调气消积汤影响Lewis肺癌细胞凋亡及p53、Bcl-2表达的实验研究

目的：探讨调气消积汤对Lewis肺癌细胞凋亡及p53、Bcl-2蛋白表达的影响。方法：C57BL/6小鼠常规接种Lewis肺癌,随机分为荷瘤对照组（MG）、调气消积汤组（TG）、顺铂组（DG）、综合组（ZG）,每组10只。每天分别予饮用水、调气消积汤各0.4ml灌胃12天;隔日一次腹腔注射生理盐水、顺铂0.13ml共3天。应用电镜技术检测调气消积汤对Lewis肺癌细胞凋亡的影响,用Western Blot法检测p53、Bcl-2基因蛋白的表达。结果：电镜下可见细胞凋亡的特异性标志-凋亡小体形成。调气消积汤组、顺铂组及综合组均可降低p53、Bcl-2蛋白的表达,与荷瘤对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论：调气消积汤能促进Lewis肺癌小鼠肿瘤细胞凋亡,与化疗药物合用能增强促肺癌细胞凋亡的能力;下调凋亡相关基因突变型p53、Bcl-2的表达水平,可能是调气消积汤发挥抑瘤作用的分子机制之一。     

顺铂诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:研究顺铂在体外诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制。方法:采用MTT法测定顺铂对Hela细胞增殖的影响;流式细胞仪和Hochest33258检测药物作用前后的细胞凋亡情况;RT-PCR检测HPVE6的mRNA水平表达;WesternBlot测定HPVE6、p53、p21、Bax、Bcl-2蛋白水平的表达。结果:顺铂抑制Hela细胞生长呈时效和量效关系;经10μg/ml顺铂分别在12、24、36、48小时作用Hela细胞,亚G1峰与对照组有显著性差异;RT-PCR提示顺铂作用Hela细胞后HPVE6的mRNA水平表达逐渐降低;WesternBlot提示顺铂作用Hela细胞后HPVE6的蛋白水平表达逐渐降低,p53、p21和Bax蛋白水平表达逐步升高,Bcl-2的表达无变化。结论:顺铂通过抑制HPVE6的表达,恢复p53的功能,引起细胞凋亡,起到杀伤肿瘤的作用。     

调气消积汤对人肺腺癌A549 细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨调气消积汤对人肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法:以不同剂量的调气消积汤及顺铂制作含药血清并分别作用于A549细胞,MTT法检测细胞的增殖能力,TUNEL原位法染色标记凋亡细胞,计算凋亡率。结果:调气消积汤低剂量组在不同时间段对A549细胞增殖没有明显影响,中、高剂量组及顺铂组对A549细胞增殖有明显的抑制作用,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01）。调气消积汤各剂量组凋亡细胞的数量与剂量呈正相关,凋亡率与空白对照组相比,差异显著(P<0.01),顺铂组绿色荧光强度最大。结论:调气消积汤可剂量依赖性抑制A549细胞增殖并诱导其凋亡。     

丹参酮诱导人肺癌细胞凋亡及其分子机理

目的 了解丹参酮对人肺癌细胞（SPC-A-1）的凋亡诱导作用，并探讨其可能的分子机理，方法 体外培养的SPC-A-1细胞经无毒剂量的丹参酮ⅡA（0.5mg/L)处理5天，光镜，电镜观察细胞凋亡情况，流式细胞仪检测凋亡指数及凋亡相关基因的蛋白表达，并以全反式维甲酸及顺铂作为对照。结果 SPC-A-1细胞经丹参酮ⅡA处理后，电镜观察可见多量凋亡细胞，流式细胞仪检测；丹参酮组凋亡指数显著高于顺铂组及对照组，而与维甲酸组比较无显著差异。丹参酮组促凋亡基因p53,Fas,Bax表达水平明显升高，而凋亡抑制基因Bcl-2的表达水平则显著降低。结论 丹参酮ⅡA具有诱导肺癌SPC-A-1细胞凋亡的作用。其分子机理可能是上调p53,Bax,Fas及下调Bcl-2的表达。     

