Chk1基因沉默增强姜黄素诱导肝癌细胞Huh7凋亡的敏感性

背景与目的：Chk1和Chk2有望成为肿瘤放化疗增敏的新靶点,然而,Chk1/2能否作为姜黄素治疗肿瘤的增敏靶点却很少有研究报道。本研究旨在探讨Chk1/2小干扰RNA（siRNA）对姜黄素诱导肝癌细胞Huh7凋亡的影响,评价其作为姜黄素治疗肝癌增敏靶点的有效性。方法：Western blot方法检测姜黄素对肝癌细胞Huh7中细胞周期检测点信号通路蛋白的影响;RT-PCR和Western blot方法检测Chk1/2siRNA对Chk1/2mRNA和蛋白的沉默效果;DAPI核染色法分别检测Chk1/2siRNA抑制Chk1/2表达后姜黄素诱导Huh7细胞凋亡的情况;流式细胞术检测Chk1/2表达被沉默后姜黄素对Huh7细胞周期的影响。结果：姜黄素明显抑制细胞周期检测点信号通路蛋白Chk1（S317）,Cdc25C（S216）和Cdk1（Y15）蛋白的磷酸化水平;与si-NC转染组相比,Chk1/2siRNA使细胞中Chkl和Chk2mRNA水平分别下降了95%和60%,蛋白水平分别下降了92%和55%（P〈0.01）;抑制Chk1使姜黄素诱导的细胞凋亡率由（21.3±1.8）%上升到（29.5±2.6）%（P〈0.05）,抑制Chk2并无此作用;Chk1/2siRNA对姜黄素处理后的Huh7细胞周期均无明显影响。结论：Chk1siRNA能有效提高姜黄素诱导Huh7细胞的凋亡率,提示Chk1可能作为姜黄素治疗肝癌的有效增敏靶点。     

沉默stathmin基因增强食管鳞癌细胞对紫杉醇敏感度的实验

目的 探讨沉默stathmin基因后,食管鳞癌细胞对紫杉醇敏感度的改变。方法 利用RNA干扰技术特异性沉默食管鳞癌KYSE150细胞的stathmin基因;实时定量PCR及蛋白质印迹法检测stathmin表达变化;CCK-8检测紫杉醇敏感度变化;流式细胞仪检测细胞周期变化;细胞分裂指数实验观察细胞有丝分裂改变。结果 特异性转染后,stathmin基因mRNA 和蛋白表达均受抑制。沉默stathmin基因后,KYSE150细胞对紫杉醇敏感度增强191.4倍;紫杉醇对特异性转染和未转染的KYSE150细胞半数抑制浓度分别为0.018 nM和3.445 nM。经紫杉醇（0.01 nM）处理72 h后,相比于未转染细胞,特异性转染的KYSE150细胞出现明显G₂/M周期阻滞[（55.4±6.2%）vs.（19.1±2.7%）, P=0.000], 有丝分裂指数减少[（5.6±0.8%）vs.（13.5±3.7%）, P=0.000]。结论 stathmin基因沉默通过细胞周期G₂/M阻滞增强食管鳞癌细胞对紫杉醇的化疗敏感度。     

柠檬酸钠联合三氧化二砷体外抗人胃癌细胞及其作用机制

目的探讨柠檬酸钠（Citrate）与三氧化二砷（As2O3）联合应用对胃癌细胞的凋亡及其作用机制。方法用Citrate（终浓度为5 mmol/L）和（或）不同浓度的As2O3（终浓度依次为5、10 μmol/L）处理体外传代培养的胃癌细胞株SGC-7901和BGC-803。流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化;RT-PCR法观察凋亡相关基因Bcl-2、Mcl-1表达的变化。结果Citrate与As₂O3联合应用相对于单用Citrate或As₂O3可显著提高诱导胃癌细胞凋亡率（P<0.05）;与空白组相比,用药后 G0／G₁期细胞比例下降,G₂/M期细胞比例上升,细胞周期阻滞于G₂/M期,抗凋亡基因Bcl-2、Mcl-1表达明显下降。结论Citrate与As2O3联合应用具有协同抗胃癌细胞的作用,其机制可能与细胞周期阻滞、增强诱导胃癌细胞凋亡以及调控凋亡相关基因的表达有关。     

