原发性肝癌多药耐药基因的表达与化疗敏感预测的相关性研究

目的探讨原发性肝癌多药耐药基因的表达与化疗敏感预测的相关性。方法取64例肝癌切除组织行ATP-TCA法肿瘤体外药敏试验。以RT—PCR法半定量检测肝癌多药耐药基因表达情况，分析多药耐药基因的表达与化疗敏感预测的相关性。结果1．原发性肝癌5种耐药基因的表达率分别为：MDR190、63％、MRP96．88％、GST-π96．88％、LRP90.63％、TOPOⅡ96.88％，各耐药基因的表达率间无显著相关。2，多药耐药基因MDR1、MRP、GST-Ⅱ、LRP、TOPOⅡ的表达量在肝癌组织分别为1．17±0．47、1．59±0．33、1．18±0．48、1．03±0．48、1．00±0．31．在癌旁组织分别为1．11±0．38，1．32±0．44，1．04±0．42．0．96±0．32，1．19±0．28，除TOPOⅡ外，癌旁组耐药基因mRNA表达量低于肝癌组的表达量，两者间的差别无显著性（P〉0．05）。3．多药耐药基因的表达与疗效的关系显示：在有效组中MDR1、MRP、GST-ⅡLRPmRNA的表达量低于无效组，且在MDR1、MRP、LRP存在显著差别（P〈0．05）。TOPOⅡmRNA的表达量有效组高于无效组，但差异无显著性（P〉0．05）。4．ATP—TCA法肿瘤体外药敏试验临床敏感预测准确率为77．27％（17／22），对抗药性的预测准确率为100％（2／2）；临床符合率为79．17％。5．MDR1的表达量与MIT、VP-16、EPI、TAX的IC。值正相关；MRP的表达量与MIT、VP-16、EPI的IC50值正相关；GST-π的表达量与5．FU、CDDP、OXA、GEM的IC50值正相关；LRP的表达量与5-FU、CDDP、OXA、EPI、GEM的IC50值正相关；TOPOⅡ的表达量与CPT的IC50值正相关。6．多药耐药基因预测化疗的准确率为72．70％。结论在肝癌存在实现化疗敏感预测基因化的可行性．可通过监测多药耐药基因的表达来预测化疗的效果．选择相关的化疗药物。     

人胆囊癌细胞系GBC-SD的多药耐药机制

目的 探讨人胆囊癌细胞系GBG-SD耐药性产生的机制，建立先天性耐药的人胆囊癌细胞模型。方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测GBC-SD细胞多药耐药相关蛋白(MDR1)、多药耐药相关蛋白(MRP)和肺耐药蛋白(LRP)基因扩增；免疫细胞化学染色检测该细胞系P-糖蛋白(P-gp)、MRP和LRP蛋白表达；流式细胞术测定P-gp、谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)和DNA拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)表达水平；用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测该细胞对8种抗癌药物的敏感性。结果 人胆囊癌GBC-SD细胞中MDR1、MRP和L,RP基因呈阳性扩增，P-gp、MRP、LRP蛋白表达阳性；GST-π和TOPOⅡ的表达水平与对照组细胞差异无显著性。四唑盐比色结果显示，GBC-SD细胞对8种抗肿瘤药物均有程度不同的耐受性。耐药倍数从5．3倍到42倍不等。结论 人胆囊癌细胞系GBC-SD是一株先天性耐药的恶性肿瘤细胞系，其耐药性的产生与MDR1、MRP、LRP基因扩增有关。     

多重逆转录-聚合酶链反应方法半定量检测多药耐药基因mRNA表达

目的：建立多重逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量检测肝癌多药耐药（MDR）基因mRNA表达。方法：在对二重RT-PCR扩增5种MDR基因mRNA动力学观察及建立RT-PCR标准曲线的基础上，建立六重RT-PCR方法。结果：六重RT-PCR与单重或二重RT-PCR扩增体系在特异性和扩增效率等方面相同，实验重复性较好。结论：该方法对于检测肝癌组织和肝癌细胞MDR基因mRNA表达具有特异、灵敏、简便、快速（6h）、所需标本量小（5mg）及半定量等优点，能快速同时分析大量样本，具有临床应用前景。     

