阿仑膦酸钠联合辛伐他汀通过Wnt/β-catenin信号通路对去卵巢骨质疏松大鼠的影响

目的观察研究阿仑膦酸钠联合辛伐他汀对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路的影响,探讨其防治骨质疏松的作用机制。方法 65只雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、A药组、B药组和A+B药组,构建去卵巢骨质疏松大鼠模型,分别检测各组骨组织骨密度(BMD)、骨生物力学指标以及骨组织Wnt、β-catenin、Runx2的mRNA和蛋白表达,观察骨组织形态学。结果模型组骨组织BMD、最大载荷和最大应力较对照组均显著降低(P0.05),A药组、B药组和A+B药组骨组织BMD、骨生物力学指标较模型组均显著增加(P0.05)。模型组骨组织Wnt、β-catenin、Runx2 mRNA和蛋白较对照组均显著降低(P0.05),A药组、B药组和A+B药组骨组织mRNA和蛋白较模型组均显著升高(P0.05)。模型组骨小梁形态结构差,数量少,排列紊乱; A+B药组骨小梁结构完整,数量增多,排列规则。结论阿仑膦酸钠联合辛伐他汀可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路相关因子的表达,增加骨质疏松大鼠骨密度,提高骨生物力学,改善骨组织微结构,发挥抗骨质疏松作用。     

富血小板血浆和脱钙骨基质促进牵拉成骨矿化过程的实验研究

目的观察局部植入富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)复合脱钙骨基质(decalcified bone matrix,DBM)是否具有协同作用加速牵拉成骨矿化过程,促进骨愈合。方法健康雄性新西兰大白兔40只,体重2.2～2.8 kg,随机分为4组,每组10只。于兔耳中央动脉取血采用Landesberg法制备PRP。于兔左胫骨胫腓关节下制备1 cm骨缺损模型。A组为对照组,行牵拉成骨1 cm;B组:植入0.5 cm长DBM并牵拉成骨0.5 cm;C组:牵拉成骨1 cm加局部注射PRP 1 mL;D组:植入0.5 cm长复合1 mL PRP的DBM并牵拉成骨0.5 cm。术后7 d开始延长,每天2次,每次0.5 mm;A、C组延长10 d,B、D组延长5 d。延长结束后进入矿化期。术后0、12、17、27、37 d摄X线片观察新生骨矿化过程;术后37 d处死实验动物,完整切取胫骨行Micro-CT扫描及三维重建,并进行生物力学测试。结果 X线片观察示术后37 d内B、C组新生骨生成情况明显优于A、D组。B、C组新生骨的骨矿物质密度(bone mineral density,BMD)、骨矿物质含量(bone mineral content,BMC)和骨体积分数(bone volume fraction,BVF)均显著高于A、D组(P<0.05);C组BMC、BMD显著高于B组(P<0.05),B、C组间BVF差异无统计学意义(P>0.05);A、D组间BMD、BMC及BVF比较差异无统计学意义(P>0.05)。C组骨小梁数量(trabecula number,Tb.N)明显多于其余各组,骨小梁间隔(trabecula spacing,Tb.Sp)小于其余各组(P<0.05);其余各组间Tb.N和Tb.Sp比较差异均无统计学意义(P>0.05)。各组骨小梁厚度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。生物力学测试显示,各组极限角位移比较差异均无统计学意义(P>0.05)。B、C组最大扭矩明显大于A、D组,C组大于B组,差异均有统计学意义(P<0.05);A、D组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 局部注射PRP可促进牵拉成骨矿化过程,加速骨缺损愈合;在正常牵拉速度下,DBM可促进牵拉成骨矿化过程;但在牵拉成骨早期植入复合PRP的DBM并未进一步加速矿化促进骨愈合。     

