苦参碱含药血清对大鼠肝干细胞的影响

目的 研究苦参碱含药血清对大鼠肝干细胞系WBF-344细胞的增殖及AFP、Notch1蛋白和mRNA表达的影响.方法 用MTT法检测苦参碱含药血清对WBF-344细胞增殖的影响,免疫细胞化学及RT-PCR方法检测苦参碱含药血清对WBF-344细胞AFP、Notch1蛋白和mRNA表达的影响.结果 5%、10%、20%浓度的苦参碱含药血清作用于WBF-344细胞24 h、48 h、72 h均有不同程度的抑制增殖作用,且存在时间、剂量依赖性.正常培养WB-F344细胞有少量AFP、Notch1蛋白和mRNA表达,肝癌前病变模型组血清培养后AFP、Notch1蛋白和mRNA表达上调,苦参碱含药血清培养后AFP、Notch1蛋白和mRNA表达较模型组血清AFP、Notch1蛋白和mRNA表达下调. 结论肝癌前病变模型组血清可能具有诱导WBF-344细胞向肝癌细胞方向分化的作用,苦参碱含药血清可逆转此作用,以上作用与调节Notch1表达关系密切.     

益肾化瘀方含药血清对NRK52E转分化过程中TGF-β_1、BMP-7表达的影响

目的:采用体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)为研究对象,观察益肾化瘀方含药血清对NRK52E转分化过程中TGF-β_1、BMP-7 mRNA表达的影响。方法:以TGF-β_1诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)为研究对象,采用血清药理学方法和RT-PCR法,观察空白对照组、TGF-β_1刺激组、益肾化瘀方含药血清高、中、低剂量组、缬沙坦含药血清组6组细胞形态的变化,以及TGF-β_1mRNA、BMP-7mRNA的表达。结果:NRK52E细胞经TGF-β_1刺激48 h后,失去原有典型的铺路石样形态,拉长增大呈梭形,细胞间隙也增宽。而与益肾化瘀方含药血清共同作用后,细胞形态有所修复,梭形改变减轻,并随着含药血清浓度的增加在一定程度上渐趋向于正常形态。而同时加入不同浓度的益肾化瘀方含药血清与TGF-β_1共刺激48 h后,呈现剂量依赖方式上调BMP-7mRNA表达,而TGF-β_1mRNA的表达则有所下降,并表现出与缬沙坦对BMP-7和TGF-β_1相互调控的高度一致性。结论:益肾化瘀方含药血清通过在基因水平抑制TGF-β_1mRNA表达,并以剂量依赖方式上调BMP-7mRNA表达,而显示出对NRK52E细胞转分化过程的阻抑作用。     

针对半乳糖凝集素-3的siRNA抑制CD133~+肺腺癌细胞体外诱导CD8~+T细胞凋亡

目的 观察针对半乳糖凝集素(galectin)-3的特异性siRNA对CD133~+肺腺癌细胞功能的影响.方法 实时荧光定量PCR技术(FQRT-PCR)和Western blot检测siRNA对galectin-3的干扰效率,噻唑蓝(MTT)比色法检测siRNA对CD133~+肺腺癌细胞增殖的影响,Annexin V和PI双染检测转染siRNA的CD133~+肺腺癌细胞上清诱导CD8+T细胞凋亡能力.结果 针对galeetin-3的siRNA平均干扰效率为80.3%,明显降低CD133~+细胞中galectin-3的表达,并抑制CD133~+细胞增殖,转染96 h后细胞活率为未转染组的(75.0±3.5)%,凋亡检测结果表明转染siRNA的CD133~+肺腺癌细胞上清诱导CD8~+T细胞凋亡率为8.2%,与未转染组凋亡率18.6%比较诱导凋亡的能力明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 针对galectin-3的siRNA高效抑制galectin-3的表达,降低细胞的增殖能力及诱导CD8~+T细胞凋亡的能力,具有潜在的临床应用价值.     

