端粒酶SiRNA抑制人口腔鳞状细胞癌生长的研究

目的　研究端粒酶SiRNA对端粒酶mRNA的阻抑作用以及对人口腔鳞状细胞癌KB细胞生长的影响作用。方法　选取距离端粒酶mRNA起始密码第 2 6 5 7～ 2 6 75核苷酸作为SiRNA的双链序列 ,并在两条链的 3′端加上“UU”两个核苷酸 ,用RT PCR和端粒重复序列扩增法 (TRAP)测定KB细胞转染前后mRNA水平以及端粒酶活性 ,并测定细胞增殖、细胞周期以及细胞凋亡。结果　SiRNA转染细胞 2 4h后能非常有效地阻抑端粒酶mRNA的水平 ,同时端粒酶活性也相应降低 ,但这种阻抑作用只维持 4 8h左右 ,转染后 72h ,端粒酶mRNA和端粒酶活性恢复正常。端粒酶mRNA的阻抑影响细胞的增殖 ,细胞在转染后的 4 8h ,增殖率开始下降 ,且一直持续到转染后的 12 0h ,细胞增殖抑制效应与细胞周期的阻滞有关 ,但未发现与细胞凋亡有关。结论端粒酶SiRNA能有效地抑制端粒酶mRNA的表达和端粒酶活性 ,同时抑制细胞增殖 ,提示端粒酶对于肿瘤细胞的生长是必需的 ,开发端粒酶抑制剂作为新的抗肿瘤药物有着广阔的应用前景。     

β-胡萝卜素对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的 观察β-胡萝卜素对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞的细胞毒性、细胞周期、细胞凋亡以及端粒酶活性的影响.方法 四唑蓝法检测30、 50、 60和70 μmol/L 4种浓度β-胡萝卜素对Tca8113细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪观察β-胡萝卜素处理后Tca8113细胞周期改变及细胞凋亡,端粒重复片段扩增银染法检测细胞端粒酶活性的变化.结果 从50 μmol/L开始,随β-胡萝卜素浓度的提高,对Tca8113细胞增殖抑制作用越来越强.70 μmol/L β-胡萝卜素作用Tca8113细胞4 d后,抑制率超过50%,细胞生长曲线的"S"形趋于平缓.70 μmol/L β-胡萝卜素作用Tca8113细胞3 d后,流式细胞仪检测未出现亚二倍体的"凋亡峰".与空白对照组相比,实验组S期细胞减少约50%(P<0.05),G0/G1期细胞同时显著增加(P<0.05),G2/M期细胞变化无统计学意义(P>0.05).β-胡萝卜素处理Tca8113细胞后,端粒酶活性显著下调.结论 β-胡萝卜素可以通过减少DNA合成,阻滞细胞于G0/G1期,抑制舌癌Tca8113细胞的增殖,抑制效果随浓度的增加而明显.作用机制可能与下调肿瘤细胞端粒酶活性、导致细胞死亡有关.     

阿霉素作为G-四联体配体对Tca8113细胞影响的研究

目的：观察阿霉素作为G-四联体配体对Tca8113细胞端粒酶活性、增殖及凋亡的影响，探讨G-四联体结构生物学功能。方法：通过TRAP法和改良TRAP—G4法，分析阿霉素对Ra8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应的影响。研究分2个实验组进行，用药组培养液含2．5μmol几阿霉素，非用药组培养液加相应体积生理盐水，细胞培养1、3、5和7d后．利用TRAP法检测其端粒酶活性；流式细胞仪分析其细胞周期和凋亡率，并对2实验组间凋亡率进行t检验；Giemsa染色和SA—β—gal染色观察凋亡和衰老细胞。结果：TRAP和改良TRAP—G4检测表明，阿霉素通过诱导G4形成抑制Tca8113细胞端粒酶介导的端粒延伸反应。在2．5μmol／L阿霉素作用下，Tca8113细胞端粒酶活性在3d后出现降低：用药组细胞增殖受抑制，停滞于G0—G1期和S期；所有观察期内2实验组间细胞凋亡率差异有统计学意义（P〈0．05）：用药组出现衰老和凋亡细胞。结论：阿霉素诱导G-四联体形成，可抑制Tca8113细胞端粒酶活性，降低其增殖活性．促进衰老和凋亡发生。     

