大黄素逆转非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药的机制研究

目的 探讨大黄素逆转非小细胞肺癌（NSCLC）表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR TKI）耐药的作用机制。方法 应用持续诱导的方法构建NSCLC EGFR-TKI耐药细胞株HCC827／GR;应用MTS法检测大黄素（30μmol／L）、吉非替尼（1μmol／L）及两药联合处理HCC827和HCC827／GR细胞48h后细胞增殖能力的变化;应用Western blotting法检测HCC827和 HCC827／GR细胞中p EGFR、p-AKT、p-ERK1／2及p-MET蛋白表达水平的变化。结果 MTS法检测结果显示,经单药吉非替尼或大黄素处理后,HCC827／GR细胞增殖能力未减弱,而两药联合处理组的细胞增殖能力明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。Western blotting检测结果显示,HCC827、HCC827／GR细胞中p-EGFR、p-ERK1/2明显表达,而p-AKT表达微弱;HCC827／GR 中p-MET表达水平较HCC827明显上调。经单药吉非替尼处理后,HCC827细胞株p-EGFR、p-ERK1/2表达水平下调,HCC827／GR细胞株p-EGFR表达明显下调;大黄素可显著下调HCC827／GR细胞株p-MET表达,但对p-EGFR、p-ERK1/2的表达无影响;而大黄素与吉非替尼两药联用可明显抑制HCC827／GR细胞株p-EGFR、p-ERK1/2以及p-MET的表达。结论 大黄素可以逆转NSCLC EGFR-TKI耐药,可能是通过抑制c-Met的活化来实现。     

lncRNAMAFG-AS1调控miR-532-3p表达对肺癌A549细胞糖酵解的影响

目的：探讨lncRNA MAFG反义RNA1（MAFG-AS1）调控miR-532-3p表达对肺癌A549细胞糖酵解的影响。方法： 用qPCR法检测人肺癌A549细胞和正常肺上皮细胞BEAS-2B中MAFG-AS1和miR-532-3p的表达水平。利用脂质体介导转染 技术,分别构建MAFG-AS1表达下调和miR-532-3p过表达的A549细胞,用分光光度法检测细胞培养上清中葡萄糖消耗量与乳 酸含量,qPCR和WB法分别检测细胞中M2型丙酮酸激酶（pyruvate kinase M2,PKM2）、己糖激酶2（hexokinase 2,HK2）mRNA和 蛋白的表达水平。用双荧光素酶报告基因实验验证MAFG-AS1与miR-532-3p的靶向关系,观察MAFG-AS1和miR-532-3p同时 低表达对A549细胞葡萄糖及乳酸含量和PKM2、HK2表达的影响。结果：与BEAS-2B细胞比较,A549细胞中MAFG-AS1表达 上调而miR-532-3p表达下调（均P<0.01）。下调MAFG-AS1或miR-532-3p过表达均可降低A549细胞葡萄糖消耗量及乳酸含量, 并抑制PKM2、HK2 mRNA和蛋白的表达（均P<0.01）。miR-532-3p可与MAFG-AS1靶向结合抑制野生型MAFG-AS1细胞的荧 光素酶活性（P<0.01）,下调MAFG-AS1可使A549细胞中miR-532-3p表达升高（P<0.01）。miR-532-3p低表达可逆转MAFG-AS1 表达下调对细胞葡萄糖消耗量及乳酸含量和PKM2、HK2表达的影响（均P<0.01）。结论：下调MAFG-AS可通过促进miR-532-3p 表达而抑制肺癌A549细胞糖酵解。     

