低分子肝素对口腔黏膜成纤维细胞释放IL-8的影响

目的：探讨低分子肝素对脂多糖诱导的人颊黏膜成纤维细胞分泌IL-8的影响。方法：原代培养正常人颊黏膜成纤维细胞,脂多糖刺激诱发炎症。不同浓度低分子肝素作用于炎症模型。采用ELISA方法检测细胞上清液中IL-8的变化。结果：脂多糖刺激后人颊黏膜成纤维细胞IL-8的表达高于正常对照组3 h（410.55 pg/mL与221.88pg/mL,P〈0.05）;低分子肝素组（1 U/mL）IL-8分泌量在6 h（552.85 pg/mL与885.81 pg/mL,P〈0.05）、12 h（532.94 pg/mL与891.24 pg/mL,P〈0.05）、24 h（405.96 pg/mL与887.88 pg/mL,P〈0.05）较炎症组显著降低。结论：低分子肝素能显著抑制脂多糖刺激后人颊黏膜成纤维细胞IL-8的释放。     

白细胞介素-1β与地塞米松对成纤维细胞分泌角质细胞生长因子的影响

目的 检测在体外培养的人正常口腔黏膜及口腔扁平苔藓(OLP)黏膜成纤维细胞中加入不同浓度的人白细胞介素-1β(IL-1β)和地塞米松(DEX)后,对成纤维细胞分泌和表达角质细胞生长因子(KGF)的影响.方法 将IL-1β和DEX配制成3个浓度梯度,分别加入到体外培养的人正常口腔黏膜和OLP黏膜成纤维细胞中,收集培养72 h后各组细胞上清液,应用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)技术检测每组细胞上清液中KGF蛋白浓度的变化.提取各组细胞RNA,用聚合酶链反应(PCR)法检测KGF mRNA表达量的变化.结果 ELISA及PCR结果显示:加入IL-1β的正常口腔黏膜及OLP黏膜成纤维细胞培养上清液中,KGF蛋白浓度较自身对照组均升高,同时KGF mRNA表达量较对照组有较明显的上升趋势.正常口腔黏膜及OLP黏膜成纤维细胞加DEX的上清液中,KGF蛋白浓度较自身对照组均降低,KGFmRNA表达量较对照组则有降低的趋势.结论 IL-1β对正常口腔黏膜成纤维细胞及OLP黏膜成纤维细胞分泌及表达KGF有促进作用;而DEX对正常口腔黏膜成纤维细胞及OLP黏膜成纤维细胞分泌和表达KGF有抑制作用.     

白细胞介素-1β（IL-1β）和地塞米松对成纤维细胞增殖的影响

目的：检测白细胞介素-1β（IL-1β）和地塞米松（DEX）对体外培养的口腔正常黏膜与口腔扁平苔藓（OLP）黏膜成纤维细胞增殖的影响。方法：应用MTT法检测3种浓度梯度的IL-1β和DEX对体外培养的14例OLP黏膜成纤维细胞和11例正常口腔黏膜成纤维细胞增殖活性的影响。结果：MTT测定结果显示,IL-1β对OLP黏膜成纤维细胞和正常口腔黏膜成纤维细胞的增殖均有促进作用,且随浓度增加促进作用增强;相反,DEX却抑制两种成纤维细胞的增殖,浓度越高抑制作用越强。结论：白细胞介素-1β可促进成纤维细胞的增殖,地塞米松则抑制成纤维细胞的增殖。     

丹参对口膜黏膜下纤维化患者颊黏膜成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的：研究丹参对口腔黏膜下纤维化患者颊黏膜成纤维细胞的影响。方法：分别用MTT法、羟脯氨酸试剂盒测丹参对培养的患者颊黏膜成纤维细胞增殖及培养基中胶原含量的影响。方法：不同浓度丹参注射液（30mg/ml、60mg/ml、90mg/ml）不仅对颊黏膜成纤维细胞的增殖有显著的抑制作用，还能显著降低该细胞培养基中可溶性胶原的含量（P＜0．05－0．01），上述抑制作用随药物浓度的增高而增强。结论：丹参对体外培养的口腔黏膜下纤维化患者颊黏膜成纤维细胞的增殖和胶原合成具有显著的抑制作用。可用于治疗口膜黏膜下纤维化。     

