模拟失重及高+Gx对猴舌横纹肌细胞c-fos表达的影响

目的探讨模拟失重30d后高+Gx暴露对猴舌横纹肌细胞c-fos表达的影响。方法 16只雄性猕猴随机分为4组,即正常对照组(A)、30d模拟失重组(B),+13Gx/230s组(C)、30d模拟失重后超重组(D),其中D组根据过载峰值又分为+11Gx/270s(D1)、+13Gx/230s(D2)和+15Gx/200s(D3)。动物放血处死,解剖取材后,经10%中性福尔马林固定,石蜡包埋切片,采用组织病理学和免疫组化的方法,观察猴舌横纹肌组织结构及c-fos的表达情况。结果 A组可见正常的舌横纹肌结构,其他组舌横纹肌细胞结构基本正常,偶见细胞间质稀疏,横纹不清或消失。A组舌横纹肌细胞c-fos呈阴性表达,胞核、胞浆着色不明显。实验组舌横纹肌细胞"横纹"着深棕色,即胞浆呈强阳性表达。免疫组化光密度值显示,对照组与实验组,B组与D3组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 30d模拟失重和高+Gx均可引起舌横纹肌细胞c-fos强阳性表达,舌横纹肌受到了一定程度的损伤。模拟失重降低了舌横纹肌细胞对+Gx的耐受性,两者具有一定的协同性。     

高正加速度环境对猴舌横纹肌细胞癌基因c-jun表达的影响

目的：观察模拟高( Gx)环境对猴舌横纹肌细胞癌基因c-jun表达的影响。方法：以雄性猕猴9只为实验对象，随机分为4组．对照组为 1Gx、300s；实验为3个亚组，分别为 15Gx、200s； 18Gx、165S； 21Gx、140s。采用模拟高( Gx)作用的动物离心装置．观察猴舌横纹肌细胞组织病理学改变及c-jun表达的影响。结果：组织病理学观察，实验组和对照组猴舌横纹肌细胞无明显变化；免疫组化学观察，对照组舌横纹肌细胞膜c-jun可见着色．呈弱阳性。实验组舌横纹肌细胞膜、细胞浆c-jun着色明显．呈强阳性，不同高 Gx组之间无明显差别。结论：模拟高( Gx)环境可引起猴舌横纹肌细胞c-jun表达增强。     

高正加速度环境对猴舌横纹肌c-fos基因表达的影响

目的 探索高正加速度( Gx)环境是否造成舌肌病理性损伤.方法 以9只雄性猕猴为对象,按受试Gx环境及持续时间随机分4组,对照组为 1Gx、300 s;实验组为3组,分别为 15Gx、200 s; 18Gx、165 s; 21Gx、140 s.采用病理学和免疫组织化学方法,观察模拟高正加速度环境下猴舌横纹肌肌细胞组织及c-fos基因表达的变化.结果 组织病理学观察:实验组和对照组猴舌横纹肌细胞无明显变化;免疫组织化学观察:对照组舌横纹肌细胞膜c-fos呈弱阳性表达,而细胞浆着色不明显.实验组舌横纹肌细胞膜、细胞浆c-fos着色明显,呈强阳性表达,不同高 Gx组之间无明显差别.结论 高于 15Gx的模拟正加速度环境可引起猴舌横纹肌细胞c-fos基因表达增强.     

