘤的发生、发展和预后中的作用。  方法  应用aCGH检测10例新鲜骨肉瘤组织样本RUNX2的基因拷贝数变化; 同时, 运用免疫组织化学技术检测59例福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)骨肉瘤组织中RUNX2蛋白表达水平。  结果  10例骨肉瘤样本中发现3例(30%)RUNX2基因扩增; RUNX2蛋白在59例骨肉瘤组织中的阳性表达率为50.8%(30/59)。RUNX2蛋白的表达水平与患者的临床病理特征和生存率无相关性, 差异无统计学意义(P > 0.05)。Kaplan-Meire单因素生存分析显示pTNM分期、病理诊断、复发、转移和综合治疗对患者的无病生存率有显著影响, 性别、pTNM分期、新辅助化疗和疾病转移对患者的总生存率有显著影响, 均有统计学意义(P < 0.05), 但Cox模型多因素生存分析显示这些因素均不能作为生存率独立的预测因素。  结论  RUNX2基因扩增、蛋白过表达以及蛋白的表达与骨肉瘤患者的临床特征和预后无相关性提示RUNX2基因扩增及其蛋白的过度表达可能是骨肉瘤发病的早期事件。      

骨肉瘤CD133 CD117 Ki-67的表达及与临床病理因素和危险度的相关性研究

  目的  研究骨肉瘤组织CD133、CD117及Ki-67在蛋白水平的表达情况及其与临床病理因素和危险度的关系。  方法  应用免疫组织化学PV-9000二步法检测55例骨肉瘤组织标本中CD133、CD117和Ki-67的表达,并与临床病理学指标和术后无瘤生存期进行比较分析,对照组为20例骨软骨瘤。应用SPSS 17.0软件统计分析,检验标准为P＜0.05具有统计学意义。  结果  骨肉瘤组织CD133、CD117、Ki-67蛋白表达阳性率显著高于良性的骨软骨瘤组织,差异有统计学意义（分别为P=0.016、P=0.008、P＜0.001）;CD133或Ki-67蛋白阳性表达骨肉瘤患者平均生存时间及平均转移时间短于CD133或Ki-67蛋白阴性骨肉瘤患者,差异有统计学意义（P＜0.05）;CD133、Ki-67在外科分期和远处转移对骨肉瘤患者预后有影响,其中CD133是外科分期及远处转移而影响骨肉瘤患者预后的独立因素。  结论  CD133和Ki-67表达可能在骨肉瘤发生、发展过程中起重要作用,有望成为判断其预后的指标。      

Ezrin表达变化及其对原发性骨肉瘤预后的意义

  目的  了解Ezrin在术前新辅助化疗前、后表达的变化情况以及其对骨肉瘤预后的意义。  方法  收集25例Ezrin表达阳性的原发性无转移骨肉瘤患者在新辅助化疗前的活检标本及化疗后的手术标本,用RT-PCR检测同一患者在化疗前、后标本中Ezrin表达的变化情况,分析Ezrin表达变化与各临床病理指标之间的关系,再对所有患者进行生存分析,找出与骨肉瘤患者生存相关的独立预后因素。  结果  25例原发性骨肉瘤患者中有64%在术前化疗后Ezrin表达发生显著下调,另有36%未见明显变化。Ezrin表达变化显著者与骨肉瘤的病理类型（P=0.037）、恶性程度（P=0.006）、对化疗反应（P=0.017）及转移或复发（P=0.041）密切相关。单因素分析显示总生存率、无病生存率与Ezrin表达变化（P=0.001、P=0.002）及对术前化疗反应有统计学相关性（P=0.001、P=0.002）,多因素分析显示Ezrin表达变化是骨肉瘤患者无病生存率的独立预后因素（P=0.014）。  结论  Ezrin在术前新辅助化疗前、后的表达变化与骨肉瘤预后密切相关,可据此将患者分为复发和转移的高危患者和低危患者,从而采取相应的治疗方案。      

NPRAP蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

  目的  探讨NPRAP在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与患者预后的关系。  方法  本文应用免疫组化检测70例NSCLC标本(其中35例具有配对的淋巴结转移标本)中NPRAP的表达及其与临床病理因素之间的关系。另选30例新鲜肺癌及癌旁正常肺组织用于NPRAP的mRNA和蛋白检测。  结果  与正常肺组织相比, NPRAP的mRNA和蛋白在肺癌组织中表达显著增高, 且NPRAP的高表达与肺癌的高分期及淋巴结转移密切相关(P < 0.05)。  结论  NPRAP的阳性表达与非小细胞肺癌患者的不良预后显著相关, NPRAP在肿瘤的发生发展过程中可能具有重要作用。      

miR-30c在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义

目的:探讨miR-30c在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义。方法:37例骨肉瘤组织标本均来自于2007年1月至2015年1月间在新疆医科大学第六附属医院住院接受治疗的骨肉瘤患者,实时定量PCR和原位杂交分析骨肉瘤组织中miR-30c表达情况。单因素和多因素分析miR-30c表达与骨肉瘤临床病理参数和预后之间的相关性。结果:实时定量PCR检测和原位杂交检测分析结果一致表明:骨肉瘤组织中miR-30c的表达水平显著低于正常骨组织,差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-30c低表达组肿瘤与更晚分期和中低分化程度、肿瘤复发有相关性（P＜0.05）;多元回归分析表明,miR-30c低表达与骨肉瘤患者生存期更短有关(P＜0.01);miR-30c低水平表达是骨肉瘤患者预后的一个独立危险因数。结论:miR-30c表达下调能够促进肿瘤进展,是预测骨肉瘤患者预后的可靠指标,miR-30c也具有成为骨肉瘤靶向治疗靶点的潜力。     