氯化镧对脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞分泌白细胞介素-8的影响

目的探讨稀土化合物氯化镧对脂多糖诱导人牙龈成纤雏细胞分泌白细胞介素-8（IL-8）的影响。方法组织块法培养人牙龈成纤维细胞，用脂多糖对其进行诱导，ELISA法检测IL-8分泌量。结果经氯化镧处理的成纤维细胞虽有脂多糖诱导但细胞分泌IL-8量明显低于对照组（P〈0．01）。结论氯化镧具有抑制脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-8的作用，据此推测氯化镧的抗炎作用机理可能与其抑制脂多糖介导的炎症因子释放有关。     

槟榔碱对口腔黏膜成纤维细胞分泌整合素α2的影响

目的：通过研究槟榔碱对体外培养的人口腔黏膜成纤维细胞（FB）表达整合素α2的影响,探讨整合素α2在口腔黏膜成纤维性变（OSF）发病机制中的可能作用。方法：体外培养人正常口腔黏膜成纤维细胞（FB）,培养基中加入不同浓度（0、10、20、40、80、160μg/ml）的槟榔碱孵育,MTT法12h后检测FB的增殖水平。RT-PCR法24h后检测0、10、20、40μg/ml浓度组整合素α2mRNA的表达水平。结果：槟榔碱浓度为20μg/ml时,FB增殖活性开始下降,与对照组相比无统计学差异（p〉0.05）,40μg/ml时下降明显与对照组相比有统计学差异（p〈0.05）。正常对照组整合素α2mRNA表达量低,随槟榔碱浓度增高其表达量呈增高趋势（p〈0.05）。结论：槟榔碱具有刺激FB表达整合素α2的作用,提示FB分泌整合素α2增多,进而诱导胶原合成增多,可能是OSF发生机制之一。     

白细胞介素-10对人牙龈成纤维细胞分泌白细胞介素-1β的抑制作用

目的:探讨白细胞介素-10(IL-10)在牙周炎症反应中的抑制作用。方法:用细胞培养法、酶联免疫吸附分析法 (ELISA)检测细胞培养液上清中的IL-1B浓度;用MTT法检测人牙龈成纤维细胞(HGF)对细菌脂多糖(LPS)、IL-10的增殖反应。结果:LPS以剂量依赖方式诱导HGF产生IL-1B,6 h达最大分泌量;IL-1B的分泌可被IL-10抑制,10 ng/ ml IL-10作用24 h抑制效应达最大;LPS对HGF具有促增殖作用,而IL-10对HGF的增殖无影响。结论:IL-10是一种抑制牙周炎症反应的细胞因子。     

脂多糖刺激牙龈成纤维细胞产生白细胞介素11、6的研究

目的观察牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）、伴放线放线杆菌（Actinobacillus actinomycetemcomitans，Aa）、大肠杆菌（Escherichia coli，Ec）的脂多糖（lipopolysacchrides，LPS）刺激人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts，HGF）合成白细胞介素（interleukin，IL）-11和IL-6的能力，并了解内源性前列腺素是否介导IL-11和IL-6的产生。方法将3种浓度的LPS（0．1、1、10mg／L）分别作用于体外培养的HGF 24h，另外在10mg／L的LPS中加入10^-6 moL／L的吲哚美辛后再分别刺激HGF 24h，ELISA法检测HGF上清液中IL-11和IL-6含量的变化。结果Aa-，Ec-LPS（10mg／L）和Pg-LPS（1、10mg／L）刺激HGF后IL-11水平显著提高；Pg-，Ec-LPS（0．1、1、10mg／L）和Aa-LPS（1、10ms／L）刺激HGF产生IL-6的水平明显增高；这些作用均受到吲哚美辛的抑制作用。结论LPS使HGF产生IL-11和IL-6的水平明显增加，并受到内源性前列腺素的正向调控。     

淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素抑制LPS对体外培养人牙龈成纤维细胞的作用

目的：探讨不同浓度淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素对细菌内毒素脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts,HGF）产生前列腺素E：（prostaglandin E2,PGE2）的影响。方法：以培养的人牙龈成纤维细胞为实验模型,用MTT试验检测淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素抑制LPS对牙龈成纤维细胞毒性作用的效果,初步筛选其作用浓度：然后用酶联免疫法检测三种提取物对LPS刺激牙龈成纤维细胞产生重要的骨吸收因子PGE：的影响。结果：LPS对HGF有明显的细胞毒性,三种提取物均可显著提高细胞成活率。LPS作用6h后培养上清中PGE,含量上升,而同时加入淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素各浓度组PGE：含量显著低于对照组qo〈o．01）。结论：淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素均可抑制LPS对HGF的细胞毒性作用,并且可抑制LPS刺激HGF产生PGE2。     

白细胞介素-1β与地塞米松对成纤维细胞分泌角质细胞生长因子的影响

目的 检测在体外培养的人正常口腔黏膜及口腔扁平苔藓(OLP)黏膜成纤维细胞中加入不同浓度的人白细胞介素-1β(IL-1β)和地塞米松(DEX)后,对成纤维细胞分泌和表达角质细胞生长因子(KGF)的影响.方法 将IL-1β和DEX配制成3个浓度梯度,分别加入到体外培养的人正常口腔黏膜和OLP黏膜成纤维细胞中,收集培养72...     

炎症微环境对人牙周膜成纤维细胞增殖与成骨分化的影响

目的: 观察脂多糖模拟的炎症微环境对体外培养的人牙周膜成纤维细胞（periodontal ligament cells, PDLCs）增殖与成骨分化的影响。方法: 体外培养鉴定人牙周膜成纤维细胞,分别用浓度为0、0.1、10 μg/mL脂多糖作用于细胞,采用MTT法观察脂多糖对PDLCs增殖的影响,运用实时定量PCR和Western印迹法检测脂多糖模拟的炎症微环境对PDLCs成骨分化的影响。采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 0.1 μg/mL脂多糖促进PDLCs增殖,增强成骨标志物mRNA和蛋白的表达;10 μg/mL脂多糖可抑制PDLCs的增殖及碱性磷酸酶、RUNX2、Ⅰ型胶原、骨形态发生蛋白2的表达,其结果有统计学意义。结论: 高浓度脂多糖（10 μg/mL）模拟的炎症微环境对PDLCs增殖及成骨分化有抑制作用,低浓度脂多糖（0.1 μg/mL）对PDLCs的增殖和成骨分化有促进作用。     

西格列汀激活基质细胞衍生因子-1/CXC趋化因子受体4信号通路对脂多糖诱导的人牙周膜干细胞增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响

目的 探讨西格列汀对脂多糖（LPS）诱导的炎症微环境下人牙周膜干细胞（hPDLSCs）增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响及分子机制。方法 体外培养hPDLSCs,用不同浓度的西格列汀处理后检测细胞活力,以确定后续西格列汀实验浓度。采用1μg/mL LPS刺激诱导24 h建立hPDLSCs炎症模型并分为空白组、对照组、西格列汀低浓度组（0.5μmol/L）、西格列汀中浓度组（1μmol/L）、西格列汀高浓度组（2μmol/L）、西格列汀高浓度+基质细胞衍生因子-1 (SDF-1)/CXC趋化因子受体4 (CXCR4)通路抑制剂（AMD3100）组（2μmol/L+10μg/mL）。细胞计数试剂盒-8检测培养24、48、72 h后的hPDLSCs增殖活性;流式细胞术检测培养72 h后hPDLSCs凋亡情况;诱导成骨分化21 d后茜素红染色检测hPDLSCs成骨分化能力,试剂盒测定hPDLSCs中碱性磷酸酶（ALP）活性;酶联免疫吸附检测hPDLSCs培养上清液中炎症因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-6水平;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测hPDLS...     