模拟失重后再超重对猴咬肌细胞SERCA mRNA表达的影响

目的：探讨模拟失重后再超重环境对猴咬肌细胞SERCA1a、SERCA2a mRNA表达的影响。方法：健康雄性猕猴23只,随机分为正常对照组（A组）和实验组：模拟失重（B组）,模拟超重（C组）,失重后再超重分别为＋11Gx/270s（D1组）、＋13Gx/230s（D2组）、＋15Gx/200s（D3组）和＋13Gx/230s恢复第10d（D4组）。实验期间,各组喂养条件相同,在实验结束后动物恢复第2d（A、B、C、D1、D2、D3组）和恢复第10d（D4组）处死取材,组织置于液氮中保存。采用常规方法制作冰冻切片,通过HE染色观察猴咬肌细胞组织形态学变化;使用RT-PCR方法检测猴咬肌细胞SERCA1a、SERCA2a mRNA的表达。结果：组织病理学观察可见,对照组猴咬肌细胞结构正常;实验组咬肌细胞胞膜边界模糊不清,间质增宽;模拟失重后再超重组肌细胞肿胀,偶见细胞核呈扁平状,移位胞浆中央。采用RT-PCR检测发现,各实验组与对照组相比,猴咬肌细胞SERCA1a mRNA表达均增强,SERCA2a mRNA除D4组外,其他实验组表达增强,其差异有统计学意义（P〈0.05）;D2、D3组与B组相比,SERCA1a mRNA表达升高,差异显著（P〈0.01）;D2、D3组与C组比较,SERCA1a mRNA表达增强,有显著差异（P〈0.01）;D4组与D2组比较,SERCA1a、SERCA2a mRNA表达均下降,有统计学意义（P〈0.05）。结论：模拟失重、模拟超重和模拟失重后再超重环境均可造成猴咬肌细胞组织形态学不同程度地改变,并可引起SERCA1a、SERCA2a mRNA表达增强,其中模拟失重后再超重恢复第10d咬肌细胞组织形态学趋于正常结构,SERCA1a、SERCA2a mRNA表达呈恢复下降趋势。     

高+Gx环境对猴颞肌c-jun蛋白表达影响的研究

目的:观察高过载( Gx)环境对颞肌组织病理学及c-jun蛋白表达的影响。方法:以9只雄性猕猴为对象,按受试Gx环境及持续时间随机分4组,对照组为 1Gx、300s(2只);实验组为3组,分别为 15Gx、200s(2只); 18Gx、165s(2只); 21Gx、140s(3只)。采用病理学和免疫组织化学方法,观察模拟高过载( Gx)环境下猴颞肌肌细胞组织及c-jun蛋白表达的变化。结果:组织病理学观察:实验组和对照组猴颞肌肌细胞无明显变化;免疫组织化学观察:对照组颞肌c-jun呈阴性或弱阳性表达,主要位于肌细胞核,胞质着色不明显。实验组颞肌细胞核c-jun着色明显,呈强阳性表达,不同高过载( Gx)组之间无明显差别。结论:高过载( Gx)环境中,猴颞肌细胞c-jun蛋白表达明显增强。     

高+Gx环境对猴口腔黏膜上皮c-fos表达的影响

目的:观察模拟空间环境航天应急返回过程中高 Gx对猴口腔黏膜上皮细胞c-fos表达的影响.方法:以9只雄性猕猴为对象,随机分为4组,对照组承受 1 Gx、300 s的超重作用;实验组根据承受过载峰值的大小分为3个亚组,分别承受过载峰值为 15 Gx、200 s; 18 Gx、165 s; 21 Gx、140 s的超重作用.采用常规组织病理学方法,观察猴口腔黏膜上皮细胞的改变;采用免疫组织化学PicTureTM两步法,观察高 Gx对猴口腔黏膜上皮c-fos表达的影响.结果:组织病理学观察显示,对照组和实验组动物口腔黏膜上皮均未见明显病理学改变.免疫组化学观察显示,实验组口腔黏膜上皮基底细胞和棘细胞呈深棕色,为c-fos强阳性表达,对照组口腔黏膜上皮部分基底细胞和少量棘细胞呈浅棕色,为c-fos弱阳性表达.高 Gx实验组之间口腔黏膜上皮c-fos表达无明显差异.结论:高 Gx可引起猴口腔黏膜上皮细胞c-fos表达增强.     

高正加速度环境对猴口腔黏膜上皮细胞热休克蛋白70表达的影响

航天飞船在升空和返回阶段 ,机体可受到超重高正加速度 ( Gx)的作用。研究表明 ,超过 3Gx负荷可影响人体正常的生理功能。我们以猴为对象 ,采用模拟高 Gx作用的动物离心装置 ,观察猴口腔黏膜的组织病理学改变及热休克蛋白 70 (heat shockprotein 70 ,HSP 70 )表达的影响。1.材料与方法 :实验用雄性恒河猴 9只 ,年龄 5～ 12岁 ,体重 5～ 8kg ,健康。随机分为对照组和实验组。对照组 1Gx、30 0s( 2只 ) ;实验组分 3个亚组 :1组 15Gx、2 0 0s( 2只 ) ;2组 18Gx、16 5s( 2只 ) ;3组 2 1Gx、14 0s( 3只 )。采用改造后的五八型动物…     