马齿苋多糖对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的  探讨马齿苋多糖对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养胃癌SGC7901细胞，分别用不同浓度（25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL、300 μg/mL）马齿苋多糖作用胃癌SGC7901细胞，以生理盐水溶液为阴性对照组，5-氟尿嘧啶（5-FU）为阳性对照组，采用MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 不同浓度马齿苋多糖作用胃癌SGC7901细胞的增殖抑制率随着作用时间的延长和药物浓度的提高而增加。作用48 h后，200 μg/mL、300 μg/mL马齿苋多糖组的细胞增殖抑制率分别为（53.02±2.46）%、（57.20±2.14）%，与5-FU组细胞增殖抑制率（56.36±3.26）%相当（P＞0.05）；各浓度组的细胞凋亡率依次为31.92%、38.39%、40.45%、48.49%、55.71%，与阴性对照组比较均升高（均P＜0.05）；与5-FU组比较，低浓度（25 μg/mL、50 μg/mL、100μg/mL）组的细胞凋亡率降低（P＜0.05），而高浓度（300 μg/mL）组的细胞凋亡率升高（P＜0.05）。结论 马齿苋多糖可抑制胃癌SGC7901细胞增殖并诱导其凋亡。     

siRNA下调KLF8对胃癌细胞SGC7901增殖能力的影响

目的:探讨KLF8基因特异性siRNA对胃癌细胞株SGC7901增殖能力的影响.方法:通过免疫组织化学、Western blot法、RT-PCR检测胃癌组织标本和胃癌细胞株KLF8的表达;通过基因重组方法构建KLF8的siRNA慢病毒载体,并感染人SGC7901细胞,通过Western blot验证siRNA干扰效率.通过MTT、平板克隆、流式细胞仪检测细胞增殖、细胞周期和凋亡,观察其对胃癌细胞SGC7901增殖能力的影响.结果:KLF8在胃癌组织和细胞株中的表达高于癌旁组织和正常胃上皮细胞,下调KLF8能能够明显抑制SGC7901细胞的增殖,促进细胞G0/G1期阻滞和诱导细胞凋亡.结论:KLF8在促进胃癌细胞SGC7901增殖中发挥重要作用,为胃癌靶向治疗提供理论依据.     

舒林酸对胃癌细胞株SGC7901细胞周期调控及凋亡的影响

目的观察舒林酸影响胃癌细胞株SGC7901细胞周期分布,诱导细胞凋亡,探讨其作用机制方法采用MTT比色法观察舒林酸对胃癌SGC7901细胞增殖的影响,采用流式细胞仪检测舒林酸对细胞周期分布的影响,同时结合透射电子显微镜观察舒林酸诱导SGC901细胞凋亡的作用;免疫细胞化学方法观察舒林酸对胃癌细胞周期调控蛋白cyvclinE及P21WAF/CIPI的影响结果舒林酸可抑制胃癌SGC7901细胞的增殖,改变细胞周期分布,使G-0/G1期细胞比例增高,S期比例降低,并对SGC7901细胞有促凋亡作用.上述作用具有剂量和时间依赖性(P＜0.05).舒林酸还可上调P21WAF/CIPI蛋白表达.下调cyolinE蛋白表达.结论舒林酸可改变细胞周期分布,影响细胞周期调控蛋白表达,并可诱导SGC7901细胞凋亡,从而抑制细胞增殖.     

