蟾毒灵对人肝癌细胞HepG2细胞周期的影响及其机制研究

目的:探讨蟾毒灵对人肝癌细胞HepG2细胞周期的影响及其相关机制.方法:MTT方法检测蟾毒灵单体对肝癌细胞HepG2的生长抑制作用;FCM法检测蟾毒灵单体诱导HepG2细胞周期阻滞的作用;Western blot方法观察蟾毒灵单体对细胞周期相关蛋白的作用.结果:蟾毒灵能够抑制HepG2细胞的生长,该抑制作用呈时间和剂量依赖性.蟾毒灵能够诱导HepG2细胞周期阻滞于G2/M期.蟾毒灵对HepG2细胞周期的阻滞作用可能与cyclinB1、CDK1的表达下调有关.结论:蟾毒灵能够通过下调细胞周期相关蛋白的表达,诱导HepG2细胞阻滞于G2/M期.     

蟾毒灵诱导骨肉瘤U-2OS和U-2OS/MTX300细胞系的凋亡

目的 研究蟾毒灵对人骨肉瘤细胞株的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 以不同浓度的蟾毒灵分别作用于骨肉瘤细胞U-2OS和甲氨蝶呤(MTX)耐药骨肉瘤细胞U-2OS/MTX300.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期,DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder凋亡条带,Western blot法检测凋亡相关蛋白p53、bax和bcl-2的表达.结果 蟾毒灵能明显抑制骨肉瘤细胞的增殖,其对U-2OS和U-2OS/MTX300细胞的IC50值分别为(8.49±2.1)ng/ml和(10.19±1.7)ng/ml(P＞0.05).蟾毒灵处理U2OS和U-2OS/MTX300细胞48 h后,细胞均出现明显的染色质凝集,有典型的凋亡小体产生.同时,蟾毒灵能诱导骨肉瘤细胞凋亡,其作用机制是通过阻滞细胞周期于G2/M期、上调p53、bax表达和下调bcl-2的表达来实现.结论 蟾毒灵能显著抑制人骨肉瘤细胞U-2OS和U-2OS/MTX300的生长,并诱导细胞凋亡,其抗骨肉瘤作用不受MTX耐药的影响.     

重组人白细胞介素24抑制淋巴瘤raji细胞生长及其分子机制

目的：研究重组人白细胞介素24体外对淋巴瘤raji细胞的生长抑制作用及其分子机制。方法：用rhIL-24蛋白作用于淋巴瘤raji细胞,MTT法检测rhIL-24蛋白对raji细胞的生长抑制作用,激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察rhIL-24蛋白诱导raji细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪（VACS）检测rhIL-24蛋白诱导raji细胞的凋亡率及细胞周期改变,免疫细胞化学分析凋亡相关因子Bcl-2和Bax的改变。结果：rhIL-24蛋白作用于淋巴瘤raji细胞后,可以显著抑制raji细胞的生长,诱导G2／M期阻滞和凋亡,rhIL-24蛋白能使raji细胞中bcl-2的表达下调和bax的表达上调。结论：rhIL-24蛋白对淋巴瘤raji细胞具有显著的生长抑制及凋亡诱导作用,其作用机制可能与下调bcl-2和上调bax的表达有关。     

去甲斑蝥素对人肝癌HepG2细胞生长抑制作用的实验观察

目的探讨去甲斑蝥素对人肝癌HepG2细胞系抑制和诱导凋亡作用。方法采用MTT法检测细胞的生长活性,应用流式细胞仪检测、透射电镜下观察去甲斑素处理HepG2细胞后细胞周期阻滞和细胞凋亡的发生情况。结果 5～40μg/ml去甲斑蝥素均能抑制HepG2细胞增殖(P<0.05),其抑制率与作用时间及NCTD浓度相关。流式细胞仪检测发现,去甲斑蝥素处理HepG2细胞后,实验组G2/M细胞明显多于对照组,P<0.05,提示细胞周期停滞于G2/M期。透射电镜下可见,HepG2细胞出现凋亡形态学改变。结论去甲斑蝥素对HepG2细胞有抑制作用,可能与阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡有关。     