高+Gx环境对猴翼内肌C-jun基因表达的影响

目的:探索高 Gx环境是否造成翼内肌病理性损伤和对c-jun表达的影响。方法:以9只雄性恒河猴为对象,按受试Gx环境、持续时间,随机分4组:对照组为 1Gx、300s;实验组为3组,分别为 15Gx、200s; 18Gx、165s; 21Gx、140s。采用组织病理学、免疫组织化学方法,观察模拟高正加速度环境下猴翼内肌肌细胞组织和c-jun基因表达的变化。结果:组织病理学观察,实验组、对照组猴翼内肌组织结构无明显变化;免疫组织化学观察,对照组翼内肌细胞核c-jun呈阴性或弱阳性表达,而细胞质着色不明显。实验组翼内肌细胞核c-jun着色明显,呈强阳性表达,不同高 Gx组之间无明显差别。结论:高于 15Gx的环境可引起猴翼内肌细胞c-jun基因表达增强。     

热休克蛋白70对人牙周膜细胞高温损伤影响的研究

目的 观察谷氨酰胺（glutamine,Gln）诱导的热休克蛋白70(heat shock protein,HSP)对人牙周膜细胞高温损伤的影响。 方法 将体外培养的人牙周膜细胞随机分为正常对照组(C组)：常规培养的人牙周膜细胞;谷氨酰胺预处理组(Gln组)：常规培养的人牙周膜细胞加入Gln 15 mmol/L培养;高温损伤组(SH组)：常规培养的人牙周膜细胞置46 ℃培养1 h后恢复常规培养;预处理+高温损伤组(Gln+SH组)：常规培养的人牙周膜细胞加入Gln 15 mmol/L培养1 h后,置于46 ℃培养1 h后恢复常规培养。以Western Blot检测细胞内HSP70的表达变化;以四唑盐（MTT）比色法、细胞形态学观察评价细胞存活能力。 结果 Western Blot显示： Gln组、Gln+SH组较C组HSP70表达上调（P<0.05）;MTT比色法、细胞形态学观察均显示Gln+SH组较SH组的细胞存活能力强（P<0.05）。 结论 Gln可诱导人牙周膜细胞中的HSP70表达上调,减轻高温对人牙周膜细胞的损伤。     

量子点荧光成像技术在人舌鳞癌细胞缺氧环境下的应用研究

目的：利用量子点(quantum dots, QDs)荧光成像技术对氯化钴（CoCl2）诱导的缺氧环境下人舌鳞癌Tca8113细胞内Heat Shock Protein 70(HSP70)蛋白进行长时间动态连续观测。方法：对人舌鳞癌Tca8113细胞分别进行常氧培养和CoCl2模拟缺氧培养,利用QDs对细胞内HSP70蛋白进行特异性荧光标记,在激光共聚焦显微镜下观测HSP70表达及细胞内分布情况。用Image-Pro Plus软件测量缺氧0 h、6 h、12 h、24 h、36 h、48 h后HSP70蛋白的荧光信号强度变化。结果：激光共聚焦显微镜下可见人舌癌Tca8113细胞内HSP70蛋白明显表达,表现为绿色荧光。缺氧6 h后Tca8113细胞进入有丝分裂期的细胞明显增多,细胞内hsp70的表达开始增强,约在24 h时到达快速增强期,36 h组、48 h组则未见明显的进一步增强。结论：缺氧环境下Tca8113细胞有丝分裂活动明显增强,HSP70蛋白呈现出高表达,缺氧24 h时HSP70蛋白的表达达到快速增强期,随着缺氧时间的进一步延长,进入缓慢增强的平台期。     