miR-369-5p抑制肝细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨miR-369-5p在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达情况、临床意义,观察miR-369-5p对HCC细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法:实时定量PCR检测miR-369-5p在HCC组织与相应癌旁组织、正常肝细胞（L02）与HCC细胞系中的表达情况;CCK-8实验检测MHCC-97H及HCCLM3细胞增殖能力;Transwell实验检测MHCC-97H及HCCLM3细胞迁移及侵袭能力;Targetscan数据库预测p21活化激酶4（p21 activated kinase 4,PAK4）为miR-369-5p下游靶基因;用双荧光素酶实验检测荧光素酶活性;蛋白免疫印迹试验检测MHCC-97H及HCCLM3细胞中PAK4的蛋白表达水平。结果:miR-369-5p在HCC组织及细胞系中均明显低表达,低表达miR-369-5p与肿瘤大小、TNM分期、微血管浸润相关;在MHCC-97H及HCCLM3细胞中过表达miR-369-5p抑制细胞的增殖、迁移及侵袭能力;通过生物信息学工具预测PAK4是miR-369-5p的下游靶基因;在MHCC-97H及HCCLM3细胞中过表达miR-369-5p下调PAK4蛋白的表达。结论:在HCC中miR-369-5p表达下调且其低表达与HCC恶性病理特征有关,在HCC中过表达miR-369-5p可通过下调PAK4表达抑制细胞增殖、迁移及侵袭。     

lncRNA MAFG-AS1通过调控miR-11181-3p/GLG1轴促进胃癌AGS细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解

目的：探讨lncRNA MAFG-AS1/miR-11181-3p/GLG1分子轴对胃癌（gastric cancer，GC）细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解的影响及其可能的机制。方法：选取 MAFG-AS1 相对高表达的 GC 细胞系 AGS 作为研究对象，采用 qPCR 法检测其 MAFGAS1、miR-11181-3p、GLG1的RNA表达水平，Transwell实验、糖酵解分析等检测细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解的变化，利用生物信息学分析及双荧光素酶报告基因验证MAFG-AS1、miR-11181-3p、GLG1之间的相互作用关系。结果：敲减MAFG-AS1显著上调miR-11181-3p及下调GLG1的表达（均P<0.01），并可显著抑制GC细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解（均P<0.01）；荧光素酶报告基因证实MAFG-AS1竞争性吸附miR-11181-3p（P<0.01）；抑制miR-11181-3p或过表达GLG1可部分逆转敲减MAFG-AS1对GC细胞迁移、侵袭和有氧糖酵解的抑制作用（均P<0.05或P<0.01）。结论：MAFG-AS1通过miR-11181-3p/GLG1分子轴增强GC迁移、侵袭和有氧糖酵解，可能是GC诊疗的潜在分子靶点。     

HPV16 阳性宫颈癌细胞株中 miR-497-5p 靶向 PD-L1的免疫调控作用

目的：探讨 miR-497-5p 靶向 PD-L1 在 HPV16 阳性宫颈癌细胞株中的免疫调控作用。方法：通过免疫共沉淀（co-immunoprecipitation,Co-IP）验证宫颈癌细胞中 HPV16 E6 和 E7 蛋白对 PD-L1 蛋白是否有直接作用;对宫颈 癌组织差异表达的 miRNA 进行生信分析筛查;以 TCGA 宫颈癌数据为基础,探讨 miRNA 与预后之间的关系;E6、E7 siRNA 由上海吉玛制药技术有限公司设计合成,通过脂质体在 HPV16 阳性宫颈癌细胞株中转染 E6、E7 siRNA,下调E6、E7 的表达;构建 E6、E7 基因表达质粒,于 HPV 阴性子宫颈癌细胞株中表达 E6、E7。利用 qRT-PCR 对不同组细胞表达 miRNA 进行检测;miR-497-5p mimics 和 inhibitor 转染 HPV16 阳性宫颈癌细胞株,通过 Western blot 检测各组 PD-L1 蛋白的表达情况;通过预测软件,在 PD-L1 mRNA 3’UTR 上寻找 miR-497-5p 的作用靶点;利用双荧光素酶报告实验,验证 miR-497-5p 是否与 PD-L1 mRNA 3’UTR 靶向结合。结果：经 Co-IP 实验验证,HPV16 E6 和 E7 对PD-L1 无直接作用关系;在宫颈癌细胞中对 E6 和 E7 表达进行上调和下调后,发现 E6、E7 与 hsa-miR-497-5p 表达存在负调控关系; miR-497-5p mimics 和 inhibitor 转染 HPV16 阳性宫颈癌细胞株后发现,hsa-miR-497-5p 可抑制 PD-L1蛋白的表达水平;hsa-miR-497-5p inbibitor 可提高 PD-L1 蛋白的表达水平;双荧光素酶活性实验结果提示 miR-497-5p可靶向结合PD-L1的3’-UTR序列。结论：HPV16 E6/E7可能通过miR-497-5P/PD-L1轴促进宫颈癌细胞免疫逃逸。     

