人涎腺腺样囊性癌相关同源异型盒基因差异表达的研究

目的研究人涎腺腺样囊性癌及正常腺体中同源异型盒基因的表达差异,认识该基因与涎腺腺样囊性癌发生发展的关系。方法设立6组严格配对的腺样囊性癌/癌旁腺体标本及2组腺样囊性癌细胞株/癌旁腺体标本,采用定制的含232条人类同源异型盒基因探针的Oligo芯片进行分析,归纳2组间差异基因信息。荧光实时定量PCR技术检测高度可疑的涎腺腺样囊性癌相关基因在不同样本中的mRNA表达水平,统计学分析找出明显异常表达的同源异型盒基因。结果组织样本出现上调的同源异型盒基因67条,下调基因54条;细胞样本中出现上调的同源异型盒基因12条,下调基因15条;同时出现在组织及细胞样本中的上调基因1条（TGIF）;下调基因7条,出现频数较高的为EVX1、PITX1。荧光实时定量PCR检测显示TGIF、EVX1在ACC-M与正常腺体组织的表达量有统计学差异。结论同源异型盒基因作为细胞正常增殖和分化的关键基因,可能与涎腺腺样囊性癌形成过程密切相关。     

p53上调凋亡调控因子在舌鳞癌中的表达及临床意义

目的：观察p53上调凋亡调控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)在舌鳞癌组织、舌癌旁组织及正常舌黏膜组织中的表达,探讨其在舌鳞癌发生、发展中的作用及临床意义。方法：通过免疫组化检测30例舌鳞癌组织、13例舌癌旁组织及10例正常舌黏膜组织中PUMA的表达水平,分析PUMA在舌鳞癌中的表达与临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移之间的关系。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果：PUMA在舌鳞癌组织、舌癌旁组织及正常舌黏膜组织中的阳性表达率分别为36.67%、53.85%和80.00%,3组之间PUMA表达均有显著差异(P<0.05)。淋巴结转移组中PUMA的阳性表达率为18.18%,而无淋巴结转移组中PUMA的阳性表达率为47.37%,2组差异显著(P<0.05)。而在不同年龄、性别、临床与病理分期、肿瘤分化程度的舌鳞癌组织中,PUMA的表达差异无显著性(P>0.05)。结论：PUMA蛋白表达降低在舌鳞癌的发生、发展及转移过程中具有重要作用,对判断舌鳞癌的预后及治疗有一定的指导意义。     

细胞周期蛋白B1在舌鳞癌中的表达及意义

目的研究舌鳞癌组织中细胞周期蛋白(cyclin)B1的表达,探讨其表达与舌鳞癌临床病理特征的关系。方法随机收集舌鳞癌标本[含正常舌组织和(或)癌旁组织]60例。采用免疫组化SP法显示cyclin B1蛋白的表达,并结合舌鳞癌的临床病理特征进行分析。结果舌癌组织中可见cyclin B1过表达,主要定位于细胞质中,显棕色;正常和癌旁上皮组织中少见其表达。癌组织、正常组织和(或)癌旁组织中cyclin B1蛋白的表达差异有非常显著性。cyclin B1的表达在舌鳞癌不同临床分期、组织分级中有显著性差异。结论cyclin B1在舌鳞癌中有过表达现象;其可作为评价舌鳞癌临床分期和组织分级的参考指标之一。     

iASPP在舌鳞癌组织中的表达及意义

目的：探讨iASPP在舌鳞癌组织中的表达及意义。方法临床收集16例舌鳞癌癌旁组织、71例舌鳞癌组织,通过免疫组化检测 iASPP的表达情况,并对其表达水平进行统计学分析。结果在舌癌旁组织中, iASPP少量位于棘层细胞胞浆中,呈淡黄色颗粒。在舌鳞癌组织中iASPP主要分布于上皮全层,其表达显著高于舌癌旁组织(P<0．05)。不同分化程度及是否淋巴结转移舌鳞癌患者中,iASPP的平均表达水平有显著性差异(P<0．05)。低分化者表达水平最高,高分化者表达水平最低,有淋巴结转移者表达水平高于无淋巴结转移者( P<0．05)。不同临床分期iASPP的表达无显著差异。结论 iASPP表达的改变可能与舌鳞癌的发生发展有关。     