热休克蛋白70对大鼠牙髓细胞高温损伤的影响

目的:研究预热处理诱导的热休克蛋白70(HSP70)对受高温损伤的大鼠牙髓细胞的影响.方法:将体外培养的大鼠牙髓细胞随机分为4组,分别为正常对照组(C组):37℃常规培养18 h;预热处理组(pH组):37℃常规培养9h后42℃培养1h,再复温培养8h;高温损伤组(SH组):37℃常规培养9h后46℃培养1h,再复温培养8h;预热处理+高温损伤组(pH+SH组):42 ℃培养1h后恢复常规培养8h,再置于46℃培养1h后恢复常规培养8h.以Western Blot检测细胞内HSP70的表达变化;以四唑盐(MTT)比色法、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染法、细胞形态学观察评价细胞存活能力.结果:Western Blot显示,与C组相比较PH组HSP70表达上调;MTT比色法、AO/EB双染法、细胞形态学观察均显示pH+SH组较SH组的细胞存活能力强.结论:预热处理可诱导大鼠牙髓细胞中的HSP70表达上调,减轻高温对牙髓细胞的损伤.     

大鼠磨牙牙髓组织在程度不同的机械性损伤刺激后HSP70的表达及意义的研究

目的 检测大鼠磨牙在程度不同的机械性钻磨损伤刺激(浅磨、深磨、穿髓)后热休克蛋白70(HSP70)的动态表达。方法 采用"二步法"免疫组化法观察HSP70在正常组、浅磨组、深磨24h组、穿髓24h组、穿髓3d组和穿髓7d组牙髓组织中的表达情况。结果 浅磨组和正常组HSP70在牙髓组织中有个别标本弱阳性着色,与后4组相比P<0.01;深磨24h组可见成牙本质细胞、成纤维细胞阳性表达,血管内皮细胞弱阳性表达;穿髓24h组和3d组表现为急性炎症反应,HSP70在成牙本质细胞、血管内皮细胞、中性粒细胞中均呈强阳性表达,成纤维细胞呈阳性表达;至穿髓7d时为弱阳性表达。结论 在程度不同的钻磨刺激下,HSP70在鼠牙髓组织中的表达有强弱不同的动态变化;HSP70在牙髓损伤修复过程中可能是主要介导牙齿矿化修复的细胞因子之一。     

热休克蛋白70在两个年龄组前磨牙成牙本质细胞表达的比较研究

目的观察热休克蛋白(HSP)70在前磨牙成牙本质细胞表达的增龄变化特点。方法采用免疫组化法结合图像分析系统,对HSP70在年老组(71~80岁)和年轻组(13~20岁)前磨牙成牙本质细胞和成牙本质细胞胞质中的表达强度进行比较。结果年老组成牙本质细胞内总的HSP70免疫组化染色的平均吸光度值比年轻组降低,而胞质内HSP70免疫组化染色的平均吸光度值平均值比年轻组略高,但无显著性差异。结论年老患者成牙本质细胞抵御急性刺激的能力下降可能与胞核内HSP70表达强度下降有关。     

芪蓝颗粒对SD大鼠舌黏膜癌变过程中PCNA变化的影响

目的:探讨中药芪蓝颗粒阻癌抑癌的作用机制.方法:SD大鼠150只,随机分为A、B、C、D、E共5组,A、B、C、D组用0.002%4NQO制备大鼠舌癌变模型,其中B、C、D组在制备模型的同时,用不同剂量芪蓝颗粒进行干预,A组为模型对照组,E组为正常对照组.各组于中药干预的9、18、27、36周时分别处死7只动物,取舌组织光镜下观察其病理变化,并采用免疫组化技术检测各组增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,数据采用SPSS13.0软件包进行x2检验和Kruskal-Wallis秩和检验.结果:A组总体癌变率高达39.29%,明显高于B(14.29%)、C(3.57%)、D(14.29%)组(P＜0.05).而A组6例正常口腔黏膜组织中PCNA蛋白没有阳性表达,11例异型增生组织中8例阳性表达,11例口腔癌变组织则全部为阳性表达.A组中PCNA的表达从正常口腔黏膜→各级异型增生→癌变,其阳性表达率呈递增趋势,差异有统计学意义(P＜0.01).在大鼠异常增生舌组织中,A组的PCNA阳性表达率为8/11,显著高于B(6/15)、C(4/14)、D(3/13)组,差异有统计学意义(P＜0.05).在大鼠舌癌组织中,A组与中药干预组之间PCNA的阳性表达率均为100%,差异无统计学差异(P＞0.05).在总体实验动物中,A组PCNA阳性表达显著高于中药干预组,差异有统计学意义(P＜0.05).E组PCNA蛋白表达均为阴性.结论:芪蓝颗粒具有明显的抑癌阻癌效果,可能通过下调细胞中PCNA的表达水平,进而降低细胞增殖能力,起到阻断癌变的作用.     

