miRNA-125b靶向p16促进套细胞淋巴瘤细胞增殖和侵袭的机制探讨

目的:探讨miRNA-125b抑制靶基因p16对套细胞淋巴瘤细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:选择人源套细胞淋巴瘤细胞系JeKo-1作为实验对象。实验共分为五组:空白对照组（不转染）、miRNA-125b阴性对照组（转染miRNA-125b inhibitor-NC）、miRNA-125b抑制剂组（转染miRNA-125b inhibitor）、p16 siRNA阴性对照组（转染p16 siRNA-NC）、p16 siRNA组（转染p16 siRNA）。于转染后48 h收集细胞。采用RT-PCR法检测各组JeKo-1细胞miRNA-125b的表达水平；采用双荧光素酶靶标实验验证miRNA-125b与p16基因的靶向关系；采用Western Blot和RT-PCR法检测各组细胞p16基因的表达水平；采用MTS法检测各组细胞增殖水平；采用流式细胞术检测各组细胞周期分布；采用Transwell侵袭实验检测各组细胞侵袭能力。结果:与空白对照组、miRNA-125b inhibitor-NC组相比，miRNA-125b inhibitor组 miRNA-125b表达水平显著降低,而p16表达水平显著升高,细胞增殖受到抑制、JeKo-1细胞穿膜细胞数显著减少，细胞G0/G1期比例显著增加,而S期比例逐渐减少（P＜0.05）；与p16 siRNA-NC组相比，p16 siRNA组p16表达水平明显被抑制，细胞增殖能力及细胞侵袭能力均显著升高，细胞G0/G1期比例显著降低,而S期、G2/M期比例升高，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因实验分析结果显示，miRNA-125b与p16基因3' UTR端存在互补结合位点，miRNA-125b和p16能够靶向结合，p16基因是miRNA-125b的靶基因。结论:miRNA-125b能够通过抑制靶基因p16促进套细胞淋巴瘤细胞的增殖和侵袭能力，可通过抑制miRNA-125b，促进p16基因的表达，使套细胞淋巴瘤细胞阻滞于G0/G1期，抑制其增殖转化。     

miRNA-145抑制肺癌细胞系A549迁移侵袭的研究

摘 要：［目的］ 观察miRNA-145对肺癌细胞系A549迁移、侵袭和克隆形成的影响,探讨其潜在的应用价值。［方法］ 采用miRNA-145过表达的慢病毒载体上调A549细胞中miRNA-145的表达量,Transwell迁移及侵袭实验分析miRNA-145表达上调前后A549细胞的体外迁移、侵袭能力,平板克隆形成实验分析miRNA-145表达上调前后A549细胞的体外增殖能力。［结果］ RT-PCR结果表明,侵染了miRNA-145过表达载体的A549细胞中miRNA-145水平明显高于阴性对照组及空白对照组,差异有统计学意义（P<0.01）;Transwell迁移和侵袭实验结果表明,过表达miRNA-145的A549细胞过膜数少于阴性对照及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01);平板克隆形成实验结果表明,过表达miRNA-145的A549细胞平板克隆形成能力明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。［结论］ miRNA-145的过表达能够抑制肺癌细胞系A549的迁移、侵袭和克隆形成,由此提示miRNA-145有可能成为肺癌治疗的潜在靶点。     

上调miRNA-145对肺癌细胞系A549增殖和凋亡的影响

目的探讨miRNA-145对肺癌细胞系A549增殖和凋亡能力的影响。方法采用实对荧光定量聚分酶链反应检测A549细胞中miRNA-145的表达,并将miRNA-145表达量上调(实验组)与空白对照组和阴性对照组比较,采用CCK8法检测并对比A549细胞增殖的改变。采用流式细胞仪检测并对比A549细胞周期以及凋亡的改变。结果 RT-PCR结果表明,侵染了miRNA-145过表达载体的A549细胞中miRNA-145水平明显高于阴性对照组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01);上调A549细胞中miRNA-145的表达量,可使A549细胞出现S期阻滞,凋亡增加、增殖减缓(P<0.05)。结论过表达miRNA-145能够抑制A549细胞的增殖并诱导A549细胞的凋亡,有可能为肺癌分子靶向治疗调控效应靶点作进一步探索研究。     

