急性白血病缓解前后HLA分子血清学分型和分子生物学分型的比较

 目的　比较急性白血病（AL）患者缓解前后HLA血清学分型以及分子生物学分型的结果,以确定能否在缓解前进行HLA配型。方法　对20例AL患者缓解前后外周血标本分别应用微量淋巴细胞毒（CDC）和序列特异性引物聚合酶链反应技术（PCR-SSP）进行HLA血清学和分子生物学分型。对HLAⅠ类分子CDC反应强度进行NIH计分,进行缓解前后配对t检验;对缓解前后HLAⅠ、Ⅱ类分子等位基因特异性进行比较。结果　缓解前后所有病例HLAⅠ、Ⅱ类分子等位基因特异性均未出现缺失或改变。缓解前后HLA-A、B基因座位抗原及Bw6超型的CDC反应强度差异有统计学意义（P＜0.05）,缓解前表达明显下调;Bw4超型在缓解前后的CDC反应强度差异无统计学意义（P＞0.05）。HLAⅠ类分子表达下调或缺失与外周血幼稚细胞含量无明显相关性。结论　对AL患者,可以在确定诊断时即进行HLA的分子生物学分型,从而缩短配型时间,增加寻找合适供者的机会。     

HLA分型在胃肠肿瘤患者中的分布

目前,我室开展MAGE,CEA肽类联合DC细胞治疗消化道肿瘤的研究.MAGE,CEA作为一种抗原肽需要特定的人类白细胞抗原(HLA)分子相结合,才能被DC细胞所递呈.因此需要对病人进行HLA测定,筛选出与MAGE,CEA相匹配的HLA分型的患者.在实验以血清学分型,采用国际上标准的淋巴细胞毒实验.标本取自1998.6～1999.5入我院腹科治疗的部分病人的外周血,共50例,其中HLA-A2,A24,A11及三者的组合共35例,胃癌26例,肠癌9例.结果:     

HLA-G与肿瘤免疫逃逸作用

人白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）是位于人第6号染色体短臂上的一群高度多态性的紧密连锁基因群，HLA—G属于非经典HLA—Ⅰ类分=产（HLA—Ⅰb，HLA—G、E、F），是惟一表达于母胎界面滋养层的HLA—Ⅰ类基因，参与母胎免疫耐受的形成。但是在肿瘤微环境中，肿瘤细胞产生的HLA—G可以结合NK和T细胞表面的杀伤细胞抑制受体（killing inhibitory receptor，KIR），强烈抑制T细胞和NK细胞对肿瘤靶细胞的识别、杀伤等活性，造成类似妊娠母胎界面的免疫耐受状态，形成一条新的肿瘤逃逸途径。     

利用PCR-SSP法研究肺腺癌细胞系A549、Calu-6的HLA-ABDR等位基因

背景和目的已有的研究表明人类白细胞抗原（HLA）在抗原呈递及T细胞识别抗原的过程中起关键作用，此外还与肿瘤细胞的免疫杀伤及免疫逃避有着密切的关系。本研究探讨了人肺腺癌细胞系A549、Calu-6中HLA-A、HLA-B、HLA-DR等位基因的存在状况。方法分离A549、Calu-6细胞DNA，分别行PCR-SSP法扩增、电泳后紫外透射扫描，根据反应格局表对HLA-A、HLA-B、HLA-DR进行判定。结果A549与Calu-6细胞中HLA-A、HLA-B基因较杂合子均有缺失，而HLA-DR基因无缺失。A549细胞HLA-ABDR的基因分型为HLA-A30、HLA-B44、HLA-DRT／HLA-DR53。Calu-6细胞HLA-ABDR的基因分型为HLA-A01、HLA-B08、HLA-DR17／HLA-DR52。结论肺腺癌中存在HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ基因。HLA-Ⅰ基因可能在肿瘤细胞传代过程中发生选择性丢失，而HLA-DR基因完整保留。检测肿瘤HLA对了解其免疫学行为及建立肿瘤特异性杀伤淋巴细胞（CTL）模型具有重要意义。     