miR-134-5p 对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的:观察微小核糖核酸-134-5p(miR-134-5p)转染对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响,验证其可能的分子机制.方法:收集湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心2016年5月至8月收治的8名宫颈癌患者肿瘤组织和相应癌旁组织.利用lipo-fectamine 2000将miR-134-5pmimics转染至宫颈癌Hela和SiHa细胞.采用MTT法和集落形成实验检测细胞增殖活性;流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡;qRT-PCR检测宫颈癌组织和细胞miR-134-5pmRNA表达以及宫颈癌细胞EGFR mRNA表达;Western blotting检测宫颈癌细胞EGFR信号通路相关蛋白的表达.结果:宫颈癌组织miR-134-5pmRNA表达显著低于癌旁组织(P＜0.01).和转染miR-NC的Hela和SiHa细胞比较,转染miR-134-5pmimics的宫颈癌Hela和SiHa细胞miR-134-5pmRNA表达显著升高;细胞增殖能力显著降低(转染第5天,Hela细胞:1.06±0.13 vs 1.32±0.07;SiHa细胞:1.12±0.10 vs 1.42±0.12,均P＜0.05);形成的集落数减少;G0/G1期细胞比例显著上升,S期和G2/M期细胞比例显著下降;细胞凋亡率显著增加[Hela细胞:(26.53±13.48)％ vs(3.25±1.74)％;SiHa细胞:(30.49±12.04)％ vs(5.10±2.86)％,均P＜0.05];EGFR mRNA和EGFR蛋白表达显著下调,其中EGFR mRNA,Hela细胞下调58％(P＜0.01),SiHa细胞下调41％ (P＜0.05);EGFR下游靶蛋白p-AKT、p-ERK1/2和CyclinD1蛋白及pEGFR蛋白表达显著下调.结论:miR-134-5p可显著抑制宫颈癌细胞增殖并促进细胞凋亡,其可能的分子机制是通过抑制EGFR基因的表达,抑制EGFR通路的活化.     

MiR 142 5p通过靶向IGF2BP3调控多柔比星诱导的肝癌细胞凋亡

目的:探讨miR-142-5p对多柔比星诱导的原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞凋亡的影响及其作用机制.方法:收集广西医科大学附属肿瘤医院88例HCC患者手术切除的癌组织及癌旁组织(距癌灶组织边缘2～5cm)标本.采用实时荧光定量PCR检测人HCC组织和癌旁组织、人正常肝细胞以及HCC细胞系中miR-142-5p的表达量.向HCC细胞SMMC-7721中转染miR-142-5p mimics,流式细胞术检测过表达miR-142-5p后SMMC-7721细胞在多柔比星(doxorubicin)(1 μg/ml)诱导下凋亡的变化;生物信息学方法预测miR-142-5p可靶向结合胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(in-sulin-like growth factor 2 mRNA-binding protein 3,IGF2BP3)基因,并采用荧光素酶报告基因实验进行验证.采用实时荧光定量PCR及Western blotting检测过表达miR-142-5p的SMMC-7721细胞中IGF2BP3的mRNA及蛋白表达情况.结果:与癌旁组织和正常肝细胞相比,HCC组织(-6.91±2.61vs-11.59±2.59,P＜0.01)和多种HCC细胞系中miR-142-5p呈明显低表达(均P＜0.01);过表达miR-142-5p可显著促进多柔比星诱导的HCC细胞SMMC-7721的凋亡[(49.40±3.47)％ vs (19.50±1.74)％,P＜0.01];过表达miR-142-5p可明显降低HCC细胞中IGF2BP3的mRNA及蛋白表达水平(P＜0.01),敲减IGF2BP3表达可进一步促进多柔比星诱导的SMMC-7721细胞的凋亡(P＜0.01).荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-142-5p能够抑制IGF2BP3的3'UTR荧光素酶报告基因的活性.结论:miR-142-5p在HCC组织标本和体外培养细胞系中的表达水平均显著降低,转染miR-142-5p mimics后能够促进多柔比星诱导的HCC细胞的凋亡,其机制可能与miR-142-5p靶向作用IGF2 BP3从而促进HCC细胞凋亡有关.     

