人参皂苷Rg1抗长波紫外线对人皮肤成纤维细胞损伤模型的作用研究

目的:观察人参皂苷Rg1抗长波紫外线(Ultravio1et A,UVA)对人皮肤成纤维细胞(Human dermal fibroblasts,HDF)的损伤作用,为研究开发光老化防护剂提供依据。方法:分离HDF进行原代培养及冻存;复苏HDF传代培养至第6～8代用于样品活性检测;采用改良MTT法检测UVA照射前后给予人参皂苷Rg1 HDF存活率的变化情况,用维生素C作阳性对照。结果:在照射前24h预先给予人参皂苷单体Rg1,在2.5～40μg/ml浓度时细胞存活率较模型组明显提高,差异有统计学意义(P0.05);且5、10μg/ml组的细胞存活率优于阳性对照组(P0.05)。照射后给予人参皂苷单体Rg1,在2.5～40μg/ml浓度时细胞存活率均较模型组明显提高(P0.05)。结论:人参皂苷Rg1在2.5～40μg/ml范围内对HDF的UVA损伤有较好的预防和治疗作用。     

环氧化酶-2选择性抑制剂NS398对紫外线照射损伤人角质形成细胞的保护作用

目的 探讨环氧化酶-2选择性抑制剂氮-2,环己氧-4,硝基苯-甲基磺胺(NS398)对长波紫外线(UVA)、中波紫外线(UVB)联合照射损伤HaCaT细胞的光保护效应.方法 HaCaT细胞传代培养,与含不同浓度NS398的培养基孵育2 h后接受紫外线(UV)照射,四甲基偶氮唑(MTT)法测定HaCaT细胞的增殖变化,二氯荧光素醋酸酯(DCFH-DA)荧光探针法测定细胞内活性氧(ROS).结果 细胞存活率测定表明,UV照射的HacaT细胞,细胞活性明显下降(P＜0.01),NS398能明显提高细胞生存能力并呈浓度依赖性(P＜0.05).NS398能明显降低UV照射引起的细胞内ROS含量,有效抵抗UV诱导的HaCaT细胞死亡或凋亡,呈浓度依赖性(P＜0.05).结论 NS398通过减少UV辐射诱导的细胞内ROS的生成,提高细胞的生存能力,发挥防护UV辐射损伤的作用.     

低剂量长波紫外线诱导培养人皮肤成纤维细胞适应性反应观察

目的:探讨低剂量长波紫外线诱导培养人皮肤成纤维细胞适应性反应的程度及特点。方法:以具有致死作用的86.4J/cm2UVA照射经7.2J/cm2低剂量UVA单次或多次预照射的培养人皮肤成纤维细胞,光镜、电镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡的比例,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤的程度。结果:单次或多次7.2J/cm2UVA预照射,随后86.4J/cm2UVA照射,观察其对培养皮肤成纤维细胞形态学上的毒性反应,并使细胞凋亡的比例下降、DNA链断裂减少及修复加快,和单纯86.4J/cm2UVA照射的相应细胞比较均有显著差异(P<0.01或P<0.05);单次7.2J/cm2的UVA预照射诱导培养皮肤成纤维细胞的适应性反应在预照射12h后消失,而当低剂量UVA预照射的累积剂量达到28.8J/cm2以上时,预照射的培养细胞即使是14天后对86.4J/cm2UVA照射仍有明显的防护作用。结论:低剂量UVA照射可诱导培养的皮肤成纤维细胞出现对随后高剂量UVA照射的适应性反应,其滞留期及强度与低剂量UVA的累积剂量有关。     