MicroRNA-183抑制结直肠癌肿瘤细胞的增殖、侵袭及迁移

目的:探讨microRNA183 （miRNA-183）对结直肠癌肿瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法:使用慢病毒技术,分别转染HT29细胞株,建立稳定过表达细胞株miRNA-183 mimics,抑制miRNA-183表达的稳定细胞株miRNA-183 inhibitor以及阴性对照组negative control。qRT-PCR检测各组细胞miRNA-183的表达,Western blot检测miRNA-183下游靶基因PDCD4蛋白水平表达变化,CCK8增殖实验检测各组细胞的增殖情况,同时以划痕实验和Transwell实验分析转染miRNA-183 mimics和miRNA-183 inhibitor对HT29细胞迁移、侵袭能力的影响。结果:与阴性对照组相比,miRNA-183 mimics组细胞增殖速度明显下降,其迁移和侵袭能力也显著降低,差异均具有统计学意义（P<0.05）;miRNA-183下游靶基因PDCD4蛋白水平表达明显增加。结论:miRNA-183可有效地抑制结直肠癌肿瘤细胞的增殖、侵袭及迁移。     

CD147对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN,EMP,又称CD147)对肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其可能的机制。方法:将CD147过表达慢病毒、短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)干扰CD147表达的慢病毒及阴性对照(negative control,NC)慢病毒分别感染肺癌A549细胞,获得CD147稳定过表达的A549EMP细胞、稳定干扰CD147表达的A549sh EMP细胞和阴性对照A549NC细胞。应用CCK-8(cell counting kit-8)法、细胞划痕实验和Transwell小室法分别检测A549EMP、A549sh EMP和A549NC细胞的增殖、迁移及侵袭能力;蛋白质印迹法检测A549EMP、A549sh EMP和A549NC细胞中β-catenin的核表达情况。结果:A549EMP细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显高于未进行慢病毒感染的空白对照组A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05),而A549sh EMP细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显低于空白对照组A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05)。A549EMP细胞β-catenin的核表达水平明显高于空白对照组A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05),而A549sh EMP细胞β-catenin的核表达水平明显低于空白对照A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05)。结论:CD147可增强肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与β-catenin的激活有关。     

上调miRNA-145表达对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响

目的探讨上调miRNA-145表达对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响。方法收集人正常肺上皮细胞株BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞株A549,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两种细胞中miRNA-145的相对表达量。以Lipofectamine^TM 2000转染试剂将miRNA-145模拟物和阴性对照质粒转染至A549细胞中,分别作为miRNA-145组和NC组,以只加入转染试剂的A549细胞作为对照组,RT-PCR检测各组细胞中miRNA-145的相对表达量。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞术(FCM)检测上调miRNA-145表达对细胞增殖和凋亡的影响。给予不同放射剂量X线照射后采用克隆形成实验检测细胞的放射敏感性。结果A549细胞中miRNA-145的相对表达量明显低于正常肺上皮BEAS-2B细胞(P<0.01);转染后,miRNA-145组细胞中miRNA-145的相对表达量高于对照组(P<0.05);转染后,NC组与对照组细胞中miRNA-145的相对表达量比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);miRNA-145组细胞转染24、48、72 h的光密度(OD)值均低于对照组(P<0.05);转染48 h后,miRNA-145组细胞的凋亡率高于对照组(P<0.05);2、4、6、8 Gy剂量的X线照射后miRNA-145组细胞的存活分数(SF)均低于对照组,放射增敏比(SER)为1.491。结论与正常肺上皮BEAS-2B细胞比较,A549细胞中miRNA-145的相对表达量较低,上调其表达能够抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡,增强放射敏感性。     