As2O3联合L-OHP对HepG2肝癌细胞株的体外抑制作用

目的探讨As2O3联合L-OHP对HepG2肝癌细胞株的体外抑制作用。方法采用MTT法（四唑盐比色法）动态观察As2O3联合L-OHP对HepG2肝癌细胞的生长抑制作用,并采用两药相互作用系数（CDI）来评价两药相互作用的性质;应用流式细胞术（FCM）检测凋亡率和细胞周期分布。结果 As2O3与L-OHP联合应用,对HepG2肝癌细胞株的生长抑制、诱导凋亡作用均较相应的单药增强。流式细胞直方图上可见明显的＂凋亡峰＂,且As2O3使肝癌细胞周期阻滞于G2/M期,L-OHP使细胞周期阻滞于S期和G2/M期,两药合用使细胞周期阻滞于S期和G2/M期。结论中低浓度As2O3与L-OHP联合作用具有显著的协同效益,其主要机制可能是As2O3联合L-OHP诱导肝癌细胞凋亡作用及增强细胞周期阻滞作用。     

重组人白细胞介素24抑制淋巴瘤raji细胞生长及其分子机制

目的:研究重组人白细胞介素24体外对淋巴瘤raji细胞的生长抑制作用及其分子机制.方法:用rhIL-24蛋白作用于淋巴瘤raji细胞,MTT法检测rhIL-24蛋白对raji细胞的生长抑制作用,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察rhIL-24蛋白诱导raji细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪(FACS)检测rhIL-24蛋白诱导raji细胞的凋亡率及细胞周期改变,免疫细胞化学分析凋亡相关因子Bcl-2 和 Bax的改变.结果:rhIL-24蛋白作用于淋巴瘤raji细胞后,可以显著抑制raji细胞的生长,诱导G2/M期阻滞和凋亡,rhIL-24蛋白能使raji细胞中bcl-2的表达下调和bax的表达上调.结论:rhIL-24蛋白对淋巴瘤raji细胞具有显著的生长抑制及凋亡诱导作用,其作用机制可能与下调bcl-2和上调bax的表达有关.     

反义survivin-脂质体复合物对肝癌细胞生长凋亡和细胞周期的影响

目的探讨反义survivin-脂质体复合物（survivin-ASODN）对肝癌细胞系HepG2的生长抑制作用及其机制,为肝癌及survivin阳性肿瘤的治疗提供理论依据。方法用脂质体介导survivin-ASODN转染肝癌细胞系HepG2细胞;通过RT-PCR和Western blot检测survivin表达水平;以MTT法测量细胞生长情况;以流式细胞术测定caspase-3活性及凋亡率,电镜观察细胞形态学变化,并应用流式细胞仪同步分析survivin-ASODN对肝癌细胞系HepG2增殖周期的影响。结果surviving-ASODN可有效下调survivin表达水平,并呈剂量依赖关系,其IC50值为250nmol／L,最大效应浓度为600nmol／L;可抑制细胞生长,激活caspase-3活性,诱导细胞凋亡,使其出现凋亡形态学变化,如胞浆空泡变性、核浓缩和核碎裂。细胞周期的同步分析显示,surviving-ASODN对HepG2细胞增殖周期有明显影响,HepG2先出现细胞周期阻滞,紧接着出现细胞凋亡;低浓度处理后,可将细胞先后阻滞在S期和G2／M期;高浓度时,S期阻滞被加强,可快速诱导细胞凋亡,并且,细胞凋亡率随着药物浓度的增加和作用时间的延长明显上升。结论surviving-ASODN对肝癌细胞有强的生长抑制效应,其机制是与阻断细胞周期及诱导细胞凋亡有关。     