热休克诱导人舌鳞癌Tca8113细胞HSP70表达的研究

目的:研究热休克恢复期人舌癌Tca8113细胞热休克蛋白(HSP70)的表达和热动力学变化,为人舌鳞癌的免疫治疗提供理论基础。方法:通过人舌鳞癌细胞Tca8113在43℃加热30min,运用免疫组化和流式细胞技术检测在各时间点细胞HSP70的表达,各时间点再次以相同条件加热后用MTT法测各组细胞活性,以期了解Tca8113细胞HSP70表达的动态变化。结果:热休克后恢复2h即出现HSP70的表达,8~12h达到高峰,之后逐渐减少,48h后基本恢复至加热2h后的水平,热休克后恢复12h细胞活性最强。结论:HSP70的迅速表达与缓慢降解对维持Tca8113细胞的生理功能有重要作用。为进一步研究HSP70在人舌癌热疗联合免疫治疗初步提供了理论依据。     

环孢素A和肿瘤坏死因子α对人牙龈成纤维细胞增殖的影响

目的 研究环孢素A(cyclosporinA)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对体外培养人牙龈成纤维细胞增殖的影响,探讨牙龈炎症与药物性牙龈增生的关系及环孢素A所致牙龈增生的相关机制.方法用原代培养的方法获取5名健康人的牙龈成纤维细胞,体外培养、传代后取其中1个生长良好的组织块4～8代细胞用于实验.按以下条件进行实验分组:A组:空白对照组;B1组:10 μg/L环孢素A,B2组:50 μg/L环孢素A,B3组:250 μg/L环孢素A,B4组:1250 μg/L环孢素A;C组:5μg/L TNF-α; D1组:10 μg/L环孢素A+5μg/L TNF-α,D2组:50 μg/L 环孢素 A+5μg/L TNF-α,D3组:250 μg/L环孢素A+5μg/L TNF-α,D4组:1250 μg/L环孢素A+ 5 μg/L TNF-α.将条件培养液分别作用于牙龈成纤维细胞,培养3、5、7d后用甲基噻唑基四唑法测定细胞的增殖情况.结果不同质量浓度的环孢素A作用于成纤维细胞后,细胞的增殖受到抑制,A值下降,其中B1、B2、B3组与A组相比差异无统计学意义,B4组与A组相比差异具有统计学意义(P =0.001);5μg/L的TNF-α作用于成纤维细胞可以刺激细胞的增殖,A值(0.542)与A组(0.441)相比显著升高(P＜0.01).环孢素A和TNF-α共同作用于成纤维细胞后,D1、D2、D3组A值均较A组升高,但均较C组显著降低(P＜0.05).D4组细胞增殖显著增加,与C组相比差异具有统计学意义(P＜0.01).结论环孢素A对成纤维细胞的增殖无促进作用,高浓度时可抑制细胞的增殖;TNF-α可以促进成纤维细胞的增殖;高浓度环孢素A与TNF-α共同作用于成纤维细胞可促进成纤维细胞增殖,提示在一定浓度下环孢素A可能放大了TNF-α刺激成纤维细胞增殖的效应.     

细胞表达HSP70的细胞模型研究

目的 :通过热休克预处理提高人牙髓细胞HSP70的表达水平 ,建立供体外实验研究的热休克细胞模型。方法 :将体外培养的人牙髓细胞爬片后进行热处理 ,置 42℃水浴 2 5min ,37℃复温。于复温后 1、2、3、4、6、8、10h、1d固定 ,进行HSP70的免疫组化染色 ;96孔板细胞同样方法热处理 ,连续培养 3d后 ,进行MTT检测。结果 :正常对照牙髓细胞呈阴性表达。热休克处理牙髓细胞 1、2h组中度阳性着色 ,3、4h组强阳性着色 ,6、8、10h组达到高峰 ,1d组恢复到弱阳性水平。MTT检测显示热处理组与对照组无统计学差异。结论 :热预处理方法可成功诱导人牙髓细胞表达HSP70 ;该方法不会导致连续培养 3d后细胞存活数量的明显变化     