siRNA沉默MMP-2基因对肺癌A549细胞侵袭能力的影响

目的 探讨siRNA靶向抑制MMP-2基因的表达对肺癌A549细胞侵袭的抑制作用.方法 化学合成一对针对MMP-2基因的干扰序列siRNA和一对阴性对照的无义序列siRNA-N,转染肺癌A549细胞,同时以未转染A549细胞作为空白对照.于转染后48 h,分别采用半定量RT-PCR技术和Western blotting法从mRNA和蛋白水平检测干扰效果;采用Boyden侵袭小室检测转染MMP-2siRNA后对A549细胞侵袭能力的影响.结果 与空白对照组和转染阴性对照siRNA-N组相比,A549细胞转染MMP-2 siRNA 48 h后,MMP-2基因转录水平和蛋白水平的表达均受到抑制.转染MMP-2 siRNA组细胞穿膜数与空白对照组和转染阴性对照siRNA-N组相比明显下降.结论 靶向MMP-2的siRNA不仅能特异性抑制MMP-2 mRNA和蛋白的表达,且能有效抑制A549肺癌细胞的侵袭,为肺癌的基因治疗提供了有效的靶点.     

基因通过 NF-κB途径抑制非小细胞肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力

目的:研究桥接整合因子1(bridging intergrator-1,Bin1)基因过表达对非小细胞肺癌细胞株A549细胞迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨其作用机制.方法:通过基因转染技术,利用阳离子脂质体将含有人全长Bin1基因序列的真核表达质粒CMV-MCS-GFP-SV40-Neomycin-Bin1转染到A549细胞株,分别设置空白对照组及空质粒转染组,利用RT-PCR和West-em blotting分别检测各处理组细胞中Bin1基因和蛋白表达水平.通过细胞划痕实验、Transwell侵袭实验分别检测Bin1过表达对A549细胞迁移、侵袭能力的影响;Western blotting实验检测Bin1过表达对A549细胞内NF-κB磷酸化水平和迁移相关蛋白E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白、MMP-9表达水平的影响.结果:与空白对照组和空质粒转染组相比,Bin1转染组A549细胞中Bin1基因和蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05);Bin1转染组细胞迁移、侵袭能力均较空白质粒组和空白对照组明显下降[穿膜细胞数:(50.50±3.15) vs (124.00±4.25),(130.00±4.37)个;均P＜0.05];与空白转染组和空白对照组相比,Bin1转染组细胞内NF-κB表达水平明显上调(P＜0.05)而p-NF-κB表达明显下调(P＜0.05),N-钙黏着蛋白、MPP-9明显下调(P＜0.05),E-钙黏着蛋白明显上调(P＜0.05).结论:Bin1过表达可以抑制A549细胞的迁移及侵袭能力,其机制可能与NF-κB途径的失活及细胞迁移侵袭相关蛋白表达变化有关.     

慢病毒介导shRNA沉默QKI-6基因对人肺腺癌A549细胞生物学行为的影响

目的:探讨慢病毒介导shRNA沉默QKI-6基因对人肺腺癌A549细胞QKI-6基因表达、细胞周期、克隆形成和细胞迁移的影响。方法:构建QKI-6-shRNA慢病毒表达载体,并用其转染A549细胞,阴性对照组转染无意义序列,空白对照组为A549细胞。运用RT-PCR及Western blot检测各组细胞QKI-6 mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期,琼脂成瘤实验检测细胞克隆形成能力,Transwell实验检测细胞迁移能力。结果:实验组QKI-6 mRNA及蛋白表达均较阴性对照组及空白对照组降低。实验组较阴性对照组及空白对照组,G0/G1期细胞比例降低（P<0.05）,S期细胞比例增高（P<0.05）。琼脂成瘤实验显示,实验组与空白对照组及阴性对照组比较,克隆形成率明显提高（P<0.05）。细胞迁移实验结果显示,实验组与空白对照组及阴性对照组比较,细胞迁移数量明显增多（P<0.05）。结论:QKI-6能够抑制肺腺癌细胞生长、克隆形成及迁移,QKI-6有望成为肺癌治疗的新靶点。     