沉默MCM7基因介导AKT信号通路参与黑色素瘤细胞增殖及凋亡的实验

目的 探讨MCM7基因沉默介导AKT信号通路参与人皮肤黑色素瘤细胞的增殖及凋亡。方法 构建MCM7基因和沉默MCM7基因表达的慢病毒RNA（LV-shRNA-MCM7）的表达载体;将A375细胞分为Control组、Empty vector转染组（空载质粒转染组）、siRNA（LV-shRNA-MCM7）转染组、siRNA NC（LV-shRNA-MCM7 negative control）转染组;MTT法检测每组细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡情况;划痕实验法检测细胞迁移能力;qRT-PCR法测定细胞中MCM7基因、AKT信号通路相关基因、Cyclin D1及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、caspase-3的相对表达量;Western blot法测定蛋白相对表达量。结果 沉默MCM7后,黑色素瘤细胞中的MCM7基因、CyclinD1、Bcl-2、AKT信号通路相关基因AKT3的mRNA和蛋白相对表达量显著下调（P<0.05）;凋亡相关基因Bax、caspase-3的mRNA和蛋白表达量显著上调（P<0.05）;siRNA转染组凋亡率显著上升,G₀/G₁期细胞数目明显增多,S期细胞数目明显减少;细胞增殖、迁移能力显著下降（P<0.05）。结论 沉默MCM7基因抑制AKT信号通路的激活,从而抑制A375黑色素瘤细胞增殖、迁移,促进A375黑色素瘤细胞凋亡。     

缬沙坦对阿霉素所致心肌细胞损伤保护作用的初步研究

目的 研究缬沙坦（valsartan,VAT）对阿霉素（doxorubicin,DOX）所致心肌细胞损伤的保护作用。方法 采用不同浓度（0.5 μmol/L、1 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L）DOX处理H9C2心肌细胞建立DOX心肌细胞损伤模型。CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化。结果 与对照组比较,不同浓度（0.5 μmol/L、1 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L）DOX作用H9C2心肌细胞12 h和24 h,细胞存活率均随药物浓度增加而降低（P＜0.01）。其中1 μmol/L DOX作用24 h即可明显引起H9C2心肌细胞损伤,细胞存活率为（75.5±5.6）%,细胞凋亡率为（11.94±2.07）%,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;10 μmol/L的 VAT预处理H9C2心肌细胞24 h后可明显抑制1 μmol/L DOX引起的心肌毒性作用,与单用 DOX组比较,细胞存活率升高［（74.2±3.0）% vs （89.3±4.0）%,P＜0.01］、细胞凋亡率下降［（13.15±6.07）% vs （11.01±3.17）%,P＜0.01］、G₀/G₁期细胞所占比例明显减少［（69.21±2.03）%  vs （50.28±1.21）%,P＜0.05］。结论 VAT能抑制DOX所致的心肌细胞损伤,保护作用可能与其调控细胞凋亡有关。     

Chk1/2基因沉默对人胃癌MGC803细胞增殖及周期的影响

目的:观察Chk1/2基因沉默对人胃癌MGC803细胞增殖及周期的影响.方法:采用RNAi技术在MGC803细胞中分别将Chk1和Chk2基因沉默,运用蛋白质印变法验证,然后采用MTT实验、流式细胞术分析Chk1和Chk2基因沉默对人胃癌MGC803细胞增殖及周期的影响.结果:蛋白质印迹法结果显示,转染靶向Chk1和Chk2 siRNA 24 h的Chk1、Chk2蛋白相对灰度值分别为0.09±0.04和0.12±0.01,明显弱于未转染对照组(0.39±0.09)和脂质体转染组(0.38±0.17),P均<0.05,而未转染对照组和脂质体转染组之间比较差异无统计学意义,P=0.458.转染Chk1、Chk2 siRNA的MGC803细胞Chk1和Chk2蛋白表达分别下降85.0%和83.4%.MTT实验证明,Chk1蛋白表达缺失导致MGC803细胞增殖活性下降,其增殖抑制率为38.0%(t=26.797,P<0.05);Chk2蛋白表达缺失对细胞增殖无明显抑制作用(t=6.098,P>0.05).Chk1基因沉默后细胞周期在G0/G1期发生停滞,但并不引发凋亡,而Chk2基因沉默后对细胞周期影响不明显.结论:Chk1基因沉默可明显抑制人胃癌细胞增殖,且其抑制增殖作用与诱导G0/G1期阻滞有关.     

