水飞蓟宾通过PI3K/AKT/FoxO1通路改善骨质疏松大鼠骨代谢和骨量

目的探讨水飞蓟宾对糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)大鼠骨量影响以及对PI3K/AKT/Fox O1通路影响。方法将30只12周龄雄性Sprague Dawley大鼠随机分为3组:对照组(n=10);地塞米松组(n=10)及地塞米松+水飞蓟宾组(n=10),对应给予地塞米松及水飞蓟宾治疗。12周后取双侧股骨进行微型计算机断层扫描(Micro-CT)和骨生物力学检测。同时检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(CTX-I)、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OC)。蛋白印迹分析大蒜素对PI3K/AKT/Fox O1通路影响。结果地塞米松组大鼠的骨密度(BMD)、骨微观结构和骨生物力学指标均明显低于对照组(P0.05)。骨吸收指标(TRACP和CTX-I)升高,骨形成指标(ALP和OC)降低。水飞蓟宾治疗后骨密度、骨微观结构、骨生物力学指标均有明显改善。与地塞米松组相比,地塞米松+水飞蓟宾组的TRACP和CTX-I显著降低,ALP和OC显著升高。进一步研究表明水飞蓟宾可以通过抑制地塞米松介导PI3K/AKT/Fox O1信号通路上调来调控骨代谢。结论水飞蓟宾可以通过PI3K/AKT/Fox O1信号通路调控骨代谢,提高GIOP大鼠骨密度、骨微观结构和骨强度。     

异补骨脂素对去卵巢大鼠骨代谢的影响研究

目的研究异补骨脂素对去卵巢大鼠骨代谢的影响。方法取3月龄雌性SD大鼠40只,随机分为4组,假手术对照组,模型组,雌二醇组(苯甲酸雌二醇0.2 mg/kg,皮下注射,每周1次),异补骨脂素组。手术6 w后,异补骨脂素组用25 mg/kg(此浓度经过前期浓度筛选得到)异补骨脂素灌胃,每天1次,1周停止1次,模型组灌胃与用药组等体积生理盐水,假手术组正常饲养。12 w后双能X骨密度仪检测全身骨密度后处死,分离骨组织,于AG-X系列台式电子万能试验机检测左侧股骨和椎骨生物力学指标,血清中骨钙素(osteocalcin,OC)和抗酒石酸性磷酸酶5b(tartrate resistant acid phosphatase 5b,TRACP5b)检测,右侧股骨护骨素(osteoprotegerin,OPG),RANKL免疫组织化学染色,剥离心、肝、脾、肺、肾、肾上腺和子宫称重,计算器官指数,并做常规病理学检测。结果与假手术组比较,模型组大鼠体质量、全身骨密度、股骨骨密度、腰椎骨密度及血清OC、TRACP 5b,胫骨微组织结构和股骨生物力学性能差异极显著,有统计学意义(P0.01),说明骨质疏松造模良好;与模型组比较,异补骨脂素组大鼠体质量、全身骨密度、股骨骨密度、腰椎骨密度及血清OC、TRACP 5b,胫骨微组织结构和股骨生物力学性能显著差异有统计学意义(0.01P0.05)。与模型组比较,阳性对照组大鼠全身与股骨骨密度、血清OC、TRACP 5b和股骨生物力学性能极显著差异有统计学意义(P0.01)。药物处理组与阳性对照相比无统计差异。结论 25 mg/kg的异补骨脂素能增加SD大鼠骨密度,改善骨组织微结构,有效提升骨生物力学性能,促进骨形成,降低骨质疏松骨折发生的风险。     