肺癌和肝癌病人细胞免疫功能状态的研究

近年来,对有关原发性支气管肺癌(简称肺癌)和原发性肝癌(简称肝癌)的临床免疫学研究,发现均存在着细胞免疫低下,T细胞亚群比例失衡及兔疫监视功能缺陷。本文对肺癌和肝癌病人探讨NK、LAK与T细胞亚群之间的关系。 实验结果表明肺癌、肝癌患者NK及LAK细胞活性明显低于正常人,差异非常显著。经方差分析,肺癌各病理分型间NK及     

HLA与膀胱癌易感性关系的初步探讨

膀胱癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤,其发病的遗传免疫学因素近年来颇受人们的重视。本文利用人白细胞抗原A复合物(简称HLA)这一遗传免疫学标志,进行了HLA与膀胱癌关联的分析,以探讨HLA与膀胱癌易感性的关系。资料和方法采用上海中心血站提供的HLA分型血清盘,应用微量淋巴细胞毒性试验进行膀胱癌患者和对照人群血液标本的HLA-A、B分型。实验组膀胱癌65例,男性46例,女性19例,年龄38～75岁。在我院经手术或电切治疗,均经病理确诊为膀胱移行细胞癌。正常对照组为随机选择的     

47例肺癌病人外周血NK细胞杀伤活性的检测

作者观察了47例原发性支气管肺癌病人NK细胞杀伤活性及其手术与免疫增强剂对NK细胞活性的影响。结果显示:肺癌病人外周血NK细胞活性明显低于健康对照(P相似文献   

NK细胞杀伤人骨髓瘤RPMI8226细胞的活性及其可能的机制

目的:研究同种异体NK细胞对人骨髓瘤RPMI 8226细胞的杀伤活性及其可能的机制。方法:LDH释放法检测NK细胞对RPMI 8226细胞和人白血病K562细胞的杀伤活性,流式细胞术和RT-PCR法分别检测K562和RPMI 8226细胞中NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子的表达;阻断K562和RPMI 8226细胞中NKG2D配体的表达后,检测NK细胞的杀伤活性。结果:NK细胞对RPMI 8226靶细胞的杀伤活性明显低于对K562靶细胞的杀伤(P<0.01)。K562细胞高表达NKG2D配体,不表达HLA-Ⅰ类分子;RPMI 8226细胞低表达NKG2D配体,高表达HLA-Ⅰ类分子,其HLA基因型为A 01,66;B 58,58;Cw 03,06。阻断NKG2D配体后NK细胞杀伤K562细胞的活性明显降低(P<0.01),而杀伤RPMI 8226细胞的活性无明显改变;阻断HLA-Ⅰ类分子,NK细胞杀伤K562细胞的活性无变化,而杀伤RPMI 8226细胞的活性明显提高(P<0.01)。结论:NK细胞杀伤RPMI 8226细胞的活性较低,其机制与RPMI 8226细胞高表达HLA-Ⅰ类分子、低表达NKG2D配体有关。     

化疗对肿瘤病人外周血自然杀伤(NK)细胞功能影响的初步研究

本实验以^(51)铬酸钠标记的K562细胞为靶细胞,检测了45例正常人及81例肿瘤病人的外周血NK细胞活性,研究了不同化疗方案对肿瘤病人外周血NK细胞活性的影响。结果表明:肿瘤病人外周血NK细胞活性明显低于正常人;肿瘤病人的瘤负荷状态与NK细胞活性有明显相关性,化疗对肿瘤病人NK细胞功能的影响与疗前NK活性状态有关:疗前NK活性正常,化疗明显抑制NK活性,疗前NK活性低下,化疗对NK活性的影响则尚难以肯定。     