miR-224-5p靶向调控KIF23通过NF-κB信号通路影响宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探索微小RNA-224-5p(miR-224-5p)对驱动蛋白超家族23(KIF23)的靶向关系及对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用实时定量PCR(qPCR)检测正常宫颈细胞(H8)和宫颈癌细胞(SiHa、HeLa、MS751、HT-3)中miR-224-5p和KIF23 mRNA表达,选择miR-224-5p表达量最低的HeLa细胞开展后续研究。在HeLa细胞中转染si-KIF23或miR-224-5p,探讨敲减KIF23或过表达miR-224-5p对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western Blot)检测KIF23、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和NF-κBp65蛋白水平;生物学信息预测和双荧光素酶报告基因实验分析miR-224-5p和KIF23之间的靶向关系;共转染si-KIF23和anti-miR-224-5p,观察miR-224-5p低表达对敲减KIF23诱导的HeLa细胞增殖、迁移、侵袭和NF-κB信号通路活化的影响。结果:miR-224-5p在SiHa、HeLa、MS751、HT-3细胞中表达下调(P<0.05),KIF23 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05)。敲减KIF23或过表达miR-224-5p显著降低HeLa细胞存活率、细胞迁移数和侵袭数,并显著抑制CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平(P<0.05)。另外,敲减KIF23显著降低细胞中NF-κBp65表达量(P<0.05)。miR-224-5p靶向调控KIF23表达。miR-224-5p低表达可以逆转敲减KIF23抑制HeLa增殖、迁移、侵袭及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达的作用,以及逆转敲减KIF23抑制NF-κB信号通路活化的作用。结论:miR-224-5p靶向调控KIF23并通过NF-κB信号通路抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-299-5p通过靶向SOX4调控胃癌细胞的增殖与凋亡

目的:探讨miR-299-5p对胃癌细胞增殖与凋亡的作用及相关机制。方法:采用RT-qPCR法检测胃癌细胞（SGC-7901、BGC-823）及正常胃黏膜上皮细胞（RGM-1）中miR-299-5p的表达差异。利用生物信息学方法预测miR-299-5p的靶基因，并使用荧光素酶报告实验验证miR-299-5p与SOX4的靶向关系。分别将miR-299-5p mimics和pcDNA3.1-SOX4转染至胃癌细胞中构建过表达模型，采用CCK-8法、流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡情况。Western blot检测靶基因SOX4及相关蛋白（Bcl-2、Bax）表达水平。结果:胃癌细胞中miR-299-5p呈低表达，SOX4呈过表达；miR-299-5p 过表达可显著下调SOX4蛋白水平；miR-299-5p与SOX4的mRNA 3' UTR区序列配对互补，SOX4是miR-299-5p的一个潜在靶作用结合位点；miR-299-5p过表达显著降低SOX4野生型荧光素酶活性，抑制胃癌细胞增殖，诱导细胞凋亡，同时可下调SOX4、Bcl-2水平，上调Bax蛋白表达水平；上调SOX4可逆转miR-299-5p过表达对胃癌细胞的作用效果。结论:miR-299-5p在胃癌细胞中呈低表达，其通过下调SOX4表达抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡。     

