蛋白激酶C-δ在热诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡中的作用研究

目的 探讨热诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡过程中蛋白激酶C-δ(PKC-δ)的作用.方法 应用PKC-δ活化抑制剂Rottlerin和等体积的Rottlerin溶剂二甲基亚砜(DMSO)分别预处理Tca8113细胞30min后,43℃水浴法热诱导Tca8113细胞0、40、80、120 min,流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位强度变化,酶标仪比色法检测Caspase-3活性,Western杂交分析PKC-δ的活化.结果 Rottlerin抑制热诱导的PKC-δ裂解活化;抑制热诱导Tca8113细胞凋亡、降低线粒体膜电位及Caspase-3活性.相同40、80、120 min加热时间,经Rottlerin与未经Rottlerin预处理的Tca8113细胞相比,两者凋亡率、线粒体膜电位及Caspase-3活性在统计学上有显著性差异(P<0.01)..结论 活化的PKC-8可促进热诱导Tca8113细胞凋亡,PKC-δ裂解活化是热诱导Tca8113细胞凋亡的机制之一.     

nm23-H1基因转染前后人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中蛋白激酶C转位的变化

目的 研究nm23-H1基因转染诱导人舌鳞状细胞癌(以下简称舌鳞癌)Tca8113 细胞凋亡过程中蛋白激酶C-θ(PKC-θ)的作用.方法 采用脂质体转染法将真核表达载体pAdEasy-nm23-H1 转染人舌鳞癌Tea8113细胞株.应用PKC-θ活化抑制剂 Calphostin C 和 DMSO 预处理细胞30 min 后,常规培养24 h,倒置显微镜观察细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot分析Tca8113细胞中PKc-θ裂解活化状况;酶标仪(ELISA)检测Caspase-3的相对活性.结果 人舌鳞癌Tea8113 细胞胞浆中及核周存在PKC-θ的表达,nm23-H1基因转染后PKC-θ从胞浆、核周转位到细胞核内表达.nm23-H1基因转染可导致PKC-θ的裂解活化,形成功能性的催化片段,而Calphostin C 抑制转染诱导的PKC-θ裂解活化.nm23-H1基因转染后,Calphostin C 预处理组和DMSO预处理组Tca8113 的凋亡率、Caspase-3的活性增加,两组间有明显差异(P<0.05).结论 nm23-H1诱导细胞凋亡过程中有PKC-θ的裂解活化,PKC-θ是 nm23-H1 诱导舌鳞癌 Tea8113 细胞株凋亡过程中的参与者,PKC-θ激活Caspase-3诱导细胞凋亡是nm23-H1基因诱导肿瘤细胞凋亡机制之一.     

超声加热诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的机制探讨

目的:通过检测超声加热处理后Tca8113细胞凋亡的主要相关参数变化,探讨超声加热诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法:应用超声热辐射系统,分别对Tca8113细胞进行不同温度、时间的加热处理,流式细胞仪连续检测42℃超声加热10min后Tca8113细胞早期凋亡和继发性坏死的动态变化,以及不同处理组的线粒体跨膜电位(ΔΨm)、Caspase-3活性的变化。采用SAS6.12统计软件包进行方差分析,比较各组均数间的显著性水平。结果:42℃超声加热(10min)Tca8113细胞后1h,即检测到细胞早期凋亡,6～8h达到高峰,以后迅速下降,12h后保持在较低水平,细胞的继发性坏死伴随着凋亡出现,在高水平保持一段时间,10h后开始下降。其与早期凋亡呈正相关(r=0.7909,P=0.0064);无论温度梯度(38℃～44℃,10min)还是时间梯度(42℃,10min～60min)的超声加热,均能导致ΔΨm显著降低(P<0.01)、Caspase-3活性显著升高(P<0.01),且两者具有显著相关性(温度梯度组r=0.89189,P=0.0029,时间梯度组r=0.9679,P=0.0003)。结论:超声加热能诱导Tca8113细胞凋亡,导致ΔΨm降低、Caspase-3活性水平升高。说明超声加热通过线粒体-Caspase途径,诱导Tca8113细胞凋亡。     