NKG2D介导NK 细胞对鼻咽癌细胞杀伤作用的体外研究

 目的 探讨鼻咽癌CNE2细胞表面HLA-Ⅰ类分子表型和NKG2D配体的表达情况，进一步了解其对同种异体NK细胞杀伤活性的影响。方法 流式细胞仪检测NKG2D的配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3在K562、CNE2细胞的表达情况。PCR-SSP法分析CNE2细胞HLA-A、B、Cw分型和NK细胞KIR分型。LDH释放法测定5例健康者NK细胞在不同效靶比时对K562、CNE2细胞的杀伤活性，效靶比20：1时观察抗NKG2D配体的单抗对NK细胞杀伤K562、CNE2细胞活性的影响。结果 CNE2细胞表达MICA、MICB、ULBP2，不表达ULBP1、ULBP3。K562细胞表面表达MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3。5例健康者NK细胞抑制性KIR与CNE2细胞表面的HLA-Ⅰ类分子之间存在错配。效靶比5：1、10：1、20：1、30：1时NK细胞对K562、CNE2细胞的杀伤活性分别为（29．02±0．45）％、（10．50±2．17）％；（44．43±1．36）％、（27．68±1．47）％；（57．82±1．35）％、（36．99±3．13）％：（71．24±2．36）％、（55．00±2．20）％，在各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较CNE2细胞明显增强（P=0．000）；在效靶比20：1时anti-MICA、anti-MICB、anti-ULBP1、anti—ULBP2、anti-ULBP3可明显抑制NK细胞对K562细胞的杀伤活性，与阻断前相比有显著性差异（P=0．000）；anti—MICA、anti—MICB、anti—ULBP2可明显抑制NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性，与阻断前相比有显著性差异（P〈0．01），但anti—ULBP1、anti—ULBP3不能阻断NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性。结论 NKG2D配体影响NK细胞对靶细胞的杀伤活性，提高NKG2D配体的表达有可能提高NK细胞的抗肿瘤活性。     

卵巢癌细胞HLA Ⅰ类分子表达异常和TAP,LMP基因表达的关系

目的:肿瘤细胞表达MHCⅠ类分子是激发肿瘤抗原特异性CTL进行肿瘤免疫治疗的关键,肿瘤细胞HLAⅠ类分子表达异常是肿瘤逃脱免疫监视的重要机制.我们探讨了卵巢癌细胞HLAⅠ类分子表达异常的分子基础.方法:本文以West-ern blot、免疫组化和流式细胞术检测卵巢癌细胞HLA Ⅰ类分子的表达,以RT-PCR检测TAP,IMP基因的表达,探讨肿瘤细胞HLA Ⅰ类分子表达异常的分子基础.结果:卵巢癌中HLA Ⅰ类分子表达异常相当普遍(5/8),并涉及抗原加工相关基因TAP,LMP基因表达异常.25℃培养肿瘤细胞可部分诱导Ⅰ类分子的表达;结论:卵巢癌HLA Ⅰ类分子表达异常与其Ⅰ类抗原加工途径异常有关.     

93例鼻咽癌病人自然杀伤细胞活性分析

用~(51)Cr释放试验检测93例鼻咽癌病人和83例正常人外周血自然杀伤细胞活性,其裂解K_(562)肿瘤靶细胞率分别为58±18.0％和54.0±12.8％。两组间没有明显差异。31例鼻咽癌病人同时检测了血清EB病毒VCA—IgA抗体滴度,分析了病期、肿瘤转移和EB病毒VCA—IgA抗体滴度与病人NK细胞活性的关系。结果表明。病期和肿瘤转移对鼻咽癌病人的NK细胞活性和EB病毒VCA—IgA抗体滴度之间有正相关关系。本文结果支持EB病毒感染可以提高病人NK细胞活性的推测。     

低表达MICA/MICB导致NK细胞对人鼻咽癌多药耐药细胞（CNE2/DDP）杀伤活性下降

目的〖HT5"SS〗： 探讨HLAⅠ类分子及MHCⅠ类链相关分子(MICA/MICB)在人鼻咽癌细胞株CNE2及多药耐药细胞株CNE2/DDP的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 流式细胞仪检测CNE2和CNE2/DDP细胞表面HLA Ⅰ类分子和MICA/MICB的表达情况;LDH释放法测定3例健康者的NK细胞在不同效靶比时对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性;效靶比10〖DK〗∶1时,用抗HLAⅠ类分子单抗(W6/32)和抗MICA/MICB单抗(BAMO1)     