调气消积汤对人肺腺癌A549细胞肿瘤相关基因表达的影响

目的:检测调气消积汤对人肺腺癌A549细胞周期及肿瘤相关基因IL-8、S28、Sp1表达的影响,探讨该方抗肺癌的分子机制。方法:实验共分为5组:空白对照组、调气消积汤低、中、高剂量组（浓度分别为5%、15%、20%）及顺铂组,常规方法制备含药血清。以不同剂量的调气消积汤及顺铂制作含药血清并分别作用于A549细胞,用流式细胞仪检测细胞周期,采用RT-PCR法检测各组IL-8、S28、Sp1 mRNA的表达水平。结果:随着药物浓度的增加,调气消积汤各剂量组的G0/G1期细胞比例逐渐降低,S期细胞比例逐渐升高（P<0.01）。调气消积汤各剂量组及顺铂组IL-8、S28、Sp1 mRNA表达水平明显低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05 或 P<0.01）。调气消积汤高剂量组与顺铂组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论:调气消积汤可以阻止肿瘤细胞进入增殖周期;下调相关基因IL-8、S28、Sp1 mRNA的表达水平,可能是调气消积汤发挥抑瘤作用的分子机制之一。     

重组人p53腺病毒逆转非小细胞肺癌顺铂耐药的体外研究

目的 为重组人p53腺病毒应用于临床非小细胞肺癌顺铂耐药患者提供实验依据.方法 采用CCK-8试剂检测半数抑制浓度(IC50);应用流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡发生率;采用功能分类基因芯片检测药物作用前后的基因变化.结果 顺铂联合重组人p53腺病毒后,H1299细胞顺铂的半数抑制浓度下降至5 μg/mL(P<0.05),细胞的凋亡率上升为10.73%(P<0.05).重组人p53腺病毒单药作用后,H1299细胞内p53基因大量表达.在两药联合作用下,导入的p53基因激活了由Fas/Apo-1/CD95系统、TNFR超家族、Bcl-2/Bax等所介导的凋亡通路,同时也上调了部分细胞周期调控基凶.结论 重组人p53腺病毒介导的基因治疗有希望成为治疗临床非小细胞肺癌顺铂耐药患者的一种有效的辅助手段.     

顺铂、得力生对胰腺癌细胞株生长和凋亡的作用

目的:体外研究胰腺癌细胞株p1,p2,p3,p4,p7的Survivin、Bc l-2和p53蛋白的表达情况,顺铂、中药得力生对胰腺癌细胞株的细胞增殖和凋亡的作用,研究细胞毒性药物与中药对胰腺癌细胞的联合作用,以及相关蛋白表达对上述作用的影响。方法:免疫组化检测上述蛋白在细胞中的表达;MTT方法检测细胞的增殖;TUNEL原位检测细胞的凋亡。结果:5种细胞株中均有不同程度Survivin和p53蛋白的表达,均无Bc l-2的表达。Survivin在p1、p3表达最强,在p2表达最弱;p3主要表达在细胞浆,其余4种细胞均表达在细胞核及细胞浆;p53在p2和p4细胞中表达率最高,为60%,但是在p2细胞中表达较弱。顺铂、中药得力生对胰腺癌细胞株的细胞增殖均具有抑制作用,且有协同趋势;Survivin和p53的表达程度与顺铂对胰腺癌细胞增殖的作用呈一定的反向关系;顺铂和中药得力生诱导下均检测到凋亡细胞。结论:Survivin和p53的表达可能调节胰腺癌细胞对顺铂的药物敏感性;中西医结合治疗胰腺癌可能具有很好的应用前景。     

顺铂对宫颈癌HeLa细胞端粒酶活性和凋亡及p53和bcl-2 表达的影响

目的观察顺铂对 HeLa 细胞端粒酶活性、凋亡及其 p53、bcl-2 表达的影响,以揭示顺铂抗宫颈癌的机理.方法运用体外细胞培养技术,以不同浓度的顺铂作用于培养的 HeLa 细胞 72 h,通过端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP-ELISA)检测细胞端粒酶活性,以及流式细胞术观察细胞凋亡及 p53、bcl-2 的表达.结果顺铂能以浓度依赖方式下调端粒酶活性并诱导细胞凋亡,使其 bcl-2 基因的表达显著降低,而 p53 基因的表达则增强.端粒酶活性下调与细胞凋亡及其 p53、bcl-2 基因表达紧密相关,P＜0.01.结论顺铂能下调端粒酶活性,诱导细胞凋亡,使 bcl-2 表达降低和 p53 表达增强,这可能是顺铂抗癌作用的重要机制之一.     

