紫杉醇对卵巢癌细胞端粒酶活性影响的研究

目的观察紫杉醇对卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性的影响,以了解紫杉醇抗癌的可能机理.方法 1～100nmol/L紫杉醇处理HO-8910细胞后,用MTT法测定卵巢癌细胞的生长抑制率,TRAP-银染法测定端粒酶活性变化.结果 1～100nmol/L紫杉醇对卵巢癌细胞有明显抑制作用,呈时间依赖性及剂量依赖性,紫杉醇处理卵巢癌细胞后,对端粒酶活性的检测结果显示,端粒酶活性下调.结论紫杉醇对卵巢癌细胞具有明显抑制作用,其下调端粒酶活性可能是紫杉醇抗癌作用的重要机理之一.     

逆癌酮诱导人肺癌细胞凋亡的体外研究

目的:研究逆癌酮诱导A549人肺腺癌细胞系和PLA-801D人肺巨细胞癌细胞系凋亡及其抗癌作用机理.方法:应用体外细胞培养技术,以逆癌酮作用于肺癌细胞,绘制生长曲线,作克隆形成实验,观察其对细胞增殖的影响,并进行光镜和流式细胞术的观察和分析.结果:应用逆癌酮后细胞生长明显受抑,克隆形成能力降低,流式细胞分析表明,应用逆癌酮后,肺癌细胞凋亡指数显著增加(P＜0.01),细胞被阻滞于G0/G1期(P＜0.01),其bax、Fas的表达被上调;bcl-2的表达被下调(P＜0.01);c-myc、TGFβR 1的表达也被上调(P＜0.01).结论:逆癌酮对A549细胞和PLA-801D细胞有明显的细胞毒,并通过上调bax、Fas的表达,下调bcl-2的表达诱导细胞凋亡.     

长春瑞滨对人肺腺癌Anip973细胞凋亡和端粒酶表达的影响

目的 探讨长春瑞滨(NVB)对人肺腺癌Anip973细胞的凋亡、端粒酶活性以及人端粒酶逆转录酶mRNA(hTERT mRNA)表达的影响.方法 以不同浓度的NVB作用于Anip973细胞,在不同时间内收集细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察NVB对Anip973细胞的生长抑制作用;通过流式细胞术观察Anip973细胞凋亡率;用倒置显微镜和电镜观察细胞形态学变化;应用以聚合酶链反应(PCR)为基础的端粒重复序列扩增(TRAP-PCR)银染法检测端粒酶活性;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTERT mRNA表达.结果 不同浓度的NVB可诱导Anip973细胞凋亡,而且可降低Anip973细胞中端粒酶活性和hTERT mRNA的表达,并呈时间-剂量依赖性.0.08μg/ml NVB作用Anip973细胞24 h,细胞增殖被抑制,细胞凋亡率为(7.37±0.35)%,hTERT mRNA表达为57.01±1.71,与对照组差异均有统计学意义(P＜0.01);端粒酶活性值为6.36±0.06,与对照组差异无统计学意义(P＞0.05);hTERT mRNA表达的改变比端粒酶活性更敏感.0.4μg/ml NVB组和2.0μg/mlNVB组各时间点的细胞凋亡率、端粒酶活性和hTERT mRNA表达与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).2.0μg/ml NVB作用Anip973细胞72 h时,端粒酶活性为1.36±0.27,而细胞凋亡率为(74.87±1.88)%,表明细胞凋亡率的增加与细胞hTERT mRNA表达呈负相关(r=-0.96046,P＜0.01).结论 NVB的作用机制与端粒酶有关,诱导凋亡是其发挥抗癌作用的机制之一.检测端粒酶活性和hTERT mRNA的表达,有助于判定NVB诱导肺癌细胞凋亡的敏感性.     

白花蛇舌草对U14宫颈癌抗肿瘤作用的实验研究

目的 探讨白花蛇舌草(HD)对U14宫颈癌细胞移植瘤的抑制作用及可能的分子生物学机制.方法 建立裸鼠U14宫颈癌模型,用不同剂量白花蛇舌草进行治疗,并以顺铂治疗组为阳性对照,通过HE染色观察肿瘤组织病理变化,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡情况,采用PCR-TRAR-ELISA方法定量检测细胞端粒酶活性水平.结果 HD对U14宫颈癌细胞移植瘤生长有明显抑制作用,并可诱导U14细胞凋亡,经中、高剂量的HD治疗后U14细胞端粒酶活性明显下降,与阴性对照组比较差异显著(P＜0.01),与阳性对照组比较无明显差异(p＞0.05).结论 一定剂量HD具有诱导U14宫颈癌细胞凋亡和抑制肿瘤细胞端粒酶活性的作用,这可能是其抑制肿瘤生长的重要分子生物学机制.     