miR-558靶向CD155调控乳腺癌细胞MCF7的凋亡研究

目的 :探讨miR-558调控乳腺癌细胞凋亡的潜在机制。方法:用miR-558 inhibitor敲低miR-558或miR-558 mimics过表达miR-558后,检测乳腺癌细胞BC-009、M CF-7、M DA-M B-435、M X-1、BT-20、HCC1937的凋亡水平。通过miRDB在线分析和荧光素酶报告系统确定miR-558的靶标。通过过表达或敲低靶标检测其是否影响乳腺癌细胞MCF-7的凋亡水平。结果:敲低miR-558后,乳腺癌细胞BC-009、MCF-7、MDA-MB-435、MX-1、BT-20、HCC1937的凋亡水平下降(P0.05);过表达miR-558后,上述乳腺癌细胞凋亡水平上升(P0.05)。miRDB在线分析发现miR-558潜在靶向HOXA1、CGREF1、CD155、ZNF217、RNF19A、DIS3L2、TM EM 140、DPYSL2、COPS2、HM GB2。敲低miR-558后,CD155的表达量上升(P0.05);过表达miR-558后CD155则表达量下降(P0.05)。荧光素酶报告系统发现miR-558靶向CD155的3端非编码区(P0.05)。敲低CD155后,乳腺癌细胞MCF-7的凋亡水平上升(P0.05)。过表达CD155后,则水平下降(P0.05),同时过表达miR-558和CD155,或同时敲低miR-558和CD155,凋亡水平无明显变化(P0.05)。结论:miR-558通过靶向CD155的mRNA的3端非编码区抑制CD155的蛋白水平,促进了乳腺癌细胞的凋亡。     

不同浓度麝香含药血清对骨髓间充质干细胞迁移影响的实验研究

目的探讨麝香对外源性骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖和迁移的影响。方法将60只SD大鼠随机分为麝香高、中、低剂量组及空白对照组,制备麝香含药血清及生理盐水血清。15只SD大鼠利用全骨髓贴壁法分离BMSCs,培养至P3代,通过形态学观察、表型鉴定、成骨成脂诱导鉴定BMSCs,鉴定认为培养成功后通过麝香含药血清干预BMSCs,检测细胞增殖率,利用Transwell实验检测麝香含药血清对BMSCs迁移的影响。结果外源性大鼠BMSCs呈梭形贴壁生长,生长状态良好;表型鉴定:CD45、CD34阴性表达,CD44、CD90阳性表达;细胞成骨、成脂诱导后可定向成骨、成脂分化;不同浓度麝香组与对照组比较均能提高BMSCs增殖率(P0.05);与对照组比较,不同浓度麝香在24 h、48 h、72 h均增加BMSCs迁移(P0.05),以低浓度组效果最佳。结论麝香含药血清可以促进BMSCs增殖,促进BMSCs的体外迁移。     

重楼含药血清对大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

【摘要】 目的 探讨重楼治疗肾小球疾病的作用机制。 方法 以脂多糖诱导MC增殖。提取大鼠的含药血清作用于体外培养的大鼠系膜细胞(MC)，观察重楼对MC增殖、凋亡的影响。用活细胞计数（CCK-8）法检测细胞增殖。以Hoechst染色及流式细胞仪检测细胞凋亡。用RT-PCR检测bcl-2 mRNA水平。 结果 重楼含药血清可抑制MC异常增殖、诱导MC凋亡，呈剂量依赖性。重楼各剂量组MC凋亡率[低、中、高剂量组分别为（11.72±0.32）％、（19.76±0.35）％、（18.71±0.41）％]较脂多糖组[（4.68±0.25）%]均显著增高(P均< 0.01)，重楼中剂量组与低剂量组间差异有统计学意义(P < 0.01)。重楼各剂量组MC bcl-2 mRNA表达[低、中、高剂量组分别为（51.06±0.77）％、（44.06±0.66）%、（35.68±0.67）％]较脂多糖组[（59.62±1.12）％]显著减少(P < 0.01)。重楼呈剂量依赖性降低MC bcl-2 mRNA表达水平(P < 0.01)。 结论 重楼含药血清可抑制MC增生和诱导MC凋亡，其机制可能与抑制抗凋亡基因bcl-2 mRNA的表达有关。     