survivin基因沉默对宫颈癌XB1702细胞增殖和对吉非替尼敏感度的影响

目的研究survivin基因沉默对人宫颈癌XB1702细胞增殖和对化疗药物吉非替尼敏感度的影响。方法 设计合成survivin的siRNA序列,LipofectamineTM2000 转染入XB1702细胞。采用RT-PCR和Western blot检测survivin在干扰后mRNA和蛋白的表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期。通过MTT法和细胞克隆形成试验法观察survivin基因沉默后XB1702细胞对吉非替尼的敏感度。结果 Survivin基因沉默48 h后,XB1702细胞的survivin基因和蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞周期被阻滞在G₀/G₁期,S期细胞数减少;差异有统计学意义(P<0.05)。survivin基因沉默组细胞对吉非替尼的敏感度显著增强。结论 survivin特异性siRNA能显著沉默XB1702细胞survivin基因,抑制细胞增殖,并增强XB1702细胞对吉非替尼的敏感度。     

FEZ1蛋白和mRNA在胃癌组织中的表达及其意义

 目的 探讨肿瘤抑制基因FEZ1蛋白和mRNA在胃癌组织中的表达及其意义。 方法 采用免疫组织化学SP法及RT-PCR技术分别检测了36例胃癌及正常胃组织中FEZ1蛋白和mRNA的表达情况,分析其阳性表达与临床病理指标的关系。 结果 FEZ1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率(55.6%)明显低于正常胃组织(86.1%),并且其在胃癌组织中的阳性表达率与分化程度密切相关(P＜0.05)。FEZ1 mRNA在胃癌组织中的表达水平为（0.677±0.120）,显著低于正常胃组织中的表达水平（0.746±0.119）,并且其在胃癌组织中的表达水平也与分化程度和淋巴结转移之间存在显著相关性（P＜0.05)。 结论 FEZ1的表达可能与胃癌的发生发展有关。     

中药复方联合托烷司琼防治化疗后消化道反应的临床比较

 目的 观察托烷司琼联合中药不同复方防治化疗所致恶心、呕吐的疗效及其不良反应。 方法 采用随机对照方法,将84例肿瘤患者随机分为对照组 (A=21)、治疗组 (B=63),B组根据患者一般情况再分为胃寒组（B1=19）、胃热组（B2=16）、平证组（B3=28）,在化疗前,两组均予盐酸托烷司琼,在此基础上B1、B2、B3分别予丁香柿蒂汤、橘皮竹茹汤、小半夏加茯苓汤各300ml,分3次口服。在化疗后7天内观察化疗所致胃肠道反应和止呕药的不良反应。 结果 A组急性恶心的完全控制率为42.9%,B组为66.7%(P<0.05);A 组急性呕吐的完全控制率为61.9%,B组为85.7%(P<0.05)。A组延迟性恶心的完全控制率和有效控制率分别为19.0%和38.1%,B组为42.9%(P<0.05)和63.5%(P<0.05);A组延迟性呕吐的完全控制率和有效控制率分别为33.3%和52.4%,B组为56.7%(P<0.05)和84.1%(P<0.01)。两组患者对不同止吐方案耐受性良好,不良反应发生率无差别(P>0.05)。 结论 托烷司琼联合中药不同复方可以较好的防治化疗药引起的消化道不良反应,方案安全、有效、易行。     

康艾注射液联合化疗治疗晚期胃癌

目的观察康艾注射液联合TX方案化疗治疗晚期胃癌患者的疗效、毒性反应及对生活质量的影响。方法62例晚期胃癌患者随机分为康艾联合化疗组（治疗组）及单纯化疗组（对照组）,其中治疗组32例,对照组30例。评价两组患者近期疗效、毒性反应及生活质量。结果治疗组与对照组近期疗效分别为46.9％和43.3％（P>0.05）;治疗组血液及非血液毒性均低于对照组(P<0.05);治疗组生活质量明显改善(P<0.05)。结论康艾注射液联合化疗治疗晚期胃癌,能减轻化疗毒性及改善生活质量。     