复方皂刺汤对顺铂联合吉西他滨抑制非小细胞肺癌生长的作用及其机制研究

目的：探讨复方皂刺汤对顺铂联合吉西他滨抑制非小细胞肺癌生长的作用及其机制。方法：50只SPF级BALB/c裸鼠通过右前肢腋窝靠背部接种A549细胞悬液制备非小细胞肺癌模型,造模成功后随机分为模型组、复方皂刺汤组、吉西他滨联合铂类(GP)方案化疗组、顺铂组、复方皂刺汤联合GP方案化疗组,共5组。模型组每天灌胃生理盐水(0.01 mL/g);复方皂刺汤组每天灌胃复方皂刺汤(1 mL/只);GP方案化疗组每3天腹腔注射1次顺铂(2 mg/kg)和吉西他滨(50 mg/kg);顺铂组每3天腹腔注射1次顺铂(2 mg/kg);复方皂刺汤联合 GP方案化疗组每天灌胃复方皂刺汤(1 mL/只),并且每3天腹腔注射1次顺铂(2 mg/kg)和吉西他滨(50mg/kg)。各组共给药治疗21 d。分别于给药第3、7、14、21天用游标卡尺测量肿瘤直径,处死裸鼠后,测量瘤质量;采用TUNEL染色观察肿瘤细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测肿瘤组织Ki67、CD31、α-SMA和VEGF蛋白的表达;ELISA法检测血清IL-4、IL-6和TNF-α浓度;Western blot法检测肿瘤组织Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达。结果：给药第21天时,与模型组比较,其他 4组裸鼠肿瘤体积、瘤质量明显减小,其中复方皂刺汤联合 GP方案化疗组肿瘤体积、瘤质量最小(P<0.05);与其他 4组比较,复方皂刺汤联合GP方案化疗组细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高,Ki67、Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组、复方皂刺汤组、GP方案化疗组比较,复方皂刺汤联合GP方案化疗组IL-6、TNF-α含量及CD31、α-SMA、VEGF蛋白表达明显降低,IL-4含量明显升高(P<0.05)。结论：复方皂刺汤在增强顺铂联合吉西他滨抑制非小细胞肺癌生长方面具有肯定作用,其机制可能与抑制血管生成、诱导细胞凋亡有关。     

抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSki细胞顺铂敏感性影响和机制的探讨

目的:研究抗HPV16E6核酶(Ri-bozyme)对宫颈癌CaSki细胞顺铂敏感性的影响和机制。方法:将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSki细胞,命名为CaSki-R、CaSki-P细胞。Northern blot、MTT比色法、Annexine/PI双标法、流式细胞术及RT-PCR扩增法分别检测E6基因、顺铂的敏感性、凋亡率、凋亡相关蛋白和基因。结果:CaSki-R表达E6较CaSki-P、CaSki明显降低;与CaSki细胞和CaSki-P细胞比较,CaSki-R对DDP敏感性分别增加了2.28倍和2.21倍。CaSki、CaSki-P和CaSki-R 3种细胞的凋亡率分别为(18.9±3.5)%、(19.7±4.8)%和(40.4±4.5)%,CaSki-R较CaSki细胞的凋亡率明显增加,P=0.003;DDP作用后CaSki-R细胞的p53蛋白(P=0.000)和Bax蛋白(P=0.002)表达较CaSK细胞明显增加,Bcl-2蛋白(P=0.005)、c-myc蛋白(P=0.005)表达则明显减小;与CaSK细胞比较,CaSki-R细胞表达p53、Bax mRNA明显增加,Bcl-2...     

Exogenous p53 Upregulated Modulator of Apoptosis (PUMA) Decreases Growth of Lung Cancer A549 Cells

Purpose: To investigate the influence of exogenous p53 upregulated modulator of apoptosis (PUMA) expressionon cell proliferation and apoptosis in human non-small cell lung cancer A549 cells and transplanted tumor cellgrowth in nude mice. Materials and Methods: A549 cells were divided into the following groups: control, noncarrier(NC), PUMA (transfected with pCEP4- (HA) 2-PUMA plasmid), DDP (10μg/mL cisplatin treatment)and PUMA+DDP (transfected with pCEP4-(HA)2-PUMA plasmid and 10μg/mL cisplatin treatment). The MTTmethod was used to detect the cell survival rate. Cell apoptosis rates were measured by flow cytometry, andPUMA, Bax and Bcl-2 protein expression levels were measured by Western blotting. Results: Compared to thecontrol group, the PUMA, DDP and PUMA+DDP groups all had significantly decreased A549 cell proliferation(p<0.01), with the largest reduction in the PUMA+DDP group. Conversely, the apoptosis rates of the three groupswere significantly increased (P < 0.01), and the PUMA and DDP treatments were synergistic. Moreover, Baxprotein levels significantly increased (p<0.01), while Bcl-2 protein levels significantly decreased (p<0.01). Finally,both the volume and the weights of transplanted tumors were significantly reduced (p<0.01), and the inhibitionratio of the PUMA+DDP group was significantly higher than in the single DDP or PUMA groups. Conclusions:Exogenous PUMA effectively inhibited lung cancer A549 cell proliferation and transplanted tumor growth byincreasing Bax protein levels and reducing Bcl-2 protein levels.     

