蛋白激酶C和线粒体ATP敏感性钾通道在未成熟心肌预处理中的作用

目的探讨蛋白激酶C(PKC)和线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道(mitoKATP)在未成熟心肌预处理保护中的作用。方法采用Langendorff离体心脏灌注模型,30只新生日本长耳大白兔分为5组:缺血/再灌注组(I/R组),心脏缺血预处理组(E1组),蛋白激酶C(PKC)阻滞剂chelerythrine(CLT) 心脏缺血预处理(E2组),mitoKATP阻滞剂5-hydroxydecanoate(5-HD) 心脏缺血预处理(E3组),mitoKATP通道开放剂Diazoxide(Diaz)预处理组(E4组)。以血流动力学、生化指标、心肌超微结构等作为观察指标。结果E1和E4组心功能恢复、心肌含水量优于I/R、E2和E4组(P<0.05),三磷酸腺苷含量、超氧化物歧化酶活性、心肌线粒体Ca2 -ATPase活性、心肌线粒体合成三磷酸腺苷(ATP)的能力优于I/R、E2和E4组(P<0.01),丙二醛含量、血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、心肌细胞内Ca2 含量、心肌线粒体Ca2 含量低于I/R、E2和E4组(P< 0.01),心肌超微结构损伤较I/R、E2和E4组明显减轻。结论心肌缺血预处理对未成熟心肌具有明显的保护作用,其机制可能是通过PKC的激活和mitoKATP通道的开放起作用。     

金属硫蛋白对未成熟心肌和心肌间质的保护作用

目的探讨诱导金属硫蛋白(MT)在未成熟心肌中的表达对缺血-再灌注未成熟心肌和心肌间质的影响。方法将24只兔(14~21d)按随机数字表法分为4组,每组6只,对照组:腹腔注射蒸馏水0.3ml,24h后取离体心脏行Langendorff灌注;组1、组2和组3在腹腔注射3.6%ZnSO4(1.5ml/kg),分别于注射后12h、24h和48h取离体心脏行Langendorff灌注。测定心肌细胞中MT含量、血流动力学、生化指标,观察心肌超微结构改变。结果组2、组3与对照组、组1比较,MT含量、三磷酸腺苷(ATP)含量、超氧化物歧化酶活性、羟脯氨酸含量、心肌线粒体[Ca2+-ATPase]m、心肌线粒体合成ATP的能力明显增高(P<0.01),心肌含水量、丙二醛含量、心肌肌酸激酶、乳酸脱氢酶漏出率、心肌线粒体Ca2+含量、心肌线粒体[Ca2+]m和内皮素含量明显降低(P<0.01),心肌超微结构损伤明显减轻。结论腹腔注射ZnSO4可诱导心肌MT长时间表达,MT可减轻未成熟心肌和心肌间质的缺血-再灌注损伤。     

二氮嗪预处理对未成熟兔心脏的保护作用

目的 了解二氮嗪预处理对未成熟兔心脏有无保护作用,并探讨其机制。方法 大耳白幼兔(小于28 d)21只随机分成三组:对照组(Ⅰ组n=8):K-H缓冲液灌注30 min后St.ThomasⅡ号停跳液(STH)停跳;二氮嗪预处理组(Ⅱ组n=8):二氮嗪(100μmol/L)灌注5 min,再K-H液灌注10min后STH停跳;二氮嗪+5-HD组(Ⅲ组n=5):二氮嗪和5-HD(均100μmol/L)共同灌注5 min后停跳。在LangendOrff模型上进行离体心脏常温缺血/再灌注(I/R)实验。观察再灌后血液动力学恢复、冠脉流出液心肌酶、心肌组织内ATP含量及心肌超微结构变化。结果 再灌后Ⅱ组左室发展压(LVDP)、左室压力上升和下降最大速率(±dp/dtmax)的恢复率在多个时间点上均高于Ⅰ组,再灌末心肌组织ATP含量也高于Ⅰ组(P<0.01),冠脉流出液中的三种心肌酶值均较Ⅰ组降低(P<0.01)。Ⅱ组的线粒体评分低于Ⅰ组(P<0.01),Ⅲ组线粒体评分回到Ⅰ组水平(P>0.05)。结论 二氮嗪能通过开放线粒体ATP敏感性通道而发挥对幼兔心肌的保护作用。     