川芎嗪对高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞氧化应激及TGF-β1表达的影响

目的:探讨川芎嗪(TMP)对高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞(MCs)氧化应激和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的作用。方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞株,分对照组、高糖组、TMP组,分别培养24h、48h,以二氢二氯荧光素(DCFH-DA)标记细胞,通过流式细胞仪检测细胞内二氯荧光黄(DCF)的荧光强度而测得细胞内ROS水平;以ELISA法检测细胞上清液TGF-β1的含量。结果:与对照组相比,高糖组细胞内DCF平均荧光强度均显著升高(P<0.01),TGF-β1表达显著增加(P<0.01);与高糖组相比,TMP组细胞内DCF平均荧光强度均显著降低(P<0.01),TGF-β1表达显著降低(P<0.01)。结论:TMP可以有效抑制高糖诱导的氧化应激以及TGF-β1表达。     

虾青素对HaCaT细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：探讨虾青素对长波紫外线（UVA）辐射诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：采用人角质形成细胞HaCat细胞构建体外模型,MTT法测定细胞活力,酶生化法测定细胞超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—px）的活性和丙二醛（MDA）的含量。结果：虾青素能提高受UVA辐射的HaCaT细胞的增殖活力,提高胞质SOD和GSH-px的活性,降低细胞内MDA的含量。结论：虾青素对受UVA辐射的HaCaT细胞氧化应激损伤有一定的保护作用。     

杜仲提取液对紫外线照射下真皮成纤维细胞保护作用的研究

目的:研究紫外线(UV)照射对真皮成纤维细胞功能的影响,观察杜仲提取液对紫外线照射下细胞的保护作用。方法:体外培养人真皮成纤维细胞接收长波紫外线或中波紫外线照射,同时加入杜仲提取液,检测细胞存活率,基质金属蛋白酶(MMP)-1和3的mRNA表达,以及Ⅰ型、Ⅲ型前胶原蛋白表达水平。结果:与未照射组相比,20J/cm~2UVA1和40mJ/cm~2UVB照射组可显著抑制细胞存活率、增加MMP-1和MMP-3mRNA水平、抑制Ⅰ型和Ⅲ型前胶原蛋白表达水平(P0.01)。照射同时加入1mg/ml杜仲提取液可以显著减少UVA1或UVB照射对细胞引起的上述改变(P0.05)。结论:杜仲提取液对UV照射所致真皮成纤维细胞的增殖损伤、胶原合成和分解代谢紊乱有保护作用,因而可以应用于防治皮肤光老化。     

川芎嗪对中波紫外线诱导黑素细胞黑素生成的影响

目的:研究川芎嗪(TMP)对不同剂量中波紫外线(UVB)诱导正常人黑素细胞黑素合成的影响,并初步探讨其机理。方法:常规分离培养正常人黑素细胞,分别用30mJ/cm2、90mJ/cm2的UVB照射细胞,然后加入100μg/ml、300μg/ml、600μg/ml的TMP孵育至72h,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖情况;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;NaOH裂解法测定黑素含量。结果:30mJ/cm2的UVB能诱导黑素细胞增殖,加强酪氨酸酶活性,促进黑素生成,TMP能显著抑制该效应,并呈剂量依赖性;90mJ/cm2的UVB对黑素细胞产生明显的细胞毒作用,细胞增殖下降,黑素合成减少,TMP则能减轻其细胞毒作用,并也表现为剂量依赖性,以600μg/ml的TMP作用最为显著,差异有统计学意义。结论:TMP不但能抑制低剂量UVB照射诱导的黑素细胞增殖和黑素合成,而且还能减轻高剂量UVB照射对黑素细胞的细胞毒作用,对黑素细胞起一定的光保护作用。     