端粒酶反义寡核苷酸对体外培养ACC-M细胞的影响

目的　研究端粒酶反义寡核苷酸 (AS ODN)对体外培养人涎腺高肺转移性腺样囊性癌 (ACC M)细胞的影响。方法　采用细胞形态学观察及PCR TRAP端粒酶活性检测法来观察其形态学和端粒酶活性的变化。结果　反义寡核苷酸在转染ACC M细胞后 72小时内 ,其形态学改变不明显 ,其端粒酶活性明显受到抑制 (P <0 .0 1)。结论　AS ODN可显著抑制ACC M的端粒酶活性 ,提示AS ODN可抑制ACC M细胞的生长 ,抑制效果可能与AS ODN的剂量、转染效率等因素有关。     

端粒酶抑制剂对舌癌细胞株端粒酶活性和细胞周期的作用

目的研究舌癌细胞经端粒酶抑制剂(3′-叠氮-3′-脱氧胸腺核苷,AZT)处理后端粒酶活性和细胞周期的变化情况.方法采用端粒重复序列扩增(telomeric repeat amplification protocol,TRAP)-PCR-ELISA方法检测舌癌细胞系Tca8113经AZT作用前后端粒酶活性的变化,流式细胞仪分析细胞周期变化.结果AZT可显著抑制Tca8113细胞端粒酶活性,而且这种抑制效应有浓度依赖性(经0.3、0.6、1.0、1.5 mol/L的AZT处理12小时的Tca8113端粒酶活性分别为0.69±0.03、0.61±0.08、0.53±0.11、0.50±0.02,未经AZT处理的Tca8113细胞端粒酶活性为0.76±0.06).流式细胞仪结果显示经AZT处理的细胞G2/M期含量显著增高(62.8%),未处理组为19.7%(P＜0.05).结论AZT可以明显抑制舌癌细胞的端粒酶活性,并使肿瘤细胞停滞在G2/M期,有抗肿瘤的作用.     

DC-CIK细胞抗鼻咽癌细胞的作用

目的:研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与树突状细胞(DC)共培养后DC-CIK细胞抗鼻咽癌细胞的作用.方法:正常人外周血单个核细胞诱导DC和CIK细胞,加入CNE1或CNE2细胞冻融液,将DC与CIK共培养,以CIK细胞单独培养为对照.用MTT法测定杀伤活性.结果:DC-CIK细胞杀伤鼻咽癌细胞活性高于CIK细胞(P＜0.05);杀伤CNE1细胞活性高于CNE2细胞(P＜0.05).结论:DC-CIK细胞抗鼻咽癌细胞的作用显著,为DC-CIK细胞免疫治疗提供了实验和理论依据.     

反义端粒酶PNA对肺癌细胞株生长的体外抑制作用

目的　探讨反义端粒酶肽核酸 (PNA)片段对肺癌细胞株端粒酶活性及细胞株生长的抑制作用。方法　将人工合成的端粒酶反义PNA片段 ,应用脂质体转染法将反义端粒酶序列导入肺腺癌细胞株A5 49及小细胞癌细胞株NCI H44 6中 ,采用MTT法检测活细胞数 ,采用RT PCR ELLISA法检测端粒酶活性。结果　转染 72h后 ,A5 49、NCI H 44 6细胞株端粒酶活性 (A45 0值 )分别由 0 .5 82± 0 .0 3 9和 0 .5 71± 0 .0 43降低至 0 .2 94± 0 .0 48(P <0 .0 1)和 0 .2 76± 0 .0 5 1(P <0 .0 1) ;而两细胞株的活细胞数 (A5 80值 )分别由 0 .485± 0 .0 0 9和 0 .5 13± 0 .0 15降低至 0 .191± 0 .0 2 7(P <0 .0 1)和 0 .13 8± 0 .0 46(P <0 .0 1) ,细胞生长受到显著抑制。结论　反义端粒酶PNA片段具有抑制肺癌细胞株端粒酶活性的作用 ,并可抑制肺癌细胞的生长     

Blood telomerase activity and its correlativity with non-small cell lung carcinoma

From the viewpoint of oncology, an importantcharacteristic of cancer is that cell schizogenesisbecomes out of control[1,2]. Recently, lots of researchesfocus on telomerase. The activation of telomerase isessential for cell to get athanasia, which is the key step incancer pathogenesis, while the normal cell lacks suchenzyme activity[3-5]. Thus, telomerase theory for cancerpathogenesis occurred. Lung cancer is a malignant disease with highincidence, which increases rapidly with theindustrializat…     