线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道在未成熟心肌缺血预处理中的作用

目的探讨线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道（mitoKATP）在未成熟心肌预处理保护中的作用,为未成熟心肌的保护提供依据。方法采用Langendorff离体心脏灌注模型,将24只新生（出生14～21d）日本长耳大白兔按随机数字表法分为4组：缺血／再灌注组（I／R组）,心脏缺血预处理组（E1组）,mitoKATP阻滞剂5-hydroxydecanoate（5-HD）＋心脏缺血预处理（E2组）,mitoKATP通道开放剂Diazoxide（Diaz）预处理组（E3组）;检测心脏功能恢复率、心肌含水量、血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、三磷酸腺苷（ATP）含量、超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量、心肌细胞内Ca^2＋含量、心肌线粒体Ca^2＋含量、心肌线粒体Ca^2＋-三磷酸腺苷酶活性（Ca^2＋-ATPase）、心肌线粒体合成ATP的能力;电子显微镜观察心肌超微结构。结果E1组、E3组心功能恢复优于I／R组和E2组,心肌含水量低于I／R组和E2组（P〈0．05）;E1组、E3组三磷酸腺苷含量、超氧化物歧化酶活性、心肌线粒体Ca^2＋-ATPase活性、心肌线粒体合成ATP的能力均优于I／R组和E2组（P〈0．05）,丙二醛含量、血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶漏出率、心肌细胞内Ca^2＋含量、心肌线粒体Ca^2＋含量低于I／R组、E2组（P〈0．05）;E1组、E3组心肌超微结构损伤较I／R组和E2组明显减轻。结论心肌缺血预处理对未成熟心肌具有明显的保护作用,其机制可能是通过mitoKATP通道的开放起作用。     

非心脏缺血预处理对兔未成熟心肌的保护作用

目的　研究非心脏缺血预处理 ( IP)对未成熟心肌的保护作用 ,探讨未成熟心肌的保护方法。　方法　采用心脏缺血预处理 ( MIP)、双下肢缺血预处理 ( DL IP)和肾缺血预处理 ( RIP)兔 L angendorff灌注模型 ,比较 3种方法对缺血 -再灌注 ( IR)未成熟心肌损伤的效应。将 2 4只兔分为 4组 ,IR组 ,MIP组 ,DL IP组和 RIP组 ,每组 6只。测定左心室功能恢复、心肌含水量 ( MWC)、乳酸脱氢酶 ( L DH)漏出量、血清肌酸激酶 ( CK)漏出量、心肌三磷酸腺苷 ( ATP)、丙二醛( MDA)含量和超氧化物歧化酶 ( SOD)活性等指标。　结果　 MIP组、DL IP组和 RIP组左心室功能恢复指标、ATP含量和 SOD活性优于 IR组 ( P<0 .0 5 ) ,MWC低于 IR组 ( P<0 .0 5 ) ,L DH、CK漏出率和 MDA含量均低于 IR组 ( P<0 .0 1)。　结论　非心脏 IP对未成熟心肌具有明显的保护作用 ,与 MIP相同 ,可诱发同等效应的心肌保护作用。     

肾缺血预处理对未成熟心肌的保护作用

目的探讨肾缺血预处理对未成熟心肌保护的影响，为未成熟心肌的保护提供新的方法。方法建立兔Langendorff灌注模型，将18只幼兔随机分为3组，缺血／再灌注组（I／R组）：灌注15min转为工作心15min，停灌45min，恢复灌注15min改为工作心30min；心脏缺血预处理组（CIP组）：灌注15min转为工作心15min，反复2次缺血5min再灌注5min，重复I／R组的方法；肾缺血预处理组（RIP组）：反复3次阻断左肾动脉血流5min再灌注5min，取离体心脏，灌注15min转为工作心15min，重复I／R组的方法。观察血流动力学、生化等指标。结果CIP组和RIP组的冠状动脉流量（CF）、心排血量（CO）、左心室收缩压（LVSP）恢复百分率均较I／R组升高，左心室舒张期末压（LVEDP）恢复率则较I／R组降低，差异有统计学意义（P〈0.01）；三组间比较，HR、AF恢复率差异无统计学意义（P〉0.05）；RIP组与CIP组比较各指标恢复率差异无统计学意义（P〉0．05）。RIP组与I／R组比较：心肌含水量（MWC）、血清肌酸激酶（cK）和乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、ATP含量、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、心肌细胞内Ca^2＋含量、心肌线粒体Ca^2＋-ATPase活性、心肌线粒体Ca^2＋含量、心肌线粒体合成ATP能力差异有统计学意义（P〈0.01），RIP组和CIP组比较各项指标差异无统计学意义（P〉0.05）。结论肾缺血预处理对未成熟心肌具有心肌保护作用。     