多次强脉冲光照射对皮肤成纤维细胞老化指标的影响

目的 探讨多次强脉冲光(intense pulsed light,IPL)照射对皮肤成纤维细胞老化指标的影响,并用长波紫外线(ultraviolet A,UVA)作对比,观察多次强脉冲光照射能否造成细胞老化.方法 实验分3组,一组朱接受照射作为对照组,其他两组分别接受UVA 9 J/cm2和IPL 15 J/cm2照射,每天1次,连续照射5d.在第6天,收集细胞,分别进行β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色及细胞周期、细胞内活性氧和端粒长度的测定.结果 连续5 d IPL照射后,SA-β-Gal染色和端粒长度与正常对照组相比,未见明显变化(P＞0.05).细胞周期中G1期所占百分比下降,细胞内活性氧下降(P＜0.05);连续5 d UVA照射后,与正常对照组相比,SA-β-Gal染色阳性细胞的百分数增加,细胞周期中G1期所占百分比未见明显变化,细胞内活性氧上升,端粒长度缩短(P＜0.05).结论 多次UVA照射可诱导细胞老化,但多次IPL照射不会出现细胞老化.     

五味子乙素对UVA损伤组织工程皮肤保护作用的研究

目的:探讨五味子乙素(Sch B)对长波紫外线(UVA)接种人永生化角质形成细胞(Ha Cat细胞)和成纤维细胞(FB细胞)的组织工程皮肤模型损伤后的保护作用及其可能的作用机制。方法:用5J/cm2的UVA照射组织工程皮肤模型,给予不同浓度的Sch B(0.01、0.1、1、10、100μmol/L)处理UVA损伤后的组织工程皮肤模型,检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性,乳酸脱氢酶(LDH)及一氧化氮(NO)含量。结果:UVA照射组织工程皮肤模型后,SOD、GSH-PX活性降低,LDH及NO含量升高,给予不同浓度的Sch B对SOD、GSH-PX活性、LDH及NO含量,有不同的影响,实验结果表明以0.01、0.1μmol/L Sch B的保护做用最强。结论:0.01、0.1μmol/L Sch B减轻UVA对组织工程皮肤模型损伤的效果最佳。     

TGF-β1对UVA照射皮肤成纤维细胞HSP70表达的影响

目的:探讨转化生长因子-β1(tansforming gowth fetor-beta 1,TGF-β1)对长波紫外线(ultraviolet A,UVA)照射皮肤成纤维细胞热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)表达的影响.方法:通过酶联免疫法(ELISA)测定不同剂量UVA即对照组(UVA 0J/cm2)、UVA 5J/cm2、UVA 10 J/cm2、UVA 20J/cm2照射成纤维细胞上清液中HSP70的含量;选择UVA照射剂量为15J/cm2,不同剂量TGF-β1即小剂量组(UVA TGF-β1 0.1ng/m1)、中剂量组(UVA TGF-β1 1ng/m1)、大剂量组(UVA TGF-β1 10ng/m1)处理后成纤维细胞HSP70上清液中HSP70的含量.结果:UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞导致HSP70表达下降,UVA 20J/cm2照射组与对照组比较,HSPT0含量明显降低,有非常显著性差异(P＜0.01),OVA 10J/cm2照射组差异有统计学意义(P＜0.05);不同剂量TGF-β1处理后,大剂量TGF-β1,组,皮肤成纤维细胞上清液中HSP70含量明显升高,与照射组比较有非常显著性差异(P＜0.01),中剂量组差异有统计学意义(P＜0.05).结论:UVA照射抑制体外培养成纤维细胞HSPT0表达,TGF-β1可提高UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞HSP70表达水平,对皮肤成纤维细胞起保护作用.     