华蟾素对直肠癌 SW480细胞生长影响的实验研究

目的：探讨华蟾素对直肠癌 SW480细胞的抑制作用及其机制。方法：以不同浓度的华蟾素作用于人直肠癌 SW480细胞,用 MTT 法检测华蟾素对直肠癌 SW480细胞增殖的影响;流式细胞术（FCM）观察华蟾素对细胞周期的影响;划痕实验检测华蟾素对直肠癌 SW480细胞迁移能力的影响;蛋白印迹法（Western blot）检测华蟾素对凋亡蛋白 Bcl －2表达的影响。结果：MTT 法显示华蟾素显著抑制直肠癌 SW480细胞增殖,其抑制率呈时间及浓度依赖性;FCM检测发现华蟾素使直肠癌 SW480细胞的 G2／M期延长,S 期缩短,周期主要阻滞在 G2／M期;划痕实验结果显示：华蟾素可降低直肠癌 SW480细胞的迁移能力;Western blot 结果显示华蟾素可使 Bcl －2蛋白表达水平降低。结论：华蟾素能够抑制直肠癌 SW480细胞的生长,并阻滞细胞周期在 G2／M期,抑制其迁移,其机制可能与影响凋亡蛋白 Bcl －2的表达相关。     

丁酸钠对人子宫内膜癌细胞系HHUA细胞增殖影响的研究

目的：探讨丁酸钠(NaB)对人子宫内膜癌细胞系HHUA细胞体外增殖的影响及机制。方法：不同浓度的NaB作用于体外培养的人子宫内膜癌细胞系HHUA，通过绘制细胞生长曲线观察NaB对细胞生长的抑制作用；用流式细胞仪定量分析细胞周期分布；用Western Blot分析p21、p53、pRb和E2F1蛋白表达。结果：NaB能诱导HHUA细胞周期G1期阻滞，上调p21蛋白表达，促进pRb去磷酸化，下调E2F1和p53蛋白表达。结论：NaB能抑制HHUA细胞体外生长，其诱导细胞周期G1期阻滞可能与p21等细胞周期调节蛋白的表达改变有关。     

Genistein对人卵巢癌细胞系3AO抑制增殖和促进凋亡的作用及机制探讨

目的 研究genistein对人卵巢癌细胞系3AO抑制增殖和促进凋亡的作用，探讨其抗癌作用的机制。方法 应用MTT法检测genistein对3AO的生长抑制作用，电镜观察凋亡细胞及凋亡小体，FCM分析细胞周期及凋亡率，免疫细胞化学法检测细胞增殖凋亡调控相关蛋白的表达。结果 genistein可明显抑制3AO的增殖，且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性。FCM分析发现genistein阻断3AO细胞生长于细胞周期的G2／M期，且24～72h可见明显亚G1峰。电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征。免疫细胞化学结果显示，20pmol／L的genistein作用48h后，PCNA、bcl-2及Cyclin B1蛋白表达降低，而p21^WAP1/CIP1和bax及Cyclin B1蛋白表达增加。结论 genistein对卵巢癌细胞系3AO的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用，其阻断细胞的生长主要在细胞周期的G2／M期，且这种生长抑制作用与p21^WAF1／CIP1蛋白水平表达增加及PCNA cy-lin B1蛋白表达降低有关，且可通过下调bcl-2蛋白表达，上调bax蛋白表达诱导卵巢癌细胞凋亡。     

Bufalin induces apoptosis through activation of both the intrinsic and extrinsic pathways in human bladder cancer cells

Bufalin, a major digoxin-like immunoreactive component of the Chinese medicine Chansu, is prepared from toad venom. This compound has been shown to exert a potential for anticancer activity against various human cancer cell lines in?vitro. However, the detailed molecular mechanisms of its induction of apoptosis are still unclear. In this study, we investigated the apoptosis-inducing effect of bufalin in T24 human bladder cancer cells. Our data revealed that bufalin treatment resulted in a concentration-response growth inhibition of T24 cells by inducing cell cycle arrest at the G2/M phase and apoptosis, as evidenced by formation of apoptotic bodies, chromatin condensation and accumulation of cells in the sub-G1 phase. Apoptosis induction of T24 cells by bufalin showed correlation with proteolytic activation of caspase-3, -8 and -9, and concomitant degradation of poly (ADP-ribose) polymerases, and collapse of the mitochondria membrane potential. In addition, bufalin treatment resulted in an increase of the Bax/Bcl-2 (or Bcl-xL) ratio and caused down-regulation of inhibitor of apoptosis protein (IAP) family members. The increase in apoptosis by bufalin treatment was also associated with up-regulation of death receptor-related factors. Our data indicate that the growth inhibitory effects of bufalin occur through blockade of the G2/M phase, and that these cancer cells do not enter cell cycle progression and die through apoptosis via both intrinsic and extrinsic pathways.     