吡咯喹啉醌通过降低氧化应激和RANKL/OPG比率减少去卵巢大鼠骨量流失研究

目的观察补充吡咯喹啉醌(PQQ)对去卵巢诱导的骨质疏松大鼠骨量和骨强度的影响。方法 30只12周龄(225～260 g)雌性SD大鼠随机分为3组(每组n=10),即OVX组、OVX+PQQ组和Sham组;其中OVX组和OVX+PQQ组进行手术切除双侧卵巢,而Sham组进行假手术; OVX+PQQ组术后食物添加4 mg/kg PQQ。治疗12周,在治疗结束收集血液和股骨,分别进行微型计算机断层扫描(Micro-CT)、生物力学检测、组织切片检测、蛋白印迹检测(WB)以及血清指标检测。结果Micro-CT和HE切片表明,与Sham组相比,OVX组的股骨骨密度和骨微观参数显著降低(P0.05); OVX组的小梁间距显著增加(P0.05),而OVX+PQQ上述指标明显优于OVX组(P0.05)。生物力学检测表明Sham组具有最高的极限载荷、能量和刚度;与OVX组比较,OVX+PQQ组极限载荷、能量和刚度明显增加(P0.05)。血清学表明,与Sham组大鼠相比,OVX大鼠血清CTX-1、TRACP-5b和MDA水平均显著升高,而T-AOC和SOD活性显著降低; PQQ治疗后显著改善(P0.05)。WB检测结果表明与Sham组大鼠相比,OVX大鼠RANKL和RANKL/OPG比率均显著升高,而OPG和FOXO1表达显著降低;经过PQQ后得到RANKL和RANKL/OPG比率均显著降低,而OPG和FOXO1表达显著增加(P 0.05)。结论 PQQ通过抑制氧化应激和降低RANKL/OPG比率来增加去卵巢大鼠骨量和骨强度。     

二甲双胍对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响及机制研究

目的 以雌二醇为对照,观察二甲双胍(metformin, MF)对去卵巢大鼠骨密度及骨矿含量的影响,并从细胞、分子水平探究MF可能的骨保护机制。方法 将60只雌性SD大鼠随机均分4组：假手术（SHAM）组、去卵巢（OVX）组、去卵巢+二甲双胍（OVX+MF）组和去卵巢+雌二醇(OVX+E2 )组。分组灌胃给药60 d后测量大鼠右侧胫骨骨密度和骨矿含量;分离培养各组大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）并诱导其向成骨细胞分化,用MTT法测定细胞活性及增殖能力;测定各组碱性磷酸酶（ALP）活性、矿化结节数目、钙含量以及I型胶原（collagen type I）、骨钙素（OC）、骨保护素 (OPG)、NFκB受体的配体 (RANKL)、白细胞介素-6（IL-6）基因表达水平。结果 与OVX组相比,OVX+MF组和OVX+E2组成骨细胞的增殖能力与ALP活性明显增强,骨密度、骨矿含量以及钙沉积量显著增加(P均<0.05),且两组collagen type I、OC、OPG mRNA的表达水平显著升高,而RANKL、IL-6mRNA表达明显受到抑制;但OVX+MF组去卵巢大鼠成骨细胞的增殖能力、ALP活性、钙沉积量、collagen type I、OC、OPG mRNA表达水平低于OVX+E2组,RANKL、IL-6mRNA表达高于OVX+E2组（P均<0.05）;与SHAM组比较,OVX+MF组的collagen type I、OC、OPG mRNA的表达水平更高（P<0.05）。结论 二甲双胍可能通过OPG/RANKL/RANK信号通路促进BMSCs向成骨细胞分化,有效逆转去卵巢大鼠骨质疏松的状态,这种潜在的骨保护作用可能会改善糖尿病引起的骨质疏松。     

人参皂苷Rh2通过OPG/RANKL信号通路介导对老年大鼠骨量流失的保护作用

目的观察人参皂苷Rh2对老年大鼠骨强度和骨量的影响,并探索可能的机制。方法 30只雌性Sprague Dawley大鼠随机分为3组:对照组(Con,10只3月龄大鼠);模型组(Mod,10只24月龄老年大鼠)及老年大鼠+人参皂苷Rh2治疗组(Rszg,大鼠每天接受300 mg/kg人参皂苷Rh2治疗12周)。12周后取双侧股骨进行微型计算机断层扫描(Micro-CT)、组织病理切片、骨生物力学以及蛋白质印迹(WB)检测。结果 Mod组大鼠的骨密度(BMD)、骨显微结构和最大载荷和弹性模量等指标均明显低于Con组(P0.05)。人参皂苷Rh2治疗后骨密度、骨显微结构、最大载荷和弹性模量等指标均有明显改善,差异有统计学意义(P0.05)。WB检测显示Mod组OPG和Runx2表达水平较Con组明显下调,而RANKL表达水平明显上调(P0.05)。Rszg组OPG和Runx2表达水平较Mod组明显上调,而RANKL表达水平显著下调。结论人参皂苷Rh2治疗可以显著改善老年大鼠股骨骨强度和骨量,而这种疗效可能通过OPG/RANKL信号通路来介导。     