小柴胡汤对小鼠Lewis肺癌作用的病理形态学观察

目的观察小柴胡汤对小鼠Lewis肺癌在病理形态学方面的影响。方法将38只小鼠常规接种Lewis肺癌,5天后选取荷瘤成功的小鼠随机分三组：模型组（MG）,小柴胡组（BG）和参一组（SG）,每组10只。每天分别予生理盐水、小柴胡汤和参一胶囊溶液各0．4mL灌胃12天。观察其肿瘤生长情况,用HE染色法观察肿瘤组织病理形态改变。结果（1）小柴胡汤和参一胶囊对肿瘤细胞的生长有抑制作用,瘤重均明显低于模型组,差异显著（P〈0．01）,但两组间无明显差异（P〉0．05）;（2）与模型组比较,小柴胡组和参一组镜下均可见瘤细胞体积缩小,异型细胞较少,细胞核致密,染色质浓缩边集,肿瘤细胞核分裂数明显减少。结论小柴胡汤有抑制Lewis肺癌细胞增殖的作用。     

温阳散结汤含药血清通过NF-κB通路调控肿瘤相关巨噬细胞极化对Lewis肺癌的影响

目的:观察温阳散结汤对 Lewis 肺癌小鼠肿瘤生长及瘤组织中巨噬细胞M2型极化的影响,并探索其调控NF-κB信号通路抑制肿瘤相关巨噬细胞M2型极化,对Lewis肺癌细胞侵袭、迁移能力的影响。方法:建立C57BL/6小鼠 Lewis 肺癌移植瘤模型,温阳散结汤干预14 d 后观察小鼠瘤重和肺转移灶,计算肺转移抑瘤率,免疫组化染色检测小鼠瘤组织中巨噬细胞M2型表面标志物 CD206 的表达;温阳散结汤灌胃SD大鼠制备含药血清,采用IL-13干预RAW264.7小鼠巨噬细胞建立巨噬细胞M2型极化模型,CCK-8法检测温阳散结汤含药血清对巨噬细胞增殖的影响,流式细胞术和Western-blot检测 CD206的表达,RT-PCR检测巨噬细胞M2型标志基因的mRNA表达,ELISA法检测细胞上清中IL-1β、IL-10、TGF-β 和TNF-α 的水平变化,Western-blot检测氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、核因子-κB p65(NF-κB p65)和磷酸化核因子-κB p65（pNF-κB p65）的蛋白表达;收集温阳散结汤含药血清处理的M2型巨噬细胞条件培养基,将其作用于Lewis肺癌细胞,通过Transwell侵袭迁移实验检测Lewis 肺癌细胞的侵袭和运动迁移能力。结果:温阳散结汤干预后,明显减少了小鼠瘤重和肺转移灶数,并抑制了瘤组织CD206的阳性表达（P<0.05）;温阳散结汤含药血清干预后,IL-13诱导的M2型巨噬细胞中F4/80+CD206+的细胞比例和CD206蛋白表达明显减少,MRC1、Arg1、Ym1的mRNA表达水平显著降低,细胞中TNF-α、IL-1β的含量明显升高,IL-10、TGF-β的含量明显降低,同时明显下调了细胞PPARγ、NF-κB p65、pNF-κB p65的蛋白表达及pNF-κB p65/NF-κB p65比值（均P<0.05）;温阳散结汤含药血清处理的M2型巨噬细胞条件培养基干预后,Lewis肺癌细胞迁移和侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。结论:温阳散结汤具有抑制肺癌肿瘤生长和转移的作用,其作用机制可能与调节NF-κB通路,抑制IL-13诱导的RAW264.7细胞M2型极化,从而抑制Lewis肺癌细胞侵袭和迁移能力相关。     

柴胡龙牡汤对Lewis肺癌小鼠细胞免疫功能的影响

目的 研究柴胡龙牡汤对 Lewis 肺癌小鼠T细胞亚群、NK细胞活性及IFN-γ、IL-10水平的影响.方法 将Lewis肺癌细胞株接种于C57BL/6J近交系小鼠右侧腋部皮下,造模成功后随机分为模型组(生理盐水)、中药组(柴胡龙牡汤)、化疗组(顺铂)、综合组(柴胡龙牡汤+顺铂)分别给药.剥离肿瘤,称重计算抑瘤率;采用...     