蟾毒灵通过下调c-Flip和XIAP增强TRAIL诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的：研究蟾毒灵（ bufalin）对TRAIL诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的的影响及机制。方法：MTT法测定细胞活力、采用流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫荧光实验检测DR4、DR5的表达情况,Western blot法检测c-Flip和XIAP蛋白的表达。结果：MTT结果显示bufalin作用于MDA-MB-231细胞后24h和48h的IC50分别为934nmol/L 和513nmol/L。流式分析显示50nmol/L 的 bufalin 作用24h 仅诱导4.5%的MDA-MB-231细胞凋亡,100ng/ml的TRAIL作用24h诱导5.1%的MDA-MB-231细胞凋亡,50nmol/L的bufalin与100ng/ml的TRAIL联合作用24小时后可诱导32.5%的MDA-MB-231细胞凋亡。Western blot分析显示bufalin与TRAIL联合作用后导致c-Flip和XIAP的明显下调。结论：Bufalin可通过下调c-FLIP和XIAP的表达增强TRAIL诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡。     

姜黄素联合低浓度长春新碱抑制肝癌细胞系生长的实验研究

目的:研究姜黄素联合低浓度长春新碱对肝癌细胞系HepG2的生长抑制情况及可能机制。方法:实验设对照组(仅加培养基)、姜黄素组(20μmol/L)、长春新碱组(0.5、1、2、4μg/ml)及联合用药组(20μmol/L姜黄素+1μg/ml),各组作用HepG2细胞24 h后,采用细胞计数法测定细胞增殖情况,克隆形成实验检测各处理组的长期效应,DAPI染色测定细胞的死亡方式,线粒体膜电位检测细胞的线粒体损伤情况,流式细胞术检测细胞DNA含量及细胞周期阻滞,RT-PCR检测LRP、MDR1和P21 mRNA表达的变化。结果:与对照组和单独给药组比较,姜黄素联合长春新碱组经24 h处理后,明显抑制HepG2细胞增殖能力(P<0.05);克隆形成实验显示联合作用组明显抑制细胞集落形成能力;DAPI染色显示联合用药组凋亡细胞明显增加(P<0.01),线粒体膜电位测定显示联合用药组膜电位减低可能与凋亡率增加相关;流式细胞术测定联合用药组G2/M期阻滞显著增加(P<0.05);RT-PCR检测到LRP、MDR1 mRNA的表达降低(均P<0.05),而P21 mRNA的表达升高(P<0.05)。结论:姜黄素联合低浓度长春新碱町以显著抑制HepG2生长,为化疗新方案提供了一定依据。     

Bufalin exerts antitumor effects by inducing cell cycle arrest and triggering apoptosis in pancreatic cancer cells

As one of the most aggressive human malignancies, pancreatic cancer is a leading cause of cancer-related deaths worldwide and only about 4 % of patients will live 5 years after diagnosis. Eighty to approximately eighty-five percent of patients are diagnosed with an unresectable or metastatic disease, which is correlated with poor prognosis and low survival rate. Therefore, it is tremendously significant to exploit novel chemicals to prevent and treat pancreatic cancer. Previous research and clinical studies have demonstrated that many natural products derived from traditional Chinese medicine (TCM) such as camptothecin derivatives and vinca alkaloids could be effective antitumor compounds, hinting that TCM is a promising source for developing new antitumor drugs. In this report, we investigated the effects of bufalin, a primary active ingredient of the traditional Chinese medicine Chan-Su, on pancreatic cancer cell lines PANC-1 and CFPAC-1 and studied the underlying molecular mechanism. We found that exposure to bufalin could suppress the proliferation of pancreatic cancer cells time and dose dependently. We used flow cytometry to study the effects of bufalin on apoptosis and cell cycle distribution in PANC-1 and CFPAC-1 cells. The results indicated that bufalin could significantly induce both apoptosis and G2/M cell cycle arrest in pancreatic cancer cells. With western blotting, we found that the expression level of an antiapoptotic protein heat shock protein 27 (Hsp27) and its partner molecule p-Akt was decreased upon the treatment with bufalin. Besides, bufalin activated pro-caspase-3 and pro-caspase-9 and modulated the expression level of Bcl-2 and Bax. These data suggested that bufalin may trigger apoptosis by targeting Hsp27, which could inhibit apoptosis by interfering with key apoptotic proteins. The influence on the level of cylinB1, CDK1, and p21 was also observed after bufalin treatment, and the relationship between Hsp27 and the cell cycle-related proteins mentioned above deserves much more research. In addition, our data showed that bufalin could enhance the growth inhibition effect of gemcitabine in above pancreatic cancer cells. Taken together, bufalin might be worthy of further study for its potential as a therapeutic agent for pancreatic cancer treatment.     