GLP-1受体激动剂利拉鲁肽对糖皮质激素性骨质疏松大鼠的疗效和作用机制研究

目的讨论GLP-1受体激动剂利拉鲁肽对糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)大鼠模型骨代谢指标的影响,包括对骨量、骨组织微结构、骨生物力学、骨转换标志物的作用。方法选取30只8周龄雄性SD大鼠,随机分为对照组、地塞米松组、利拉鲁肽干预组,每组各10只。除对照组外,各组均予以地塞米松1 mg/kg肌肉注射(2次/周)诱导糖皮质激素性骨质疏松。利拉鲁肽组同时给予利拉鲁肽200μg/(kg·d)皮下注射干预。对照组给予同等体积0. 9%氯化钠肌肉注射。干预12周后收集两侧股骨和第五腰椎行Micro-CT和骨生物力学检测。同时收集外周血清检测抗酒石酸酸性磷酸酶(Str ACP)、Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTX-1)、碱性磷酸酶(ALP)、和骨钙素(OC)。结果地塞米松组股骨远端干骺端和第五腰椎的骨密度(BMD)、组织骨密度(TMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)、连接密度(Conn.D)、最大载荷和弹性模量均较对照组明显降低,骨吸收指标Tr ACP、CTX-1显著升高,骨形成指标ALP、OC显著降低(均P0. 05)。利拉鲁肽干预组大鼠的骨密度、骨微结构、骨生物力学指标得到明显改善,且Tr ACP、CTX-1明显降低,ALP、OC明显升高(均P0. 05)。结论利拉鲁肽能对抗糖皮质激素的致骨质疏松作用,改善糖皮质激素造成的骨质疏松状态,机制可能与减少骨吸收以及促进骨形成有关。     

跑台运动对阿霉素联合醋酸戈舍瑞林诱导骨质疏松大鼠骨密度和骨代谢的影响

目的研究阿霉素(doxorubicin,DOX)和醋酸戈舍瑞林(goserelin acetate,GA)联合作用对大鼠骨密度和骨代谢的影响,以及跑台运动对DOX联合GA诱导的大鼠骨质疏松的防治效果。方法 8周龄雌性SD大鼠64只,被随机分为8组,每组8只:安静对照组(SED)、DOX干预组(SED+DOX)、GA干预组(SED+GA)、DOX和GA联合干预组(SED+DOX+GA)、跑台运动对照组(EX)、跑台运动结合DOX干预组(EX+DOX)、跑台运动结合GA干预组(EX+GA)、跑台运动结合DOX和GA联合干预组(EX+DOX+GA)。药物和跑台运动干预周期均为8周,8周后测试所有大鼠左侧股骨骨密度和血清骨代谢指标。结果与其相对应的非药物干预各组相比较,药物干预各组大鼠骨密度显著降低、骨形成指标ALP和BGP显著降低而骨吸收指标Ca2+和TRACP5b显著升高;与DOX单独干预组及GA单独干预组相比较,DOX和GA联合干预组大鼠骨密度显著降低、骨形成指标ALP和BGP显著降低而骨吸收指标Ca2+和TRACP5b显著升高;与其相对应的安静组相比较,跑台运动各组大鼠骨密度显著升高、骨形成指标ALP和BGP显著升高而骨吸收指标Ca2+和TRACP5b显著降低。结论 DOX和GA单独或联合作用均可导致大鼠骨质疏松症的发生,且DOX和GA联合作用诱导大鼠骨质疏松的程度显著大于DOX或GA单独作用的结果;跑台运动可以有效降低DOX和GA单独或联合作用诱导的大鼠骨质疏松。     

