益康唑体外净化后自体骨髓移植治疗白血病小鼠的实验研究

目的 建立一个小鼠急性髓系白血病(AML)净化后骨髓移植的模型并探讨益康唑(Econazole,Ec)药物净化的效果.方法 利用小鼠P815 AML细胞转染新霉素抗性基因,即NeoR基因后与小鼠骨髓细胞混合,体外短期培养净化;通过移植后血液系统恢复,白血病微小残留病变和小鼠的存活进行评估.结果 接受放射治疗后经尾静脉注射P815/NeoR细胞而未经净化的小鼠100%可检测到白血病细胞;Ec体外净化后骨髓移植小鼠造血恢复没有延迟,而残留白血病细胞阳性率明显降低且小鼠的总生存明显改善.结论 实验所设计的P815/NeoR小鼠AML净化后骨髓移植模型简单易行、重复性好;Ec可用于AML的净化后骨髓移植.     

应用X线照射后的Balb／c小鼠制备白血病模型的方法学研究

目的：探索用SPF级Balb／c小鼠经x线照射后,尾静脉注射转染GFP及NeoR基因的K562细胞株以制备白血病模型的方法。方法：实验组小鼠分别经x线照射2Gy和3Gy,24小时后取对数生长期的K562（GFP＋／Neo＋）细胞尾静脉注射2×10 6个／只。对照组不予特殊处理。结果：实验组在接种5—7天时发病,分别于30、24天内全部死亡;生存天数显著短于对照组（P〈0．01）。体重较对照组显著下降（p〈0．05）。小鼠的白血病发病率为100％,无自发缓解。随照射剂量的增加,小鼠的存活时间缩短,且外周血及骨髓中自血病细胞所占比例增加。流式细胞仪测定及PCR方法也证实了GFP＋细胞和NeoR基因在外周血、骨髓、肝、脾中的存在。结论：Balb／c小鼠经照射后从尾静脉注射K562细胞株可以获得白血病模型。     

骨髓净化的研究进展

  【摘要】 高剂量化疗联合造血干细胞移植（HSCT）已成为治愈白血病的有效途径。与异基因骨髓移植（allo-BMT）相比,自体骨髓移植（auto-BMT）具有植活容易、无年龄限制、无需配型、无移植物抗宿主病（GVHD）等诸多优点。然而,自体移植物中残留的白血病细胞是引起复发的主要原因。因此,从移植物中选择性清除白血病细胞是避免复发的关键。文章论述了骨髓净化的若干方法,如物理净化法、免疫净化法、化学净化法、生物净化法等。     

癌光啉—光照体外净化急性髓细胞性白血病祖细胞的研究

体外净化除去移植物中残留的白血病细胞是提高ABMT治疗白血病效果的的关键之一。本文观察了新血卟啉光敏剂癌光啉加光照对人AML—CFU的体外净化效果。结果表明,癌光啉(10mg/L)单用对正常GM-CFU和AML-CFU集落形成均无明显影响,照光后集落存活率随照光时间延长而下降,照光4分钟CFU—GM和AML—CFU存活率分别为对照的23.374±25.66%和1.63±3.24%,照光6分钟,12例AML中无一例生长,此时CFU—GM存活率为3.51±3.43%。说明癌光啉—光照在体外对白血病细胞确有净化作用,可用于临床ABMT。另外,不同个体对癌光啉光照的敏感性相差较大,提示临床进行体外净化时应先行敏感性试验,以确定最适照光时间。     

保尔佳（Polyerga）体外净化自体骨髓移植的实验研究与临床应用

目的 应用保尔佳（Ｐｏｌｙｅｒｇａ）体外净化自体骨髓移植治疗急性白血病及实体瘤,探索有效的体外净化新方法。方法 取正常骨髓加入不同浓度的保尔佳在３７℃条件上孵育后台盼蓝染色,计数活细胞数,细胞培养计数ＣＦＵ－ＧＭ,评价保尔佳对正常造血干细胞的影响,临床应用按１００～１５０ｎｇ／ｍｌ保尔佳体外骨髓净化处理,净化组预处理方案及回输自体骨髓细胞量与对照组相似。结果 不同浓度的保尔佳在体外对正常造血干细胞均无影响,净化组与对照组自体骨髓移植造血恢复时间相似,实验组与对照组间无差异（Ｐ〉０．０５）,随访报告提示,净化组复发率较对照组明显降低（Ｐ〈０．０１）。结论 保尔佳体外净化自体骨髓对造血干细胞无损伤,可有效清除体内残留肿瘤细胞,延长无病生存期。     

供体细胞源性白血病

供体细胞源性白血病林凤茹王藏海综述姚尔固审校众所周知，异基因骨髓移植（ＢＭＴ）是治疗白血病的重要措施之一，而ＢＭＴ后白血病复发，常为患者残留的白血病细胞增殖所致。１９７１年Ｆｉａｌｋｏｗ等［１］首先报告ＢＭＴ后复发白血病，细胞来自供体细胞（ｄｏｎｏｒ...     