ALDH1A1在舌癌及淋巴结中的表达及其临床意义

目的:检测乙醛脱氢酶1A1(aldehyde dehydrogenase1A1, ALDH1A1)在舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma, TSCC)原发灶及颈淋巴结标本中的表达水平,分析其与患者临床病理特征及预后的关系。方法:采用免疫组化SP法检测50例舌鳞状细胞癌原发灶和10例正常舌组织、29例转移淋巴结和9例未转移淋巴结标本中ALDH1A1的表达水平。结果:舌鳞状细胞癌原发灶中ALDH1A1表达高于正常舌组织,差异有统计学意义(P＜0.05);转移淋巴结中ALDH1A1表达高于未转移淋巴结,差异有统计学意义(P＜0.05)。在舌鳞状细胞癌原发灶中,ALDH1A1表达与患者的临床分期、有无淋巴结转移、原发灶大小及组织学分级有关(P＜0.05);在淋巴结中,ALDH1A1表达与患者的临床分期、有无淋巴结转移及原发灶大小有关(P＜0.05)。Kaplan-Meier分析表明舌鳞状细胞癌原发灶ALDH1A1高表达提示不良预后。结论:ALDH1A1的表达与舌鳞状细胞癌的生物学行为及预后密切相关,有望作为舌鳞状细胞癌预后相关因子,可能为舌鳞状细胞癌提供新的治疗靶点。     

正常及炎症状态人牙髓中八聚体结合转录因子4B的表达

目的 研究人正常及炎症牙髓组织中八聚体结合转录因子4B(Oct-4B)的表达特点,检测大肠杆菌脂多糖刺激后人牙髓细胞( HDPCs)中Oct-4B的表达水平,以探讨Oct-4B在牙髓炎症中的可能作用.方法 采用免疫组织化学和反转录聚合酶链反应( RT-PCR)方法检测正常及炎症牙髓组织中Oct-4B的表达情况.RT-PCR检测1 mg/L脂多糖刺激HDPC 24、48、72 h后Oct-4B和热休克蛋白70(HSP70)表达水平的变化.结果 正常牙髓组织中未检测到Oct-4B的表达,炎症牙髓组织病灶处牙髓成纤维细胞和炎症细胞胞质中Oct-4B表达强阳性.炎症牙髓组织中Oct-4B mRNA水平显著高于正常牙髓组织(P<0.05).脂多糖刺激48.72 h后,HDPC中Oct-4B和HSP70 mRNA水平同步上调(P<0.05).结论 Oct-4B在炎症牙髓组织中高表达,且脂多糖刺激可上调牙髓细胞内Oct-4B表达,Oct-4B可能参与牙髓炎症修复过程.     

矫治力初期牙髓组织HSP70表达及临床意义

目的 观察在矫治力初期牙髓组织中heat shock protein 70(HSP70)的分布及表达,探讨适宜的矫治力对牙髓组织的影响并正确运用生物力学原则。方法 16例采用拔除上颌双侧第一前磨牙进行固定矫治的患者,随机分为正常对照组,加力（0.5 N）1、3、7 d组在受力相应时段拔除,并制备石蜡标本。免疫组织化学法(SABC)观察牙髓中HSP70的表达及分布。结果 HSP70的阳性反应产物呈深褐色均质性沉淀,主要在血管内皮细胞,成牙本质细胞胞质周围呈颗粒状阳性表达。在加力1 d组HSP70的表达并没有明显增强(P>0.05),3天组表达达高峰尤其是在血管内皮细胞中(P<0.01),到7天后牙髓细胞的整体表达呈弱阳性。所有病例无一例牙髓坏死。结论 在牙移动过程中牙髓组织中HSP70的表达先升高后又逐渐减低至恢复正常水平,提示HSP70在牙移动过程中对牙髓组织的改建过程可能起着重要作用;适宜的矫治力作用下产生的HSP70可能对牙髓组织提供了有效的保护。