基于OPG/RANKL/RANK轴观察加味阳和汤及其拆方对去卵巢骨质疏松大鼠的影响

目的观察加味阳和汤及其拆方对OPG、RANKL、RANK含量的影响,探讨其防治绝经后骨质疏松症可能的作用机制及组方配伍的合理性。方法选取48只雌性SD大鼠,加味阳和汤按君臣佐使关系拆方,将大鼠等量随机分为假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、君药+臣药组(A组)、君药+臣药+佐药组(B组)、君药+臣药+佐药+使药组(C组)、戊酸雌二醇组(E2V)。除SHAM组外,均采用去卵巢骨质疏松大鼠模型,干预给药后(灌胃90 d),处死动物后取右侧股骨及胫骨通过双能X射线骨密度仪检测骨密度(bone mineral density,BMD)及骨矿含量(bone mineral content,BMC),取左侧股骨行HE染色观察骨显微结构,检测血清中骨代谢指标ALP、Ca~(2+)、P~(3-)、E2及血清OPG、RANKL、RANK含量。结果与SHAM组相比,OVX组大鼠股骨及胫骨BMD、BMC降低(P0.05),骨小梁变细、间隙增大、结构缺失,血清Ca~(2+)、P~(3-)、E2、OPG水平下降(P0.05),血清ALP、RANKL、RANK水平上升(P0.05);与OVX组比较,除A组大鼠股骨及胫骨BMD、BMC、血清Ca~(2+)、P~(3-)、E2、OPG、RANKL及B组P~(3-)水平无显著差异外(P0.05),各给药组大鼠股骨及胫骨BMD、BMC均显著升高(P0.05),骨小梁增多、间隙减小、结构趋向完整,血清Ca~(2+)、P~(3-)、E2、OPG水平上升(P0.05),血清ALP、RANKL、RANK水平下降(P0.05)。结论加味阳和汤及其拆方通过提高去卵巢骨质疏松大鼠BMD、BMC,降低骨代谢,改善骨显微结构从而发挥治疗作用,调节OPG/RANKL/RANK轴是可能的机制。     

地塞米松对护骨素基因敲除小鼠骨微结构的影响

目的探讨小剂量地塞米松对生长期小鼠骨密度及骨微结构的影响及其与OPG途径的关系。方法 20只4周龄OPG~(-/-)雌性小鼠及20只野生型小鼠随机分四组(n=10):野生型安慰剂组(WT+saline),野生型地塞米松干预组(WT+DEX,地塞米松1mg/kg体重,肌肉注射,每周3次),OPG~(-/-)敲除小鼠安慰剂组(OPG~(-/-)+saline),OPG~(-/-)敲除小鼠DEX干预组(OPG~(-/-)+DEX,地塞米松1 mg/kg体重,肌肉注射,每周3次)。6周后处死小鼠,一侧胫骨行显微CT扫描分析。结果OPG~(-/-)组的组织骨密度、骨小梁体积分数、骨小梁数量、骨小梁厚度均较其他三组降低(P0.05)。OPG~(-/-)+DEX组的组织骨密度、骨小梁体积分数、骨小梁数量、骨小梁厚度均较WT及WT+DEX组降低(P0.05)。OPG~(-/-)组的骨小梁模型因子及骨小梁分离度均较其他三组增加(P0.05);OPG~(-/-)+DEX组的骨小梁模型因子及骨小梁分离度均较WT及WT+DEX组增加(P0.05)。WT及WT+DEX组之间骨小梁微结构参数均无统计学差异。结论在生长期小鼠OPG基因功能缺失时,地塞米松有部分拮抗骨量丢失的作用,表明除了OPG/RANKL途径,地塞米松对骨代谢的影响是多途径的。     

卵巢切除大鼠在不同时期RANKL、OPG蛋白表达的变化及与BTMs的相关性

目的探讨卵巢切除大鼠在不同时期骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的表达及与骨转换标志物(BTMs)的关系。方法将SD雌性大鼠随机分成假手术组(Sham)和去卵巢骨质疏松模型组(OVX),模型组行双侧卵巢切除术,术后第2、6、10、14周分批取材,采用Western blot检测各时期大鼠骨组织OPG、RANKL蛋白表达,采用Elisa检测各时期大鼠血清骨转换标志物BGP、BALP、CTX-I、TRAP-5b的变化。结果 OVX组在术后第2周(P0.01)和第10、14周(P0.05)骨组织RANKL蛋白表达均较Sham组显著升高,OPG蛋白表达在第2周(P0.01)和第6周(P0.05)均显著降低。(2)与Sham组相比,OVX组术后第2周血清BGP、BALP、CTX-I(P0.05)和TRAP-5b(P0.01)水平均显著升高;OVX组术后第6周血清BGP、BALP水平显著升高(P0.01),CTX-I(P0.05)和TRAP-5b(P0.01)水平显著下降;OVX组术后第10、14周血清CTX-I(P0.05)、BALP(P0.01)水平显著升高。(3)骨转换标志物血清CTX-I、TRAP-5b水平与骨OPG表达成负相关(P0.01),与骨RANKL表达成正相关(P0.05)。结论相关性分析显示骨转换标志物CTX-I、TRAP-5b与骨OPG成负相关,与骨RANKL成正相关。     