保尔佳(Polyerga)体外净化自体骨髓移植的实验研究与临床应用

目的　应用保尔佳 (Polyerga)体外净化自体骨髓移植治疗急性白血病及实体瘤 ,探索有效的体外净化新方法。方法　取正常骨髓加入不同浓度的保尔佳在 3 7℃条件下孵育后台盼蓝染色 ,计数活细胞数 ,细胞培养计数CFU -GM ,评价保尔佳对正常造血干细胞的影响。临床应用按 10 0～ 15 0ng/ml保尔佳体外骨髓净化处理 ,净化组预处理方案及回输自体骨髓细胞量与对照组相似。结果　不同浓度的保尔佳在体外对正常造血干细胞均无影响 ,净化组与对照组自体骨髓移植造血恢复时间相似 ,实验组与对照组间无差异 (P >0 0 5 )。随访报告提示 ,净化组复发率较对照组明显降低 (P <0 0 1)。结论　保尔佳体外净化自体骨髓对造血干细胞无损伤 ,可有效清除体内残留肿瘤细胞 ,延长无病生存期。     

YCD基因修饰对小鼠P388白血病的体内治疗作用研究

目的：以P388/DBA小鼠白血病模型，探讨新型自杀基因YCD的体内治疗作用。方法：用逆转录病毒载体将YCD基因导入，筛选P388YCDeGFP细胞克隆，以P388eGFP和野生性（wt）P388细胞为对照。（1）3组细胞腹腔接种给DBA小鼠（n=5），5×106/只（下同），观察致病性；（2）3组细胞腹腔接种给DBA小鼠（n=5），分别以5FC治疗2周，观察疗效；（3）2组×5只小鼠腹腔接种P388YCDeGFP，5FC 5 μmol/L·d-1×2 d或PBS治疗，根据小鼠存活时间推算杀伤效率。以流式细胞仪、冰冻切片和HE切片检测各脏器中白血病细胞的分布和变化。结果：基因导入对细胞的生物学特性影响不显著；5FC治疗2周，YCD组小鼠存活(17.8±1.89) d，而eGFP组和wtP388组分别存活(7.8±1.10) d 和(7.7±1.15) d （P<005）；5FC治疗2 d的杀伤率达99.6%。结论：YCD转基因细胞在体内可被5FC有效杀灭，该系统具有应用前景。     

DBA／2 小鼠微小残留白血病模型的构建

 目的　探讨建立一种细胞系和种鼠传代方便、重复性好的微小残留白血病模型的方法。方法　选用国际标准近交系DBA／2小鼠84只，接种不同数量L1210白血病细胞，观察接种白血病细胞数量与小鼠存活时间之间的关系；每只小鼠接种L1210白血病细胞1×106个后，第3天行不同剂量环磷酰胺（CTX）化疗，观察化疗剂量与小鼠存活时间之间的关系。结果　小鼠存活时间随接种细胞数量增加而逐渐缩短；白血病小鼠存活时间随化疗剂量增加而逐渐延长；观察接种不同数量白血病细胞的小鼠和接受不同剂量CTX化疗的白血病小鼠的生存趋势，显示接种500个白血病细胞小鼠的存活时间相当于用CTX剂量125 mg／kg化疗白血病小鼠生存时间，两者均为28 d左右。结论　DBA／2小鼠接种L1210白血病细胞1×106个／只后第3天采用CTX 125 mg／kg化疗可以成功建立微小残留白血病模型，此时小鼠体内白血病细胞数约为500个。     

白血病骨髓体外长期液相培养净化实验与临床

自体骨髓移植是白血病治疗的重要手段。完全缓解期白血病病人骨髓仍含有一定量的白血病细胞。为清除残留白血病细胞,人们通常采用一定的方法体外净化骨髓,这些方法包括:物理、药物、免疫等。骨髓长期液相培养可使白血病病人骨髓在体外得到不同程度净化,这种方法有选择性促进正常造血于细胞生长的优点,是近10年来自体骨髓移植中骨髓净化方面重要进展。本文就其研究概况及现状     