阿霉素诱导鸟嘌呤-四联体形成对Tca8113细胞端粒酶及细胞周期的影响

目的：探讨阿霉素影响端粒酶活性、端粒酶mRNA表达、细胞周期及周期蛋白表达的分子作用机制。方法：采用端粒重复序列扩增法（TRAP）、改良TRAP—G4法和RT—PCR法检测Tca8113细胞端粒酶活性变化、端粒酶hTERT和TP1mRNA水平；流式细胞仪分析细胞周期；采用Western印迹法测定CyclinB1和CyclinA表达水平。采用SPSS10．0软件包对数据进行t检验。结果：所有实验浓度阿霉素均可降低Tca8113细胞端粒酶活性．当端粒酶作用底物变为5＇-（GGGATr），GGGTT-3’时，端粒延伸反应完全受到抑制；5μg/ml阿霉素作用24h后，hTERT和TP1mRNA表达降低，CyclinB1表达明显增强，G2／M期细胞百分率显著下降。结论：阿霉素抑制端粒酶活性、降低端粒酶表达、影响细胞周期及CyclinB1表达的作用机制与其诱导鸟嘌呤-四联体形成有关。     

十字孢碱对口腔鳞状细胞癌CAL27细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨十字孢碱(staurosporine,ST)对人口腔鳞状细胞癌细胞株CAL27增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度的ST对CAL27细胞增殖的抑制作用,DAPI荧光染色法观察不同浓度的ST对CAL27细胞凋亡的改变,流式细胞术检测不同浓度ST对CAL27细胞凋亡率和周期分布的影响;蛋白免疫印迹法检测不同浓度ST对CAL27细胞周期蛋白cyclin D1、Cdk4、Cdk6、p21表达的影响。结果 ST对CAL27细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05),抑制作用具有药物浓度依赖性。通过DAPT染色,ST能明显诱导细胞凋亡及凋亡形态改变。CAL27细胞出现Annexin V-FITC/PI流式细胞术观察发现与对照组相比,ST可诱导CAL27细胞凋亡率明显增加(P<0.05),并引起细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.05)。蛋白免疫印迹法检测结果显示,经ST处理细胞后,cyclin D1、Cdk4和Cdk6蛋白表达明显降低,p21蛋白表达升高(P<0.05)。结论 ST可显著抑制口腔鳞状细胞癌CAL27细胞增殖并诱导其凋亡,其机制考虑是通过阻滞细胞周期于G2/M期,进而抑制肿瘤细胞生长并促进细胞凋亡。     

Genistein对涎腺腺样囊性癌细胞生长及Survivin表达的影响

目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC- 83细胞增殖及Survivin表达的影响。方法以不同浓度Genistein作用于SACC- 83细胞不同时间后，用MTT法分析细胞的生长增殖，用流式细胞术检测细胞凋亡，用Western印迹分析及电泳凝胶成像分析软件定量检测Survivin的表达。结果Genistein对SACC-83细胞有一定的抗增殖作用，且当其作用到一定时间达到一定的浓度后，该作用与浓度及时间呈依赖关系；SACC- 83细胞经220 μmol/L Genistein作用3 d其生长明显受到抑制，并显著诱导细胞凋亡（P<0.01），同时伴有抗凋亡蛋白Survivin的表达下调。结论Genistein能明显抑制人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC- 83细胞生长并诱导凋亡；Survivin的表达减少可能是Genistein诱导凋亡的机制之一。     

紫杉醇联合肿瘤坏死因子α诱导粘液表皮样癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨人肿瘤坏死因子α（TNF-α）联合紫杉醇对人黏液表皮样癌细胞系（MEC-1）的抑制增殖作用及与细胞凋亡的关系,为化疗与生物治疗联合应用治疗粘液表皮样癌提供实验依据。方法将人黏液表皮样癌细胞系（MEC-1）和对照组原代培养鼠肺成纤维细胞（LFB）分为9组,每组给予不用药物浓度作用72h。3H-TDR法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期改变;透射电镜观察凋亡细胞形态变化。结果联合用药组的细胞增殖抑制率显著高于单独用药组（P〈0.05）。LFB细胞各组的细胞增殖抑制率显著低于MEC-1细胞（P〈0.05）。结论TNF-α联合紫杉醇对MEC-1细胞增殖的抑制作用以及诱导凋亡具有协同作用。     