小剂量地塞米松对生长期小鼠骨微结构及骨代谢的影响

目的 观察小剂量地塞米松对生长期小鼠骨微结构及骨代谢的影响。方法 24只4周龄雌性小鼠随机分两组（n=12）：地塞米松组（DEX,1mg/kg,肌肉注射,2次/周）,对照组。4w后处死小鼠,检测血清Ⅰ型前胶原N端肽(PINP)和骨Ⅰ型胶原交联C端肽（β-CTX）蛋白的表达水平;检测胫骨干骺端骨保护素（OPG）、核因子-κ B受体活化因子配体（RANKL）表达;抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色方法检测破骨细胞;一侧胫骨行显微CT扫描分析。结果 DEX组小鼠胫表观骨密度和骨体积分数明显高于对照组（P<0.05）,骨小梁数量高于对照组,结构模型指数低于对照组,但无统计学意义。DEX组小鼠血清PINP及β-CTX浓度显著下降（P<0.05）。DEX组小鼠胫骨干骺端OPG表达明显增多,而RANKL表达无明显变化,相对于对照组,OPG/RANKL比值升高。TRAP染色示DEX组小鼠胫骨干骺端破骨细胞数量较对照组减少。结论 小剂量地塞米松间断给药可能通过上调OPG/RANKL比率维持生长期小鼠骨量。     

培本固疏方对去势大鼠骨代谢及骨生物力学的影响

目的观察培本固疏方对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨密度、骨生物力学及骨代谢指标的影响。方法将42只SD大鼠随机分为假手术组(SHAM)、模型对照组(OVX)、中药低剂量组(D)、中药中剂量组(Z)、中药高剂量组(G)和西药组(X),通过切除大鼠双侧卵巢建立骨质疏松症模型,假手术组仅切除卵巢周围约1 g的脂肪组织。造模4周后进行药物干预,各组持续灌胃8周。计算子宫指数,测定股骨骨密度(bone mineral density,BMD)及股骨生物力学弹性载荷、极限载荷、弹性模量等指标;采用ELISA法测定血清骨代谢指标TRACP5b、sRANKL、OPG及氧化应激指标MDA、AGEs的含量。结果与SHAM组比较,OVX组子宫指数、股骨近端和股骨中段BMD、弹性载荷、弹性模量均明显降低(P0. 05),OVX组血清MDA、AGEs含量明显升高(P0. 01),血清TRACP5b含量明显升高(P0. 01),而OPG、OPG/sRANKL比值下降(P0. 01);与OVX组相比,各治疗组子宫指数、骨强度均有所改善。Z组、G组及X组BMD均明显增高(P0. 05)。Z组、G组及X组TRACP5b含量下降(P0. 05)、OPG含量升高(P0. 05)、RANKL含量降低、OPG/sRANKL比值升高(P0. 05)。Z组、G组血清MDA、AGEs含量降低(P0. 05)。结论培本固疏方可以增加骨强度,通过OPG/RANKL/RANK通路来抑制破骨细胞形成,减缓骨基质吸收,抗氧化应激机制也可能参与其中,具体机制有待探讨。     

