FTY720对大鼠肾脏缺血再灌注损伤中缺氧诱导因子-1表达的影响

目的探讨FTY720对大鼠肾脏在缺血再灌注损伤中的保护作用及对缺氧诱导因子1α(HIF1α)表达水平的影响。方法将125只健康雄性SD大鼠随机平均分为5组。建立大鼠肾脏缺血再灌注模型。FTY720组:缺血再灌注前3d连续用FTY7201mg·kg-1·d-1灌胃;霉酚酸酯(MMF)组:缺血再灌注前3d连续用MMF20mg·kg-1·d-1灌胃;环孢素A(CsA)组:缺血再灌注前3d连续用CsA10mg·kg-1·d-1颈部皮下注射;对照组:术前不给予任何处理;假手术组:不建立肾脏缺血再灌注损伤模型。观察各组大鼠术后0、6、24、72h及7d时的血肌酐水平以及肾组织中HIF1αmRNA和蛋白表达水平。结果(1)大鼠肾脏缺血再灌注后各时间点的血清肌酐值水平均高于假手术组(P<0.05)。但是FTY720组再灌注6、24和72h时血肌酐值明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。而MMF组、CsA组各时间点与对照组比较,差异无统计学意义。(2)再灌注后0、6和24h,FTY720组肾组织中HIF1αmRNA和蛋白水平明显高于同期对照组(P<0.05),而MMF组和CsA组与对照组相比较,差异无统计学意义。结论FTY720可诱导肾脏缺血再灌注早期HIF1αmRNA的快速转录和蛋白表达量的增加,这可能是减轻肾脏缺血再灌注损伤的重要机理之一。     

血红素氧化酶-1在脊髓缺血再灌注脊髓损伤后的表达

目的　探讨血红素氧化酶 1(HO 1)在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的表达。方法　制备脊髓缺血再灌注损伤模型 ,于再灌注后 4、8、16、2 4h及 2、5d收集脊髓标本。以假手术组大鼠脊髓为对照 ,采用免疫组织化学和原位杂交方法分别检测脊髓组织中HO 1的表达。以原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记法测定细胞的凋亡。结果　对照组未发现HO 1表达 ,亦未见细胞凋亡。实验组在再灌注 4h左右HO 1开始表达上调 ,2d达峰值 (35 6± 2 96 ) ,与假手术组相比 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。在伤后 4h见凋亡细胞 ,16h达高峰 (2 9 1± 0 4 4 )。HO 1与凋亡细胞的相关系数为r=- 0 731,P =0 0 0 5 ,具有统计学意义。结论　脊髓缺血再灌注损伤诱导HO 1表达上调 ;同时引起大量神经细胞凋亡 ,表明再灌注中脊髓存在明显、持续性的损伤。HO 1在脊髓缺血再灌注损伤中表达显著增加 ,有一定的保护作用。     

大鼠脊髓损伤后骨形态发生蛋白2表达变化的规律及意义

目的:观察大鼠脊髓损伤后损伤脊髓组织中骨形态发生蛋白2(BMP2)表达变化的时间及空间分布规律,探讨抑制BMP2增加的最佳时间及部位。方法:成年SD大鼠40只,随机分为5组:假手术组,损伤后1d组、3d组、7d组、14d组,每组8只。将大鼠麻醉后以T10棘突为中心,打开椎板,暴露脊髓,各损伤组使用NYU impactor打击器制作大鼠脊髓损伤模型,假手术组不做打击处理。分别于造模前后对各组大鼠进行运动功能BBB评分,于预定时间点处死动物,取损伤段(假手术组取相应节段)脊髓组织行HE染色和免疫组化染色,观察脊髓组织学改变并进行阳性细胞计数,采用方差分析进行组间比较。结果:造模前各组大鼠的BBB评分均为21分;造模后假手术组大鼠BBB评分高于各损伤组,且差异有显著性(P<0.01),各损伤组之间两两比较评分均无显著性差异(P>0.05)。HE染色假手术组大鼠脊髓组织结构清晰,层次规整,条理性强,灰质中可见较多的神经元,白质中可见大量纤维性星形胶质细胞;损伤组大鼠损伤处脊髓组织结构紊乱,层次感消失,可见弥散的血细胞,早期增多较晚期明显,脊髓灰质与白质中都可见因大量组织细胞溶解而遗留的组织空洞。各组脊髓灰、白质中均有BMP2表达,假手术组灰质中平均阳性细胞数为1.53±0.38个/HP,白质中为0.77±0.14个/HP;损伤后1d组灰质中为13.70±4.81个/HP,白质中为7.23±3.14个/HP;损伤后3d组灰质中为9.37±3.61个/HP,白质中为5.63±2.23个/HP;损伤后7d组灰质中为6.17±1.81个/HP,白质中为4.17±1.24个/HP;损伤后14d组灰质中为4.36±1.60个/HP,白质中为1.87±1.13个/HP;损伤各组BMP2平均阳性细胞数与假手术组相比较均有明显差异(P<0.01),各组灰质区BMP2平均阳性细胞数的增加均较白质区更为显著(P<0.01)。结论:脊髓损伤后损伤脊髓组织中BMP2的表达增加,损伤后1d最高,主要集中在损伤区灰质区。针对BMP2进行特异性抑制最好在损伤后第一天的脊髓灰质区实施。     