c-IAP1和bax蛋白在甲状腺癌中的表达与细胞凋亡

目的探讨甲状腺癌中c-IAP1和bax蛋白的表达及其与细胞凋亡的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测甲状腺肿瘤细胞中c-IAP1和bax蛋白的表达,用TUNEL法测定肿瘤细胞凋亡指数（AI）。结果20例甲状腺腺瘤中c-IAP1和bax阳性表达率分别为25.0%、60.0%,AI为0.33±0.21;47例甲状腺癌中c-IAP1和bax阳性表达率分别为87.2%、89.3%,AI为0.91±0.37。C-IAP1、bax和AI在腺瘤和癌组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。在甲状腺癌中,c-IAP1阳性组AI低于阴性组,bax阳性组AI高于阴性组。结论c-IAP1和bax可能与甲状腺癌的发生发展密切相关;c-IAP1高表达抑制了甲状腺癌细胞凋亡,bax高表达促进了甲状腺癌细胞凋亡。     

三维适形放疗配合同期化疗治疗食管癌根治术后胸内淋巴结复发

目的 观察三维适形放疗（3 Dimensional Conformal Radiotherapy,3DCRT）加每周顺铂单药同期化疗（Concurrent Chemotherapy,CT）治疗食管癌根治术后胸内淋巴结复发的临床疗效和治疗反应。方法 98例食管鳞癌,根治术后未经放化疗而胸内淋巴结复发,随机分为两组,单纯3DCRT组：全程3DCRT,处方剂量为95%PTV60~70Gy/30~35Fx;3DCRT+CT组：放疗同时采用每周DDP（30mg/m²）单药方案同期化疗,观察两组疗效和治疗反应。结果 3DCRT+CT组近期有效率明显优于3DCRT组(91.8%vs. 73.5%,P=0.016）,1、3年生存率也优于3DCRT组(85.7% vs. 69.4%,P=0.032;46.9% vs. 28.6%,P=0.038),5年总生存率两组差异无统计学意义(14.3%vs. 8.2%,P=0.051)。3DCRT+CT组死于远处转移5例,低于3DCRT组的13例（P=0.036）。3DCRT+CT组急性上消化道和骨髓不良反应较3DCRT组重（P＜0.05）,而后期并发症两组没有区别（P＞0.05）。结论 采用3DCRT配合同期化疗治疗食管癌根治术后胸内淋巴结复发是一种有效可行的方式,可提高肿瘤局部控制率,降低远处转移率,有提高长期生存率的趋势。     

左金丸与反左金丸诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的比较

目的比较左金丸（Zuojin Pill,ZP）和反左金丸（Retro-zuojin Pill,RZP）对人胃癌细胞（SGC-7901）生长的活性抑制和凋亡诱导作用。方法采用MTT比色法观ZP与RZP对SGC-7901的生长抑制情况;流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析细胞凋亡率;Hoechst 33258染色观察细胞形态学变化。结果0.1mg/ml ZP与RZP分别作用SGC-7901细胞后,均能抑制细胞活性,且与时间呈依赖关系。0.1、0.5和1.0mg/ml RZP作用SGC-7901细胞48h,细胞凋亡率为(5.52±.54)％、(6.91±2.31)%、(8.50±1.02)%,0.1、0.5和1.0mg/ml的ZP对细胞的凋亡率分别为(11.60±1.24）％、(21.80±0.28）%、(36.40±1.59）%,与对照组(1.69±1.91)%比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。Hochest染色细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征。结论左金丸和反左金丸对SGC-7901生长都有明显的抑制作用并可诱导SGC-7901的凋亡,同一浓度的ZP和RZP作用SGC-7901相同时间,ZP的作用效果更为明显。     