穿山龙总皂苷对大鼠滑膜细胞株VEGF与AP-1的影响

目的观察含穿山龙总皂苷血清对大鼠滑膜细胞株RSC 364血管内皮细胞生长因子（VEGF）mRNA和激活蛋白 1（AP 1）活性的影响,探讨其抑制血管新生的作用机制。方法制备含穿山龙总皂苷和雷公藤（阳性对照）血清。将培养好的大鼠滑膜细胞株RSC 364分为空白对照组、模型对照组、含雷公藤多苷血清组和含穿山龙总皂苷血清组,培养1 h,除空白对照组外,其余各组加入IL 17和TNF α（均为10 μg·L－1）共同孵育24 h。采用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞VEGF mRNA表达,凝胶电泳迁移率实验法（EMSA）检测各组细胞核蛋白提取物AP 1 的DNA结合活性。结果与空白对照组比较,模型对照组VEGF mRNA表达水平及AP 1 DNA结合活性显著增高（P＜0.05,P＜0.01）;与模型对照组比较,含雷公藤多苷血清组、含穿山龙总皂苷血清组VEGF mRNA表达水平及AP 1 DNA结合活性均降低（P＜0.05）,且两组间比较,差异无统计学意义。结论含穿山龙总皂苷血清可以抑制VEGF mRNA表达水平及AP 1 DNA结合活性,其机制可能是通过抑制转录因子AP 1来调控血管新生关键因子VEGF产生,进而抑制血管新生。     

姜黄素雷公藤内酯醇对前列腺癌细胞PC3及血管内皮生长因子影响的比较

目的研究姜黄素（curcumin,Cur）、雷公藤内酯醇（triptolide,TL）对非雄激素依赖性前列腺癌细胞株PC3细胞体外作用及其血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法分别用梯度浓度的Cur和TL作用于PC3细胞,MTT法检测细胞生长活性;流式细胞仪测定细胞周期及凋亡的变化;半定量RT-PCR法检测PC3细胞内VEGF mR-NA的表达;ELISA检测细胞上清液中分泌VEGF蛋白的浓度。结果Cur及TL都能呈剂量与时间依赖性显著抑制PC3细胞的生长,不同浓度组之间及不同作用时间组之间的差异均有统计学意义（P〈0.01）。Cur、TL诱导PC3细胞分别出现剂量依赖性G2/M、S期阻滞（P〈0.01）,且各浓度组凋亡细胞比例差异有统计学意义（P〈0.01）;PC3细胞内VEGF mRNA的表达和细胞上清液中分泌VEGF蛋白亦呈剂量依赖性降低。结论Cur、TL能显著抑制体外PC3细胞的生长,分别促进细胞周期阻滞于不同时期,增加凋亡,并且VEGF mRNA及蛋白的表达明显降低,两药抑制肿瘤和血管生长机制不同。     

miR-96干扰NKD2表达对骨肉瘤MG63细胞株的增殖、凋亡的影响

目的探究miR-96通过干扰裸露角质蛋白同源物2(naked cuticle homolog 2,NKD2)的表达对骨肉瘤MG63细胞株的增殖、凋亡的影响。方法回顾性分析我院2013年9月至2018年2月收集的骨肉瘤标本57例临床资料作为研究组,同时收集距肿瘤边界5 cm的癌旁组织作为对照组,其中男39例,女18例;年龄21～49岁,平均(28.16±6.73)岁。将骨肉瘤MG63细胞株分为miR-96抑制组与空白对照组,其中miR-96抑制组细胞给予miR-96抑制剂转染,空白对照组细胞不作任何处理。培养48h后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法与Western blot法检测各组人骨肉瘤MG63细胞中miR-96与NKD2蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyltetrazolium assay, MTT)法检测各组细胞增殖情况;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况与细胞周期分布情况。结果骨肉瘤组织中miR-96表达水平明显高于正常骨组织(P0.05);骨肉瘤组织中NKD2蛋白表达水平明显低于正常骨组织(P0.05);miR-96抑制组骨肉瘤细胞中miR-96表达水平明显低于空白对照组(P0.05);miR-96抑制组骨肉瘤细胞中NKD2表达水平明显高于空白对照组(P0.05);miR-96抑制组骨肉瘤MG63细胞株经miR-96抑制剂转染48h后细胞相对吸光度明显低于空白对照组细胞(P0.05);miR-96抑制组骨肉瘤MG63细胞株细胞凋亡率明显大于空白对照组(P0.05);miR-96抑制组与空白对照组骨肉瘤MG63细胞株细胞周期情况差异明显(P0.05)。结论 miR-96在骨肉瘤组织中呈高表达,NKD2在骨肉瘤组织中呈低表达;miR-96通过抑制NKD2表达而促进骨肉瘤MG63细胞株生长,并抑制骨肉瘤MG63细胞株早期凋亡。     