大鼠脊髓损伤后脊髓组织中基质细胞衍生因子1α的时空分布

目的:观察Wistar大鼠脊髓损伤后脊髓组织中基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)的表达及分布变化,探讨SDF-1α在脊髓损伤后脊髓中的时空分布特点.方法:取成年雌性Wistar大鼠90只,随机分成3组:正常组(n=10),假手术组(单纯椎板切除,n=10)和损伤组(n=70).损伤组根据损伤后取材时间点不同分为1、2、3、4、7、14、28d组.损伤组按改良的Impactor modelⅡ法,暴露T10脊髓节段,将10g条形重物从2.5cm高度垂直打击该段脊髓,制作脊髓损伤模型.按设定的时间点将大鼠在多聚甲醛灌注下取以T10为中心的2cm脊髓组织,取离损伤中心2mm和7mm处脊髓组织横断切片,使用HE及免疫组织化学法进行染色,观察并分析脊髓形态学变化和SDF-1α表达的时空分布特点.结果:正常组和假手术组的脊髓形态结构完整,损伤组中灰质神经元数量减少,白质纤维结构紊乱.免疫组化染色正常组和假手术组的脊髓中均匀分布少量SDF-1α,损伤组脊髓损伤中心近端(2mm)和远端(7mm)SDF-1α表达量都明显上升,损伤近端的SDF-1α阳性细胞数量增幅远多于远端;脊髓灰质中阳性细胞明显多于白质(P＜0.05).在大鼠脊髓损伤后1d脊髓组织中的SDF-1α阳性细胞数量开始上升,到损伤后2d时脊髓灰质中SDF-1α阳性细胞达到高峰,之后逐渐下降,损伤后7d时损伤近端SDF-1 α阳性细胞数量高于正常组和假手术组(P＜0.05),远端与正常组和假手术组无统计学差异(P＞0.05);到损伤后14d和28d时近端和远端与正常组和假手术组均无统计学差异(P＞0.05).结论:SDF-1α在Wistar大鼠脊髓损伤后脊髓组织中表达活跃,呈现出明显的时空分布特点.     