CCND1、ORAOV1、ERCC1在舌鳞状细胞癌中的表达和临床意义

目的:通过观察 CCND1、ORAOV1、ERCC1在舌鳞状细胞癌中的表达情况,探讨CCND1、ORAOV1、ERCC1与舌癌发生、发展的相关性。方法:应用免疫组织化学染色方法检测38例舌鳞状细胞癌组织芯片及4例正常舌组织芯片中CCND1,ORAOV1,ERCC1蛋白表达情况,并分析其与临床病理特征的关系。结果:舌癌组织中CCND1蛋白的阳性表达率明显高于正常舌组织(P<0.05),但其过表达水平与正常舌组织相比无统计学差异;CCND1阳性表达率及过表达水平与患者年龄、性别、肿瘤组织学分级及肿瘤有无淋巴结转移之间无明显相关。ORAOV1在舌癌组织中的表达明显升高(P<0.05),且与肿瘤有无淋巴结转移之间显著相关(P<0.05);ORAOV1在舌癌中的过表达水平与对照组相比无明显差异,但随着肿瘤分化程度的降低ORAOV1的过表达水平显著上升(P<0.05)。ERCC1蛋白在舌鳞状细胞癌组织中的阳性表达率及过表达水平均明显低于正常舌组织(P<0.05),并均与肿瘤有无淋巴结转移之间显著相关(P<0.05);且与高、中分化组相比,低分化组ERCC1蛋白过表达水平上升,但无统计学差异。结论:在舌鳞状细胞癌组织中CCND1和ORAOV1显著高表达,ERCC1表达显著降低,三者的检测对早期诊断舌癌具有指导意义。     

舌鳞癌中hTERT与PTEN表达的相关性研究

目的:探讨舌鳞状细胞癌组织中hTERT与PTEN蛋白表达的相关关系,为治疗原发性舌鳞癌提供理论依据.方法:采用免疫组织化学技术及原位杂交技术,对原发性舌鳞癌组织、癌旁组织(正常组织)中hTERT和PTEN蛋白表达进行检测.利用计算机图像分析技术,将二者中hTERT和PTEN蛋白水平进行半定量分析.在此基础上,应用有关统计学方法,评价hTERT与PTEN之间是否存在相关性及其相关程度.结果:舌鳞癌中hTERT和PTEN蛋白的阳性检出率分别为74.5%(37/50)和39.1%(20/50).且随着肿瘤恶性程度的增加,hTERT的表达升高,PTEN的表达下降,二者之间存在相关性(P<0.01).结论:抑癌基因PTEN在舌鳞状细胞癌中对hTERT活化的可能存在抑制作用,PTEN的缺失可能引起hTERT表达水平增高从而导致舌癌的发生.     

舌癌中原癌/抑癌基因及凋亡/应激反应相关基因的表达谱研究

目的：应用cDNA微阵列技术研究舌癌中原癌/抑癌基因及凋亡/应激反应相关基因的差异表达基因。方法：分别提取4例舌癌组织和正常舌黏膜组织的mRNA,逆转录后制成cDNA探针,纯化后与含有100条细胞凋亡/应激反应相关基因和234条原癌/抑癌基因相关基因的基因表达谱芯片进行杂交分析,筛选相关的差异表达基因。结果：共筛选出与细胞凋亡/应激反应有关的基因14条,其中表达增加的基因有4条,表达降低的基因有10条。在原癌/抑癌基因相关的234条基因中,共有17条基因在舌癌组织中存在差异表达,其中表达增加的基因10条,表达降低的基因7条。结论：运用cDNA微阵列技术能成功检测出两种不同组织中多个基因的差异表达,为研究舌癌提供有价值的筛选资料。     

Cdc42在舌鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的： 探讨舌鳞癌组织、癌旁组织以及正常舌组织中细胞分裂周期蛋白42（cell division cycle 42,Cdc42）的表达及临床意义。方法： 选择青岛大学附属青岛市市立医院口腔颌面外科2014—2016年手术切除的舌鳞癌原发灶42例,采用免疫组织化学和免疫印迹法检测患者的组织标本（舌鳞癌、癌旁组织和正常舌组织）中Cdc42蛋白的表达水平,并分析其与临床病理参数的相关性。采用SPSS 13.0软件包对相应资料进行t检验与秩和检验。结果： Cdc42蛋白在舌鳞癌以及其癌旁组织中的阳性率分别为80.95%和52.38%,均高于正常舌组织（11.90%）,2组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。Cdc42蛋白的表达与舌鳞癌的病理分化程度无关（P>0.05）,Cdc42蛋白定位在胞核的阳性分度与舌鳞癌的病理分化程度相关（P<0.05）;与患者的年龄、性别无关(P>0.05);与颈淋巴结转移及舌鳞癌的临床分期呈正相关(P<0.05)。结论： Cdc42蛋白在舌鳞癌组织及癌旁组织中表达增高,与舌鳞癌的发生、发展密切相关。     