K-ras点突变与非小细胞肺癌经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调相关性的研究

目的:探讨癌基因K-ras点突变与非小细胞肺癌(NSCLC)原发灶及淋巴结癌转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调的关系.方法:应用流式细胞术检测65例NSCLC原发灶及31例淋巴结转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原的表达;应用PCR-RFLP技术检测K-ras基因第12位密码子点突变(正常肺组织及淋巴结组织作对照);根据不同的变量类型及目的,采用t检验、Spearman相关分析和x2检验等进行统计分析.结果:淋巴结转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原的表达率为(15.35±6.24)％,明显低于NSCLC原发灶的(39.68±12.46)％,t=2.06,P=0.034;且与NSCLC原发灶经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调明显呈正相关,rs=0.487,P=0.008.经典HLA-Ⅰ类抗原表达阳性的NSCLC原发灶中未检测到K-ras基因突变,经典HLA-Ⅰ类抗原阴性表达者的K-ras基因突变率为54.5％(6/11),低表达者的K-ras基因突变率为20.0％(9/45),差异有统计学意义,x2 =5.38,P=0.042.结论:经典HLA-Ⅰ类抗原表达下调是NSCLC淋巴结转移的机制之一,癌基因K-ras突变与NSCLC原发灶及淋巴结转移灶经典HLA-Ⅰ类抗原低表达有关.     

肿瘤细胞HLAⅠ类分子表达对NK抗性的影响及IFN-γ的调节作用

目的 探讨肿瘤细胞表面HLAⅠ类分子的表达与NK杀伤的关系及IFN－γ的调节作用。方法 用间接免疫荧光法检测7种肿瘤细胞表面HLA－ABC分子的表达;用鼠抗人HLA－ABC单抗封闭靶细胞后,观察NK杀伤的变化;用IFN-γ处理靶细胞后,观察瘤细胞表面HLA分子表达的变化及NK杀伤的变化。结果 不同肿瘤细胞株表达HLA－ABC分子的比例及荧光强度均不相同,除Karpas外,均表现为不同程度的下降。HLA－ABC表达阴性的K562细胞对NK杀伤最敏感,其他细胞的敏感性均有下降。肿瘤细胞表达HLA－ABC分子的表达多有不同程度的下降。用抗HLA单抗封闭相应位 点后,可使NK杀伤明显增强。用IFN－γ500U／ml处理48h后,白血病细胞K562、黑色素瘤细胞M21和高转移肺癌细胞PG表面HLAⅠ类分子表达明显增加,对NK杀伤的敏感性降低;而人T细胞淋巴瘤Karpas、髓样白血病细胞HL60和结直肠癌细胞HT29经处理后,HLAⅠ类分子表达无明显变化,对NK杀伤的敏感性反而明显增强。IFN－γ促进HL60和HT29细胞的凋亡。结论 NK细胞能识别HLA－ABC分子表达下降或缺陷的肿瘤细胞并发挥杀伤作用;INF－γ能恢复部分肿瘤细胞HLA－ABC分子的丢失,并能促进部分肿瘤细胞的凋亡,提高肿瘤对机体抗瘤机制的敏感性。     

SBT、SSOP法分析湖北土家族妇女HLA-A2超型各等位基因及与宫颈癌的关联

目的通过检测湖北土家族人群HLA-A2超型(包含A*0201、A*0202、A*0203、A*0204、A*0205、A*0206、A*0207、A*6802、A*6901)各等位基因,分析与宫颈癌关联的等位基因及其结构与功能特点.方法提取湖北土家族正常人群236名育龄妇女及59例原发性宫颈癌患者外周血DNA,采用SBT(sequence based typing)、SSOP(Sequence Specific Oligonucleotide Probes)HLA基因分型技术,对HLA-A2超型各等位基因型进行分型,比较宫颈癌病例组和正常对照组中HLA-A2超型中相应等位基因型构成比的差异,并分析相关等位基因的结构特点.结果有7种HLA-A2超型等位基因HLA-A*0201(17.3%)HLA-A*0202(9.5%)HLA A*0203(1.4%)HLA-A*0204(3.8%)HLA-A*0205(3.1%)HLA-A*0206(10.8%)HLA-A*0207/0215N(9.8%),其中HLA-A*0202和HLA A*0206在正常对照组和宫颈癌病人组的构成比有显著性差异(p＜0.05),HLA-A*0202(OR=0.24,95%CI=0.05～0.48)和HLA A*0206(OR=0.2,95%CI=0.67～1.07)对于宫颈癌发生的易感性有保护作用.结论湖北土家族人群HLA-A*0201所占比例最高达17.3%,HLA-A*0202和HLA-A*0206对于宫颈癌发生的易感性有保护作用.     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅴ CD3AK介导的MHC非限制性溶瘤作用的机制分析