Genistein对唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的体外抗增殖作用

目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein(4',5,7-三羟基异黄酮)对人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的体外抗增殖作用及其对细胞增殖周期的影响。方法:用Genistein处理体外培养的SACC-83细胞,采用MTT检测法计算细胞存活率,显微照相记录细胞生长状态及形态学的改变,流式细胞仪测定细胞周期,AnnexinⅤ/PI法定量检测细胞凋亡,采用SPSS11.5统计软件对结果进行统计方差分析。结果:Genistein对SACC-83细胞有一定的抗增殖作用,且当其作用到一定时间、达到一定的浓度后,该作用与浓度及时间呈依赖关系;细胞形态发生改变,体积缩小,悬浮细胞逐渐增多;SACC-83细胞经220μmol/LGenistein作用3d,其生长受到明显抑制,阻断细胞生长于G2/M期,并明显诱导细胞凋亡(P<0.01)。结论:Genistein可以显著抑制人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的生长,阻断细胞周期于G2/M期,并诱导细胞凋亡;提示酪氨酸蛋白激酶在唾液腺腺样囊性癌的发生、发展中起着重要作用。     

伴放线放线杆菌细胞致死性膨胀毒素研究进展

伴放线放线杆菌产生一种毒性蛋白成分——细胞致死性膨胀毒素（cytolethal distending toxin,CDT）。该毒素由3个相邻基因cdtA（669 bp）、cdtB（852 bp）、cdtC（561 bp）编码的蛋白亚基CdtA（28 000 Da）、CdtB（32 000 Da）、CdtC（20 000 Da）组成异源三聚体全毒素。CDT引起细胞膨胀,导致细胞周期阻滞,抑制细胞增殖,还能诱导淋巴细胞凋亡,影响宿主免疫功能,诱导细胞因子分泌等,在牙周病的发生发展过程中发挥至关重要的作用。本文就伴放线放线杆菌CDT各亚基及其致病机制作一综述。     

MS-275促进口腔鳞状细胞癌凋亡的实验研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对口腔鳞状细胞癌（Tca-8113）生长抑制情况以及促进凋亡的作用。方法采用0、0.5、1、2、4、8μmol/L MS-275对口腔鳞状细胞癌进行干预,倒置相差显微镜观察细胞形态改变;MTT法检测细胞增殖活性;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪定量检测细胞凋亡,流式细胞仪分析细胞周期。结果①倒置相差显微镜下观察到对照组细胞呈多边形,贴壁,生长活跃;实验组细胞形态改变明显,大部分细胞核固缩,细胞变小、变圆、脱壁。②细胞生长曲线显示,随MS-275浓度增加、时间延长,Tca-8113细胞生长明显受到抑制,各实验组细胞生长抑制率与对照组相比,P〈0.05,差别有统计学意义。③2、4μmol/L MS-275作用48h,细胞总凋亡率分别为41.28%和53.71%,细胞周期阻滞于G0/G1期,与对照组相比,差别有统计学意义。结论 MS-275体外抑制口腔鳞状细胞癌生长,呈时间-剂量依赖性,并促进细胞凋亡,阻滞细胞周期。     

端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的探讨端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法反义寡核苷酸(AS-ONS)作用于Tca8113细胞;采用MTT法测定AS-ONS对Tca8113细胞的毒性;倒置相差显微镜观察细胞生长状况及形态学改变;透射电镜观察细胞超微结构;测定Tca8113细胞端粒酶活性。结果AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,其生长抑制随剂量的增加而增强,具有浓度依赖性;AS-ONS对于Tca8113细胞端粒酶活性抑制作用具有时间依赖性。不同浓度AS-ONS作用于Tca8113细胞,其细胞毒性作用较弱;在倒置显微镜下可见AS-ONS组随药物浓度增高,细胞生长出现抑制。透射电镜观察到AS-ONS组作用的细胞细胞膜破损,细胞核内染色质凝聚,边集,并穿过核膜溢入胞质中,胞质部分溶解,线粒体空胞变性;AS-ONS对端粒酶活性抑制效果非常明显。结论反义寡核苷酸AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,并具有剂量依赖性和时间依赖性;靶向于端粒酶RNA的反义寡核苷酸可明显地抑制Tca8113细胞端粒酶活性,细胞增殖受到明显抑制。     