siRNA慢病毒载体介导DKK-1基因沉默对骨髓间充质干细胞分化影响的实验研究

背景:激素性股骨头坏死(SONFH)发病机制尚不完全明确,可能与骨髓间充质干细胞(BMSC)的异常分化密切相关。目的:研究si RNA慢病毒载体介导的DKK-1基因沉默,通过调控Wnt/β-catenin信号通路对超生理剂量糖皮质激素作用下大鼠BMSC分化的影响,探索治疗SONFH的新途径。方法:提取、培养SD大鼠BMSC,并构建DKK-1基因慢病毒干扰载体。大鼠第3代BMSC分4组:对照组(A组)、激素组(B组)、激素+无序序列慢病毒载体组(C组)、激素+DKK-1基因慢病毒干扰载体组(D组)。A组用基础培养基培养,B组加入浓度为1×10^(-6)mol/L的地塞米松,C、D组除加入地塞米松外,各自加入相应的慢病毒载体转染BMSC。14 d后提取各组细胞RNA及蛋白,对DKK-1、成脂相关基因PPAR-γ2和成骨相关基因RUNX2进行Real-time PCR及Western-blot检测,并对各组进行油红O、茜素红染色,观察各组BMSC分化情况,对结果进行统计学分析。结果:Real-time PCR及Western-blot检测结果示B、C组与A、D组相比,成骨相关基因RUNX2的表达明显较低(P<0.05),而DKK-1及成脂相关基因PPAR-γ2的表达明显较高(P<0.05)。油红O染色结果显示B、C组呈阳性,A、D组呈阴性;茜素红染色结果显示A、D组呈阳性,B、C组呈阴性。结论:DKK-1基因沉默通过特异性抑制DKK-1过表达而重新激活Wnt/β-catenin信号通路,减少成脂基因PPAR-γ2的表达、增加成骨基因RUNX2的表达,抑制BMSC成脂分化,促进BMSC成骨分化。     

siRNA对肝癌HepG2细胞β-catenin表达和细胞增殖的抑制作用

目的 研究siRNA对肝癌HepG2细胞β-catenin基因表达,β-catenin蛋白翻译及细胞增殖的抑制作用.方法 利用RT-PCR检测β-catenin基因表达,WesternBlotting方法检测肝癌HepG2细胞株β-catenin表达和HepG2细胞增殖曲线的变化.结果 shRNA转染后1dA和B组β-catenin表达弱于C和D组,2dA和B组β-catenin表达更弱,3d几乎未见表达.A和B组问比较无显著差异(P>0.05),A,B与C、D组比较相差非常显著(P<0.01).A,B两处理组细胞转染后每天所检测抑制率均显著高于对照组(P<0.01),表明细胞经A、B处理后生长受到明显抑制;两处理组细胞生长抑制率5d内逐渐增高.A与B和C与D组间差异无统计学意义(P>0.05).加入siRNA的两实验组(A,B组)β-catenin蛋白表达明显较少,对照C,D组β-catenin蛋白表达较多,提示siRNA抑制了HepG2细胞的β-catenin蛋白表达.结论 针对β-catenin的sbRNA能够抑制β-cateninmRNA表达,使胞浆中的β-cateninmRNA下降,细胞β-catenin蛋白表达明显减少,HepG2细胞增殖受到明显的抑制,这种作用对临床肿瘤有潜在的治疗价值.     

耐力运动对骨质疏松小鼠骨量、骨形态学及Linc-ROR表达的影响

目的研究长链非编码RNA-linc-ROR在运动预防卵巢切除小鼠骨量丢失、改善骨形态学破坏中的作用。方法 24只3月龄雌性C57BL小鼠随机分为假手术组(Sham)、卵巢切除组(Ovx)、卵巢切运动组(Ex)。Ex小鼠接受8周下坡跑训练,8周后所有小鼠处死,收集血液、骨骼标本检测血清激素(ELISA)、骨密度(bone mineral density,BMD)、骨形态学指标(micro-CT)及相关基因(PCR)与蛋白(Western blot)表达。采用STATA 15软件统计组间差异。结果 Ovx小鼠出现BMD下降,骨体积(bone volume/total volume,BV/TV)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、骨小梁数量(trabecular number,Tb.N)减小,骨小梁间距(trabecular separation,Tb.Sp)增加;运动增加Ovx小鼠BMD、BV/TV、Tb.Th和Tb.N,减少Tb.Sp。相比Ovx组,Ex小鼠骨组织中碱性磷酸酶阳性(alkaline phosphatase positive,ALP~+)成骨细胞数量增多。Ovx小鼠血清雌二醇(estradiol,E_2)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)下降,核因子κB受体配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)升高,运动明显增加血清E_2、OPG水平,降低RANKL浓度。Ovx小鼠骨组织Linc-ROR及Wnt3、β-catenin mRNA和蛋白表达下降,运动上调这些基因、蛋白的表达。结论耐力运动可预防骨质疏松小鼠骨量丢失、改善骨微观结构,Linc-ROR/Wnt/β-catenin信号通路可能参与这一过程。     