IL-lra对IL-1β诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-6的拮抗作用

目的:研究白细胞介素-1受体拮抗剂对IL-1β所介导生物学功能的影响,为进一步临床应用提供理论依据.方法:采用细胞培养技术和ELISA夹心法.结果:经IL-1β单独作用,牙龈成纤维细胞培养上清液中IL-6含量明显增高,当一定浓度的IL-lra与1ug/L IL-1β共同作用人牙龈成纤维细胞后,培养上清液中IL-6的含量比单独IL-1β作用组低.结论:IL-lra能够抑制IL-l诱导的人牙龈成纤维细胞分泌IL-6.     

HGF在人牙周膜成纤维细胞中的表达

目的：观察HGF在人牙周膜成纤维细胞中的表达及探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-1β（IL-1β）与HGF之间的关系。方法：分别采用IL-1β梯度浓度、最佳干预浓度和TGF-β1梯度浓度干预第5代人牙周膜成纤维细胞,并运用酶联免疫技术检测人牙周膜成纤维细胞的上清液中HGF的表达。结果：经IL-1β单独作用,人牙周膜成纤维细胞的上清液中HGF的含量较空白对照组高,并优选出IL-1β的最佳干预浓度为10 ng/mL。当一定浓度的TGF-β1和10 ng/mL的IL-1β联合干预人牙周膜成纤维细胞,该细胞上清液中HGF的含量较单独IL-1β作用组低。结论：TGF-β1能够抑制IL-1β诱导的人牙周膜成纤维细胞分泌HGF。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人牙周膜成纤维细胞胶原吞噬作用的影响

目的研究牙周病致病菌牙龈卟啉单胞菌脂多糖（LPS）对体外培养的人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）胶原吞噬作用的影响。方法将不同质量浓度的LPS加入体外培养的hPDLF 48 h后,采用荧光定位术和流式细胞技术检测hPDLF胶原吞噬率的变化。结果LPS导致hPDLF胶原吞噬率显著增加（P<0.05）。结论牙龈卟啉单胞菌脂多糖具有促进hPDLF吞噬胶原的作用,可能是牙周组织破坏机制之一。     

成纤维细胞上清提取物对成纤维细胞增殖迁移的影响

目的：在人皮肤成纤维细胞培养上清液中寻求出有效的生长因子样活性组分。方法：收集超滤成纤维细胞的培养上清液，采用MTT法、划痕试验等检测其对人皮肤成纤维细胞增殖和诱导迁移的影响。结果：上清液组中分子量10～30kD的试验组对成纤维细胞有明显促增殖趋势，而大于30kD组有较强的促进单层细胞伤口愈合的能力，二者与对照组比较均差异显著（P〈0．01）。结论：人成纤维细胞培养上清液的提取物中含有促进成纤维细胞增殖和迁移能力的活性物质。     

体外培养碱性成纤维细胞因子对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

目的：探讨体外培养过程中，碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）生物学特性的影响。方法：体外分离培养人牙周膜成纤维细胞并鉴定，加入不同浓度bFGF（1ng／ml、10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml）培养，MTT方法检测细胞增殖情况；并对细胞进行矿化诱导，检测细胞的碱性磷酸酶活性。结果：hPDLFs呈星形或长梭形，免疫组化波丝蛋白阳性，角蛋白阴性，证实该细胞来源可靠。bFGF在一定浓度范围内，与细胞增殖成正比，而在本实验培养条件下（10％FBS）bFGF最大效应浓度为10ng／ml。矿化诱导条件下，碱性磷酸酶活性明显增加，在联合应用bFGF的情况下，100ng／ml组碱性磷酸酶活性明显高于其他组。结论：不同浓度bFGF对人牙周膜成纤维细胞生物学行为的影响不同，在一定浓度条件下，低浓度bFGF促进人牙周膜成纤维细胞的增殖，而高浓度bFGF作用于人牙周膜成纤维细胞可能更易于分化。     