培哚普利对兔糖皮质激素性骨质疏松症干预作用的实验研究

目的 :通过兔糖皮质激素性骨质疏松症(glucocorticoid-induced osteoporosis,GIOP)模型,探讨培哚普利对GIOP的干预作用以及其具体机制。方法 :10月龄雄性新西兰大白兔(3.0~3.5 kg)45只,采用随机数字表的方法将其随机分成3组:正常对照组(肌肉注射生理盐水,n=15,NC组)、模型组(肌肉注射地塞米松,n=15,GIOP组)和治疗组(肌肉注射地塞米松+口服培垛普利,n=15,GIOP+ACEI组);所有动物于干预后12周处死取材。通过检测骨组织形态计量学、生物力学以及骨代谢相关的血清学指标和m RNA表达来分析各组骨质和骨量的变化。结果:12周时骨形态计量学及生物力学结果显示GIOP组的骨量以及骨强度明显低于NC组(P0.05);在给予培哚普利干预后,GIOP+ACEI组的骨量及骨强度较GIOP组明显增高(P0.05)。与NC组比较,GIOP组矿化表面积、矿化沉积率、血清骨钙素均明显下降而破骨细胞数量、破骨细胞表面积、侵蚀表面积以及尿脱氧吡啶啉均明显增高(P0.05),而给予培哚普利干预后这些指标的变化明显改善(P0.05)。实时定量PCR结果显示给予地塞米松干预后SOST的m RNA表达以及RANKL/OPG的m RNA水平的比值均较NC组明显增高(P0.05),而Runx2的m RNA水平明显下降(P0.05);当给予培哚普利干预后,这些m RNA表达的变化被明显改善(P0.05)。结论:培哚普利可以促进骨形成和抑制骨吸收,从而有效的干预糖皮质激素性骨质疏松症的发生,这为糖皮质激素性骨质疏松症的预防和治疗提供了新的思路。     

牛蒡苷元通过OPG/RANKL信号通路介导对去卵巢大鼠骨量流失的保护作用

目的探讨牛蒡苷元(AGN)对去卵巢大鼠骨强度和骨量的影响,并探索可能的机制。方法本研究中通过双侧去卵巢建立骨质疏松大鼠模型;随后随机分为假手术组(Sham)、去卵巢组(OVX)以及牛蒡苷元组(AGN),每组10只;其中牛蒡苷元组大鼠接受牛蒡苷元[40 mg/(kg.d)]治疗12周;待治疗结束后使用Micro-CT、Masson染色切片、骨代谢指标、骨生物力学检测以及蛋白质印迹观察治疗效果以及可能的机制。结果治疗12周后,与OVX组相比,Micro-CT和Masson染色切片结果显示AGN组的大鼠骨小梁数量和骨密度得到明显改善。AGN组大鼠BMD、TV/BV、Tb.N、Tb.Th和Tb.Sp较OVX组明显改善(P0.05)。治疗12周时,AGN组极限载荷和刚度较OVX组显著增加(P0.05),而AGN组骨代谢指标AKP和TRACP水平显著降低(P0.05),差异有统计学意义(P0.05)。和OVX组比较,AGN组OPG表达水平明显上调,而RANKL表达水平显著下调,差异有统计学意义(P0.05)。表明AGN组的大鼠OPG/RANKL信号通路被激活。结论牛蒡苷元可以通过OPG/RANKL信号通路介导对去卵巢大鼠骨骼的保护作用。     

小檗碱可以通过改善氧化应激和成骨活性减少2型糖尿病大鼠骨量的流失

目的探索小檗碱对2型糖尿病大鼠骨密度和骨量影响及其可能的机制。方法 60只大鼠随机分为4组:对照组(CG)(n=15)、糖尿病组(DG)(n=15)、糖尿病+50 mg/(kg.d)小檗碱治疗组(Brb-50)(n=15)和糖尿病+100 mg/(kg.d)小檗碱治疗组(Brb-100)(n=15)。使用小檗碱治疗12周后,对所有大鼠的股骨进行蛋白印迹、Micro-CT、组织学等评估,并评估其他血液生化指标。结果 DG组大鼠的骨密度(BMD)、骨显微结构和骨生物力学指标均明显低于CG组(P0.05)。氧化指标(8-OHdG)升高,抗氧化剂活性指标SOD、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶和GST显著降低(P0.05)。小檗碱治疗后骨密度、骨显微结构、抗氧化剂活性指标均有明显改善。WB结果表明DG组的Runx2和Osterix显著降低;而PPARγ显著上升;小檗碱治疗后Runx2和Osterix明显上升,而PPARγ水平显著降低。结论小檗碱可以通过改善氧化应激和成骨活性减少2型糖尿病大鼠骨量的流失。     