上调miRNA-506抑制直肠癌Colo320细胞的增殖和侵袭

目的:探讨微小核糖核酸(miRNA)-506对人直肠癌Colo320细胞增殖和侵袭的影响.方法:构建miRNA-506 模拟物,应用脂质体法转染直肠癌细胞株Colo320.采用逆转录酶链聚合反应(qRT-PCR)法检测各组细胞中miRNA-506的表达水平,CCK-8法检测细胞的增殖情况.Transwell小室检测细胞的侵袭能力.Western blot检测MMP-9的表达.结果:qRT-PCR结果显示,miRNA-506转染组miRNA-506的表达量明显高于空白细胞对照组和阴性对照组(P均<0.05).CCK-8结果显示,上调miRNA-506 抑制Colo320细胞增殖.Transwell结果显示,转染miRNA-506后Colo320细胞的侵袭数目明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05).miRNA-506可以抑制Colo320细胞MMP-9蛋白的表达.结论:上调miRNA-506能抑制人直肠癌Colo320细胞的增殖和侵袭能力.     

LncRNA HOTAIR通过Wnt/β-Catenin信号通路调控NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭

目的探究长链非编码RNA HOTAIR对非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭的影响及其分子作用机制。方法采用qRT-PCR法检测NSCLC细胞系A549、H460、H1650中HOTAIR的相对表达。转染干扰序列siRNNA敲降HOTAIR基因表达,验证干扰效率。采用CCk-8法、Transwell实验分别检测敲降HOTAIR表达对A549、H460、H1650细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。通过Western blot检测敲降HOTAIR表达后Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白表达情况。结果与正常HBE细胞对比,NSCLC细胞系A549、H1650、H460中HOTAIR高表达(P<0.01);敲降HOTAIR表达后,三组细胞系中HOTAIR相对表达水平均较阴性对照组显著降低(P<0.05)。与阴性对照组相比,敲降HOTAIR表达后A549、H1650、H460细胞在各转染时间点的增殖能力受到不同程度抑制(P<0.05),细胞侵袭率、迁移率显著降低(P<0.01);三组细胞系中Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白β-catenin、c-Myc表达水平较阴性对照组和空白对照组显著下调(P<0.05)。结论LncRNA HOTAIR在NSCLC细胞系中高表达,敲降细胞内HOTAIR表达可抑制NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭,其机制可能与Wnt/β-Catenin信号通路活性受抑制有关。     

miRNA-21调节PTEN表达影响宫颈癌HeLa细胞的生物学行为

目的： 探讨抑制miRNA-21表达对宫颈癌HeLa细胞中PTEN的表达及细胞增殖、侵袭能力的影响。 方 法： 以脂质体介导anti-miRNA-21（anti-miRNA-21转染组）、anti-miRNA-21-neg（阴性对照组）转染HeLa细胞,同时设空白对照组（未转染组）。应用Real-time PCR技术检测3组细胞中miRNA-21的表达,Western blotting 检测3组细胞中PTEN的表达,MTT法检测3组细胞的增殖能力,Transwell实验检测3组细胞的侵袭能力。结果： Anti-miR-21转染组与阴性对照组相比,HeLa细胞中miRNA-21的表达量明显降低\[（0.187±0.027）vs （0.861±0.144）,P＜0.01\]。转染 anti-miRNA-21 96 h后,HeLa细胞增殖抑制率明显升高\[（49.44±1.97）% vs （4.36±0.64）%,P＜0.01\]。Anti-miR-21转染组与阴性、空白对照相比, Hela细胞的侵袭细胞数明显减少\[（29.4±2.1）vs （40.4±2.9）、（41.2±2.6）个,均P＜0.01\];PTEN蛋白的表达则明显增加\[（1766.00±35.56）vs（726.00±5.48）、（729.25±17.73）,均P<0.01\]。 结论： 抑制miRNA-21的表达后,宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭能力明显下降,其机制可能与上调PTEN的表达有一定关系。     