肝癌多药耐药基因表达的临床研究

目的　探讨肝癌多药耐药基因 (MDR1)mRNA表达与癌分化、临床病理学特征、化疗效果、转移复发及预后的关系。方法　收集肝癌组织及癌旁 2cm肝组织 4 7例 ,正常肝组织 12例 ,采用荧光定量RT PCR方法检测MDR1mRNA的表达。结果　MDR1mRNA表达强度在 1 4× 10 3 ～3 6× 10 6copy/ μgRNA ,癌组织阳性率为 72 % ,明显高于癌旁肝组织 (5 1% )和正常肝组织 (4 2 % )(P <0 0 5 )。癌组织MDR1mRNA表达与癌灶直径、有无转移、Okuda分期、癌结节数目呈正相关 ,与复发时间、有无包膜及患者的生存期呈负相关关系。回归分析表明MDR1mRNA主要与癌灶转移潜能有关 (B =1 82 3,OR =6 187,P <0 0 5 )。MDR1mRNA阳性组化疗与疗效间无相关性 ,而MDR1mRNA阴性组术后局部化疗能明显改善肝癌的疗效 (r =0 773,P <0 0 5 ) ,其生存曲线明显高于MDR1mRNA阳性组。结论　MDR1mRNA基因表达与肝癌原发性耐药及癌灶转移潜能有关。     

肝癌介入治疗对多药耐药相关蛋白基因表达的影响

目的：研究肝癌介入治疗前后多药耐药相关蛋白基因的表达情况并探讨其临床意义。方法：选择28例不能手术的肝癌患者行TACE治疗,TACE前后对肝癌组织进行细针穿刺活检,再利用实时荧光定量PCR法检测MRP1、MRP2、MRP3和MRP5基因的表达水平,比较TACE治疗前后多药耐药相关蛋白基因的表达情况。结果：28例肝癌患者行TACE治疗后MRP1、MRP3和MRP5基因的表达水平比TACE治疗前表达量明显增高（P〈0.05）,而MRP2基因的表达水平在TACE治疗前后没有显著性差异（P〉0.05）。结论：肝癌患者进行TACE治疗与否不影响MRP2的基因表达,因而肝癌的获得性多药耐药可能与MRP1、MRP3、MRP5基因的表达有关。     

胃癌体外药敏试验与多药耐药基因、多药耐药相关蛋白表达的关系

目的 探讨胃癌体外化疗药物敏感试验与胃癌组织中多药耐药基因（MDR1）和多药耐药相关蛋白（MRP）基因表达的关系。方法 收集42例手术切除胃癌标本，采用噻唑蓝（MTT）比色法进行胃癌原代细胞培养体外药物敏感试验，检测其对9种临床常用化疗药物的敏感性，并应用逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）检测胃癌组织中MDR1和MRP mRNA表达，分析药敏试验结果与MDR1、MRP mRNA表达的关系。结果42例胃癌组织中MDR1、MRP mRNA表达阳性率分别为38．1％和28．9％。CDDP、ADM和OXA耐药组中，MDR1 mRNA表达阳性率显著高于敏感组；在CDDP和HCPT耐药组中，MRP mRNA表达阳性率显著高于敏感组。结论MDR1和MRP高表达是胃癌对多种化疗药物具有耐药性的标志，结合体外药敏试验，有助于临床筛选有效的化疗药物。     

人肝癌HepG2多药耐药细胞系的部分生物学性状研究

目的　研究人肝癌多药耐药 (MDR)的机制 ,建立HepG2多药耐药细胞系并研究其部分生物学性状。方法　应用HepG2细胞系 ,通过培养液中阿霉素 (ADM )的浓度梯度增加法 ,得到肝癌多药耐药株HepG2 /ADM。Westernblot增强化学发光法 (ECL)检测细胞株表面多药耐药基因(MDR1)的表达产物P 糖蛋白 (P 170 )、多药耐药相关蛋白 (MRP)及肺耐药蛋白 (LRP)的表达水平。结果　耐药细胞的倍增时间延长 2 .0 5倍。该耐药模型的P 170表达水平较亲本细胞升高3 .90倍 (P <0 .0 1) ,但MRP及LRP无明显变化。结论　HepG2 /ADM同其亲本细胞相比 ,其耐药性、倍增时间有明显改变 ;多药耐药性主要与MDR1的高表达有关。     