miR-485-3p通过靶向TLR1/NF-κB信号通路调节胃癌细胞放射敏感性

目的 研究miR-485-3p是否通过靶向TLR1对胃癌细胞放射敏感性起作用。方法分别用qRT-PCR和蛋白印迹法检测miR-485-3p和TLR1的表达变化,DIANA、TargetScan和miRanda软件预测和双荧光素酶报告实验验证miR-485-3p对TLR1的靶向作用。将miR-485-3p mimic或TLR1 siRNA转染到胃癌MGC803细胞中,放射处理细胞,凋亡实验、克隆形成实验和MTT检测细胞放射敏感性的变化。双荧光素酶报告实验检测miR-485-3p上调和TLR1沉默对NF-κB活性的影响。蛋白免疫印迹实验探究miR-485-3p上调和TLR1沉默对NF-κB靶基因的影响。结果 放射处理后胃癌细胞miR-485-3p表达下调,TLR1表达上调。靶基因预测软件发现TLR1可能是miR-485-3p的靶基因,双荧光素酶报告实验进一步验证了TLR1是miR-485-3p的直接靶点。miR-485-3p负调控TLR1的表达。miR-485-3p的过表达提高了细胞凋亡率,降低了细胞克隆形成和细胞群体增殖能力,增强了细胞的放射敏感性,且TLR1的沉默也具有相同作用。miR-485-3p上调和TLR1沉默均降低了NF-κB的活性,下调了NF-κB多个靶基因的表达。结论 miR-485-3p可能通过靶向TLR1调控NF-κB信号通路增强胃癌细胞的放射敏感性。     

miR-886-5p抑制肝细胞癌细胞侵袭与迁移

目的:探讨miR-886-5p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达水平及其与临床病理特征的关系,并分析miR-886-5p对HCC细胞侵袭与迁移能力的影响.方法:应用Real-time PCR技术检测HCC组织和细胞系中miR-886-5p的表达水平;分析miR-886-5p的表达水平与HCC临床病理特征的关系;应用Transwell实验探究miR-886-5p对HCC细胞侵袭与迁移能力的影响.结果:miR-886-5p在HCC组织中的表达水平较癌旁组织明显降低(P＜0.05),miR-886-5p在HCC细胞系中(Hep3B、MHCC-97L、HepG2、SMMC-7721)的表达水平较正常肝细胞LO2显著下调(P＜0.05);miR-886-5p的表达水平与肿瘤数目、静脉侵犯、Edmondson病理分级及TNM分期显著相关(P＜0.05);Transwell小室实验表明miR-886-5p能够显著抑制HCC细胞的侵袭与迁移能力.结论:miR-886-5p在HCC中表达下调,其能够抑制HCC细胞的侵袭与迁移.     

MicroRNA-490-5p靶向CDK1通过ERK信号通路参与胃癌细胞周期调控

目的:探讨miR-490-5p对胃癌细胞增殖与周期的调控作用和分子机制,以期为临床治疗胃癌提供新的有效靶点.方法:收集30例胃癌患者的胃癌组织及相应的癌旁组织标本;采用Real-time PCR法检测miR-490-5p和CDK1的表达水平;分析细胞周期相关蛋白 CDK1 与 miR-490-5p 的靶向关系.MTT法和流式细胞仪检测转染后胃癌细胞生长以及细胞周期情况.结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-490-5p的表达显著下调(P<0.001);转染 miR-490-5p mimics 的细胞中miR-490-5p的表达显著上调,而miR-490-5p inhibitors中miR-490-5p显著下降(均P<0.001);CDK1 是 miR-490-5p 的靶基因;下调miR-490-5p、上调CDK1能促进胃癌细胞的增殖能力及G1/S期的转化(均P<0.001).结论:通过上调miR-490-5p 可以抑制胃癌细胞的恶性增殖,减少CDK1表达,抑制 ERK信号途径,降低了G1/S期的转化速率,从而为胃癌诊断及治疗提供新靶标.     

miR-32-5p靶向CEBPA调控EGFR/β-catenin信号通路影响骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭

目的:探究miR-32-5p靶向CCAAT增强子结合蛋白α（CCAAT/enhancer binding proteins α,CEBPA）调控表皮生长因子/β联蛋白（EGFR/β-catenin）信号通路影响骨髓瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的机制。方法:qRT-PCR、Western blot检测细胞中miR-32-5p、CEBPA的表达水平;转染慢病毒至骨髓瘤细胞U266,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡水平;生物信息学预测miR-32-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因、Western blot验证miR-32-5p与CEBPA的关系及在骨髓瘤细胞中的作用,Western blot检测miR-32-5p与CEBPA的表达对EGFR/β-catenin信号通路的影响。结果:与正常浆细胞比较,骨髓瘤细胞株H929、U266、IM-9、RPMI-8226中miR-32-5p表达水平显著增高,CEBPA mRNA和蛋白水平显著降低（P＜0.05）;与NC、anti-miR-con组比较,anti-miR-32-5p组miR-32-5p mRNA表达量显著降低,细胞凋亡率显著升高,24 h、48 h、72 h的OD值显著降低,细胞侵袭数目显著减少（P＜0.05）;TargetScan生物信息学预测显示,miR-32-5p与CEBPA 3' UTR存在结合位点,双荧光素酶报告实验、Western blot进一步证实miR-32-5p可与CEBPA直接结合负向调控CEBPA的表达;与NC、pcDNA-control组比较,pcDNA-CEBPA组CEBPA 表达量显著升高,24 h、48 h、72 h的OD值显著降低,凋亡率显著升高,细胞侵袭数目显著减少（P＜0.05）;与anti-miR-con组比较,anti-miR-32-5p组CEBPA蛋白表达量显著升高,EGFR、p-EGFR、β-catenin蛋白表达量显著降低;与anti-miR-32-5p+si-con组比较,anti-miR-32-5p+si-CEBPA组CEBPA蛋白表达量显著降低,EGFR、p-EGFR、β-catenin蛋白表达量显著升高（P＜0.05）。结论:骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭受miR-32-5p和CEBPA的双重调控,miR-32-5p可靶向CEBPA调控EGFR/β-catenin信号通路影响骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭。     

PD-L1对肺癌细胞迁移能力的影响

目的:探索PD-L1在肺癌细胞中的表达及其对细胞迁移能力的影响.方法:采用流式细胞术检测不同病理类型肺癌细胞株表面PD-L1分子表达水平,分别选择高、中、低表达的细胞株,后添加细胞因子诱导肺癌细胞株,采用免疫印迹术筛选出能够提高肺癌细胞株PD-L1分子表达水平的细胞因子;采用siRNA干扰技术,下调中、高表达PD-L1的肺癌细胞株中PD-L1的分子表达水平,transwell实验检测细胞迁移能力改变.结果:PD-L1在细胞株HCC827、H1299、A549(腺癌)、H226、H520(鳞癌)、H460(大细胞癌)、H446(小细胞癌)表面的表达水平分别为HCC827、H460(高表达),H1299、H226、H446、H520(中表达),A549(低表达).选择具有transwell迁移能力的腺癌细胞株H1299、A549,分别添加细胞因子IL-4、IL-6、IL-13、TGF-β-1、IFN-γ培养,筛选出TGF-β-1、IFN-γ两种因子能够上调肺癌细胞株PD-L1的表达水平,transwell实验结果显示细胞迁移能力较对照组显著增强.si-PD-L1干扰肺癌细胞株PD-L1表达后,PD-L1的表达水平明显下调,细胞迁移能力较对照组显著减弱;TGF-β-1、IFN-γ诱导细胞株PD-L1表达水平上调后能够引起细胞迁移能力增强,经siRNA干扰后,PD-L1表达水平下调,细胞迁移能力随之显著减弱.结论:PD-L1的表达能促进肺癌细胞的迁移,可能参与肺癌转移过程.     

miR-200c增强肺癌A549细胞对紫杉醇及吉非替尼的敏感度及相关机制

目的 观察上调肺癌A549细胞中miR-200c的表达对紫杉醇、吉非替尼敏感度及两药联合作用的影响及其作用机制。方法 用miR-200c转染肺癌A549细胞,Real-time PCR检测miR-200c表达,MTT法和流式细胞仪检测转染miR-200c后A549细胞对紫杉醇、吉非替尼单药及两药联合的敏感度和细胞凋亡的影响,Western blot检测TUBB3蛋白、EGFR、Akt、MAPK磷酸化蛋白及总蛋白的表达。结果 上调miR-200c表达可增强A549细胞对紫杉醇及吉非替尼敏感度并促进细胞凋亡,对两药联合无明显作用。Western blot显示转染miR-200c联合紫杉醇可下调A549细胞中TUBB3蛋白表达,联合吉非替尼下调EGFR和Akt磷酸化蛋白表达,与两药联合对EGFR和Akt磷酸化蛋白表达无明显影响。 结论 miR-200c可增强肺癌A549细胞对紫杉醇、吉非替尼的敏感度,可能分别与抑制TUBB3表达、抑制EGFR和Akt磷酸化蛋白表达有关,而对两药联合无协同抗肿瘤作用。     