丹参预处理对肝脏缺血再灌注损伤后磷酸化真核生物翻译起始因子2α和caspase12的影响

目的 观察丹参预处理对肝脏缺血再灌注损伤后磷酸化真核生物翻译起始因子2α(p-eIF-2α)和caspasel2表达的影响.方法 将80只Wistar大鼠按随机数字表法分成正常对照组5只,假手术组、缺血再灌注组和丹参预处理组各25只,后3组大鼠再根据缺血再灌注时限(0、3、12、24和72 h)分为5个亚组,每组5只.采用动脉夹钳夹肝蒂45 min后,使血液复流的方法制备大鼠缺血再灌注损伤模型.正常对照组大鼠不做处理;假手术组仅解剖肝门不钳夹肝蒂;丹参预处理组大鼠在肝血流阻断前30 min经尾静脉注入丹参注射液6 ml/kg;假手术组和缺血再灌注组大鼠则在肝血流阻断前30 min经尾静脉注入等量生理盐水.采用Western blot检测各组大鼠肝组织中p-eIF-20和caspase12蛋白的表达,HE染色观察各组大鼠同期肝组织的病理形态学变化.多组间比较采用单因素方差分析,组间比较方差齐采用LSD法,方差不齐采用Games-Howell法.结果 正常对照组大鼠肝组织中p-eIF-2α蛋白的相对表达量为0.296±0.038,假手术组在缺血再灌注0、3、12、24和72 h分别为0.304±0.048、0.298±0.038、0.272±0.042、0.266±0.076和0.296±0.043,两组比较,差异无统计学意(P＞0.05).缺血再灌注组大鼠肝组织中p-eIF-2α蛋白的相对表达量在缺血再灌注0h为0.310±0.034,与正常对照组和假手术组同时相点比较,差异无统计学意义(F=0.15,P＞0.05);在缺血再灌注3、12、24 h,p-eIF-2α蛋白的相对表达量分别为0.386±0.021、0.710±0.034和0.474 ±0.017,与正常对照组和假手术组同时相点比较,差异有统计学意义(F=11.90,211.52,25.15,P＜0.05);至缺血再灌注72 h,p-eIF-2α蛋白的相对表达量为0.336±0.043,基本回落至正常对照组和假手术组同时相点水平(F=1.57,P＞0.05).丹参预处理组大鼠肝组织中p-eIF-2α蛋白的相对表达量在缺血再灌注0、12、24和72 h分别为0.278 ±0.044、0.800±0.079、1.056±0.125、0.736±0.087和0.442 ±0.047,丹参预处理组在缺血再灌注3、12、24、72 h明显高于缺血再灌注组同时相点水平(P＜0.05).正常对照组大鼠肝组织中caspase12蛋白的相对表达量为0.983±0.003,假手术组在缺血再灌注0、3、12、24和72 h分别为0.974±0.004、0.983±0.005、0.985±0.003、0.981±0.004和0.978±0.004,两组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).缺血再灌注组大鼠肝组织中caspase12蛋白的相对表达量在缺血再灌注0h开始上升为1.018 ±0.076,但与正常对照组和假手术组同时相点比较,差异无统计学意义(F=1.43,P＞0.05);在缺血再灌注3h明显升高为2.056±0.067,12h达到峰值为2.804±0.050,24 h仍处于相对高水平为1.882 ±0.037,72 h有所下降为1.282±0.066,与正常对照组和假手术组同时相点比较,差异均有统计学意义(F=1290.69,6490.84,2898.71,103.61,P＜0.05).丹参预处理组肝组织中caspase12蛋白的相对表达量在缺血再灌注0、3、12、24、72 h分别为0.998±0.056、1.442±0.066、1.990±0.068、1.364±0.056和0.962±0.054,缺血再灌注3、12、24、72 h均明显低于缺血再灌注组同时相点(P＜0.05).病理形态学检测结果显示:正常对照组和假手术组大鼠肝组织肝小叶结构基本完整,肝细胞连续成索,胞核大而圆;肝缺血再灌注组大鼠肝组织可见肝小叶变形,细胞体积变小,细胞核浓缩,部分出现片状坏死;丹参预处理组大鼠肝细胞肿胀,出现轻微的点状坏死.结论 丹参可能通过上调p-eIF-20的水平稳定内质网内环境,减轻经内质网细胞凋亡途径中caspase12的表达,在肝脏缺血再灌注损伤期发挥肝脏保护作用.     