miR-200a抑制YAP1基因表达对肺癌细胞增殖的影响

  目的   研究微小RNA-200a（miR-200a）对肺癌细胞增殖的影响,并探讨其分子机制。   方法   采用Real-time PCR检测15例非小细胞肺癌组织和对应癌旁组织、人肺癌细胞株（A549、NCI-H520、SK-MES-1）及人正常肺支气管上皮细胞株16HBE中miR-200a的表达水平。用CCK-8法检测miR-200a对A549肺癌细胞增殖活性的影响。通过生物信息学方法预测miR-200a可能的靶基因,双荧光素酶报告基因实验结合Real-time PCR和Western blot验证miR-200a对靶基因YAP1的调控作用。CCK-8法检测下调靶基因YAP1对A549肺癌细胞株增殖活性的影响。   结果   miR-200a在非小细胞肺癌组织和肺癌细胞系中表达明显降低（P < 0.01）。上调miR-200a表达后明显抑制A549肺癌细胞的增殖活力（P < 0.01）。双荧光素酶报告基因显示miR-200a可以直接作用于靶基因YAP1的3'-UTR区域抑制荧光素酶活性（P < 0.01）,Real-time PCR和Western blot检测显示上调miR-200a的表达能够明显下调A549肺癌细胞YAP1 mRNA和蛋白的表达水平（P < 0.01）。CCK-8法显示下调YAP1的表达能够明显抑制A549肺癌细胞的增殖活性（P < 0.01）。   结论   miR-200a通过靶向作用于YAP1基因来抑制肺癌细胞的增殖,从而在肺癌中发挥抑癌基因的功能。      

榄香烯乳对人肺腺癌 A549 细胞株凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株凋亡蛋白表达的影响.方法:体外培养人肺腺癌A549细胞株,四甲基偶氮唑蓝比色试验法(MTT法)测定不同浓度榄香烯乳在不同作用时间下对A549细胞株的生长抑制作用.IC软件计算10％的细胞抑制浓度(IC10).免疫细胞化学染色观察榄香烯乳作用24h后A549细胞的Bcl-2、Bax、Survivin及VEGF蛋白的表达变化.结果:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株增殖具有明显抑制作用,呈时间和剂量依赖性.榄香烯乳作用24h后IC10为43.49μg/ml,Bax蛋白表达增加,细胞质着色增强;Bcl-2蛋白表达下降,细胞质着色减弱;增殖蛋白Survivin和VEGF的表达下降,且具有药物浓度相关性.结论:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株有明显的抑制作用,榄香烯乳可上调凋亡相关蛋白表达、诱导凋亡.     

NDRG2对A549肺癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)对于肺癌细胞系增殖的抑制作用。方法:将NDRG2基因转染进肺癌细胞系A549,采用G418筛选出稳定高表达NDRG2的亚克隆细胞系A549/NDRG2-flag并将仅转染载体的A549/pcDNA3.1(+)作为阴性对照。Western blot检测NDRG2在转染细胞中的表达水平。MTT、平板克隆形成试验检测转染前后细胞增殖作用的差异,流式细胞仪检测转染后细胞的周期分布状态。结果:成功构建高表达NDRG2的亚克隆细胞系A549/NDRG2-flag。证实了NDRG2的高表达能够抑制肺癌细胞系的增殖(P<0.01),使肺癌细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:NDRG2高表达后能够有效抑制肺癌细胞系A549增殖并阻滞细胞周期滞留在G0/G1期。     

Rb94对人肺腺癌细胞系A549放射增敏作用的实验研究

目的 构建人视网膜母细胞瘤基因(Rb94)真核表达载体,观察其对人肺腺癌细胞系A549的放射增敏作用并探讨其机制.方法 构建重组表达质粒pIPES-Rb94,经脂质体转染A549细胞、G418筛选获得稳定转染的细胞系.细胞计数法绘制生长曲线、计算细胞倍增时间;实时RT-PCR检测hTERT、Bcl-2mRNA的表达;成克隆实验检测pIRES-Rb94对A549细胞放射敏感性影响,计算放射增敏比(SER);流式细胞仪分析细胞周期.结果 成功构建pIRES-Rb94质粒,转染A549细胞后获得稳定转染细胞系pIRES-Rb94-A549.与A549细胞相比,pIRES-Rb94-A549细胞倍增时间延长(31.5h:39.5 h;t=5.15,P<0.01);hTERT、Bcl-2 mRNA表达下降(0.02:1.00;t=18.99,P<0.01;0.01:1.00;t=13.73,P<0.01);G2+M期细胞增加(35.91%:4.53%;t=36.78,P=0.00),G0+G1期和S期细胞减少(47.02%:74.07%;t=11.71,P=0.00和17.07%:22.32%;t=2.30,P<0.05);由D0值计算的SER为1.30.结论 Rb94对A549细胞具有明显放射增敏作用,其机制可能是G2+M期阻滞作用以及下调hTERT、Bcl-2 mRNA表达,并可能通过调节细胞周期来影响细胞增殖.     