一氧化氮对人牙周膜细胞增殖抑制作用的研究

目的探讨外源性一氧化氮（nitric oxide,NO）对牙周膜细胞（periodontal ligament cells,PDLCs）增殖的抑制作用。方法培养人牙周膜细胞,将培养增殖的4～8代细胞分为两组,即实验组和对照组。实验组中加入不同浓度的硝普钠（sodium nitroprusside,SNP）作为NO的供体,对照组不加SNP。培养24h后用硝酸还原酶法检测细胞上清液中NO的含量;MTT检测活细胞数量,连续监测法检测碱性磷酸酶活性。结果24h后细胞上清液中NO含量随SNP浓度增高而增加;碱性磷酸酶活性随SNP浓度增加而降低;MTT实验显示经SNP作用后的的活细胞数明显较对照组少（P〈0.05）;去除SNP作用后牙周膜细胞仍能保持旺盛的增殖能力,且实验组不同浓度之间无明显差异（P〉0.05）。结论NO对培养状态下PDLCs的增殖有抑制作用。     

环孢素A引发牙龈过度生长过程中IL-6的表达

目的:对体外培养的牙龈上皮细胞和成纤维细胞施加环孢素A(cyclosporin,CsA)刺激,应用免疫组化方法探讨CsA引发药物性牙龈过度生长(gingival overgrowth,GO)的病理机制。方法:对体外培养的牙龈上皮细胞和成纤维细胞分别施加浓度为600、800和1000ng/mL,作用时间为48、72h的CsA刺激。在观察细胞生长曲线及其变化的基础上,通过对细胞铺片的免疫酶染色(ABC法)定量分析和对细胞培养液的酶联免疫吸附检测(ELISA法),分别对牙龈组织细胞IL-6的表达和分泌进行测定,应用SAS 6.0软件包对数据进行统计学分析。结果:牙龈上皮细胞接受CsA刺激后,细胞数量明显增加,与对照组相比具有显著差异(P<0.05)。在接受相同条件CsA刺激下,牙龈上皮细胞和成纤维细胞胞内IL-6表达无显著差异,细胞胞内IL-6表达量与CsA作用时间、浓度间相关。接受CsA刺激的最初24h内,牙龈成纤维细胞分泌IL-6的总量在各CsA浓度实验组及对照组间均无显著差异(P>0.05);牙龈成纤维细胞接受刺激超过24h后,CsA浓度为1000ng/mL的实验组与对照组间在细胞分泌IL-6总量上有显著增加...     

TLR4在人牙周膜成纤维细胞中的表达研究

目的：探讨TLR4在体外培养的人牙周膜成纤维细胞中的表达情况。方法：体外分离培养人牙周膜成纤维细胞，采用免疫荧光染色检测TLR4蛋白在该细胞中的表达；用半定量RT—PCR法检测TLR4基因的表达及0．1ng／mL牙龈卟啉菌脂多糖刺激24h后细胞内TLR4基因表达水平的改变。结果：免疫荧光检测显示体外培养的人牙周膜细胞中有TLR4表达，0．1ng／mL牙龈卟啉菌脂多糖刺激24h，其TLRd基因表达水平显著性增高（P〈0．05）。结论：TLR4在牙周膜成纤维细胞中有表达，牙龈卟啉菌脂多糖成分可刺激TLR4基因上调，提示与该细胞参与牙周免疫应答有关。