丹参预处理对肝脏缺血再灌注损伤后磷酸化真核生物翻译起始因子2α和caspasel2的影响

目的观察丹参预处理对肝脏缺血再灌注损伤后磷酸化真核生物翻译起始因子2d（p-elF-2a）和caspasel2表达的影响。方法将80只Wistar大鼠按随机数字表法分成正常对照组5只,假手术组、缺血再灌注组和丹参预处理组各25只,后3组大鼠再根据缺血再灌注时限（0、3、12、24和72h）分为5个亚组,每组5只。采用动脉夹钳夹肝蒂45min后,使血液复流的方法制备大鼠缺血再灌注损伤模型。正常对照组大鼠不做处理;假手术组仅解剖肝门不钳夹肝蒂;丹参预处理组大鼠在肝血流阻断前30min经尾静脉注入丹参注射液6ml／kg;假手术组和缺血再灌注组大鼠则在肝血流阻断前30min经尾静脉注入等量生理盐水。采用Westernblot检测各组大鼠肝组织中p-eIF-20α和caspasel2蛋白的表达,HE染色观察各组大鼠同期肝组织的病理形态学变化。多组间比较采用单因素方差分析,组间比较方差齐采用LSD法,方差不齐采用Games-Howell法。结果正常对照组大鼠肝组织中p-eIF-20α蛋白的相对表达量为0．296±0．038,假手术组在缺血再灌注0、3、12、24和72h分别为0．304±0．048、0．298±0．038、0．272±0．042、0．266±0．076和0．296±0．043,两组比较,差异无统计学意（P〉0．05）。缺血再灌注组大鼠肝组织中p-eIF-2α蛋白的相对表达量在缺血再灌注0h为0．310±0．034,与正常对照组和假手术组同时相点比较,差异无统计学意义（F=0．15,P〉0．05）;在缺血再灌注3、12、24h,p-eIF-2α蛋白的相对表达量分别为0．386±0．021、0．710±0．034和0．474-4-0．017,与正常对照组和假手术组同时相点比较,差异有统计学意义（F=11．90,211．52,25．15,P〈0．05）;至缺血再灌注72h,p-eIF-2α蛋白的相对表达量为0．336±0．043,基本回落至正常对照组和假手术组同时相点水平（F=1．57,P〉0．05）。丹参预处理组大鼠肝组织中p-eIF-2α蛋白的相对表达量在缺血再灌注0、12、24和72h分别为0．278±0．044、0．800±0．079、1．056±0．125、0．736±0．087和0．442±0．047,丹参预处理组在缺血再灌注3、12、24、72h明显高于缺血再灌注组同时相点水平（P〈0．05）。正常对照组大鼠肝组织中easpasel2蛋白的相对表达量为0．983±0．003,假手术组在缺血再灌注0、3、12、24和72h分别为0．974±0．004、0．9834-0．005、0．985±0．003、0．981±0．004和0．978±0．004,两组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。缺血再灌注组大鼠肝组织中caspasel2蛋白的相对表达量在缺血再灌注0h开始上升为1．018±0．076,但与正常对照组和假手术组同时相点比较,差异无统计学意义（F=1．43,P〉0．05）;在缺血再灌注3h明显升高为2．056±0．067,12h达到峰值为2．804±0．050,24h仍处于相对高水平为1．882±0．037,72h有所下降为1．282±0．066,与正常对照组和假手术组同时相点比较,差异均有统计学意义（F=1290．69,6490．84,2898．71,103．61,P〈0．05）。丹参预处理组肝组织中caspasel2蛋白的相对表达量在缺血再灌注0、3、12、24、72h分别为0．998±0．056、1．442±0．066、1．990±0．068、1．364±0．056和0．962±0．054,缺血再灌注3、12、24、72h均明显低于缺血再灌注组同时相点（P〈0．05）。病理形态学检测结果显示：正常对照组和假手术组大鼠肝组织肝小叶结构基本完整,肝细胞连续成索,胞核大而圆;肝缺血再灌注组大鼠肝组织可见肝小叶变形,细胞体积变小,细胞核浓缩,部分出现片状坏死;丹参预处理组大鼠肝细胞肿胀,出现轻微的点状坏死。结论丹参可能通过上调p-eIF-2α的水平稳定内质网内环境,减轻经内质网细胞凋亡途径中caspasel2的表达,在肝脏缺血再灌注损伤期发挥肝脏保护作用。     

低氧诱导因子-1α对脊髓损伤后血管内皮生长因子表达的调控作用

目的　研究腺病毒 (Ad)介导的低氧诱导因子 1α(HIF 1α)基因对脊髓损伤后血管内皮细胞生长因子 (VEGF)蛋白表达的影响 ,为HIF 1α基因治疗脊髓损伤提供依据。方法　改良Allen’s法制作大鼠脊髓损伤模型。SD大鼠随机分为 4组 :假手术组 (Sham )、单纯脊髓损伤对照组(SCI)、空载体对照组 (Ad Blank)、基因治疗组 (Ad HIF 1α)。分别在第 1、3、7、14、2 8天 5个时间点取组织切片 ,HE染色观察大鼠脊髓细胞形态 ,免疫组织化学法检测HIF 1α和VEGF蛋白的表达。结果　 (1)HE染色显示 ,Ad HIF 1α组出血、坏死等损伤性改变比SCI及Ad Blank组轻 ,细胞残留数目相对增多 ,形态大致正常。 (2 )Ad HIF 1α组的HIF 1α、VEGF免疫阳性细胞吸光度值较SCI及Ad Blank组增加明显 (P <0 .0 5 ) ,表达时间延长。结论　腺病毒介导的HIF 1α基因转移可在体内有效表达。HIF 1α基因可促进脊髓损伤后VEGF蛋白的表达。转HIF 1α基因可减少大鼠脊髓损伤后细胞的死亡。     