氯离子通道蛋白及β-肌动蛋白基因在人胃癌组织中的表达

  目的  研究Hp(Helicobacter pylori, Hp)感染在胃癌发生发展中的作用。  方法  运用实时定量PCR法检测氯离子通道蛋白基因(Chloride ion channel protein, CICP)及β-肌动蛋白基因在50例人胃癌组织的表达, 并分析其表达与临床病理特征和胃癌组织中Hp感染状态的关系。  结果  两个基因在人胃癌组织及淋巴结组织的表达显著高于癌旁组织(P < 0.05)。氯离子通道蛋白基因的表达与胃癌患者pTNM分期及患者生存期相关(P < 0.05), 而β-肌动蛋白基因的表达与pTNM分期及淋巴结转移相关(P < 0.05);人胃癌组织中Hp的感染与氯离子通道蛋白及β-肌动蛋白基因的表达上调相关(P < 0.05)。  结论  Hp的感染可以上调胃癌组织中氯离子通道蛋白及β-肌动蛋白基因的表达, 检测这两个基因的表达对预测胃癌患者的预后有一定作用。      

miR-101基因簇与食管癌发病风险的病例对照研究

目的：探讨miR-101基因簇与食管癌发病风险的关系。方法：收集3例食管癌进展期患者的新鲜组织标本进行组织芯片高通量microRNA检测,采用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库食管癌RNA测序数据验证的方式对miR-101基因簇表达水平进行分析;另收集33例食管癌患者癌组织和癌旁组织标本,分别提取样本总RNA,采用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测miR-101基因簇相关基因的表达,logistic回归分析miRNA异常表达对食管癌发病风险的影响,受试者特征曲线(ROC)评价miR-101基因簇对食管癌的诊断效力,Fisher检验分析基因簇各miRNA的表达和食管癌患者临床病理指标之间的相关性。结果：miRNA芯片高通量检测及TCGA数据库生物信息学分析结果显示,与食管正常组织相比,miR-101-3p、miR-125a-5p和miR-145-5p在食管癌组织中表达下调(P<0.05)。qPCR结果显示miR-101基因簇在33例食管癌组织中均呈低表达,多因素logistic回归分析显示,miR-101基因簇miR-101-3p、miR-127-5p与miR-145-5p表达水平与食管癌的发病风险呈负相关[OR (95% CI)值分别为：0.717(0.563,0.912)、0.717(0.534,0.962)和0.597(0.426,0.838),均为P<0.05];ROC分析显示miR-101基因簇曲线下面积(AUC)分别为0.753、0.792、0.763和0.800(P<0.05)。此外,miR-101-3p、miR-145-5p的表达水平与食管癌患者肿瘤大小相关(P<0.05),miR-125a-5p的表达水平与患者淋巴结转移相关(P<0.05)。结论：miR-101基因簇在食管癌患者癌组织中呈低表达,可作为食管癌诊断的潜在生物标志物,其在食管癌进程中的功能和调控机制有待进一步研究。     

miR-149通过靶向FOXM1基因抑制前列腺癌细胞的生长和侵袭

  目的  探讨miR-149对前列腺癌细胞生长和侵袭的影响,并研究miR-149的靶基因及其功能。  方法  利用实时荧光定量PCR检测前列腺癌和癌旁组织miR-149和FOXM1 mRNA表达水平。在人前列腺癌细胞系PC3和DU145细胞中瞬时转染miR-149模拟物和阴性对照miRNA,运用平板克隆形成和Transwell侵袭实验检测细胞生长和侵袭。在细胞中分别转染miR-149靶基因FOXM1的siRNA和siRNA阴性对照,利用Western blot检测FOXM1蛋白表达情况,并检测细胞的克隆形成和侵袭能力。  结果  在前列腺癌中miR-149低表达（P < 0.01）,FOXM1 mRNA高表达（P < 0.01）。与对照组细胞相比,转染miR-149模拟物的PC3和DU145细胞克隆数目减少（P < 0.01）,发生侵袭的细胞减少（P < 0.01）;FOXM1蛋白水平在转染miR-149模拟物的PC3（P < 0.01）和DU145细胞（P < 0.05）中较对照组细胞降低。转染FOXM1 siRNA的PC3和DU145细胞中FOXM1蛋白水平较对照组降低,且克隆形成和侵袭能力较对照组明显降低（P < 0.01）。  结论  miR-149通过靶向FOXM1抑制前列腺癌细胞生长和侵袭,发挥着抑癌基因的作用,可作为前列腺癌分子治疗的有效靶点。      