脱落酸对Tca8113细胞诱导分化影响的体外实验

目的探讨植物激素中脱落酸（ABA）对人舌鳞癌Tca8113细胞的诱导分化作用。方法采用脱落酸处理Tca8113细胞,观察Tca8113细胞生长和形态变化,SABC免疫组化检测细胞表面分化标志物Involucrin、RARβ及原位杂交检测Caspase- 3 mRNA的表达变化,并比较细胞表面分化标志物的表达水平与Caspase- 3 mRNA表达两者间相关性。结果Tca8113细胞经ABA作用后,细胞生长抑制明显（P<0.05）,Tca8113细胞表现出向正常细胞转化的趋势。脱落酸作用24 h时细胞Involucrin、RARβ蛋白以及Caspase- 3 mRNA表达均增高,不同浓度实验组中其表达存在显著性差异（P<0.05）。1×10-2mmol/L ABA作用12 h和24 h时,Involucrin、RARβ和Caspase- 3 mRNA表达之间呈正相关（P<0.05）。结论脱落酸可通过提高Involucrin、RARβ表达水平,激活Caspase- 3 mRNA的表达,从而促进肿瘤细胞分化及凋亡。     

热疗对人Tca8113细胞侵袭能力及基质金属蛋白酶-13和钙离子结合蛋白S100A4表达的抑制作用

目的研究热疗对Tca8113细胞的侵袭能力及侵袭转移相关蛋白---基质金属蛋白酶-13（MMP-13）及钙离子结合蛋白S100A4（S100A4）表达的影响。方法Tca8113细胞分别经43℃加热0、40、80、120 min及37、41、43、45℃加热80 min,用体外侵袭实验评价各组细胞的侵袭能力;Tca8113细胞爬片经43 ℃分别加热0、40、80、120 min,用免疫细胞化学染色法检测各组细胞MMP-13及S100A4的表达变化;Tca8113细胞分别经43℃加热0、40、80、120 min及37、41、43、45 ℃加热80 min,Western blot法检测各组细胞MMP-13及S100A4的表达变化。结果随加热时间延长或加热温度升高,Tca8113细胞侵袭率（即侵袭细胞数占全部细胞的百分比）依次递减,除43 ℃加热40、80 min组之间及41、43℃加热80 min组之间的差异无统计学意义（P>0.05）外,其余各组间的差异均有统计学意义（P<0.05）;随着加热时间延长,Tca8113细胞的细胞浆内MMP-13及S100A4的表达强度呈现递减趋势;随着加热时间延长或加热温度升高,Tca8113细胞的MMP-13及S100A4含量逐渐降低,除43 ℃加热40、80 min组之间及41、43 ℃加热80 min组之间外,其余各组间的差异均有统计学意义（P<0.05）。结论热疗能抑制Tca8113细胞的侵袭能力,其机制可能与热疗抑制了细胞内MMP-13及S100A4的表达有关。     

三氧化二砷诱导口腔鳞癌细胞凋亡的机制探讨

目的：探讨三氧化二砷诱导口腔鳞癌细胞凋亡的机制。方法：通过对两种舌鳞癌细胞系OSC－19，Tca8113经三氧化二砷作用后电镜下形态学改变、流式细胞仪测得的细胞周期变化、线粒体跨膜电位改变、凋亡相关蛋白BCL－2、p16、p53、Caspase-3及PARP变化；初步探讨三氧化二砷诱导舌鳞癌细胞系凋亡的机制。结果：（1）三氧化二砷抑制口腔鳞癌细胞生长通过毒性损伤和诱导凋亡双重途径来实现；（2）经三氧化二砷作用后，western blot检测bcl-2、p53、p16基因表达蛋白无变化，而caspase-3,PARP发生改变；（3）经三氧化二砷作用后，两类舌鳞癌细胞系线粒体跨膜电位明显下降，细胞周期G2－M期阻滞，且与凋亡产生同步。结论：（1）线粒体和微管可能是三氧化二砷的主要作用位点，为三氧化二砷发挥凋亡诱导效应的启动因素；（2）Caspase-3途径的激活可能为三氧化二砷诱导口腔鳞癌细胞凋亡的关键途径之一。     

莪术醇通过激活p38 MAPK介导的线粒体凋亡途径诱导人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞凋亡

目的:探讨莪术醇对人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞凋亡的影响及其可能机制.方法:采用不同浓度莪术醇处理Tca-8113细胞,MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平和细胞线粒体膜电位变化;Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3和p38 MAPK信号通路相关蛋白p-p38MAPK、p38MAPK以及线粒体和细胞质中Cyt C等蛋白表达水平.采用p38 MAPK抑制剂SB203580联合莪术醇处理Tca-8113细胞,流式细胞术检测细胞凋亡水平和细胞线粒体膜电位变化;Western blot检测细胞中p38 MAPK信号通路相关蛋白p-p38MAPK、p38MAPK表达水平.结果:莪术醇可呈时间和剂量依赖性抑制Tca-8113细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位,并下调Bcl-2和线粒体中Cyt C蛋白表达水平,上调Bax、Cleaved-caspase-3、p-p38MAPK及细胞质中Cyt C蛋白表达水平,而对p38 MAPK蛋白表达水平无影响.然而,SB203580干预可抑制莪术醇对Tca-8113细胞凋亡、线粒体膜电位改变、p38 MAPK信号通路激活的诱导作用.结论:莪术醇可促进Tca-8113细胞凋亡,其机制可能与激活p38 MAPK介导的线粒体凋亡途径有关.     