微小RNA-766对肝细胞癌细胞生物学行为和PI3K/AKT/FOXO1通路的影响

目的 探讨微小RNA-766(miR-766)对肝细胞癌(HCC)细胞生物学行为和磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶信号/叉头盒O1(PI3K/AKT/FOXO1)通路的影响。方法 实时定量PCR(qPCR)检测HCC细胞的miR-766表达；向SMMC-7721细胞转染miR-766抑制剂来下调其表达，随后采用MTT和流式细胞术检测miR-766表达抑制对SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响，划痕和Transwell小室实验检测miR-766表达抑制对SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响，qPCR或Western blot检测B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(CC3)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)的表达，双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-766和FOXO1的靶向关系。结果 MiR-766在HCC细胞中的表达异常增高(P<0.05),下调miR-766明显抑制SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭能力且促进细胞凋亡(P<0.05)。MiR-766直接靶向调控FOXO1表达，下调miR-766表达能够增加FOXO1和CC3表达，...     

lncRNA ZNF674-AS1通过miR-510-5p/REPS2轴调控宫颈癌细胞HCC94 的增殖和迁移

目的：探讨lncRNA ZNF674-AS1在宫颈癌中的作用及其分子机制。方法：用qPCR法检测ZNF674-AS1在31例2019年1月至2020年7月在武汉儿童医院接受手术治疗患者的宫颈癌组织和对应的癌旁组织、宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、C33A和HCC94）和永生化子宫颈上皮细胞系中的表达。转染过表达 ZNF674-AS1 质粒及其阴性对照质粒至 ZNF674-AS1 表达最少的HCC94细胞,CCK-8法和Transwell实验检测过表达ZNF674-AS1对HCC94细胞增殖活性和迁移能力的影响。生物信息学方法预测和双荧光素酶报告基因实验验证ZNF674-AS1和miR-510-5p、REPS2三者间的互补结合关系。qPCR检测过表达ZNF674-AS1对miR-510-5p与REPS2表达的影响,WB法检测过表达ZNF674-AS对细胞增殖和迁移相关因子表达的影响。结果：与癌旁组织相比,ZNF674-AS1在宫颈癌组织中呈明显低表达（P<0.01）;与永生化子宫上皮细胞相比,ZNF674-AS1在宫颈癌细胞系中也呈明显低表达（P<0.05或P<0.01）,以HCC94细胞中表达最低（P<0.01）。过表达ZNF674-AS1 能明显抑制 HCC94细胞的增殖（P<0.05）和迁移（P<0.01）。与ZNF674-AS1相互作用的miRNA是miR-510-5p,与miR-510-5p相互作用的基因是REPS2。过表达ZNF674-AS1导致HCC94细胞中miR-510-5p的表达水平降低（P<0.01）而REPS2基因的表达水平升高（P<0.01）,同时引起细胞增殖和迁移相关的多种因子（CDK2、cyclin D3、vimentin和twist）上调或下调。结论：lncRNA ZNF674-AS1在宫颈癌组织和细胞中呈低表达,可能通过竞争性结合miR-510-5p而上调REPS2的表达,从而抑制宫颈癌HCC94细胞的增殖和迁移。     