强脉冲光对长波紫外线Ⅰ诱导成纤维细胞光损伤的保护作用

目的 研究强脉冲光（intense pulse light,IPL）对长波紫外线（ultraviolet A,UVA Ⅰ）诱导的正常离体人皮肤成纤维细胞（fibroblast,FB）损伤的保护作用,探讨以IPL为手段的光子嫩肤技术的理论基础.方法 分离并培养人FB,用不同剂量UVA Ⅰ照射FB以诱导细胞光损伤,CCK-8检测其增殖能力的情况,根据预实验结果确定IPL剂量进行照射,流式细胞仪技术枪测细胞周期,Western印迹法检测CylinD1和CDK2蛋白的表达水平.结果 不同剂量的UVA Ⅰ可造成FB的损伤,随着UVA Ⅰ剂量的增加,细胞增殖能力下降,11 J/cm2的剂量可明显导致细胞大量死亡,而7 J/cm2的UVAⅠ对细胞的增殖能力没有明显的影响;经UVA Ⅰ照射2 d后再进行IPL连续照射2 d,细胞增殖活性高于单独UVA Ⅰ处理组,差异具有统计学意义.流式细胞仪检测结果表明该组细胞增殖指数升高.细胞周期蛋白CyclinD1和CDK2的表达水平升高.结论 IPL可通过调节周期蛋白的表达而促进正常FB增殖,从而保护UVAⅠ诱导的FB光损伤,为应用IPL面部美容除皱即光子嫩肤术提供理论依据.     

PDGF-BB对UVB诱导的光老化成纤维细胞中ROS的影响

目的:探讨PDGF-BB对紫外线诱导的光老化成纤维细胞中ROS的影响及抑制氧化应激的作用特点。方法:利用CCK-8法检查不同浓度PDGF-BB对成纤维细胞增殖活性的影响,筛选治疗最佳浓度;PDGF-BB预处理成纤维细胞48h后,利用UVB体外重复照射构建成纤维细胞光老化模型;利用β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老程度;装载活性氧(ROS)检测探针,利用荧光显微镜、流式细胞技术观察和检测各组ROS的表达。结果:PDGF-BB预处理辐照组(UVB+PDGF-BB组)中β-半乳糖苷酶染色细胞的着色比率低于UVB组,差异有统计学意义(P0.05)。在UVB诱导的应激性老化中,UVB组ROS表达显著高于正常组(P0.05);PDGF-BB预处理辐照组(UVB+PDGF-BB组)ROS表达显著低于UVB组(P0.05)。结论:PDGF-BB可降低UVB介导的光老化成纤维细胞中ROS的表达,减少氧化应激反应,可在一定程度上缓解光老化进程。     

TGF-β1对UVA照射人皮肤成纤维细胞MMP-1和MMP-3 mRNA表达的影响

目的：研究转化生长因子-β1（tansforming gowth fctot-beta1,TGF-β1）对长波紫外线（ultrayiolet A,UVA）照射人皮肤成纤维细胞基质金属蛋白酶-1（matrix metalloproteinase-1,MMP-1）和基质金属蛋白酶-3（matrix metalloprotein ase-3,MMP-3）mRNA表达的影响,探讨TGF-D,对皮肤成纤维细胞的光保护机制。方法：通过体外培养人皮肤成纤维细胞,加入不同浓度TGF-β1（0．1、1、10ng／m1）预处理细胞后UVA15J／cm^2照射诱导细胞光老化,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测成纤维细胞增殖活性,半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定MMP-1、MMP-3 mRNA表达。结果：UVAI5J／cm^2照射前给予不同剂量TGF-β1预处理,随TGF-β1剂量增加成纤维细胞增殖活性明显提高,MMP-1、MMP-3 mRNA表达随着TGF-β1剂量增加而降低。结论：TGF-β1可提高UVA照射体外培养成纤维细胞增殖活性,减少UVA照射体外培养的皮肤成纤维细胞MMP-1、MMP-3 mRNA表达,减少其对胶原的降解,对UVA照射皮肤成纤维细胞起保护作用。     