Notch信号通路分子在舌鳞癌中的表达及意义

目的 明确Notch信号通路受体Notch1、Notch3及其配体Jagged1、Jagged2在舌鳞癌中的表达及其意义。方法 通过逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学和Western blot检测74例舌癌患者的组织标本（舌癌及癌旁组织）和人舌癌Cal-27细胞株中Notch1、Notch3、Jagged1和Jagged2 mRNA与蛋白质的表达水平,分析其与细胞增殖及临床病理的关系。结果 舌癌、癌旁组织及Cal-27细胞株中均检测到Notch1、Notch3、Jagged1、Jagged2 mRNA和蛋白质的表达。Notch1和Notch3蛋白在舌癌中的表达率高于癌旁组织,而Jagged1和Jagged2蛋白在舌癌和癌旁组织中的表达率无明显差异。Notch1和Notch3蛋白的表达和舌癌的临床分期具有相关性。4种信号蛋白的表达与患者的年龄、性别和临床病理分级无相关性。Notch3和Jagged2的表达具有相关性。Notch1蛋白在淋巴结转移阳性病例中的表达率高于转移阴性的病例,Jagged1在转移阳性病例的表达分级高于阴性病例。结论 Notch信号通路分子在舌鳞癌中表达活跃,与舌癌的发生发展有重要的相关性。     

凋亡相关基因Bcl-2、Bax与舌鳞状细胞癌的相关性研究

目的探讨舌鳞癌组织Bcl-2和Bax基因蛋白表达与舌鳞状细胞癌发生、发展的关系。方法采用Envision免疫组织化学两步法检测10例舌慢性炎症标本、45例舌鳞状细胞癌标本及20例癌旁舌组织中Bcl-2的表达水平。结果舌鳞癌组织中Bcl-2基因蛋白阳性表达率82.22%,舌鳞癌组织中Bax基因蛋白阳性表达率62.22%,与炎症组织和癌旁组织相比,差异均有显著意义(P<0.05)。舌鳞癌组织中Bcl-2和Bax基因蛋白的表达呈明显的负相关关系(r=-0.324,P<0.01)。结论舌鳞癌组织中Bcl-2和Bax协同作用参与了舌鳞癌的发生发展,有可能成为早期诊断的指标或基因治疗的靶点。     

口腔颊癌p16INK4/CDKN2基因的纯合子缺失与点突变

目的 探讨p16基因纯合子缺失和点突变与颊癌发生、发展的关系。方法 采用聚合酶链反应（PCR）、DNA单链构象多态性（SSCP）分析和DNA测序技术研究30例颊癌及10例颊黏膜白斑p16基因纯合子缺失和点突变的情况,并应用免疫组化检测基因改变组织中P16蛋白质的表达。结果 颊白斑和正常颊黏膜无p16基因的纯合子缺失和点突变。在30例颊癌标本中,7例标本p16纯合子缺失,纯合子缺失率是23.3%（7/30）;5例颊癌出现点突变,均发生在第2外显子上,点突变率为16.7%（5/30）。经DNA直接测序,发现5例点突变均为错义突变,其中3例突变位点相同,均在第99密码子上由GAT突变为AAT,由门冬酰胺取代门冬氨酸;对纯合子缺失和点突变的12例颊癌组织进行P16蛋白的检测,发现11例标本P16蛋白表达缺失,1例点突变标本表达正常。结论 p16基因纯合子缺失和点突变是颊癌基因失活的主要形式,与颊癌的发生、发展密切相关。     

苯并蒽诱导金黄地鼠颊黏膜癌变的重要致病基因筛选

目的 利用基因芯片和生物信息学分析技术探讨口腔黏膜癌变发生发展的不同阶段基因表达谱的改变,并筛选癌变的重要致病基因.方法 用9,10-二甲基1,2苯并蒽(9,10-dimethylen-1,2-benzanthracene,DMBA)诱导建立金黄地鼠颊鳞状细胞癌模型,分别提取并纯化正常颊黏膜、癌前病变和鳞状细胞癌组织的总RNA并合成用Cy3荧光标记的cRNA,分别与含有41 000条基因-表达序列标签(expressed sequence tags,EST)的Agilent大鼠全基因表达谱芯片杂交,以Ratio≥2和≤0.5为阈值确定癌变3个不同阶段的差异表达基因并分析相关生物信息,然后用Gene Spring10.0软件行Venn图分析,筛选出在口腔颊黏膜癌变发生发展的3个不同阶段均持续表达异常的基因,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)对部分差异表达基因行验证分析.结果 金黄地鼠颊黏膜自正常黏膜到鳞状细胞癌的过程中,共有5255条差异表达基因,其中表达上调2896条,下调2359条.癌变的3个不同发展阶段均持续表达异常的基因共有22条,其中表达上调3条,下调19条.对上调基因Eaf-2和下调基因Ecg-2行RT-PCR验证结果与芯片结果相符.结论 口腔黏膜癌变涉及众多基因表达的改变;癌变的不同阶段均持续表达异常的基因可能为癌变的重要致病基因,对以上基因的探讨将对研究口腔黏膜癌变发生发展的分子机制和靶向治疗具有重要作用.     