MG132和DDP联合应用诱导Hep-2喉癌细胞凋亡及机制的研究

目的：研究蛋白酶体抑制剂MG132与顺铂（DDP）联合应用对Hep-2喉癌细胞凋亡的影响,同时观察细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bad表达水平的变化。方法：体外培养Hep-2细胞分别暴露于MG132、DDP或者MG132和DDP,24h后流式细胞术（FCW）检测Hep-2细胞的凋亡率,Western blot方法测定Hep-2细胞中Bcl-2和Bad两种蛋白的表达情况。结果：流式细胞术检测结果显示,MG132和DDP联合用药24h后Hep-2细胞凋亡率较单独应用MG132、DDP显著增加。Western blot结果显示联合用药组较单独用药组Hep-2细胞中Bcl-2的表达显著减少,而Bad的表达显著增加。结论：MG132联合DDP可能通过降低Bcl-2同时增强Bad的表达而进一步诱导Hep-2细胞的凋亡。可以认为MG132能增强DDP诱导Hep-2细胞凋亡的作用。     

MG132和DDP联合应用诱导Hep-2喉癌细胞凋亡及机制的研究

目的:研究蛋白酶体抑制剂MG132与顺铂(DDP)联合应用对Hep-2喉癌细胞凋亡的影响,同时观察细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bad表达水平的变化。方法:体外培养Hep-2细胞分别暴露于MG132、DDP或者MG132和DDP,24h后流式细胞术(FCW)检测Hep-2细胞的凋亡率,Western blot方法测定Hep-2细胞中Bcl-2和Bad两种蛋白的表达情况。结果:流式细胞术检测结果显示,MG132和DDP联合用药24h后Hep-2细胞凋亡率较单独应用MG132、DDP显著增加。Western blot结果显示联合用药组较单独用药组Hep-2细胞中Bcl-2的表达显著减少,而Bad的表达显著增加。结论:MG132联合DDP可能通过降低Bcl-2同时增强Bad的表达而进一步诱导Hep-2细胞的凋亡。可以认为MG132能增强DDP诱导Hep-2细胞凋亡的作用。     

左旋棉酚对小鼠宫颈癌移植瘤细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨左旋棉酚［(-)-gossypol,LGP］对顺铂诱导小鼠宫颈癌移植瘤凋亡的影响及可能的作用机制。方法建立小鼠宫颈癌U14细胞皮下移植瘤模型,将60只小鼠按随机原则分为左旋棉酚组、顺铂(Cisplatin,DDP)组、左旋棉酚+顺铂(LGP+DDP)组及模型对照（Model Control）组4组,用药干预8天后采用电子天平称量瘤重并计算抑瘤率;采用TUNEL法检测各组瘤组织的凋亡情况;采用免疫组织化学法检测各组肿瘤组织中Bcl-2、Bax和P-gp蛋白的表达水平。结果各干预组小鼠移植瘤瘤重均低于Model组,其中LGP+DDP组瘤重最低,其次为DDP组(P＜0.01);各组移植瘤组织内AI均高于Model组（P＜0.05）,且LGP+DDP组最高（P＜0.01）;含LGP组移植瘤组织内P-gp、Bcl-2蛋白的表达降低（P＜0.05）, Bax蛋白的表达升高（P＜0.05）,Bax/Bcl-2比值升高,LGP+DDP组的上述作用明显优于单药组（P＜0.01）;相关性分析表明P-gp蛋白的表达量与Bcl-2的表达量呈正相关,与Bax的表达量呈负相关（P＜0.01）。结论 LGP能抑制小鼠宫颈癌移植瘤的生长,且与DDP联合后抑制作用更显著;其可能的机制:LGP可能是通过下调Bcl-2、上调Bax蛋白诱导小鼠宫颈癌细胞凋亡,降低P-gp蛋白的表达,增加肿瘤组织对DDP的化疗敏感度。