当归鸡血藤化裁方发挥类雌激素作用保护去卵巢大鼠骨量流失

目的 观察当归鸡血藤化裁方对去卵巢大鼠骨密度和骨量的影响并探讨相关的作用机制。方法 将30只3月龄雌性大鼠随机分为Sham组、OVX组以及OVX+T组，每组10只；适应性饲养两周后对Sham组行假手术，对OVX及OVX+T组行双侧卵巢去势手术，其中OVX+T组于术后两个月给予等效当归鸡血藤化裁方灌胃治疗；连续给药12周后，取各组大鼠血清及股骨组织分别进行骨密度检测、组织切片检测、蛋白印迹检测及血清指标检测。结果 X线及HE切片显示，OVX组骨密度及骨微参数均低于Sham组，OVX+T组骨密度及骨微参数高于OVX组(P＜0.05)。血清指标显示，OVX组的17β-E2水平低于Sham组，ALP、CTX-1、TRAcP-5b含量或活性高于Sham组；OVX+T组的17β-E2水平高于OVX组，ALP、CTX-1、TRAcP-5b含量或活性低于OVX组(P＜0.05)。蛋白印迹结果显示，OVX组的OPG、ERK表达水平低于Sham组，RANKL、RANK、RANKL/OPG的比率高于Sham组；OVX+T组的OPG、ERK表达水平高于OVX组，RANKL、RANK、RANKL/OPG的比率低于OVX组(P＜0.05)。结论 当归鸡血藤化裁方是通过类雌激素作用抑制骨的高转化率，并通过OPG/RANKL/RANK信号通路来促进骨形成并抑制骨吸收，从而来防治雌激素缺乏引起的骨质疏松症。在这一过程中可能有ERK信号通路的参与。     

骨碎补经骨髓间充质干细胞调节OPG/RANKL/RANK通路抑制破骨细胞的实验研究

目的研究骨碎补作用绝经后骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)调节OPG/RANKL/RANK通路及对破骨细胞分化成熟的影响并探讨其可能的作用机制。方法实验大鼠去双侧卵巢造模,分为实验组(OVXDF,造模+骨碎补水煎液灌胃)、模型组(OVX,造模+0.9%生理盐水灌胃)、假手术组(SHAM,假手术+0.9%生理盐水灌胃),造模成功后提取BMSCs,将BMSCs和骨髓单核细胞共培养于Transwell小室的上室和下室,分为实验组+破骨细胞(OVXDF+OC)、模型组+破骨细胞(OVX+OC)、假手术组+破骨细胞(SHAM+OC)。下室加入破骨细胞诱导剂,倒置相差显微镜观察破骨细胞的分化成熟情况并计数,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测下室培养液中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、RANKL的含量,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测BMSCs中Wnt10b、β-catenin、RANKL、OPG mRAN及蛋白表达并计算RANKL/OPG。结果在共培养系统中,与去卵巢灌胃大鼠BMSCs共培养的破骨细胞(OVXDF+OC)数量较单纯模型组+破骨细胞(OVX+OC)明显减少(P0.05)。下室培养液OPG含量及共培养BMSCs中Wnt10b、β-catenin、OPG mRAN及蛋白表达模型组+破骨细胞(OVX+OC)最低,RANKL及RANKL/OPG最高,经骨碎补灌胃后(OVXDF+OC)培养液中OPG含量及BMSCs细胞中Wnt10b、β-catenin、OPG mRAN及蛋白表达明显升高,培养液及BMSCs细胞中RANKL及RANKL/OPG明显降低(P0.05)。结论骨碎补可调节BMSCs细胞OPG、RANKL的表达,激活OPG/RANKL/RANK信号通路抑制破骨细胞的分化和成熟,此作用可能与BMSCs的Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