siRNA抑制肺腺癌细胞DNA-DPKCS表达与放射敏感性关系研究

目的 探讨稳定表达的小干扰RNA(siRNA)抑制DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-DPKCS)表达对非小细胞肺癌细胞增殖、细胞周期及放射敏感性的影响.方法 构建DNA-DPKCS-siRNA莺组质粒转染肺腺癌细胞A549.流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,成克隆实验测定细胞存活曲线.结果 建立了与A549细胞同源的DNA-DPKCS低表达细胞系549pRNA-DNA-DPKCS、阴性对照549pRNA-C细胞、空白549pSUPER细胞.与A549细胞相比549pRNA-DNA-DPKCS细胞的DNA-DPKCS mRNA(0.110:1.000;F=80.55,P<0.01)、蛋白表达水平(0.870:2.967;F=63.96,P<0.01)以及DNA-DPKCS活性(0.004:0.266;F=51.62,P<0.01)均显著降低.549pRNA-DNA-DPKCS细胞2 Gy存活分数、平均致死剂量、亚致死性损伤剂量均较A549细胞明显降低(0.25:0.76;F=996.86,P<0.01;1.42:1.62;F=17.41,P<0.05;0.06:1.00;F=68.92,P<0.01).DNA-DPKCS表达受抑后549pRNA-DNA-DPKCS细胞较A549细胞S期和G_2期细胞比例明显减少(24.5%:35.5%;F=4.83,P<0.05和10.7%:11.0%;F=32.04,P<0.01).结论 抑制DNA-DPKCS表达可提高肺腺癌细胞A549的放射敏感性,同时调控细胞周期时相分布.     

托瑞米芬协同顺铂对人肺癌细胞株A549的影响

目的：研究托瑞米芬（TOR）对人肺腺癌细胞系A549的毒性作用及其与顺铂（DDP）联用的协同效应,探讨肺癌综合治疗的方向。方法：用MTT显色法检测TOR及与DDP联用后对A549细胞的毒性作用,测定其吸光度（A）值。用流式细胞仪检测细胞DNA含量,Western blot法检测p21蛋白表达。结果：TOR能直接抑制A549细胞的生长,≥5μmol/L的TOR可明显增强DDP的细胞毒性作用。TOR可加强DDP对S期、G2期及M期细胞的作用,且DDP＋TOR后p21蛋白表达增加。结论：≥5μmol/L的TOR与DDP联用对A549细胞具有显著的协同抗肿瘤效应。     

THBS2在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响

目的:研究血小板反应蛋白2（thrombospondin 2,THBS2）在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞H1299和A549迁移能力、侵袭能力、上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响,并探究分子机制。方法:运用TIMER和GEPIA数据库分析THBS2 mRNA在泛肿瘤和肺腺癌组织中的表达,利用UALCAN数据库分析THBS2 mRNA在I-IV期肺腺癌组织中的表达差异,通过HPA数据库检测THBS2蛋白在肺腺癌组织中的表达情况。通过免疫印迹实验（Western blot）检测THBS2在人正常支气管上皮细胞（BEAS-2B）和肺腺癌细胞（H1299、A549）中的表达情况。应用质粒转染技术在肺腺癌细胞H1299和A549中分别过表达和敲低THBS2。细胞划痕实验和侵袭实验（Transwell）检测细胞迁移和侵袭能力。Western blot验证THBS2过表达和敲低效率,同时检测EMT相关蛋白和MMP2的表达水平。结果:TIMER数据库与GEPIA数据库检索结果显示THBS2 mRNA在肺腺癌组织中高表达（P＜0.001）。UALCAN数据库分析证明,与正常肺组织相比,THBS2 mRNA在I-IV期肺腺癌组织中均显著表达（P＜0.001）。HPA数据库结果显示,THBS2蛋白在肺腺癌组织中呈现中高等强度表达。细胞划痕实验、Transwell实验和Western blot结果表明,THBS2在人正常支气管上皮细胞和肺腺癌细胞中的表达有显著差异（P＜0.01）;过表达THBS2可增加肺腺癌细胞H1299和A549迁移与侵袭能力（P＜0.01）,EMT相关蛋白E-cadherin表达水平减少,而N-cadherin和Vimentin表达水平增加（P＜0.01）;相反的,敲低THBS2可抑制肺腺癌细胞H1299和A549迁移与侵袭能力（P＜0.01）,EMT相关蛋白E-cadherin表达水平增加,而N-cadherin和Vimentin表达水平减少（P＜0.01）。结论:THBS2在肺腺癌组织中高表达;THBS2在肺腺癌细胞（H1299、A549）中的表达均显著高于人正常支气管上皮细胞（BEAS-2B）;THBS2在肺腺癌细胞H1299和A549中的过表达和敲低影响迁移、侵袭和EMT的过程,可作为肺腺癌治疗的新型潜在靶点。