大鼠肝脏缺血再灌注过程中信号转导与转录激活子1的表达变化及其意义

目的 观察JAK-STAT信号通路蛋白STAT1和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3在大鼠肝脏缺血再灌注不同时限的表达及丹参对两者表达的影响.方法 将80只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、缺血再灌注组和丹参组,建立肝缺血再灌注模型,采用免疫组织化学方法 检测STAT1及Caspase-3在肝缺血45 min再灌注0、3、12、24、72 h时的表达.结果 STAT1、Caspase-3在正常及假手术组中未见明显表达.缺血再灌注组STATI在再灌注0 h即有表达(PU=10.29±0.92),再灌注12～24 h表达最明显(PU=38.73±1.59～38.90±2.29),Caspase-3在再灌注0 h亦有表达(PU=8.18±0.95),峰值出现在再灌注24 h(PU=38.06±2.85).丹参组STAT1在各时限点均较同期缺血再灌注组低(P＜0.05),除再灌注72h外丹参组Caspase-3在各时限点均较同期缺血再灌注组低(P＜0.05).结论 STAT1在大鼠肝缺血再灌注损伤中被激活,丹参可能通过抑制STAT1的表达减轻缺血再灌注对肝的损伤.     

大鼠脊髓缺血再灌注损伤后CaMKII的表达及作用研究

[目的]探讨钙调蛋白依赖性蛋白激酶2(Ca MKII)在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中作用。[方法]雄性SD大鼠56只,随机分为假手术组(n=8)、实验组(n=48),假手术组暴露肾动脉下腹主动脉,但不阻断,实验组采用Naslund腹主动脉阻断法制作脊髓缺血再灌注损伤模型,于再灌注后0、1、3、7、14、28 d取脊髓标本,HE染色观察脊髓病理变化,免疫组化和Westewrn blot检测Ca MKII的表达情况,TUNEL染色检测神经细胞凋亡。[结果]实验组脊髓组织出现明显病理学改变。Western blot在56KD分子量处可见Ca MKII蛋白特异性条带,假手术组Ca MKII表达较少,实验组0 d即出现Ca MKII表达增多,且随着时间延长表达量逐渐增多,于3 d达高峰后逐渐降低,至14 d时仍高于假手术组(P0.01)。免疫组化结果显示,Ca MKII蛋白主要表达于脊髓神经元胞浆,Ca MKII阳性细胞数的变化趋势与免疫组化结果相似。TUNEL染色示假手术组有少量凋亡细胞散在分布,实验组术后0 d开始出现凋亡细胞增多,3 d达高峰,后逐渐减少,28 d时仍高于假手术组(P0.05)。[结论]脊髓缺血再灌注损伤后Ca MKII表达增加,同时细胞凋亡数增多,Ca MKII可能通过调节细胞凋亡来影响脊髓缺血再灌注损伤。     

静脉输注艾司洛尔对脊髓缺血再灌注损伤大鼠脊髓组织HIF-1α表达的影响

目的 评价静脉输注艾司洛尔对脊髓缺血再灌注损伤大鼠脊髓组织低氧诱导因子-1α表达( HIF-1α)的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠36只,体重300～350 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=12):假手术组(S组)、脊髓缺血再灌注组(1R组)和艾司洛尔组(E组).采用夹闭肾下腹主动脉20 min再开放的方法制备脊髓缺血再灌注损伤模型.E组缺血前30 min静脉输注艾司洛尔200 g·kg-1·min-1,输注时间为1h;IR组静脉输注等容量生理盐水,输注时间为1h;S组不阻断腹主动脉,于分离腹主动脉后输注等容量生理盐水,输注时间为1h.再灌注24和48 h时随机抽取大鼠6只,采用Tarlov评分法评价后肢运动功能,然后处死大鼠,取L4,5脊髓组织,光镜下观察病理学结果,采用免疫组化法测定HIF-1α表达水平.结果 与S组比较,IR组各时点HIF-1α表达上调,Tarlov评分降低(P＜ 0.05),E组HIF-1α表达上调(P＜0.05),Tarlov评分差异无统计学意义(P＞0.05);与IR组比较,E组各时点HIF-1α表达上调,Tarlov评分升高(P＜0.05),脊髓病理学损伤j减轻.结论 静脉输注艾司洛尔可减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤,其机制与其上调脊髓组织HIF-1α的表达有关.