肝动脉灌注化疗治疗胃癌同时多发性肝转移的疗效观察

 目的 评估肝动脉灌注化疗（HAI）联合姑息性胃切除术治疗胃癌同时多发性肝转移的疗效。 方法 按治疗方法不同将29例胃癌同时多发性肝转移患者分为HAI组和non-HAI组,回顾性分析HAI化疗的疗效。 结果 HAI化疗后CR4例,PR7例,有效率78.6%; HAI组的中位生存期为13.7月,non HAI组中位生存期为9.4月,经Log rank检验,差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 HAI化疗能有效控制胃癌同时多发性肝转移患者的转移灶,可作为此类患者的治疗选择。     

胃泌素和Ki-67在胃癌及其癌前病变中的表达

目的研究不同胃黏膜病变组织中胃泌素和Ki-67的表达,探讨胃泌素在胃癌发生中的作用。方法96例不同胃黏膜病变组织来自胃镜活检标本。采用免疫组织化学染色技术检测胃泌素和Ki-67表达。结果胃泌素在浅表性胃炎（CSG）、萎缩性胃炎（CAG）、肠化生（IM）、异型增生（Dy）和胃癌（GC）中表达的阳性率分别为58.8 %、30.0%、57.9 %、68.2%和77.8%,CAG组与GC组比较,差异有统计学意义(P<0.05);从CSG→GC,Ki 67增殖指数（PI）呈逐渐递增趋势,且从CAG→GC,胃泌素的表达与PI呈正相关（P<0.05）。结论胃泌素在萎缩性胃炎中呈低表达,在胃黏膜肠化生、异型增生及胃癌中,表达异常增高;胃泌素与胃癌的发生有关。     

三阴性乳腺癌和非三阴性乳腺癌临床特征及预后的比较分析

目的比较三阴性乳腺癌和非三阴性乳腺癌临床特征及预后。方法对我院2003年-2010年期间住院治疗的560例乳腺癌患者临床资料进行回顾性分析。比较三阴乳腺癌及非三阴乳腺癌的3年、5年生存率及临床特征的差别。结果三阴乳腺癌患者的3年生存率及5年生存率为85.5%和73.3%,显著低于非三阴乳腺癌患者（95.1%和88.0%,P<0.05）;三阴乳腺癌患者复发率和远行转移率显著高于对照组（P<0.05）;三阴乳腺癌患者发病年龄较轻,肿瘤体积较大,与非三阴乳腺癌患者相比差异有统计学意义(P<0.05);Cox多因素分析结果显示：是否为三阴性、肿瘤大小是影响患者预后的独立影响因素。结论三阴性乳腺癌有独特的临床病理特征,易发生复发及转移,预后差。     

术前CT检查在可手术非小细胞肺癌TNM分期中的应用评价

目的比较术前CT检查和术后病理诊断的非小细胞肺癌TNM分期结果,评价术前CT检查对非小细胞肺癌TNM分期的临床参考价值。方法112例临床确诊为NSCLC的患者行术前螺旋CT检查,临床分期为Ⅰ～ⅢA患者行手术切除加系统性淋巴结清扫,术前CT检查对TNM的分期结果定义为临床TNM（cTNM）,术后的病理分期定义为病理TNM（pTNM）。对比患者的cTNM与pTNM,评价术前CT检查确定非小细胞肺癌TNM分期的敏感度、特异性和准确率。结果（1）术前CT检查诊断T分期的敏感度和特异性分别为76.6％和85.7％,阳性预测值为92.2％,阴性预测值为62.5％,准确率为79.5％。一致性检验有统计学意义（Kappa=0.658,P<0.05）;（2）术前CT检查诊断纵隔淋巴结转移的敏感度和特异性分别为72.9％和84.9％,阳性预测值为84.3％,阴性预测值为73.8％,准确率为78.6％,一致性检验有统计学意义（Kappa=0.667,P<0.05）。螺旋CT检查诊断 4R、5、6 组纵隔淋巴结转移的准确率和特异性偏低,其中4R组淋巴结转移的假阳性和假阴性较高。结论术前CT检查对非小细胞肺癌TNM分期有重要的临床参考价值,但存在假阳性和假阴性,应结合其他检查手段如PET-CT或纵隔镜等提高术前TNM分期准确率。