miR-182-5p在膀胱癌中的表达及其机制

  目的  探究miR-182-5p及FOXO3在膀胱癌中的表达意义及其参与膀胱癌可能的机制。  方法  收集2017年6月至2019年6月64例于郑州人民医院行手术切除膀胱癌患者的组织标本和临床资料,采用RT-qPCR检测膀胱癌组织及膀胱癌细胞中的miR-182-5p和FOXO3表达,按照其表达水平分为miR-182-5p高表达组和miR-182-5p低表达组、FOXO3高表达组和FOXO3低表达组,采用Western blot实验检测FOXO3蛋白的表达。采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-182-5p和FOXO3与膀胱癌患者预后的相关性。采用双荧光素酶报告实验分析miR-182-5p与FOXO3的靶向关系,并采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blot检测转染miR-182-5p抑制剂对FOXO3表达的影响;分别采用CCK-8、Transwell实验和流式细胞术检测转染miR-182-5p抑制剂对T24细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。  结果  miR-182-5p在膀胱癌组织中的表达量为2.27±0.66,显著高于癌旁组织的1.04±0.36,两者比较差异具有统计学意义（P<0.001）,与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移有关（P<0.05）;FOXO3在膀胱癌组织中低表达,与肿瘤大小、分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关（P<0.05）;miR-182-5p高表达组、FOXO3低表达组的患者的生存率显著低于miR-182-5p低表达组、FOXO3高表达组（P=0.038,P=0.004）。T24细胞中miR-182-5p高表达（P<0.05）。抑制miR-182-5p上调FOXO3表达,抑制miR-182-5p表达能抑制T24细胞的增殖和侵袭,促进细胞凋亡（P<0.05）。  结论  miR-182-5p在膀胱癌组织中高表达,而FOXO3低表达。miR-182-5p促进膀胱癌细胞的增殖和侵袭,抑制其凋亡,可能与负调控FOXO3有关。      

STAT3与miRNA-21在舌鳞状细胞癌中异常表达的相关性研究

  目的  探讨不同分化程度人舌鳞状细胞癌组织及细胞系中STAT3及miRNA-21表达的相关性及其和预后的关系。  方法  Western Blot法测定舌鳞癌细胞中STAT3表达, 免疫组织化学染色法检测舌鳞癌组织标本中STAT3蛋白表达水平, 采用荧光实时定量PCR法检测舌鳞癌细胞中miRNA-21的表达, 采用荧光原位杂交法测定舌鳞癌标本中miRNA-21表达, Spearman等级相关分析STAT3、miRNA-21表达在舌鳞癌中表达的相关性, Kaplan-Meier法分析STAT3、miRNA-21不同表达状态与生存期的关系。  结果  STAT3和miRNA-21在舌鳞癌细胞及组织标本中过表达; 舌鳞癌标本中STAT3、miRNA-21随肿瘤分化程度越差, 其表达越高; STAT3和miRNA-21表达呈正相关(r_s=0.574, P < 0.001);STAT3、miRNA-21与生存期为负相关, STAT3和miRNA-21高表达患者的预后较低表达者差。  结论  STAT3、miRNA-21的表达状态对预测舌鳞癌患者的预后具有一定的价值。 < /span >      

CTHRC1增强结直肠癌细胞侵袭能力促进结直肠癌转移的机制研究

  目的  探讨胶原三股螺旋重叠蛋白1（collagen triple helix repeat containing 1,CTHRC1）对结直肠癌细胞生物学特性的影响及可能的调控机制。  方法  采用实时定量PCR技术检测上调或抑制miR-520d-5P的表达,探讨其对基因CTHRC1的调控作用,双荧光素酶实验验证miR-520d-5P与基因CTHRC1的3'UTR区之间是否相互结合。采用Western blot法检测6株不同结直肠癌细胞系及临床结直肠癌配对标本中基因CTHRC1的蛋白表达水平。构建稳定转染基因CTHRC1的结直肠癌细胞系;CCK-8、Transwell等方法检测稳定转染目的基因后结直肠癌细胞的增殖、侵袭能力的变化。  结果  在配对结直肠癌患者组织中发现,正常组织中miR-520d-5P的表达高于癌组织（P < 0.001）,基因CTHRC1的表达趋势相反（P < 0.001）,且两者的表达呈负相关。通过miR-520d-5P模拟类似物mimics及抑制物inhibitor的瞬时转染实验发现其对基因CTHRC1的蛋白表达有负向调节作用。双荧光素酶实验验证miR-520d-5P与CTHRC1的3'UTR之间存在相互结合。稳定转染基因CTHRC1后,细胞的增殖能力下降,但侵袭能力提高,差异具有统计学意义（P < 0.05）。在配对结直肠癌标本中,原发癌组织中基因CTHRC1的蛋白表达水平高于正常组织（P=0.003）。  结论  miR-520d-5P对基因CTHRC1蛋白表达具有负调控作用。基因CTHRC1可以增强结直肠癌细胞的侵袭能力,抑制结直肠癌细胞的增殖能力,且与miR-520d-5P具有临床相关性。