Wnt/β-catenin信号通路在大鼠早期激素性股骨头缺血性坏死中的作用机制研究

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在大鼠激素性股骨头缺血性坏死(steroid-induced avascular necrosis of femoral head,SANFH)中的作用。方法 12月龄清洁级雄性SD大鼠72只,体质量200~230 g,随机分为对照组(A组,n=24)、模型组(B组,n=24)和干预组(C组,n=24)。B、C组大鼠采用脂多糖联合甲泼尼龙法制备SANFH模型;C组在第1次注射甲泼尼龙时开始肌肉注射人重组分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1,SFRP1)[1μg/(kg·d)],持续30 d。A组于B组各注射时间点同法给予等量生理盐水。观察B、C组动物造模期间以及造模后一般情况。于末次注射甲泼尼龙后2、4、8周,各组取8只动物双侧股骨头标本行HE染色并计算空骨陷窝率,TUNEL染色并计算细胞凋亡率,免疫组织化学染色及Western blot检测活性β-catenin、c-Myc表达情况。结果 B、C组造模期间共6只动物死亡,均对应补充;其余动物均存活至实验完成。组织学观察示,A组为正常骨组织结构;B、C组随时间延长均出现骨质紊乱、骨小梁断裂等骨坏死表现。各时间点C组空骨陷窝率及细胞凋亡率均高于A、B组,B组高于A组,比较差异均有统计学意义(P0.05)。免疫组织化学染色及Western blot检测示,各时间点C组活性β-catenin及c-Myc表达水平均低于A、B组,B组低于A组,比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论 Wnt/β-catenin信号通路异常参与了大鼠SANFH早期病变,作用机制可能与其调控c-Myc表达,导致骨细胞凋亡有关。     

低频脉冲电磁场对去势骨质疏松大鼠腰椎骨形态计量学的影响

目的观察低频脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMFs)对去势骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠腰椎骨组织形态计量学的影响,探讨PEMFs治疗OP的作用机制。方法将66只3月龄雌性SD大鼠随机分为假手术组(A组,n=12)、PEMFs实验组(B组,n=12)、雌激素对照组(C组,n=12)、卵巢切除对照组(D组,n=30)。A组大鼠仅切除卵巢周围部分脂肪组织,不切除卵巢;其余各组大鼠均切除双侧卵巢,制备去势OP大鼠模型。术后12周,B组采用低频PEMFs(8 Hz、3.8 mT、40 min/d)干预治疗30 d;C组采用倍美力0.065 mg/(kg.d)灌胃30 d;A、D组正常饲养。观察各组大鼠一般情况,术后12周检测血清雌二醇水平;干预治疗30 d后处死大鼠,取L4椎体作组织学切片,行静态骨形态计量学分析。结果术后D组大鼠毛发逐渐稀疏,活动迟缓,精神不振,反应较迟钝;A、B、C组大鼠毛发均光洁,精神及活动正常。术后12周,A组和D组大鼠血清雌二醇水平分别为(54.93±23.52)pg/mL和(31.99±23.45)pg/mL,比较差异有统计学意义(t=2.345,P=0.029)。干预治疗30 d后HE染色观察示,D组骨质变薄,骨髓扩大,骨小梁分布稀疏并变细,见断裂现象;A、B、C组骨小梁粗细一致,分布均匀,无断裂现象。B组大鼠L4椎体骨小梁面积百分比显著高于D组(P<0.05),也高于A、C组,但差异无统计学意义(P>0.05);骨小梁厚度显著高于D组(P<0.05),低于A、C组,但差异无统计学意义(P>0.05);骨小梁数量显著低于D组(P<0.05),高于A、C组,但差异无统计学意义(P>0.05);骨小梁分离度高于D组,低于A、C组,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 8 Hz、3.8 mT的PEMFs干预30 d可有效改善去势OP大鼠骨显微结构,增加骨小梁面积百分比、骨小梁厚度,降低骨小梁数量,对大鼠OP有良好的防治作用。     