热休克蛋白70表达对未成熟心肌和心肌间质的保护作用

目的 观察热休克蛋白70(HSP70)对未成熟心肌和心肌间质的保护作用.方法 健康新生长耳大白兔30只随机分为5组.对照组:腹腔注射生理盐水0.4 ml 24 h后取离体心脏,建立Langendorff离体心脏灌注模型;E4h、E12h、E24h、E48h组,腹腔注射去甲肾上腺素,4、12、24、48 h后分别取离体心脏,方法同对照组.测定心肌细胞中HSPT0含量、血流动力学指标、心肌含水量(MWC)、心肌肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、三磷酸腺苷(ATP)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量、心肌组织羟脯氨酸(HP)含量、内皮素(ET)含量、心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+-ATPase活性及其Ca2+含量、心肌线粒体合成ATP能力[ATP]m,心肌超微结构.结果 E24h组与其他各组比较,HSPT0含量明显增高(P＜0.01),MWC(72.48±1.36)低于其他各组(P＜0.05),ATP含量(11.64±1.87)、SOD活性(235.83±12.30)、心肌线粒体Ca2+-AT-Pase活性(18.46±1.95)、[ATP]m(106.26±9.42),HP含量(6.45±1.53)优于其他各组(P＜0.01),MDA含量(1.17±0.12)、CK(57.38±4.75),LDH漏出率(37.28±3.26)、心肌细胞内Ca2+含量(2.54±0.34)、心肌线粒体Ca2+含量(38.37±3.61)、ET含量(76.84±10.37)低于其他各组(P＜0.01),心肌超微结构损伤较其他各组明显减轻.结论 腹腔注射去甲肾上腺素24 h后可诱导未成熟心肌HSP70高表达,一定量的HSP70表达可明显减轻未成熟心肌和心肌间质的缺血再灌注损伤.     

黄芪预处理对缺血-再灌注心肌线粒体的保护作用

目的 观察黄芪预处理对兔心肌缺血-再灌注时心肌线粒体功能及结构的影响.方法 将家兔24只随机均分为心肌缺血-再灌注组(A组)、黄芪预处理组(B组)、假手术组(C组).检测线粒体Ca2+浓度([Ca2+])、丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活性及心肌三磷酸腺苷酸(ATP)含量,并观察线粒体超微结构的改变.结果 B组SOD、ATP含量、比表面(δ)明显高于A组(P<0.05或P<0.01),[Ca2+]、MDA、体密度(Vv)显著低于A组(P<0.05或P<0.01).结论 黄芪预处理对缺血-再灌注心肌线粒体有一定保护作用.     

常温缺血预处理对幼兔未成熟心肌的保护作用

目的研究常温缺血预处理(IP)对幼兔未成熟心肌的保护作用。方法将24只幼兔分为四组。组1IP1次;组2IP2次;组3IP3次;对照组。应用Langendorff心脏灌注方法,对3～4周龄幼兔离体心脏实施不同次数的5分钟缺血、5分钟再灌注的常温IP,常温缺血45分钟,再灌注30分钟。于平衡灌注末、缺血前、再灌注3分钟、5分钟、10分钟、20分钟和30分钟分别测定左心室发展压(LVDP)、左心室最大上升及下降速率(±dp/dtmax),再灌注末测定心肌组织三磷酸腺苷(ATP)含量、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果再灌注30分钟时,组1和组2LVDP、+dp/dtmax恢复率显著高于对照组（P<0.05,P<0.01）,组3LVDP、±dp/dtmax的恢复率与对照组比较差别无显著性意义。再灌注末组1、组2和组3心肌ATP含量显著高于对照组（P<0.05）。组2MDA含量显著低于组1、组3和对照组（P<0.05）。结论IP对未成熟心肌具有保护作用,其中2次IP的保护作用最好,而3次的保护作用减弱,表明IP对未成熟心肌的保护作用具有饱和效应和累计现象。     