NS398对长波紫外线诱导的HaCaT细胞白介素-10及γ干扰素mRNA表达的影响

目的 探讨环氧化酶2选择性抑制剂(NS398)对长波紫外线(UVA)辐射人类角质形成细胞(HaCaT细胞)的保护作用.方法 将传代培养的HaCaT细胞分为单纯照光组、NS398干预组和对照组共3组.单纯照光组用UVA照射,NS398干预组预先用不同浓度NS398( 20、40、80 μmol/L)处理后接受UVA照射,对照组为常规条件下培养做避光处理.用RT-PCR法分别检测细胞中白介素(IL)-10及γ干扰素(IFN-γ)mRNA的表达水平变化.结果 单纯照光组细胞IL-10mRNA表达量明显高于对照组,而IFN-γ mRNA的表达水平较对照组低;NS398干预组细胞IL-10mRNA表达量明显低于单纯照光组,IFN-γ mRNA的表达高于单纯照光组,并呈NS398浓度依赖性.结论 NS398能够抑制UVA照射下HaCaT细胞IL-10 mRNA的表达,并上调IFN-γ mRNA表达水平,从而可能具有延缓人类皮肤光损伤的效应.     

十精丸对UVA致ESF-1细胞光老化保护作用的研究

目的:研究十精丸抗紫外线致ESF-1细胞光老化作用,并初步探讨其作用机制。方法:用40J/cm2的UVA照射人皮肤成纤维细胞建立光老化细胞模型,以不同浓度十精丸提取物处理光老化细胞,MTT法检测细胞活力,羟胺法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,TBA法检测丙二醛(MDA)含量。结果:UVA照射成纤维细胞后,细胞活力下降,SOD、GSH-Px活性降低,MDA含量升高(P<0.01),十精丸水提液中(100μg/ml)、高(200μg/ml)剂量组能显著提高成纤维细胞细胞活力、SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量(P<0.05或P<0.01)。结论:十精丸水提液可抑制UVA引起的成纤维细胞活性下降,推测其机制为通过提高SOD活力、加速氧自由基的清除和减少氧自由基的产生,使细胞的脂质过氧化损伤程度降低有关。     

苦参碱对前列腺癌细胞增殖及雄激素受体功能的抑制作用

目的:探讨苦参碱(matrine)对雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP)的增殖及雄激素受体(androgen re-ceptor,AR)表达的抑制作用。方法:分别用0.5、1.0、1.5、2.0、3.0g/L浓度的苦参碱作用于LNCaP细胞12、24、36h后MTT法检测细胞生长活性;台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线;24h后流式细胞仪测定细胞周期变化;24h后Western印迹法检测细胞内AR的表达。结果:苦参碱能抑制LNCaP细胞的生长,呈剂量与时间依赖性,不同浓度苦参碱组之间与不同作用时间组之间的差异均有显著性意义(P<0.01)。苦参碱诱导LNCaP细胞出现剂量依赖性G2/M期阻滞(P<0.01);细胞内AR的表达随苦参碱剂量依赖性减少(P<0.01)。结论:苦参碱通过下调细胞内AR表达和阻滞细胞周期进展来抑制LNCaP细胞的体外生长。     

低剂量长波紫外线反复照射诱导培养成纤维细胞表达基质金属蛋白酶实验研究

目的：探讨长波紫外线引起皮肤光老化、皱纹形成的机制。方法：以7.2J/cm2长波紫外线单次或多次照射培养真皮成纤维细胞,光镜、电镜观察细胞的形态学变化,原位杂交和免疫组化的方法检测基质金属蛋白酶中的间质胶原酶（MMP-1）、间质溶解素-1（MMP-3）mRNA及其共同的组织抑制因子（TIMP-1）蛋白在各实验组成纤维细胞的表达并进行定量分析。结果：在长波紫外线累积剂量达57.6J/cm2后,培养真皮成纤维细胞开始出现具有细胞衰老特征性的形态改变,但仅经两次7.2J/cm2 UVA照射,培养成纤维细胞就出现MMP-1、MMP-3 mRNA的表达并随累积照射剂量增加逐渐增强,但各照射组的TIMP-1蛋白均仅在照射后48h内呈一过性轻度表达。结论：皮肤光老化皱纹形成可能与长波紫外线照射引起真皮成纤维细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制剂表达失衡密切相关。     