Smad2、Smad3和β-catenin在病理性瘢痕中的表达和意义

目的 研究Smad2、Smad3和β-catenin在病理性瘢痕中的表达,探讨TGF-β/Smad信号传导通路和Wnt/β-catenin信号传导通路在病理性瘢痕发病机制中的作用及相互关系.方法 应用免疫组化技术检测Smad2、Smad3和β-catenin在30例瘢痕疙瘩(A组)、30例增生性瘢痕(B组)及20例正常皮肤(C组)中的表达,并进行统计学分析.结果 Smad2、Smad3在A、B组中的阳性率高于C组,但其差异无统计学意义(P＞0.05),但在核内积聚较C组明显,且其差异有统计学意义(P＜0.05).βcatenin在A、B组中的表达与C组比较,其差异有统计学意义(P＜0.01),但A、B组之间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TGF-β/Smad信号传导通路与Wnt/β-catenin信号传导通路联合作用,导致病理性瘢痕形成.     

青娥丸调控Wnt1/β-catenin信号通路治疗糖尿病骨质疏松

目的 探究青娥丸对糖尿病骨质疏松（diabetic osteoporosis，DOP）小鼠模型Wnt/β-catenin通路的影响。方法 采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲菌素建立DOP小鼠模型，对小鼠进行药物干预，分为空白组、模型组、青娥丸低、中、高剂量组及阿仑膦酸钠组，进行一般状态观察，股骨组织进行HE染色，验证造模成功情况。生化检测各组小鼠碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、天冬氨酸转氨酶（AST）的水平，免疫组化检测股骨Wnt/β-catenin信号传导通路中相关蛋白Wnt1、β-catenin、Runx2表达水平，HE染色观察各组股骨组织细胞形态，qPCR检测股骨组织中GSK-3β、低密度脂蛋白受体相关基因5(LRP5)、COL1A1 mRNA水平。结果 与对照组相比，模型组小鼠骨小梁间隔增大，骨小梁之间连接减少，小鼠多饮多尿少动，尾静脉血糖值增加（P＜0.01），血清中ALP、BUN、AST含量和GSK-3β mRNA水平均增加（P＜0.01），体重和LRP5、COL1A1 mRNA水平下调（P＜0.01），Wnt1、β-catenin、Runx2蛋白呈少量阳性表达（P＜0.01）。与模型组相比，青娥丸组和阿仑膦酸钠组骨小梁间隔变小，骨小梁间的连接增多，尾静脉血糖值下降（P＜0.01），血清中ALP、BUN、AST含量和GSK-3β mRNA水平均减少（P＜0.01），体重和LRP5、COL1A1 mRNA水平上调（P＜0.01），Wnt1、β-catenin、Runx2蛋白阳性表达增多（P＜0.01）。结论 青娥丸可增强DOP小鼠骨组织的修复作用，其机制可能与Wnt1/β-catenin信号通路的激活有关。 关键词：中医中药；青娥丸；糖尿病性骨质疏松；骨组织；Wnt1/β-catenin信号通路     