应用X线照射后的Balb/c小鼠制备白血病模型的方法学研究

目的:探索用SPF级Balb/c小鼠经X线照射后,尾静脉注射转染GFP及NeoR基因的K562细胞株以制备白血病模型的方法。方法:实验组小鼠分别经X线照射2Gy和3Gy,24小时后取对数生长期的K562(GFP+/Neo+)细胞尾静脉注射2×106个/只。对照组不予特殊处理。结果:实验组在接种5-7天时发病,分别于30、24天内全部死亡;生存天数显著短于对照组(P<0.01)。体重较对照组显著下降(P<0.05)。小鼠的白血病发病率为100%,无自发缓解。随照射剂量的增加,小鼠的存活时间缩短,且外周血及骨髓中白血病细胞所占比例增加。流式细胞仪测定及PCR方法也证实了GFP+细胞和NeoR基因在外周血、骨髓、肝、脾中的存在。结论:Balb/c小鼠经照射后从尾静脉注射K562细胞株可以获得白血病模型。     

FasL基因修饰树突状细胞的抗白血病作用及其机制

目的:选择性去除骨髓移植物中异基因反应性淋巴细胞,特异性抑制移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)并保留移植物的抗白血病(graft versus leukemia,GVL)作用。方法:分别把未经处理的、溶T淋巴细胞处理的和以FasL基因修饰树突状细胞(FasL-DC)处理的3组小鼠骨髓细胞移植物移植给已经接种P815肿瘤细胞的BALB/c受体小鼠,然后观察比较各组小鼠存活情况,并用51Cr释放法检测移植后2个月受体小鼠T淋巴细胞的CTL活性。结果:致死剂量(9Gy)照射的白血病受体鼠在接受经FasL-DC处理的供体骨髓细胞移植后,生存期显著延长,2个月时生存率为40%,对照组在1个月内全部死亡。51Cr释放法检测证实,FasL-DC处理组的T淋巴细胞对P815细胞保持较强的杀伤活性。结论:转染FasL基因的DC可有效去除骨髓移植物中异基因反应性T淋巴细胞,移植用该方法处理过的骨髓,不但能够有效抑制GVHD的发生,同时也可以保留移植物的抗肿瘤作用。     

急性淋巴细胞白血病AML1基因重排与MLL基因丢失同时出现临床意义的探讨

目的：对急性淋巴细胞白血病（ALL）急性髓系白血病（AML1）基因重排与混合谱系白血病（MLL）基因丢失同时出现进行探讨。方法：在常规细胞遗传学（CC）分析基础上运用荧光原位杂交技术（FISH），采用多种位点特异性DNA探针（染色体全染、特殊位点和双色易位融合探针），对63例ALL患者（8例成人，55例儿童）进行分析。结果：63例ALL患者中有4例（6．3％）出现MLL基因重排，其中3例出现MLL基因丢失，1例出现MLL基因的移位即t（4；11），3例出现了MLL基因丢失的患者同时合并有AML1基因重排，2例为t（12；21）易位而形成的TEL／AML1融合基因，1例为AML1基因复制引起的环形21号染色体，即r（21）。55例儿童ALL中有15例（27．3％）出现AML1基因重排，即由t（12；21）易位而形成的TEL／AML1融合基因，TEL／AML1阳性患者免疫分型均为B细胞型，8例成人均无t（12；21）。结论：儿童ALL常合并有t（12；21），TEL／AML1融合基因的出现是预后良好的指标，而MLL基因重排的患者具有对常规化疗不敏感及预后不良的特点，两者同时出现说明白血病染色体重排、病理过程及影响预后因素的复杂性。     

筑巢式RT-PCR检测慢性粒细胞白血病残留细胞

目的：检测慢性粒细胞白血病残留细胞,方法：应用RT－PCR方法对20例（其中6例为异基因骨髓移植术后）慢性粒细胞白血病患者进行右骨髓的bcr/abl mRNA检测,结果：20例初发时Ph染色体阴性1例,阳性19例,20例均检出bcr/abl基因扩增产物,全部病例进行连续性监测发现,6例异基因骨髓移植患者5例最终Ph染色体及bcr/abl基因转阴,1例持续阳性并检出两类（168bp 或93bp)bcr/abl基因,结论：RT－PCR是当前检测慢性粒细胞白血病残留细胞比较可靠的方法。     