miRNA-196b靶向抑制IGF2BP1对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的探讨miRNA-196b通过靶向调控胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)的表达抑制肝癌HepG2细胞增殖并诱导其凋亡的机制。方法将miRNA-196b模拟物(mimics)和阴性对照转染至肝癌HepG2 细胞,分别作为阴性对照组和mimics-196b 组,未处理的细胞作为空白对照组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测3 组肝癌HepG2 细胞miRNA-196b 和IGF2BP1 mRNA的相对表达量,蛋白质印迹法(Western blot)检测IGF2BP1 和caspase 3 蛋白的相对表达量,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 mimics-196b组细胞miRNA-196b相对表达量均高于阴性对照组和空白对照组细胞,IGF2BP1 mRNA相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。mimics-196b 组细胞光密度(OD)值和IGF2BP1 蛋白的相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组细胞,细胞凋亡率和caspase 3 蛋白相对表达量均高于阴性对照组和空白对照组细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。空白对照组和阴性对照组OD值、细胞凋亡率、IGF2BP1和caspase 3蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论 miRNA-196b 可能通过靶向抑制IGF2BP1 的表达,抑制肝癌HepG2 细胞的增殖并促进其凋亡。     

转染IkBα基因抑制NF-KB活性对A549细胞侵袭行为的影响

背景与目的:近年来的研究显示核因子-KB(nuclear factor-kB, NF-kB)的活化能够调节肿瘤细胞的侵袭和转移.本研究探讨抑制NF-kB的活性对A549细胞侵袭能力的影响及其可能的机制.方法:构建表达NF-kB抑制物a同分异构体(inhibitor of NF-kB, α isoform, IkBα)的真核表达重组质粒pcDNA3.1( )/IkBα.体外培养A549细胞,分为未转染组(不转染质粒)、转染pcDNA3.1( )组、转染pcDNA3.1( )/IkBα组,分别转染相应的质粒.应用RT-PCR、Western blot检测各组细胞IkBα的表达情况,应用凝胶电泳迁移率改变实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)检测各组细胞NF-kB的活性,应用Transwell侵袭小室检测各组细胞的侵袭能力,应用RT-PCR方法检测各组细胞MMP-2、MMP-9的mRNA水平,应用明胶酶谱法检测各组细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)的活性.结果:酶切鉴定结果显示pcDNA3.1( )/IkBα质粒构建成功.RT-PCR和Western blot检测结果表明构建的pcDNA3.1( )/IkBα质粒能够在A549细胞中表达IkBα.转染pcDNA3.1( )/IkBα组A549细胞NF-kB活性、侵袭细胞数目、MMP-2活性及MMP-9活性均低于未转染组和转染pcDNA3.1( )组(P值均<0.05),而转染pcDNA3.1( )组与未转染组之间的差异均无统计学意义(P值均>0.05).结论:转染IkBα基因能够抑制A549细胞中NF-KB的活性.NF-kB的活性下降能够抑制A549细胞的侵袭能力,其机制可能与MMP-2、MMP-9表达下调有关.     

STYK1/NOK基因转染对肺腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨STYK1/NOK基因对肺腺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法:运用电穿孔仪将含STYK1/NOK全长基因的重组真核表达质粒(pcDNA3.1/NOK)转染入肺腺癌细胞系A549,筛选出稳定表达NOK蛋白的单克隆株A549-NOK。蛋白质印迹法检测转染前后细胞内NOK蛋白的表达效果。划痕实验、Transwell迁移实验检测转染前后细胞的迁移能力,Matrigel侵袭实验检测细胞的侵袭能力,MTT法绘制细胞生长曲线。结果:蛋白质印迹法显示,A549-NOK细胞中NOK蛋白表达量明显增高。划痕实验结果显示,A549-NOK细胞的迁移速度加快。在Transwell迁移实验中,A549-NOK组的穿膜细胞数较A549及空质粒对照组增多(95.7±9.5vs69.1±8.3、70.5±7.5),P值分别为0.003和0.004。Matrigel侵袭实验中A549-NOK组的穿膜细胞数较A549及空质粒对照组增多(67.8±6.7vs36.0±4.1、38.3±5.1),P值分别为0.000和0.001。MTT结果显示,A549-NOK细胞较A549和空质粒对照组细胞生长曲线上移。结论:STYK1/NOK基因能够促进肺腺癌细胞的迁移和侵袭,可能在肺癌的转移中发挥重要作用。     