三七透明质酸钠凝胶对家兔硬膜外瘢痕中Cox-2、TGF-?茁1及CTGF表达的影响

目的:研究三七透明质酸钠凝胶对家兔硬膜外瘢痕中环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,Cox-2)、转化生长因子β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)及结缔组织生长因子(connective-tissue growth factor,CTGF)表达的影响。方法:将72只大耳白品系家兔随机分为A、B、C、D 4组,制作家兔L6椎板切除模型,分别在硬膜囊周围滴加生理盐水、三七浓缩液、透明质酸钠、三七透明质酸钠凝胶各0.5ml。各组于术后1、2、4周取手术局部硬膜外瘢痕组织,采用原位杂交法检测Cox-2 mRNA和CTGF mRNA的表达情况,采用免疫组化法检测TGF-β1抗体的表达情况。结果:术后1、2周时D组硬膜外瘢痕中Cox-2 mRNA的表达较其他各组显著减少(P<0.05),其他各组间无显著性差异(P>0.05);各组2、4周时较1周时及A、B、C组4周时较2周时均显著减少(P<0.05),D组2周和4周时无显著性差异(P>0.05)。术后1周时CTGF mRNA的表达B、C、D组较A组及D组较B、C组均显著降低(P<0.05);2周时D组较其他各组均降低(P<0.05),其他各组间无显著性差异(P>0.05);A、C组2、4周及B组4周较1周时均显著减少(P<0.05),其他各组各时间点之间无显著性差异(P>0.05)。术后1周时TGF-β1抗体的表达B、C、D组较A组及D组较B、C组均显著减少(P<0.05),2周时D组较A、B、C组均显著减少(P<0.05),其他各组之间无明显差异(P>0.05);各组2周与1周时比较均无显著性差异(P>0.05),4周时较1、2周时均明显减少(P<0.05)。术后4周时各指标各组之间无显著性差异(P>0.05)。结论:三七透明质酸钠凝胶可明显抑制硬膜外瘢痕组织中与成纤维细胞增殖相关的Cox-2、TGF-β1、CTGF的表达,其作用优于单独使用三七浓缩液或透明质酸钠。     

GSK3β在病理性瘢痕中的表达和意义

目的 研究Wnt/β-catenin 通路中糖原合成酶激酶3β(GSK 3β)在病理性瘢痕中的表达情况,以确定GSK3β在病理性瘢痕中的作用.方法 利用免疫组化技术检测GSK 3β在30例瘢痕疙瘩(A组),30例增生性瘢痕(B组)及20例正常皮肤(C组)中的表达,并进行统计学分析.结果 GSK 3β在A、B组中的表达与C组比较,其差异有统计学意义(P ＜0.05),但A、B组之间的差异无统计学意义(P ＞0.05).结论 GSK 3β是病理性瘢痕形成的重要机制之一,Wnt/β-catenin通路的激活在病理性瘢痕形成中起到重要作用.     

过表达miR-664a-5p激活Wnt/β-catenin信号通路促进骨质疏松大鼠骨重建

目的 探究过表达miR-664a-5p的脂肪间充质干细胞（miR-664a-5p-ADSCs）通过激活Wnt/β-catenin信号通路对骨质疏松（OP）大鼠骨重建的促进作用。方法 将大鼠分为Sham组、OVX组、ADSCs组和miR-664a-5p-ADSCs组。切除卵巢建立OP大鼠模型,Sham组仅切除脂肪组织。3个月后,ADSCs组和miR-664a-5p-ADSCs组分别尾静脉注射miR-664a-5p-ADSCs及其阴性对照ADSCs;Sham组和OVX组注射等量生理盐水。1个月后进行指标检测。micro-CT、HE染色、TRAP染色检测OP大鼠骨重建情况;免疫组化染色、RT-qPCR、Western blot检测Runx2、ALP、OCN、Wnt、β-catenin mRNA和蛋白的表达。结果 Sham组骨小梁完整,破骨细胞较少;与Sham组相比,OVX组骨小梁稀疏且变薄,破骨细胞较多;Runx2、ALP、OCN、Wnt、β-catenin mRNA和蛋白水平明显降低（P<0.05）;与OVX组相比,ADSCs组、miR-664a-5p-ADSCs组骨小梁增加且增厚,破骨细胞较少;Runx2、ALP、OCN、Wnt、β-catenin mRNA和蛋白水平明显升高,且miR-664a-5p-ADSCs组上述效果强于ADSCs组（P<0.05）。结论 过表达miR-664a-5p的ADSCs通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进OP大鼠骨重建。     