PCR检测降钙素基因高甲基化在白血病微小残留病灶诊断中的价值

为探讨甲基化分析在白血病微小残留病灶（MRD）中的价值，用酶切加PCR技术研究31的初诊期急性髓细胞白血病（AML），14例对照者以及在18个月中动态观察5例AML治疗前后降钙素（CT）基因高甲基化的变化。31N初诊期AML中25例，14例对照者中的0呈现CT基因高甲基化（P＜0．01）。动态观察的5例AML，全部初诊期及完全缓解时的4例呈现CT基因高甲基化，其中3例分别于完全缓解后3个月、5个月、6个月复发。完全缓解和CT基因高甲基化阳性1例及阴性1例未复发。提示该方法有助于检测AML的MRD。     

白血病自体骨髓移植的体外净化

自体骨髓移植治疗白血病的缺点是复发率高,复发主要是回输的自体骨髓中含有残留的微量白血病细胞.在回输前进行骨髓净化具有降低复发率的作用.对自体骨髓在回输前进行体外净化是当前自体骨髓移植研究的主要课题之一.现就近年来骨髓净化的研究综述如下.     

依马替尼对c-Kit+急性髓细胞白血病凋亡机制的作用

 目的 观察依马替尼（STI571）体外对干细胞受体阳性（c-Kit+）急性髓细胞白血病（AML）患者骨髓细胞凋亡的作用。方法 用RT-PCR法检测c-Kit+ AML细胞抑凋亡基因Survivin mRNA和促凋亡基因Smac mRNA的表达水平。结果 抑凋亡基因Survivin mRNA的表达水平下降，促凋亡基因Smac mRNA的表达水平上升。结论 STI571能诱导c-Kit+ AML细胞促凋亡基因 Smac mRNA上调，抑凋亡基因Survivin mRNA的表达水平下降，发挥促凋亡作用。     

WT1基因在白血病患者中的表达及临床意义

 目的 探讨WT1基因在白血病患者中的表达及其临床意义。方法 运用RT-PCR方法检测 WT1基因在50例白血病患者中的表达。结果 急性髓细胞白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）WT1表达阳性率分别为77.3 %（17／22）和54.5 %（6／11）。慢性粒细胞白血病（CML）慢性期WT1表达均阴性,急变期55.6 %（5／9）表达阳性。WT1阳性患者化疗缓解率低于阴性患者（分别为31.3 %和69.2 %,P <0.05）。结论 WT1在白血病患者中高表达,可作为临床评估预后、检测微小残留病（MRD）的标志。     

骨髓移植治疗急性髓细胞白血病

广泛用于急性髓性白血病有三种治疗方法；异基因骨髓移植，自体骨髓移植及化疗，分析及比较此三种治疗的结果是复杂的和有争议的，比较已发表的结果问题在于报告的偏见及病例的选择。随机的试验也有报告，但其病例数目过少，其结论能否应用于多数急性髓性白血病（AML）是有问题的。随机试验研究的设计常常是被误解的或只是AML中的一部分人，     

骨髓基质细胞通过TSP-1/CD36通路对急性髓系白血病细胞影响的初步研究

目的：探讨骨髓基质细胞（bone marrow-derived mesenchymal stromal cells,BM-MSCs）对急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）细胞影响的作用机制。方法：构建MLL-AF9过表达诱导的AML小鼠模型,通过PCR比较AML小鼠和野生型小鼠（WT）BM-MSCs内TSP-1的表达差异。通过慢病毒载体使AML小鼠来源的BM-MSCs高表达TSP-1后,与AML细胞行transwell共培养,检测AML细胞表面TSP-1受体CD36及CD47的表达及AML细胞的生长情况。在共培养体系中加入CD36抑制剂N-油酰基硫代琥珀酰亚胺,检测AML细胞增殖、凋亡的变化。结果：AML小鼠BM-MSCs中TSP-1的表达低于对照组。过表达TSP-1的BM-MSCs与AML细胞行transwell共培养后AML细胞的生长受到抑制,且AML细胞表面的CD36受体表达升高,但CD47表达无明显差异。在共培养体系中加入CD36抑制剂N-油酰基硫代琥珀酰亚胺后,AML细胞增殖加快,凋亡减少。结论：TSP-1/CD36信号通路有望成为治疗AML...