CrkⅡ表达水平对喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨CrkⅡ表达水平对喉癌细胞Hep-2增殖、迁移及侵袭的影响。方法采用免疫组化法检测CrkⅡ在108例喉癌患者喉癌组织及癌旁正常组织中的表达情况,分析不同临床特征喉癌患者喉癌组织中CrkⅡ蛋白的阳性表达情况。构建并验证CrkⅡRNA干扰质粒,将培养后的Hep-2细胞分为空白对照组(未转染质粒)、阴性对照组(转染阴性对照质粒)和实验组(转染CrkⅡ干扰质粒),细胞转染后行实时聚合酶链反应(PCR)扩增。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后Hep-2细胞中CrkⅡ的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移情况。结果喉癌组织中CrkⅡ蛋白的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P﹤0.01)。临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、组织分化程度为中低分化、有淋巴结转移喉癌患者喉癌组织中CrkⅡ蛋白的阳性表达率均高于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、组织分化程度为高分化、无淋巴结转移的喉癌患者(P﹤0.05)。实验组喉癌细胞Hep-2中CrkⅡmRNA和蛋白的相对表达量均低于阴性对照组、空白对照组(P﹤0.05)。实验组穿过基质膜至下室的细胞数目低于阴性对照组和空白对照组(P﹤0.05)。转染48 h时,实验组细胞的迁移率低于阴性对照组、空白对照组(P﹤0.05)。细胞培养24、48、72 h时,实验组Hep-2细胞的光密度(OD)值均低于空白对照组和阴性对照组(P﹤0.05)。结论喉癌细胞Hep-2中CrkⅡ的表达下调可降低细胞的增殖、迁移和侵袭能力,CrkⅡ有可能成为喉癌临床治疗的新靶点。     

上调miR-222对肝癌细胞系HepG2增殖和侵袭能力的影响

目的 通过上调miR-222,检测肝癌细胞增殖能力和侵袭能力的变化。方法 采用载有miR-222超表达子的脂质体转染HepG2肝癌细胞系,使miR-222过表达;采用Western blot检测miR-222的靶蛋白PTEN的表达;MTT比色法检测转染前后HepG2细胞增殖能力的变化;Transwell试验检测转染前后细胞侵袭能力的变化。结果 Western blot实验中转染组的PTEN蛋白表达量明显低于阴性对照组和空白对照组;在MTT实验中,转染组OD值较阴性对照组和空白对照组升高(P＜0.05);在Transwell小室实验中,转染组的穿膜细胞数目较阴性对照组和空白对照组升高(P＜0.05)。结论 上调miR-222,HepG2细胞PTEN蛋白表达量明显降低,抑癌基因PTEN表达受抑制使肿瘤细胞的增殖能力和侵袭能力增强。     