补肾健脾活血方含药血清对UMR106细胞成骨分化和骨形成相关蛋白的影响

目的观察补肾健脾活血方含药血清对UMR106细胞成骨分化和骨形成相关蛋白的影响。方法将实验动物随机分成空白血清组、低剂量血清组、中剂量血清组、高剂量血清组、阳性对照组,分别予以灌胃制备含药血清,并对其细胞进行加药培养,测定UMR106细胞培养72 h后的检测增殖、ALP活性以及各组细胞OPN、RUNX2、BMP-2蛋白表达情况。结果与空白血清组比较,低、中、高剂量血清组和阳性对照组加药干预72 h后,细胞吸光度值均较低(P0.05),而细胞ALP活性均较高(P0.05),且随着中药血清水平升高,ALP活性提高;与空白血清组相比,经中药含药血清培养后UMR106细胞OPN、RUNX2、BMP-2均显著上调(P0.05),且呈浓度梯度性变化,各中药含药血清组以高剂量组表达最为明显。结论表明补肾健脾活血方(骨康方)含药血清有促进UMR 106细胞成骨分化和调节骨形成相关蛋白;且随着补肾健脾活血方(骨康方)水平的增高,成骨分化更明显。     

微小RNA-142-3p靶向CD133对肝癌细胞增殖、侵袭和干细胞特性的影响

目的观察微小RNA(miR)-142-3p靶向CD133对肝癌细胞增殖、侵袭和干细胞特性的影响。方法选取郑州大学第二附属医院2017年6月至2019年12月手术切除的肝癌组织和对应的癌旁组织作为研究对象。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁组织和肿瘤组织miR-142-3p表达水平。采用慢病毒在MHCC97H肝癌细胞建立miR-142-3p过表达和对照细胞系(miR-142-3p组和对照组),采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和EdU染色分析两组细胞增殖;采用Transwell分析两组细胞侵袭;采用软琼脂克隆形成实验分析两组细胞干细胞特性;生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-142-3p靶基因;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析两组增殖、侵袭和干细胞标志物细胞核增殖抗原(Ki-67)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、CD133和Nanog蛋白表达水平,组间比较采用t检验。结果miR-142-3p组细胞miR-142-3p表达水平(0.41±0.12)显著低于癌旁组织miR-142-3p表达水平(1.06±0.25),差异有统计学意义(t=3.081,P<0.05)。miR-142-3p组细胞吸光度(A)值(1.63±0.20)低于对照组细胞A值(2.13±0.22),差异有统计学意义(t=2.918,P<0.05)。miR-142-3p组细胞EdU染色阳性率[(30.48±5.12)%]低于对照组细胞EdU染色阳性率[(87.89±7.28)%],差异有统计学意义(t=3.409,P<0.05)。miR-142-3p组细胞Ki-67蛋白表达水平(0.50±0.13)低于对照组细胞Ki-67表达水平(1.15±0.14),差异有统计学意义(t=2.319,P<0.05)。miR-142-3p组细胞侵袭数量[(67.59±6.01)个]低于对照组细胞侵袭数量[(121.35±6.12)个],差异有统计学意义(t=3.409,P<0.05)。miR-142-3p组细胞MMP-9蛋白表达水平(0.48±0.18)低于对照组细胞MMP-9蛋白表达水平(1.57±0.15),差异有统计学意义(t=2.917,P<0.05)。miR-142-3p组细胞克隆形成率[(31.44±4.51)%]低于对照组细胞克隆形成率[(57.68±7.19)%],差异有统计学意义(t=5.103,P<0.05)。miR-142-3p组细胞Nanog蛋白表达水平(0.51±0.14)低于对照组细胞Nanog蛋白表达水平(1.36±0.17),差异有统计学意义(t=2.514,P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示CD133是miR-142-3p的靶基因。miR-142-3p组细胞CD133蛋白表达水平(0.43±0.11)低于对照组细胞CD133蛋白表达水平(1.15±0.13),差异有统计学意义(t=2.514,P<0.05)。结论miR-142-3p通过靶向调控CD133表达水平调节着肝癌细胞增殖、迁移和干细胞特性。     