加热对人舌癌Tca8113细胞尿激酶型纤溶酶原激活物表达的影响

目的　研究加热对人舌癌Tca8113细胞尿激酶型纤溶酶原激活物(UPA)表达的影响。方法　采用免疫组织化学染色和流式细胞术检测Tca8113细胞在不同加热温度下(37℃、40℃、43℃、45℃)UPA表达情况。结果　与37℃组相比,40℃、43℃组加热后Tca8113细胞UPA表达明显下降(P<0·05),而45℃组UPA表达下降,但无统计学意义(P>0·05)。结论　口腔鳞癌局部热疗不会促进侵袭、转移,还会对肿瘤的侵袭、转移有抑制作用。     

全反式维甲酸和三氧化二砷对人口腔鳞癌细胞系KB细胞周期的影响

目的研究全反式维甲酸（all-trans retinoi cacid,ATRA）和三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）诱导分化对人口腔未分化鳞癌细胞系KB细胞周期的影响及意义。方法采用流式细胞技术观察人口腔未分化鳞癌细胞系KB细胞经不同浓度ATRA和As2O3诱导分化后96h时的细胞周期的变化。结果ATRA作用于KB细胞后,加药组与对照组相比,被阻断在G1期的细胞比率轻度升高,S期比率下降,抑制率随浓度增高无明显升高的趋势。As2O3三个不同浓度作用KB细胞96h时,没有明显改变各细胞周期所占的比例。抑制率随作用浓度的增加而升高。结论ATRA和低浓度As2O3对人口腔未分化鳞癌细胞系KB细胞具有诱导分化作用,ATRA诱导KB细胞分化可能与G1、G0期阻滞有关。     

PTEN基因联合多西环素抑制黏液表皮样癌细胞系端粒酶活性的研究

目的探讨外源性PTEN抑癌基因联合多西环素对人黏液表皮样癌细胞系端粒酶活性的影响。方法用脂质体将野生型PTEN基因导入黏液表皮样癌细胞系,再用不同质量浓度的多西环素处理细胞,采用MTT比色法测定细胞存活,用端粒酶重复扩增法-酶联免疫吸附（TRAP-ELISA）测定细胞端粒酶活性。结果与对照细胞比较,野生型PTEN基因明显增加癌细胞对多西环素的敏感性,增敏比为1.65～4.75倍。PTEN基因转染或多西环素诱导癌细胞端粒酶活性明显下降（P＜0.05）,二者联合应用对癌细胞端粒酶活性抑制更为显著（P＜0.01）。结论PTEN抑癌基因联合多西环素对人黏液表皮样癌细胞系端粒酶活性具有显著的协同抑制效应。     

顺铂诱导颊癌细胞凋亡及凋亡分子(Apo-1)表达的实验研究

目的:研究细胞毒类化疗药——顺铂诱导人颊癌细胞凋亡发生的规律以及凋亡分子Apo-1的表达。探讨口腔癌化疗的细胞凋亡机制。方法:以建株人颊癌细胞系BcaCD885为对象,采用光镜、电镜以及流式细胞术等手段观察顺铂诱导颊癌细胞凋亡的形态特征及规律,同时检测顺铂对颊癌细胞Apo-1表达的影响。结果:顺铂作用后的颊癌细胞出现典型的凋亡细胞形态学特征;顺铂诱导颊癌细胞凋亡呈现时间及剂量依赖性效应关系;顺铂能上调颊癌细胞Apo-1的表达。结论:细胞凋亡可能是顺铂杀灭颊癌细胞的重要机制,Apo-1在顺铂诱导颊癌细胞凋亡中可能起着关键性调节作用     