miR-194-5p调控LMNB1抑制肺腺癌细胞的生长转移

目的:探究miR-194-5p调控LMNB1对肺腺癌细胞生长转移的作用。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验检测肺腺癌组织和癌旁组织中miR-194-5p、LMNB1表达水平。体外培养肺腺癌细胞A549,分为对照组、miR-194-5p mimics阴性对照组、miR-194-5p mimics组。转染处理后,CCK-8实验检测各组A549细胞增殖情况,比较各组细胞活力;流式细胞实验检测各组A549细胞凋亡率;细胞划痕及Transwell小室侵袭实验分别检测各组A549细胞迁移、侵袭力,比较各组细胞迁移、侵袭数;免疫印迹实验检测各组A549细胞凋亡蛋白caspase-3、Bax和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白E-cadherin、Vimentin表达;qRT-PCR实验及免疫印迹实验分别检测各组A549细胞miR-194-5p、LMNB1 mRNA表达及LMNB1蛋白表达。结果:相比癌旁组织,肺腺癌组织中miR-194-5p表达水平明显降低（P＜0.05）,LMNB1表达水平明显升高（P＜0.05）。相比对照组,miR-194-5p mimics组A549细胞活力、细胞迁移数、细胞侵袭数、LMNB1 mRNA表达水平、Vimentin和LMNB1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、miR-194-5p表达、caspase-3、Bax和E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。miR-194-5p mimics阴性对照组A549细胞上述各指标与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-194-5p可下调LMNB1表达,抑制肺腺癌细胞增殖,促进其凋亡,并降低其迁移及侵袭能力。     

MicroRNA-18a对非小细胞肺癌细胞A549/DDP顺铂耐药性的调控研究

目的：探讨microRNA-18a（miR-18a）对顺铂（DDP）耐药非小细胞肺癌（NSCLC）A549/DDP细胞耐药性的影响及其作用机制。方法将A549/DDP细胞随机分为3组,分别为空白对照组（正常培养的A549/DDP细胞）、阴性对照组（在正常培养的A549/DDP细胞中转染无关序列）和miR-18a转染组（在正常培养的A549/DDP细胞中转染miR-18a）。每组重复5次,待转染进行24、48、72、96 h后检测转染效果。实时荧光定量PCR检测A549/DDP细胞中miR-18a的表达水平;流式细胞术检测转染后的细胞周期情况;MTT法测定转染miR-18a对A549/DDP细胞的增殖抑制;Western Blot检测转染后A549/DDP细胞的共济失调-毛细血管扩张症突变基因蛋白（ATM）及磷酸化ATM的表达。结果 miR-18a转染组、阴性对照组、空白对照组的miR-18a相对表达量分别为（101.1±2.50）、（1.18±0.21）、（1.00±0.02）,差异有统计学意义（P﹤0.05）;miR-18a转染组DDP的半数抑制浓度（IC50）值为（17±0.51）μmol/L,低于阴性对照组和空白对照组;与阴性对照组和空白对照组相比,miR-18a转染组A549/DDP的S期和G2/M期细胞比例、ATM及磷酸化ATM蛋白水平均降低,差异均有统计学意义（P﹤0.05）。结论 miR-18a的表达水平可以调控A549/DDP细胞对DDP的耐药性,可能与ATM及磷酸化ATM的表达有关。     

LncRNA-p21调控Notch信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨LncRNA-p21调控Notch信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 pcDNA-lincRNA-p21、空载质粒pcDNA转染A549细胞设为过表达组和空载组;稳定转染过表达组加入Notch信号通路特异性激活剂Jagged1蛋白,设为Notch激活剂组;不作处理细胞为对照组。MTT法、划痕实验和Transwell小室实验检测各组细胞增殖、迁移和侵袭情况。RT-qPCR及Western blot法检测各组Notch1、HES-1、NICD、E-cadherin、Vimentin的mRNA和蛋白表达。结果 过表达组培养24、48和72 h MTT实验A值均低于对照组、空载组和Notch激活剂组,Notch激活剂组低于对照组和空载组（P<0.05）;过表达组48 h细胞迁移率和穿膜细胞数及Notch1、HES-1、NICD、Vimentin mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组、空载组和Notch激活剂组,Notch激活剂组低于对照组和空载组（P<0.05）;过表达组E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量高于对照组和Notch激活剂组,Notch激活剂组高于空载组和对照组（P<0.05）。结论 LncRNA-p21基因过表达可抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭,其调控机制可能与抑制Notch信号通路、阻断A549细胞上皮间质转化有关。