肝癌多药耐药产生与低糖环境的关系

目的探讨局部微环境低糖与肝细胞癌多药耐药性(MDR)产生的关系及影响机制。方法低糖培养HepG2细胞,应用流式细胞术Annexin V/PI法检测低糖培养的细胞在化疗药物5-氟脲嘧啶(5-Fu)作用后的凋亡情况,分别应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术和Western blot技术检测低糖培养后HepG2细胞内多药耐药相关基因mdr1、MRP1、LRP的mRNA和蛋白水平的表达。结果在低糖环境下生长时间越长的HepG2细胞对5-Fu的抵抗越强,而且随着低糖培养时间的增加,5-Fu诱导的HepG2细胞的凋亡高峰延迟。低糖培养的HepG2细胞内多药耐药相关基因mdr1、MRP1、LRP在mRNA和蛋白水平的表达随低糖培养时间的延长而升高,以LRP的改变最为显著。结论肝癌生长微环境葡萄糖耐量不足也是肝癌产生MDR的原因之一。低糖可通过上调一组多药耐药相关基因的表达而诱导肝癌的多药耐药性。     

微环境诱导肝细胞癌多药耐药的形成及机制

目的探讨微环境在肝癌多药耐药（MDR）表型形成中的作用，并初探其作用机制，为逆转肝癌耐药提供有效的新的分子靶点。方法模拟肝癌体内生长的局部微环境，使HepG2细胞分别在缺氧、低糖的微环境下生长或稳定整合HBX基因。应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术和Westernblot技术分别检测这些局部微环境因素作用下的HepG2细胞内多药耐药相关基因mdr1、肺耐药相关蛋白基因（LRP）、多药耐药相关蛋白基因（MRP1）和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的mRNA和蛋白水平的表达。同时运用免疫细胞化学技术检测肝癌耐药细胞株中HIF-1α蛋白的表达。以及检测转染了HIF-1α质粒的HepG2细胞中上述相关多药耐药基因的表达。结果在缺氧、低糖环境下生长或稳定整合了HBX基因的HepG2细胞均不同程度地高表达多药耐药相关基因和HIF-1α；在肝癌耐药细胞株中HIF-1α蛋白高表达；稳定转染了HIF-1α质粒的HepG2细胞显著高表达多药耐药相关基因。结论肝癌生长的微环境可通过核转录因子HIF-1α调控多药耐药相关基因的表达。从而诱导肝癌多药耐药表型的形成；HIF-1α有望成为逆转肝癌耐药的新的分子靶点。     

多药耐药相关蛋白在肝癌多药耐药细胞系HePG2/ADM中的作用

目的研究4种耐药蛋白：多药耐药蛋白（multi—drug resistance protein 1，MDR1），多药耐药相关蛋白1（multi—drug resistance related protein 1，MRP1），肺耐药蛋白（lung resistance protein，LRP），乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP）在肝癌多药耐药中的作用。方法通过培养液中阿霉素（adriamycin，ADM）浓度递增诱导法筛选培养，建立HePG2／ADM肝癌多药耐药细胞株；采用real time荧光定量PCR检测四种耐药蛋白mRNA在正常肝细胞系L02、肝癌细胞系HePG2及HePG2／ADM中的表达差异；Western blot检测3种细胞系中4种耐药蛋白的表达。结果（1）建立HePG2／ADM细胞系。MTT法检测阿霉素对HePG2／ADM细胞IC50为亲本细胞的282倍（P〈0．05）。（2）HePG2／ADM中MDR1和BCRP mRNA表达分别是HePG2的400倍（F=87．49，P〈0．05）和9倍（F=1006，P〈0．05）。MRP1和LRP mRNA表达差异无统计学意义（FMRPI=3．43，FLRP=2．44，Pall〉0．05）。（3）L02和HePG2中4种耐药蛋白mRNA的表达均无差异（FMDRI=1006，FBCRP=87．49，FMRPI=3．43，FLRP，=2．44，Pall〉0．05）。（4）Western blot检测发现HePG2／ADM细胞中MDR1，BCRP，LRP蛋白表达显著高于HePG2和L02细胞（FMDHI=28．68，FBCRP=18．60，FLRP=6．28，Pall〈0．05），MRP1蛋白表达不增高（FMRPI=0．70，P〉0．05）。（5）4种耐药蛋白表达在HePG2和L02细胞差异均无统计学意义（FMDRI=28．68，FBCRP=18．60，FMRPI=0．70，FLRP=6．28，Pall〉0．05）。结论MDR1和BCRP在HePG2／ADM多药耐药中起重要作用，HePG2／ADM多药耐药与MRP1和LRP可能无关。