甲状旁腺素对大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的观察甲状旁腺素(PTH)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及凋亡的影响,并探讨其作用的可能机制。方法体外培养的大鼠系膜细胞经不同浓度的PTH作用后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期及凋亡,吖啶橙荧光活体染色观察细胞凋亡形态,免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测c-jun、c-fos表达。结果PTH持续刺激GMC6h、12h时,10-11～10-9mol/L浓度范围内,促进细胞增殖(P<0.05);10-9mol/L在12h达高峰,并可使G0～G1期细胞减少,S G2M期细胞增多,并能明显促进c-jun、c-fos的表达(P<0.01),而10-8mol/L无明显作用;刺激24h时各浓度均无作用;刺激48h各浓度明显抑制大鼠系膜细胞增殖(P<0.01),且使细胞阻滞在G0～G1期,不能进入S期,并能明显抑制c-jun、c-fos的表达(P<0.01)。PTH不诱导GMC凋亡。结论PTH体外刺激GMC增殖与作用时间及剂量相关,低浓度短时间作用刺激GMC增殖,持续作用抑制GMC增殖,其作用与c-jun、c-fos的表达有关,并影响细胞周期。PTH对体外培养的大鼠GMC凋亡无诱导作用。甲状旁腺机能亢进可能参与了慢性肾病残余肾功能进一步恶化的病理过程。     

TNF-α对兔胆管成纤维细胞P311/TGF-β1/α-SMA通路的影响及川芎嗪的干预作用

目的:探讨TNF-α对兔胆管成纤维细胞P311/TGF-β1/α-SMA通路的影响及川芎嗪的干预作用。方法:分离、培养正常家兔胆管成纤维细胞并鉴定,将胆管成纤维细胞分别给予TNF-α、TNF-α联合不同浓度的TMP(0.08、0.4、2.0 mg/m L)干预48 h,以无处理的胆管成纤维细胞为空白对照,用CCK-8法检测细胞增殖水平;real-time PCR检测细胞P311、TGF-β1、α-SMA m RNA表达;Western blot检测细胞TGF-β1、α-SMA蛋白表达。结果:与空白对照比较,胆管成纤维细胞经TNF-α处理后,增殖明显增强,P311、TGF-β1、α-SMA m RNA以及TGF-β1、α-SMA蛋白表达明显上调(均P0.05);TMP对TNF-α的上述效应有抑制作用,并且呈现浓度依耐趋势,其中0.4、2.0 mg/m L的TMP有明显作用(均P0.05)。结论:TNF-α可能通过调控P311/TGF-β1/α-SMA信号通路促进胆管成纤维细胞增殖,TMP能抑TNF-α对该通路的活化,故可能对良性胆道狭窄有防治作用。     

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3及血管内皮生长因子的影响

目的:研究姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞体外作用及其对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法:分别用0、6.25、12.5、25、50μmol/L浓度的姜黄素作用于PC-3细胞,12、24、36、48、72、96h后台盼蓝拒染法、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长活性;24h后流式细胞仪测定细胞周期及凋亡的变化,透射电镜观察细胞超微结构变化;半定量RT-PCR法检测PC-3细胞内VEGFmRNA的表达;ELISA检测细胞上清液中VEGF浓度。结果:姜黄素能显著抑制PC-3细胞的增殖,呈剂量与时间依赖性,不同浓度姜黄素组之间及不同时间组之间差异均有统计学意义(P<0.01)。不同浓度姜黄素诱导PC-3细胞出现剂量依赖性G2/M期阻滞(P<0.01),且各浓度组凋亡细胞比例均显著高于空白对照组(P<0.01),差异有统计学意义;姜黄素作用24h后PC-3细胞出现凋亡的形态学改变;PC-3细胞内VEGF mRNA的表达和细胞上清液中VEGF呈剂量依赖性降低。结论:姜黄素能显著抑制体外PC-3细胞的生长,并促进其G2/M期阻滞和凋亡,VEGFmRNA及蛋白的表达也明显降低,可能是其抑制肿瘤和血管生长的机制之一。