钙预处理对未成熟心肌的保护作用

目的 观察钙预处理对未成熟心肌的影响.方法 采用Langendorff离体灌注模型,分为3组,缺血再灌组(I/R):离体心脏灌注10 win、工作心15 min后停灌45 min恢复灌注15 min,转为工作心模型30 min;心脏缺血预处理组(IPC):离体灌注10 min转为工作心15 min,反复2次缺血5min/再灌5min,停灌45min后恢复灌注15min,转为工作心模型30min;钙预处理组(CP):离体心脏灌注10 min、工作心15 min后,反复3次45 s无钙KH液灌流/5 min KH液灌流,停灌45 min后恢复灌注15 min,转为工作心模型30 min.以血流动力学指标、生化指标和心肌超微结构作为观察指标.结果 IPC与CP组比较,血流动力学指标、生化指标和心肌超微结构等方面均无明显差异;CP、IPC与I/R组比较,左心室功能恢复、三磷酸腺苷含量(ATP)(11.53±1.85、13.40±1.96比4.27±0.83,P＜0.01)、超氧化物歧化酶(SOD)活性(230.47±11.72、236.28±12.69比124.17±6.20,P＜0.01)、心肌线粒体Ca2+ATP酶活性(17.86±1.39、16.38±1.27比6.78 ±0.64,P＜0.01)和心肌线粒体合成ATP的能力(104.29±9.60、102.43±9.53比50.83±4.75,P＜0.01)明显增强,在心肌含水量(75.32±1.25、73.29±1.26比84.23±2.03,P＜0.01)、丙二醛含量(1.32±0.12、1.23±0.11比2.61±0.37,P＜0.01)、肌酸激酶(53.17±5.32、57.47±5.62比123.65±9.63,P＜0.01)和乳酸脱氢酶漏出率(32.16±3.23、34.48±3.43比85.43±5.93,P＜0.01)、心肌细胞内(2.54 ±0.32、2.17±0.22比4.48±0.74,P＜0.01)和心肌线粒体Ca2+含量(35.91±4.01、36.85±3.97比68.29±6.90,P＜0.01)明显减少;CP、IPC组心肌超微结构损伤较I/R组明显减轻.结论 钙预处理对未成熟心肌具有明显保护作用

Abstract：

Objective To investigate the protective effects of Ca2+ preconditioning on isolated immature myocardium.Methods Isolated working rabbit heart model was used,and 18 rabbits were randomly divided into 3 groups:ischemic/reperfusion (I/R) group receiving 45 min ischemia followed by 45 min reperfusion;myocardial ischemic preconditioning (IPC) group receiving 5 min ischemia and 5 min reperfusion 2 times before 45 min ischemia followed by 45 min reperfusion;Ca2 + preconditioning (CP)group receiving no-Ca2 + preconditioning before 45 min ischemia followed by 45 min reperfusion.The hemodynamics,biochemistry and myocardial ultrastructure were tested.Results The hemodynamics,biochemistry and myocardial ultrastructure had no significant diferrence between CP group and IPC group.As compared with I/R group,in CP and IPC groups,the left ventricular function recovery,adenosine triphosphate content (ATP) (11.53 ± 1.85,13.40 ± 1.96 vs 4.27 ±0.83,P＜0.01),superoxide dismutase (SOD)activity (230.47± 11.72,236.28 ± 12.69 vs 124.17 ±6.20,P＜0.01),Ca2+-ATPase activity of mitothondia ( 104.29 ± 9.60,102.43 ± 9.53 vs 50.83 ± 4.75,P＜0.01 ) and synthesized ATP activity of mitochondria ( 104.29 ±9.60,102.43 ±9.53 vs 50.83 ±4.75 ,P ＜0.01 ) were improved,and myocardial water content ( 75.32 ± 1.25,73.29 ± 1.26 vs 84.23 ± 2.03 ,P＜0.01 ),malondialdehyde content ( 1.32 ± 0.12,1.23 ± 0.11 vs 2.61 ± 0.37 ,P＜0.01 ),the dehydrogenase (32.16 ± 3.23,34.48 ± 3.43 vs 85.43 ± 5.93,P ＜0.01 ) and creatine kinase leakage (53.17 ±5.32,57.47±5.62 vs 123.65 ±9.63 ,P ＜0.01 ),myocardial cell Ca2+ content (2.54 ±0.32,2.17 ±0.22 vs 4.48 ±0.74 ,P ＜0.01 ) and mitochondrial Ca2+ content(35.91 ±4.01,36.85 ±3.97 vs 68.29 ±6.90,P ＜0.01 ) were reduced.The ultra.structure injury was milder in CP group and ICP group than in I/R group.Conclusion CP has signifcantly protective effects on immature myocardium.