雌二醇对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察雌二醇对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路的影响,探讨其防治绝经后骨质疏松症的作用机制。方法将80只雌性SD大鼠随机分为对照组、假手术组、去势组、药物组,构建绝经后骨质疏松大鼠模型,检测骨组织骨密度(bone mineral density,BMD)和生物力学指标,运用qRT-PCR和免疫组化分别检测骨组织Wnt、β-catenin、BMP-2的mRNA和蛋白表达,通过HE染色观察骨组织形态学。结果去势组股骨BMD、生物力学指标较对照组和假手术组均显著降低(P0.05),药物组股骨BMD、生物力学指标较去势组均显著升高(P0.05)。去势组骨组织Wnt、β-catenin、BMP-2的mRNA和蛋白表达较对照组和假手术组均显著降低(P0.05),药物组骨组织Wnt、β-catenin、BMP-2的mRNA和蛋白表达较去势组均显著升高(P0.05)。去势组骨小梁明显减少,排列稀疏不规则,连接不完整,骨髓腔变大,有大量纤维组织。药物组骨小梁数量减少不明显,粗细均匀稍致密,排列尚规则,连续性完整性较好。结论雌二醇通过Wnt/β-catenin信号通路作用于BMP-2,增加了去卵巢骨质疏松大鼠骨密度,提高了骨生物力学性能,能够改善骨组织结构,发挥了抗骨质疏松作用。     

针刺通过Wnt信号通路对绝经后骨质疏松骨折大鼠骨密度和骨代谢的作用研究

目的 探讨针刺对绝经后骨质疏松骨折大鼠骨损伤的治疗作用及其可能作用机制。方法 选取36只雌性SD大鼠采用双侧卵巢摘除法建立绝经后骨质疏松症模型,造模成功3周后采用闭合骨折法建立股骨骨折大鼠模型,随机分为模型组、针刺组和针刺+Wnt拮抗剂组,另设假手术组。针刺组给予针刺治疗,针刺+Wnt拮抗剂组给予针刺治疗同时皮下注射20 mg/kg Wnt拮抗剂DKK1;假手术组及模型组仅给予常规饲养。检测各组大鼠股骨骨密度（BMD）、组织矿物质密度（TMD）、骨体积分数（BV/TV）、骨小梁数量（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）和骨小梁分离度（Tb.Sp）、血清炎性因子和成骨影响因子水平;HE染色观察股骨组织病理学变化,评定骨损伤情况;RT-PCR和Western blot检测大鼠骨痂组织分泌型蛋白Wnt3a和β连环蛋白（β-catenin）mRNA与蛋白表达情况。结果 与假手术组比较,模型组大鼠ALP、PINP、股骨组织病理学评分、BMD、TMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Wnt3a和β-catenin mRNA与蛋白表达水平降低,Tb.Sp、TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高（P<0.05）。与模型组比较,针刺组大鼠ALP、PINP、股骨组织病理学评分、BMD、TMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Wnt3a和β-catenin mRNA与蛋白表达水平升高,Tb.Sp、TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低（P<0.05）。与针刺组比较,针刺+Wnt拮抗剂组大鼠ALP、PINP、股骨组织病理学评分、BMD、TMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Wnt3a和β-catenin mRNA与蛋白表达水平降低,Tb.Sp、TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高（P<0.05）。结论 针刺能够改善PMOP股骨骨折大鼠骨密度,减轻体内炎症反应,提高成骨影响因子水平,可能是通过调节Wnt信号通路发挥作用。     

马血清致敏条件下鸡乙醇性股骨头坏死模型的制作

目的 制作马血清致敏条件下鸡乙醇性股骨头坏死的动物模型.方法 取64只健康成年雄性三黄鸡随机分为4组.A组:马血清+乙醇组;B组:单纯乙醇组;C组:单纯马血清组;D组:空白对照组.于灌胃第4、8周末分批处死,取股骨头制作苏木素-伊红(HE)和冰冻切片,光镜观察组织学变化并测算骨小梁面积分数、空骨陷窝计数、最大脂肪细胞平均直径、股骨头坏死发生率等指标.于灌胃第8周末取股骨头制作标本在扫描电镜下观察组织学变化.结果 灌胃第4周末,各组股骨头组织未见明显病理改变.灌胃第8周末,A组股骨头软骨下骨髓内造血组织明显?栽 减少,脂肪细胞增殖肥大,骨小梁明显变细、稀疏,多处断裂,骨小梁面积分数降低,空骨陷窝显著增多,与其他3组比较,P<0.01.A、B、C、D组股骨头坏死发生率分别为87.5%、25.0%、25.0%、0%.扫描电镜下观察可见A组股骨头表面凹陷,伴有多处裂痕,骨小梁失去原有形态,变细、稀疏,多处断裂,空骨陷窝增多,而B、C、D组未见到这些变化.结论 鸡是制作乙醇性股骨头坏死动物模型的理想动物;马血清致敏条件下,可以缩短造模周期,提高造模成功率.     