环状RNA-7靶向微小RNA-7促进食管鳞癌细胞放疗抵抗的实验研究

目的探讨环状RNA-7(circularRNA,ciRS)-7在食管鳞癌细胞放疗抵抗中的作用及生物学机制。方法采用慢病毒转染食管鳞癌细胞系KYSE410和KYSE510构建ciRS-7敲降细胞系(分为正常对照组和sh#1组、sh#2组)。不同剂量射线(2 Gy组、4 Gy组、8 Gy组)照射上述细胞,收集各组细胞染色,流式细胞术检测活细胞比例。双荧光素酶报告系统检测ciRS-7与微小RNA(microRNA,miR)-7的调控关系;KYSE410细胞分正常组、ciRS-7敲降组,RT-qPCR检测miR-7表达。shRNA转染KYSE410细胞,分为干扰组(正常对照组、敲降ciRS-7组);过表达组(ciRS-7和miR-7同时过表达组、阴性对照组、miR-7过表达组),蛋白质印迹法检测各组中B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(bcl-2)的表达。两组间比较采用独立样本的t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果KYSE410细胞sh#1组(0.36±0.03)、sh#2组(0.37±0.12)ciRS-7表达量低于正常对照组(1.00±0.01,t=24.460、8.910,P<0.05);KYSE510细胞sh#1组(0.40±0.08)、sh#2组(0.34±0.08)ciRS-7表达量低于正常对照组(1.00±0.08,t=8.514、9.550,P<0.05),差异均有统计学意义。4 Gy射线照射后,KYSE410细胞sh#1组[(37.00±3.07)%]、sh#2组[(39.50±0.70)%]活细胞比例低于正常对照组[(63.50±6.36)%,t=7.400、5.301,P<0.05];KYSE510细胞sh#1组[(39.00±8.48)%]、sh#2组[(39.50±0.70)%]活细胞比例低于正常对照组[(73.50±6.36)%,t=4.600、7.509,P<0.05]。8 Gy射线照射后,KYSE410细胞sh#1组[(22.50±3.53)%]、sh#2组[(39.50±0.70)%]活细胞比例低于正常对照组[(50.50±2.12)%,t=9.604、11.800,P<0.05];KYSE510细胞sh#1组[(33.00±2.82)%]、sh#2组[(31.00±2.82)%]活细胞比例低于正常对照组[(60.50±2.12)%,t=11.000、11.800,P<0.05],差异均有统计学意义。KYSE410细胞过表达ciRS-7组(1.00±0.23)的miR-7表达低于正常对照组(0.54±0.08,t=3.191,P<0.05),双荧光素酶报告系统证实ciRS-7吸附结合miR-7。同时过表达miR-7及ciRS-7组的bcl-2表达高于过表达miR-7组(0.59±0.11,t=6.013,P<0.05)、敲降ciRS-7组(0.83±0.08,t=3.717,P<0.05),差异均有统计学意义。结论ciRS-7通过靶向miR-7促进食管鳞癌细胞的放疗抵抗。     

miR-26b的表达及其与Foxf2相互作用在乳腺癌细胞生物学行为中的作用

目的:探讨miR-26b在乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的的影响。方法:比较正常乳腺细胞系MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7中miR-26b的表达差异。以无处理的MCF-7细胞为空白对照,分别检测MCF-7细胞转染miR-26b模拟物(miR-26b组)、空质粒(阴性对照组)后的miR-26b表达与增殖、迁移、侵袭能力,以及Foxf2的mRNA与蛋白表达的变化。用双荧光素酶报告系统检测miR-26b对MCF-7细胞中Foxf2转录活性的影响。结果:miR-26b在MCF-7细胞中的表达水平明显低于MCF-10A细胞(P0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,miR-26b组miR-26b mRNA表达水平明显升高、细胞增殖迁移、侵袭能力明显降低,Foxf2的mRNA和蛋白表达量均明显下调(P0.05)。转染miR-26b模拟物后,MCF-7细胞中Foxf2-3'UTR的转录活性明显抑制(P0.05)。结论:miR-26b在乳腺癌细胞中表达降低、增加其表达能抑制乳腺癌细胞的恶性生物学行为,机制可能与其下调Foxf2的表达有关。     