miR-223-3p 通过靶向RAC1 调控肝细胞癌SMMC-7721 细胞的增殖和凋亡

目的：探讨miR-223-3p 通过调控Ras 相关C3 肉毒素底物1（Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1，RAC1）对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：选用2016 年8 月至2018 年8 月吉林市中心医院手术切除的30 例HCC 组织及其癌旁组织标本和人HCC 细胞系SMMC-7721、Bel-7402、HepG2 及人正常肝细胞QSG-7701，用qPCR检测HCC组织和细胞系中miR-223-3p的表达水平。分别将miR-223-3p mimics、miR-223-3p inhibitor 和siRAC1转染至SMMC-7721 细胞，通过CCK-8、克隆形成实验和Annexin V-FITC/PI 染色流式细胞术检测SMMC-7721 细胞的增殖、克隆形成和凋亡水平。用双荧光素酶报告基因实验检测miR-223-3p 与RAC1 的靶向关系，Western blotting 检测细胞中RAC1 蛋白的表达水平。结果：miR-223-3p 在HCC组织的表达水平显著低于癌旁组织（P<0.01），其表达水平与肿瘤大小、TNM分期及肿瘤分化病理特征相关（P<0.05 或P<0.01）；miR-223-3p 在HCC细胞系表达水平显著低于QSG-7701 细胞（均P<0.01），以在SMMC-7721细胞中表达水平最低。双荧光素酶报告基因实验证实RAC1 是miR-223-3p 靶基因，miR-223-3p 靶向负调控RAC1 的表达。转染miR-223-3p mimics 显著抑制SMMC-7721 细胞的增殖和克隆形成能力（P<0.05 或P<0.01），并促进细胞凋亡（P<0.01）；转染miR-223-3p inhibtor 则逆转miR-223-3p mimics 对细胞的抑制作用。结论：过表达miR-223-3p 抑制HCC细胞增殖和克隆形成能力并促进细胞凋亡，其机制可能与靶向下调RAC1表达有关。     

miR-370-3p靶向HDAC4调节卵巢癌SKOV3细胞的生长和代谢研究

  目的  研究miR-370-3p对卵巢癌（ovarian cancer，OC）细胞的生长和代谢的作用及机制。  方法  选取2017年2月至2019年2月23例于郑州人民医院行OC切除术患者的组织标本，RT-qPCR检测OC组织和细胞中miR-370-3p和组蛋白脱乙酰酶4（histone deacetylase 4，HDAC4）mRNA的相对表达量，双荧光素酶试验检测miR-370-3p与HDAC4的靶向关系，蛋白印迹法检测Ki- 67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、裂解caspase-3、Bax、HDAC4蛋白表达水平，CCK-8检测细胞增殖，流式检测细胞凋亡率，Seahorse XF24分析仪分析细胞糖酵解能力和线粒体功能，建立移植瘤动物模型，测定移植瘤体积和重量，免疫组织化学法检测Ki-67和caspase-3表达水平。  结果  在OC组织和细胞中miR-370-3p低表达，HDAC4高表达。miR-370-3p靶向下调HDAC4表达。miR-370-3p过表达显著减少SKOV3细胞增殖，增加细胞凋亡，下调PCNA和Ki-67蛋白表达，上调裂解caspase-3和Bax蛋白表达，降低糖酵解速率和糖酵解能力，升高基础呼吸速率和最大呼吸速率。在小鼠体内，miR-370-3p过表达减小移植瘤体积和重量，增加Ki-67阳性细胞比率，减少caspase-3阳性细胞比率，降低糖酵解速率和糖酵解能力，升高基础呼吸速率和最大呼吸速率。  结论  miR-370-3p通过靶向下调HDAC4来抑制OC细胞的生长和代谢。      

微小RNA-526b-3p通过JAK/STAT3信号通路对黑色素瘤细胞侵袭迁移的影响

目的 探讨微小RNA-526b-3p(miR-526b-3p)对黑素瘤细胞侵袭与迁移的影响及潜在机制。方法 实时定量PCR(qPCR)检测黑色素瘤组织和A2058细胞中miR-526b-3p和信号转导子与激活子3(STAT3)的表达水平，双荧光素酶报告基因实验验证miR-526b-3p和STAT3的靶向关系。成功构建miR-526b-3p模拟物(mimics)和过表达STAT3的质粒pcDNA3.1-STAT3后进行转染，将A2058细胞分为miR-NC组(对照)、miR-526b-3p mimics组(过表达miR-526b-3p)、miR-526b-3p mimics+pcDNA3.1-STAT3组(过表达miR-526b-3p和STAT3)。采用CCK-8法检测细胞增殖，划痕实验和Transwell小室实验检测各组细胞迁移和侵袭；运用qPCR和Western blot方法检测miR-526b-3p和JAK/STAT3信号通路相关基因STAT3和p-JAK1的表达水平。结果 黑色素瘤组织和细胞中miR-526b-3p表达下调，而STAT3表达上调(P<0.05)。相较于miR...