改良型富血小板纤维蛋白与β-磷酸三钙复合物诱导骨再生的研究

目的探讨改良型富血小板纤维蛋白(advanced-platelet-rich fibrin,A-PRF)与β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)复合物诱导骨再生的效果。方法雌性新西兰兔32只,取耳中动脉血制备A-PRF;实验动物随机分为6组,制备双后肢股骨髁骨缺损模型(直径6 mm,深8 mm)后,A、B、C、D、E组(n=6)分别采用不同比例(1∶1、2∶1、4∶1、1∶2、1∶4,V/V)APRF与β-TCP复合物修复,F组(n=2)不作处理。术后8、12周行大体观察、X线片检查、Micro-CT观测,其中A～E组于Micro-CT图像测量新生骨相关指标,包括骨体积/组织体积(bone volume/total volume,BV/TV)、骨小梁数目(trabecular number,Tb.N)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、骨小梁间隙(trabecular spacing,Tb.Sp);同时A～E组标本行生物力学测试,测量压缩强度和弹性模量。结果大体及X线片观察示,各组术后12周表面骨质形成均优于8周;同时间点B组骨缺损修复以及新骨形成情况均优于其他组。Micro-CT测量示,术后8、12周时,B组新生骨小梁最多,且排列紧密,其中BV/TV、Tb.N、Tb.Sp优于其他组(P0.05)。组内术后12周B组Tb.N及Tb.Th, C组BV/TV及Tb.Sp、D组Tb.Sp与8周比较,差异均有统计学意义(P0.05)。生物力学测试示,术后8、12周,B组压缩强度和弹性模量最大,C组最小,组间比较差异有统计学意义(P0.05);各组12周时压缩强度和弹性模量均大于8周,差异有统计学意义(P0.05)。结论 A-PRF与β-TCP复合物可修复兔股骨髁骨缺损,并且以2∶1 (V/V)比例复合成骨效果最佳。     

1,25-二羟维生素D3联合ARB治疗早期糖尿病肾病疗效观察

目的:观察1,25-二羟维生素D3联合ARB治疗早期糖尿病肾病的临床疗效。方法:84例符合早期糖尿病肾病诊断标准的患者按性别、年龄配对再随机分为四组(对照组及治疗A组、治疗B组、治疗C组各21例)。所有入组患者均予以优化糖尿病治疗,治疗A组在常规治疗基础上加骨化三醇胶丸0.25μg每日1次,口服;治疗B组加厄贝沙坦片75mg每日1次,口服;治疗C组加骨化三醇胶丸0.25μg每日1次,联合厄贝沙坦片75mg每日1次,口服,疗程3个月。观察各组患者治疗前后空腹血浆血糖(FPG)及餐后2h血浆血糖(2hPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿微量白蛋白(U-mAlb)、尿β2微球蛋白(β2-MG),超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血浆肾素(PRA)等。结果:治疗C组hs-CRP与对照组、治疗A组及治疗B组其间差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗A组、治疗B组及治疗C组U-mAlb及PRA值分别于治疗前相比有明显下降,其前后间差异有统计学意义(P<0.05);治疗A组及治疗C组U-β2MG值分别于治疗前相比有明显下降,其前后间差异亦有统计学意义(P<0.05);治疗C组在U-mAlb、U-β2MG及PRA值变化方面分别与对照组、治疗A组及治疗B组相比其间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:联合应用1,25-二羟维生素D3及ARB可有效减轻或逆转早期糖尿病肾病患者肾小球及肾小管的损伤,其机制可能与联合用药加强抑制炎症反应及抑制RASS系统作用有关。     