硼替佐米对伊马替尼耐药细胞株K562/G01增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

 目的　探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米（BOR）对慢性粒细胞白血病（CML）伊马替尼耐药细胞株K562／G01的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法　采用MTT法观察细胞的生长抑制效应;流式细胞术（FCM）检测细胞周期与凋亡。结果　K562／G01细胞对伊马替尼不敏感,伊马替尼对K562／G01和K562细胞的IC50分别是（20.09±1.38）、（0.54±0.13）μmol／L;BOR对K562／G01细胞具有增殖抑制作用,并于48 h时作用效果达高峰,IC50（23.10±2.71）nmol／L,随着BOR浓度和作用时间的增加,FCM检测可见G2／M 期细胞周期阻滞及明显的凋亡峰。结论　BOR对CML伊马替尼耐药细胞株具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制可能与细胞周期G2／M 期的阻滞有关。     

矢车菊-3-O-葡萄糖苷增强肝癌HepG2细胞的抗肿瘤活性及其机制探讨

目的:探讨矢车菊-3-O-葡萄糖苷（cyanidin-3-glucoside,C3G）增强人肝癌HepG2细胞的抗肿瘤活性及其作用机制。方法:采用MTT法研究C3G对HepG2细胞抑制率的影响;利用激光共聚焦观察Hoechst 33342染色后细胞形态;流式细胞分析仪分别测定C3G对HepG2细胞凋亡、周期和线粒体膜电位的影响;Western blot 法测定C3G对HepG2细胞凋亡相关蛋白表达量的影响。结果:当C3G浓度在12.5~100.0 μmol/L范围内,随C3G浓度增加HepG2细胞的抑制率显著增加,呈浓度依赖性,同时在24、48、72 h对HepG2细胞抑制率的IC50分别为97.16、40.35、39.83 μmol/L。C3G能显著增加HepG2细胞凋亡率和细胞核的荧光强度,并将细胞周期阻滞在G2/M期,同时线粒体膜电位显著降低。C3G可上调Bax、Cytochrome c、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平,下调Bcl-2蛋白表达水平。结论:C3G可通过激活线粒体介导的凋亡通路和周期阻滞来实现抗肿瘤作用。     

蟾蜍灵对B16细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究中药蟾蜍灵对B16细胞增殖和凋亡的影响,探讨蟾蜍灵对黑色素瘤的抑制作用。方法 采用MTT法测定蟾蜍灵对B16细胞活力的影响;Hoechst 33342荧光染色检测细胞形态学变化;流式细胞术检测蟾蜍灵对细胞周期的影响。结果 蟾蜍灵对B16细胞的增殖有抑制作用,且呈浓度和时间的依赖性。蟾蜍灵作用24、48和72 h的IC50值分别为37.80、6.00和9.12 μmol/L。荧光染色显示蟾蜍灵作用于B16细胞24 h后,细胞呈现典型的凋亡形态特征;细胞周期分析显示,蟾蜍灵处理组S期细胞降低,蟾蜍灵可引B16细胞G0/G1期阻滞,而对G0/G1期阻滞随作用时间延长而增强。结论 蟾蜍灵可能通过阻滞B16细胞增殖周期进程而诱导凋亡。