大鼠颊黏膜鳞癌细胞系端粒酶活性与其转移相关性的研究

目的：检测SD大鼠颊黏膜鳞癌细胞系SDSCC—B与其单克隆细胞系Rca—B细胞的端粒酶活性，分析其对细胞转移能力的影响。方法：采用单细胞克隆培养法筛选细胞系SDSCC—B，建立单克隆来源的细胞系Rca—B；分别检测2个细胞系端粒酶的活性：以Tca8113和Tb细胞系做阳性对照。2个细胞系经裸鼠尾静脉注射后，观察其实验性肺转移情况。检测结果采用SPSS11．0．1软件包分别进行q检验和t检验。结果：端粒酶活性检测结果显示，2个细胞系的端粒酶活性均为强阳性．显著高于大鼠正常颊黏膜细胞，差别均具有统计学意义（P〈0．01）；Rca—B端粒酶活性高于SDSCC—B细胞，差别具有统计学意义（P〈0．05）；同时。Rca—B细胞实验性肺转移能力较后者高，Rca—B组与SDSCC—B组肺重，体重的比值差别具有统计学意义（P〈0．05）。结论：SD大鼠细胞系SDSCC—B和Rca—B均具有高转移特性，端粒酶活性的表达与转移能力有关，Rca—B的转移能力更强。     

顺铂—白蛋白微球舌动脉导向治疗舌鳞癌的药物释放研究

目的　研究顺铂—白蛋白微球 (CDDP_AMS)舌动脉导向治疗舌癌时 ,顺铂 (DDP)在体内和肿瘤局部的释放情况。方法　采用自行研制的平均粒径为 5 6 3μm的CDDP_AMS 10 0mg(含CDDP 13 6mg) ,经舌动脉推注治疗舌部鳞癌患者 7例 ,分别测定患者外周静脉血和肿瘤切除标本组织匀浆中的铂含量 ,并与单纯CDDP给药组患者相比较 ,分析CDDP_AMS药物释放的特点。结果　CDDP_AMS舌动脉推注治疗舌部鳞癌组 ,患者外周静脉血平均血药浓度在 90min时达峰值 ,10d时血药浓度尚可测到 ;肿瘤局部药物浓度可较长时间维持恒定 ,到第 17天时尚可测到。结论　CDDP_AMS具有很强的缓释作用 ,起到了药物“贮存站”作用 ,达到肿瘤局部长时间高浓度、全身外周血低浓度的效果 ,消除了CDDP全身大剂量用药时的毒副作用 ,值得推广应用     

ICAM-1和LFA-1单抗对口腔鳞癌肿瘤浸润淋巴细胞杀伤活性的影响

目的　研究ICAM-1/LFA-1单抗阻断对口腔鳞癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)对自体肿瘤细胞杀伤活性及分泌TNF-α的影响。方法　从15例口腔鳞癌组织中分离TIL并培养,用流式细胞术检测新鲜分离和激活的TIL细胞上ICAM-1和LFA-1的表达水平;比较用ICAM-1/LFA-1单抗阻断前后TIL对自体肿瘤细胞杀伤活性及产生TNF-α 水平的影响。结果　激活的TIL较新鲜分离的TIL细胞ICAM-1和LAF-1的表达显著增加(P<0·05);阻断ICAM-1, TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性无显著改变;阻断ICAM-1和LAF-1后,TIL分泌TNF-α无显著差异(P>0·05),但TIL 对自体肿瘤细胞的杀伤活性显著降低(P<0·05)。结论　anti-LFA-1单克隆抗体(McAb)可能通过干扰抗原非特异性的粘附过程而发挥作用。     

颊黏膜鳞癌cN_0患者的颈部处理

目的　探讨颊黏膜鳞癌cN0 患者的颈部处理原则。方法　对四川大学华西口腔医院颌面外科1 980～ 2 0 0 0年收治的 1 0 1例颊黏膜鳞癌cN0 患者进行回顾性研究。所有患者均行原发灶切除加同期或二期颈清扫术 ,有的患者还兼行化疗、放疗。术后淋巴结作病理学检查 ,随访 3年以上。结果　 101例颊黏膜鳞癌cN0 患者中有17例发生颈淋巴结转移 ,淋巴结隐匿性转移 (OM)率为16.83% ,且随临床T分期的增高而增高 ,T3和T4期的隐匿性转移率分别为18.18%和 52.00% ;转移淋巴结主要分布于颌下淋巴结组 (41.18% )和颈深上淋巴结组(29.41%)。结论　颊黏膜鳞癌颈部隐匿性转移率较高 ,对T3,4 期的cN0 颊黏膜鳞癌患者应考虑行选择性同期全颈清扫术。