阿仑膦酸钠对IL-1β体外诱导培养的大鼠膝关节软骨细胞影响的实验研究

目的二膦酸盐类药物可抑制骨重塑,通过观察阿仑膦酸钠(alendronate,ALN)对IL-1β体外诱导培养的大鼠膝关节软骨细胞的影响,探讨ALN治疗骨性关节炎(osteoarthritis,OA)的可行性。方法取15只1月龄SPF级SD大鼠(雌雄不限,体重100～150g)膝关节软骨,体外培养软骨细胞并传至第3代。倒置相差显微镜下观察细胞形态并进行鉴定。将第3代软骨细胞分为3组:空白对照组(A组)软骨细胞用常规DMEM完全培养液培养5d;IL-1β诱导组(B组)软骨细胞以10ng/mL重组人IL-1β培养2d后更换为常规DMEM完全培养液培养3d;IL-1β诱导后加ALN培养组(C组)软骨细胞以10ng/mL重组人IL-1β培养2d后更换为浓度为1×10-6mol/L的ALN培养3d。培养后取各组细胞进行免疫细胞化学染色及实时PCR检测,观察细胞中Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,ColⅡ)、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase13,MMP-13)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平。结果甲苯胺蓝染色示培养的细胞呈异染性,证实为软骨细胞。免疫细胞化学染色显示:A、B、C组ColⅡ表达积分吸光度(IA)值分别为15.3770±0.5718、5.4632±0.4504、10.2907±0.4992,C组高于B组,但低于A组,差异有统计学意义(P<0.05);MMP-13表达IA值分别为2.7775±0.1996、6.9981±0.3297、3.0686±0.2056,C组明显低于B组(P<0.05),但与A组比较差异无统计学意义(P>0.05);β-catenin表达IA值分别为4.3903±0.5519、11.7999±0.3487、6.6117±0.3818,C组低于B组,但高于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。实时PCR检测示,C组ColⅡmRNA表达高于B组,MMP-13及β-catenin的mRNA表达低于B组,比较差异均有统计学意义(P<0.05);ColⅡ和β-catenin mRNA表达高于A组,MMP-13mRNA表达低于A组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 ALN可能通过抑制IL-1β诱导的大鼠膝关节软骨细胞中ColⅡ的降解并下调MMP-13及β-catenin因子的表达,对软骨细胞具有一定的保护作用。     

Wnt/β-catenin通路在FSHβ增强BMP9诱导间充质干细胞成骨分化的作用研究

目的 探讨Wnt/β-catenin通路在促卵泡激素β亚基（follicle-stimulating hormone β-subunit,FSHβ）增强骨形成蛋白9（bone morphogenetic protein 9,BMP9）诱导间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）成骨分化的作用。方法 C3H10T1/2细胞为研究对象,通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色方法检测Ad-GFP对照组、Ad-FSHβ实验组、Ad-BMP9实验组和Ad-BMP9+Ad-FSHβ实验组等各研究组ALP表达;茜素红S染色（alizarin red s,ARS）方法检测各研究组钙盐小节沉积;实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR）技术检测各研究组cyclin D1 转录。结果 单独的Ad-FSHβ实验组骨形成早、晚期标志物（ALP和钙盐小结）与Ad-GFP对照组相比无显著差异;单独的Ad-BMP9实验组中,两者的表达均高于Ad-GFP对照组;Ad-FSHβ与Ad-BMP9联合实验组的表达量较Ad-BMP9实验组显著增加。检测各研究组Wnt/β-catenin通路的靶基因cyclin D1的转录,与Ad-GFP对照组相比,Ad-FSHβ实验组的表达无显著变化,Ad-BMP9实验组的表达水平显著升高（P<0.01）,Ad-FSHβ与Ad-BMP9联合实验组cyclin D1 mRNA表达量显著高于Ad-BMP9实验组（P<0.01）。Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV-939处理后,Ad-BMP9与XAV-939联合实验组cyclin D1 mRNA的水平较Ad-BMP9实验组下降（P<0.01）,Ad-FSHβ、Ad-BMP9与XAV-939三者联合实验组水平也较Ad-FSHβ与Ad-BMP9联合实验组下降（P<0.05）。ALP的表达呈现出与cyclin D1 转录相似的变化趋势。结论 Wnt/β-catenin通路可能在促卵泡激素β亚基增强骨形成蛋白9诱导MSCs成骨分化中起重要作用。