miR-9-5p调控雄激素受体的表达促进卵巢颗粒细胞增殖

目的分析微小RNA-9-5p(miR-9-5p)在多囊卵巢综合征(PCOS)中的诊断价值,并探讨对卵巢颗粒细胞(KGN)增殖的作用机制。方法采用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析miR-9-5p在50例PCOS患者(实验组)及50例健康女性(对照组)血清中的表达特征。采用受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-9-5p在诊断PCOS中的曲线下面积(AUC)、特异度及敏感度。培养KGN细胞并分为空白组、阴性转染组及转染组,分别采用MTT及流式细胞技术检测干扰miR-9-5p后KGN增殖和细胞周期的变化。利用双荧光素酶报告基因实验检测miR-9-5p对雄激素受体(AR)的直接调节作用。采用western blot技术分析干扰miR-9-5p后KGN中AR蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,miR-9-5p在PCOS患者血清中的表达显著升高(P<0.05)。ROC显示,miR-9-5p在诊断PCOS中AUC为0.76,敏感性为65.43%,特异性为74.09%。与空白及阴性转染组相比,转染拮抗剂后KGN中miR-9-5p表达水平显著降低(P<0.05)。干扰miR-9-5p显著降低KGN增殖(P<0.05),并抑制细胞周期G1到S期的转变,表现为G0/G1期细胞比例增加,而S期细胞比例减少。双荧光素酶报告基因实验显示,AR是miR-9-5p的靶基因,miR-9-5p可直接与AR mRNA 3’-非编码区互补结合而降低KGN中AR蛋白的表达水平。结论miR-9-5p在PCOS患者血清中表达上调,并可能是一种新的PCOS诊断标志物。在机制上,miR-9-5p通过直接调控AR而促进KGN增殖。     

微小RNA-205-5p调控轴抑制蛋白2基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及作用机制的临床研究

目的探讨微小RNA(microRNA,miR)-205-5p靶向调节轴抑制蛋白2(AXIN2)基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及作用机制。方法收集2017年1月至2019年1月山西省人民医院手术切除结肠癌组织组织标本并购买结肠癌细胞系,分别以距肿瘤边缘5 cm的癌旁组织和人正常结肠黏膜上皮细胞系为对照。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测分别检测组织和细胞中miR-205-5p和AXIN2表达水平。荧光素酶报告实验验证miR-205-5p与AXIN2的靶向关系。细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞术检测各组转染细胞增殖和凋亡变化,两组和多组间比较分别采用t检验和单因素方差分析。结果结肠癌组织及细胞系中miR-205-5p低表达(2.16±0.24比1.00±0.04,t=10.660,P<0.01),AXIN2高表达(mRNA,0.21±0.02比1.00±0.04,t=30.600,P<0.01;蛋白,0.64±0.03比1.44±0.06,t=26.670,P<0.05),差异均有统计学意义。AXIN2是miR-205-5p的靶基因。mimic组AXIN2蛋白表达量显著低于Blank组和NC组,差异有统计学意义(0.33±0.03,t=116.490,P<0.05);miR-205-5p抑制剂(inhibitor)组AXIN2蛋白表达量显著高于Blank组和NC组,差异有统计学意义(1.67±0.11,t=11.270,P<0.05)。miR-205-5p mimic组(增殖,48 h 0.82±0.09,t=5.375,P<0.05;72 h 1.46±0.13,t=3.333,P<0.05;凋亡,28.71±2.27,t=12.350,P<0.05)和AXIN2沉默表达(siRNA-AXIN2)组(增殖,48 h 1.11±0.11,t=2.814,P<0.05;72 h 1.68±0.06,t=4.959,P<0.05;凋亡,4.45±0.64,t=5.090,P<0.05)结肠癌细胞增殖率显著低于Blank组和NC组,细胞凋亡率显著高于Blank组和NC组,差异有统计学意义;而miR-205-5p inhibitor组(增殖,48 h 2.11±0.18,t=4.386,P<0.05;72 h 2.66±0.19,t=4.898,P<0.05;凋亡,4.71±0.26,t=5.155,P<0.05)和AXIN2过表达(OE-AXIN2)组(增殖,48 h 0.44±0.05,t=0.002,P<0.05;72 h 0.88±0.11,t=7.446,P<0.05;凋亡,25.65±2.12,t=10.900,P<0.05)结肠癌细胞增殖率显著高于Blank组和NC组,细胞凋亡率显著低于Blank组和NC组,差异有统计学意义。结论miR-205-5p在结肠癌中异常升表达,AXIN2呈低表达。miR-205-5p抑制表达靶向上调AXIN2表达可抑制结肠癌细胞增殖、促进细胞凋亡。     