雌激素对去势骨质疏松症大鼠骨密度和骨代谢影响的实验研究

目的研究雌激素对去势骨质疏松症模型大鼠骨密度(bone mineral density,BMD)和骨代谢的影响,并探讨其治疗骨质疏松症的机制。方法将48只雌性SD大鼠随机分配成对照组、模型组、雌激素组和雌激素+三苯氧胺组,每组12只。除对照组外,其他各组大鼠采用双侧卵巢摘除法制备骨质疏松症模型。雌激素组给予尼尔雌醇(1 mg/kg)灌胃,1次/周;雌激素+三苯氧胺组给予尼尔雌醇(1 mg/kg)和三苯氧胺(3 mg/kg)灌胃,1次/周;对照组和模型组分别使用等量生理盐水灌胃,均持续3个月。3个月后取材,检测大鼠左侧股骨BMD和股骨骨矿物盐含量、血清钙含量以及胫骨中骨骼钙含量;酶联免疫法检测大鼠血清碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)、血清抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(tartrate resistant acid phosphatase-5b,TRAP-5b)的含量;免疫组化检测大鼠胫骨中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)蛋白的表达情况。结果治疗前,与对照组比较其他各组血清钙含量和血清TRAP-5b含量均显著升高(P0.05),骨钙含量、BMD和骨矿物盐含量显著降低(P0.05),血清ALP含量无显著性变化(P0.05);治疗后,与模型组比较雌激素组血清钙含量、血清TRAP-5b含量以及胫骨组织RANKL蛋白表达均显著降低(P0.05),骨钙含量、血清ALP含量、BMD、骨矿物盐含量以及胫骨组织OPG蛋白表达均显著升高(P0.05),而治疗后,与模型组比较雌激素+三苯氧胺组各项指标变化差异无统计学意义(P0.05)。结论雌激素通过显著性提高去卵巢骨质疏松模型大鼠骨骼钙、ALP、股骨骨密度、骨矿物盐以及OPG的含量,抑制骨钙流失、TRAP-5b及RANKL蛋白表达,达到改善骨质疏松的作用。     

益肾健骨膏对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢的影响

目的 探讨益肾健骨膏对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢的影响及可能机制。方法 50只雌性SD大鼠被随机分为假手术组、模型组、高剂量膏方组、低剂量膏方组、阳性药物组,每组10只。假手术组、模型组给予10 mL /（kg·d）生理盐水灌胃,低、高剂量膏方组分别给予2 g /（kg·d）、13 g/（kg·d）益肾健骨膏灌胃,阳性药物组灌服6.25 mg/（kg·w）阿仑膦酸钠维D3。治疗12周后检测大鼠腰椎骨密度和腰椎最大压缩载荷,通过Elisa检测血清骨代谢指标抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）、骨保护素(OPG)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PINP)、Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTX-Ⅰ),RT-PCR检测腰椎骨组织OPG、RANKL、RANK、TRAF6的 mRNA表达,RT-PCR及Western blot检测腰椎Notch1、Notch2、Jagged1、Jagged2的基因及蛋白表达。结果 益肾健骨膏治疗12周后,与模型组比较,高剂量膏方组大鼠腰椎骨密度、最大压缩载荷,血清PINP、OPG水平,骨组织Notch1、Notch2、Jagged1、Jagged2的mRNA和蛋白表达,OPG的mRNA表达显著升高（P<0.05）,而血清TRACP、CTX-Ⅰ水平,骨组织RANKL、RANK、TRAF6的mRNA表达显著降低（P<0.05）。结论 高剂量益肾健骨膏能改善去卵巢骨质疏松大鼠骨密度、骨强度及骨代谢,其作用机制可能与Notch通路及OPG/RANKL/RANK系统有关。     

黄芪多糖治疗对去卵巢诱导骨质疏松大鼠骨密度、骨量和骨代谢的影响

目的探索黄芪多糖对去卵巢大鼠骨量和骨代谢以及BMP-2/Smads信号通路的影响。方法30只雌性SD大鼠进行去卵巢手术或假手术。正常饲养12周后被分为黄芪多糖组(ASNT组)、对照组(CON组)和去卵巢组(OVX组),其中黄芪多糖组每天给予400 mg/kg黄芪多糖治疗。通过骨密度、骨代谢指标、Micro-CT以及WB检测评估ASNT对骨质疏松症大鼠骨量、骨代谢以及BMP-2/Smads信号通路的影响。结果经过12周治疗,ASNT组大鼠骨密度较OVX组显著增加(P<0.05);ASNT治疗12周可以降低血清ALP和OC水平,增加血钙含量,增加股骨骨密度。经过12周治疗,ASNT组大鼠骨体积分数(BV/TV)、表面积体积分数(BS/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数目(Tb.N)较OVX组显著增加;而骨小梁间隙(Tb.Sp)较OVX组显著降低,差异比较有统计学意义(P<0.05)。WB结果表明OVX大鼠骨组织的BMP-2/Smsds信号通路受到抑制;ASNT可以通过上调BMP-2、p-Smad1和p-Smad5的表达显著激活BMP-2/Smsds信号通路传导。结论研究表明ASNT对去卵巢大鼠骨密度和骨量具有保护作用,可能和激活BMP-2/Smads信号通路有关。