口腔扁平苔藓基因表达谱中差异表达基因初步探讨

目的筛选口腔扁平苔藓组织中的差异表达基因,并对其进行功能分类。方法用4 000种人类基因多聚酶链反应产物制成BiostarH- 40s型表达谱芯片,分离纯化正常口腔黏膜组织和口腔扁平苔藓病变组织mRNA,制备表达谱探针,用ScanArray 4000 荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,分析正常口腔黏膜组织和口腔扁平苔藓组织之间差异表达的基因。结果1）在4 000条基因中,有213条基因表达差异,其中122条基因表达上调,91条基因表达下调。2）在表达上调基因中,功能分类主要包括免疫相关基因、代谢相关基因、癌基因、细胞因子、细胞信号和传递蛋白。3）在表达下调基因中,功能分类主要包括DNA结合、转录和转录因子、细胞信号和传递蛋白、免疫相关基因、细胞因子、代谢相关基因。结论口腔扁平苔藓的发生、发展过程中存在着多条不同功能基因表达调控的改变。     

口腔鳞癌中Bax,Bcl-2和Survivin蛋白表达与预后相关性研究

目的:研究凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2及Survivin的表达与口腔鳞癌预后的相关性,确定预后判断的有效标志物。方法:采用免疫组织化学方法,检测110例口腔鳞癌患者术后石蜡切片组织中Bax、Bcl-2及Survivin蛋白的表达。通过目标蛋白阳性染色细胞比例和阳性细胞中蛋白的染色强度判定各种蛋白的表达水平;应用SAS 9.0软件中的Kaplan-Meier及Cox回归分析Bax、Bcl-2及Survivin蛋白表达与口腔鳞癌预后的相关性。结果:110例标本检测和统计分析结果表明,Bax、Bcl-2和Survivin蛋白单独表达水平与口腔鳞癌术后生存时间并无显著的相关性;Bcl-2/Bax的比值与口腔鳞癌的术后生存时间呈显著相关(P<0.05)。结论:口腔鳞癌患者组织标本中的Bcl-2/Bax值是影响预后的重要指标,提示该指标在临床上可作为口腔鳞癌患者预后判断的有效标志物。     

白斑癌变相关基因的表达谱研究

目的 运用cDNA微阵列技术研究口腔白斑组织和口腔鳞癌组织的基因表达谱的变化，为探讨口腔白斑癌变基因提供初步筛选资料。方法 对临床切除的5例口腔白斑和口腔癌组织进行总RNA抽提，逆转录制备探针，纯化后与含有4124个基因的微阵列杂交，杂交后的信号经扫描仪检测和计算机分析后筛选出与白斑癌变相关的基因。结果 对口腔白斑和口腔癌基因表达谱进行分析，发现存在30个差异表达的基因，它们可能与白斑癌变有关。结论 采用cDNA微阵列技术能成功检测出两种不同组织中多个基因的差异表达，为研究白斑癌变机制提供有价值的筛选资料。     

小鼠帽状期和钟状早期磨牙牙胚差异表达基因的初探

目的筛选小鼠帽状期(E14.5)和钟状早期(E18.5)磨牙牙胚的差异表达基因。方法分离小鼠E14.5和E18.5磨牙牙胚,采用基因芯片技术检测相关的差异表达基因。结果共得到76条差异表达基因,上调基因71条,下调基因5条。结论 E18.5磨牙牙胚,调控细胞代谢、分化、极性形成酶类,调控免疫应答相关基因,转录、翻译相关基因,信号通路的信号分子、受体以及应激反应相关基因等功能的基因表达都显著上调,而细胞凋亡相关基因、氨基酸代谢激酶等的表达下调。     

玉屏风口服液对口腔扁平苔藓差异表达基因干预的初步探讨

目的 应用基因芯片技术及最新公共数据库,观察玉屏风口服液作用后口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)组织中基因表达谱改变。方法 分离纯化正常口腔黏膜组织、口腔扁平苔藓病变组织和服用玉屏风口服液后扁平苔藓病变组织mRNA,制备表达谱探针,混合后用BiostarH-40s型基因芯片杂交,用ScanArray 4000荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,利用GenePix Pro 3.0软件分析检测玉屏风口服液作用口腔扁平苔藓组织中的差异表达基因,并进行筛选。结果 服用玉屏风口服液后,病变组织有5条基因表达上调,3条基因表达下调,功能以转录基因为主。结论 玉屏风口服液对口腔扁平苔藓的差异表达基因具有干预作用,干预基因以转录基因为主。?