乳腺癌组织中miR-34a与VEGF的关系及临床意义

目的:探讨乳腺癌组织中miR-34a与VEGF的关系及临床意义。方法:检测40对乳腺癌及其癌旁组织组织中miR-34a与VEGF的表达,分析乳腺癌中miR-34a表达与临床病理因素及VEGF表达的关系;用双荧光素酶报告系统检测miR-34a对乳腺癌细胞MCF-7中VEGF转录活性的影响;用miR-34a模拟物转染MCF-7细胞后,检测细胞增殖情况与VEGF及下游Akt蛋白表达的变化。结果:与癌旁组织比较,乳腺癌组织中miR-34a表达明显降低,而VEGF表达明显升高(均P0.05);乳腺癌中miR-34a的表达与TNM分期有关(P0.05),且与VEGF的表达呈负相关(r~2=0.4469,P=0.0033)。miR-34a模拟物转染后,MCF-7细胞中VEGF的转录活性明显抑制;增殖率明显降低,VEGF的表达以及Akt的磷酸化水平明显下调(均P0.05)。结论:miR-34a在乳腺癌组织中表达降低,削弱了对VEGF及其下游Akt磷酸化的抑制,从而促进了乳腺癌的生长。     

miR-3126-5p靶向 LASP1抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移的机制探讨

目的探讨微小RNA(miRNA)-3126-5p抑制靶基因LIM和SH3蛋白1(LIM and SH3 protein 1.LASP1)对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株(HT-29、HCT116、LoVo、SW480)和正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)中miR-3126-5p的表达水平。选择表达水平最低的细胞株作为实验对象,实验分为2组:阴性对照组(转染miR-NC)和miR-3126-5p组(转染miR-3126-5p),转染48 h后收集各组细胞。qRT-PCR法检测各组细胞miR-3126-5p的表达水平。采用MTS法和划痕愈合实验分别检测各组细胞的增殖水平和迁移能力。采用生物信息学软件microRNA.org和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-3126-5p的靶基因。采用qRT-PCR和Western blot检测各组细胞靶基因的表达水平。计量资料以均数土标准差(Mean±SO)表示,两两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析结果与正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)相比,结直肠癌细胞株miR-3126-5p的表达水平显著降低(P<0.05),表达水平最低的细胞株是HCT116细胞(P<0.01)。阴性对照组和miR-3126-5P组HCT116细胞中miR-3126-5p的表达分别为(1.05±0.16)和(7.91±1.26),差异具有统计学意义(t=5.40,P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组HCT116细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),迁移能力显著下降(t=4.52,F<0.01)。microRNA.org显示miR-3126-5p与LIM和SH3蛋白1(LASP1)基因mRNA存在互补结合位点。miR-3126-5p和L4SP/mRNA能够靶向结合(P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组H CT116细胞中L4SP/基因表达显著降低(t=4.56,P<0.01)。结论结直肠癌细胞株中miR-3126-5p呈低表达,miR-3126-5p能够通过抑制靶基因LASP1降低结直肠癌HCT116细胞的增殖和迁移能力。     

miR-7856-5p通过靶向作用3对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响

目的探索微小RNA(miRNA,miR)-7856-5p对EPH受体A3(EPHA3)基因表达的调控作用及对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测结直肠癌组织和细胞系中miR-7856-5p的表达。脂质体转染法分别将miR-7856-5p模拟物和miR-NC转入结直肠癌细胞SW480,分别定义为miR-7856-5p组和miR-NC组。Real-time PCR检测转染效果。Transwell实验和CCK-8实验检测转染后细胞迁移和增殖能力。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因系统验证miR-7856-5p的靶基因。Real-time PCR和Western blot检测转染后细胞中EPHA3的表达。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-7856-5p在结直肠癌组织的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。miR-7856-5p在结直肠癌细胞系的表达明显低于正常肠黏膜上皮细胞(P<0.05),在SW480细胞中表达最低(P<0.01)。miR-7856-5p组miR-7856-5p的表达明显高于miR-NC组,差异有统计学意义[(9.49±1.09)比(1.06±0.18),P<0.01]。miR-NC组和miR-7856-5p组迁移细胞数量分别为(125.70±14.05)个和(42.01±8.98)个,miR-7856-5p组细胞迁移能力明显下降(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。生物信息学软件显示miR-7856-5p的靶基因是EPHA3。双荧光素酶报告基因系统证实miR-7856-5p可靶向结合EPHA3基因(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组SW480细胞中EPHA3的表达明显降低(P<0.05)。结论miR-7856-5p可通过靶向调控EPHA3的表达,抑制结直肠癌细胞SW480的迁移和增殖能力。     