MHC(Maior histocompatibility complex, MHC)Ⅰ类抗原缺失是一些肿瘤细胞逃逸抗原特异性CTL攻击的重要机制。CTL能否通过MHC非限制性、MHC Ⅰ类非依赖性机制杀伤肿瘤细胞是值得深入探讨的。我们用抗CD3单抗和rIL-2共刺激法诱导的CD3AK作为效应细胞,研究了CD3AK对两株MHCⅠ类阴性肿瘤细胞株K562和Daudi杀伤作用,初步分析了其机制:(1)CD3AK对K562和Daudi都有细胞毒作用,分别为49.4±5.8和33.5±2.5％;同血源NK细胞对K562细胞的细胞毒活性为8.2±3.2％,Daudi对NK的杀伤作用不敏感。(2)CD3AK可与K562细胞结合,EDTA抑制这一过程。(3)CD3AK通过诱导靶细胞K562坏死     

局部注射小鼠白细胞介素12逆转录病毒包装细胞对大鼠肝癌的治疗

目的:研究低剂量环磷酸胺(Cy)联合MHC Ⅰ类限制性肿瘤抗原多肽Mutl致敏、白细胞介素2(IL-2)基因修饰的树突状细胞(DCs)对转移性肺癌小鼠的治疗作用及其免疫学机理.方法:制备小鼠骨髓来源的DCs,用转移性Lewis肺癌特异性多肽Mutl预激经IL-2基因修饰的DCs联合低剂量Cy治疗转移性肺癌小鼠.通过FACS分析其脾细胞内T淋巴细胞比例的变化,~51Cr释放法检测CTL和NK细胞杀伤活性.结果:肿瘤抗原多肽致敏、IL-2基因修饰的DCs与小剂量Cy联合后,能比单用DCs更有效地治疗转移性肺癌,小鼠脾细胞中CD8~ T细胞和NK1.1~ 细胞明显比例升高,联合治疗组诱导出的CTL杀伤活性最高.结论:以肿瘤抗原多肽冲击致敏的IL-2基因修饰的DCs联合小剂量Cy能更有效地促进荷瘤宿主免疫应答,具有显著地体内抑制肺癌转移的效果.     

低剂量环磷酰胺增强MHCⅠ类限制性肿瘤抗原多肽冲击致敏的树突状细胞的抗肿瘤转移效果

目的:研究低剂量环磷酸胺(Cy)联合MHC Ⅰ类限制性肿瘤抗原多肽Mutl致敏、白细胞介素2(IL-2)基因修饰的树突状细胞(DCs)对转移性肺癌小鼠的治疗作用及其免疫学机理.方法:制备小鼠骨髓来源的DCs,用转移性Lewis肺癌特异性多肽Mutl预激经IL-2基因修饰的DCs联合低剂量Cy治疗转移性肺癌小鼠.通过FACS分析其脾细胞内T淋巴细胞比例的变化,~51Cr释放法检测CTL和NK细胞杀伤活性.结果:肿瘤抗原多肽致敏、IL-2基因修饰的DCs与小剂量Cy联合后,能比单用DCs更有效地治疗转移性肺癌,小鼠脾细胞中CD8~+T细胞和NK1.1~+细胞明显比例升高,联合治疗组诱导出的CTL杀伤活性最高.结论:以肿瘤抗原多肽冲击致敏的IL-2基因修饰的DCs联合小剂量Cy能更有效地促进荷瘤宿主免疫应答,具有显著地体内抑制肺癌转移的效果.     

HLA-G与肿瘤免疫逃逸

HLAG是一种非经典的HLAI类抗原。在人类黑色素瘤、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、膀胱癌、肾癌和肺癌中可表达HLAG。HLAG可以通过抑制NK细胞、CTL细胞等效应细胞的作用，改变机体细胞因子分泌的模式来抑制机体的肿瘤免疫反应，使肿瘤细胞发生免疫逃逸而得以生存发展。