微RNA-23a通过缝隙连接蛋白43对颈椎后纵韧带细胞骨向分化的作用机制

目的 探讨微RNA（miR）-23a通过缝隙连接蛋白43（Cx43）对颈椎后纵韧带细胞骨向分化的作用及相关机制。方法 选取本院收治的50例间断型颈椎后纵韧带骨化症（OPLL）患者（OPLL组）、50例颈椎外伤非OPLL患者（对照A组）和50例颈椎病非OPLL患者（对照B组）颈椎后纵韧带组织，培养后纵韧带细胞，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测3组细胞miR-23a、Cx43 mRNA的表达，采用Western blotingt检测Cx43蛋白的表达。取OPLL组对数期后纵韧带细胞，分别转染miR-23a agomir质粒（miR-23a过表达组）、miR-23a antagomir质粒（miR-23a低表达组）、agomir NC质粒（转染对照组），未经处理的后纵韧带细胞为空白组。采用双荧光素酶实验验证miR-23a与Cx43的靶向关系；采用碱性磷酸酶（ALP）染色检测矿化情况；采用Western blotingt检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）、细胞外信号调节激酶（ERK1/2）、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的蛋白表达。结果 与对照A、B组比较，OPLL组miR-23a表达降低，Cx43 mRNA及蛋白表达升高，差异均有统计学意义（P < 0.05）。与空白组、转染对照组比较，miR-23a过表达组miR-23a表达量升高、Cx43 mRNA表达量降低，miR-23a低表达组miR-23a表达量降低、Cx43 mRNA表达量升高，差异均有统计学意义（P < 0.05）。双荧光素酶实验显示，miR-23a可有效抑制野生型质粒荧光素酶活性；与空白组、转染对照组比较，miR-23a过表达组矿化面积百分比、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达降低，miR-23a低表达组矿化面积百分比、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达升高，差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论OPLL病理条件下，颈椎后纵韧带细胞中miR-23a异常低表达，通过靶向上调Cx43激活MAPK信号通路，促进成骨分化。     

miR-542-3p对肝癌细胞恶性生物学行为的影响及机制探讨

目的探讨microRNA-542-3p（miR-542-3p）在人肝癌细胞系及组织中的表达水平及其对肝癌细胞增殖、侵袭转移能力的影响。方法采用RT-PCR检测miR-542-3p在肝癌细胞系（HCCLM3、Hep3B、Huh7、SMMC-7721、MHCC-97H、MHCC-97 L）以及人正常肝细胞LO2中的表达;同时采用RT-PCR检测肝癌及对应癌旁组织中miR-542-3p的表达。分别以转染miR-542-3p mimics的MHCC-97H和HCCLM3细胞作为过表达组,以转染空载体的MHCC-97H和HCCLM3细胞作为阴性对照组;采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力,采用Transwell法检测各组细胞体外侵袭能力,Western blotting检测各组细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）相关蛋白的表达,免疫荧光法检测miR-542-3p对肝癌细胞EMT的影响。结果miR-542-3p在肝癌细胞系HCCLM3（0.221±0.034）、Hep3B（0.764±0.059）、Huh7（0.561±0.029）、SMMC-7721（0.688±0.049）、MHCC-97H（0.162±0.031）、MHCC-97L（0.473±0.041）中的表达均低于在人正常肝细胞LO2（1.0）的表达水平（P＜0.05）;在肝癌组织表达低于癌旁组织[（0.208±0.064）vs（0.746±0.093）,P＜0.05]。MHCC-97H和HCCLM3过表达组细胞增殖、侵袭转移能力显著低于阴性对照组,EMT相关蛋白荧光明显低于阴性对照组（P＜0.05）。结论miR-542-3p在肝癌组织及肝癌细胞中低表达,miR-542-3p的过表达可有效抑制肝癌细胞恶性生物学行为,该过程可能与EMT相关通路有关。miR-542-3p有望成为肝癌生物治疗的潜在靶点。