塞来昔布抑制Tca8113细胞释放PGE_2及抑制细胞增殖的作用

目的研究选择性环氧化酶2抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞生长抑制、诱导细胞凋亡与释放前列腺素E2（PGE2）的影响。方法采用四唑氮蓝（MTT）法检测细胞增殖,AnnexinV-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测PGE2含量,AO/EB荧光双染观察凋亡细胞的形态学变化。结果塞来昔布以剂量依赖方式抑制Tca8113细胞生长及释放PGE2,其抑制PGE2释放与抑制细胞生长及诱导细胞凋亡均呈负相关,AO/EB荧光双染观察发现经塞来昔布处理24h后,细胞出现典型的凋亡变化,凋亡细胞多见。结论塞来昔布抑制人舌鳞癌Tca8113细胞生长及诱导细胞凋亡与其抑制PGE2释放密切相关。     

高迁移率族蛋白N2抑制口腔鳞状细胞癌增殖作用的体外研究

目的 以人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113为实验模型,初步探讨高迁移率族蛋白N2（HMGN2）抗口腔鳞状细胞癌的作用。方法 大量培养重组人HMGN2表达载体大肠杆菌BL21,用异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖苷（IPTG） 诱导HMGN2的表达,产物用B-PER GST Fusion Protein Purification Kit进行纯化。在细胞培养基中加入不同质量浓度的HMGN2,通过MTT、Hoechst 33342荧光染色、流式细胞术和Western-blot法检测其凋亡效果及抗凋亡的分子机制。结果 经MTT检测证明HMGN2能显著抑制Tca8113细胞的生长,通过Hoechst 33342荧光染色、流式细胞术和 Western-blot检测证明HMGN2能使Tca8113的细胞形态发生改变,并且能使Tca8113细胞阻滞于细胞周期的S期,促进Tca8113细胞凋亡。结论 HMGN2可以促进人口腔鳞状细胞癌细胞的凋亡。     

盐酸小檗碱抗假丝酵母菌及抗肿瘤活性研究

目的:研究盐酸小檗碱抗假丝酵母菌及抗肿瘤活性,为临床用药提供依据.方法:依据NCCLS的M27-A2标准方案测定标准株对盐酸小檗碱的药物敏感性;MTT 法测定盐酸小檗碱对细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测盐酸小檗碱对人舌癌细胞Tca8113凋亡率的影响.结果:盐酸小檗碱具有抗假丝酵母菌活性,能抑制Tca8113细胞生长;浓度为160、80、40、20、10 μg/ml的盐酸小檗碱作用于Tca8113 细胞48 h后凋亡率分别为32.3%、24.6%、13.3%、6.35%、6.51%,对照为8.46%.结论:盐酸小檗碱(C20H18ClNO4)体外具有抗假丝酵母菌活性,且能抑制舌癌细胞Tca8113的生长,诱导舌癌细胞Tca8113的凋亡.     

热疗对人Tca8113细胞侵袭能力及基质金属蛋白酶-13和钙离子结合蛋白S100A4表达的抑制作用

目的 研究热疗对Tca8113细胞的侵袭能力及侵袭转移相关蛋白——基质金属蛋白酶-13 (MMP-13)及钙离子结合蛋白S100A4 (S100A4)表达的影响.方法 Tca8113细胞分别经43℃加热0、40、80、120 min及37、41、43、45℃加热80min,用体外侵袭实验评价各组细胞的侵袭能力;Tca8...     

PI3K/Akt信号通路抑制剂在舌鳞癌细胞系增殖和凋亡中的作用

目的:探讨PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对舌鳞癌细胞系Tca8113增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法:LY294002处理Tca8113细胞,MTT法观察对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot及ELISA分析LY294002作用前后p-Akt及Akt蛋白的表达。结果:随LY294002浓度(0、10、25、50、75μmol/L)的增加及作用时间(24、48 h)的延长,实验组Tca8113细胞的增殖抑制率逐渐增大,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈正相关LY294002干预细胞24 h后,细胞凋亡率显著高于未干预组,p-Akt蛋白表达明显降低,而总Akt表达无显著改变。结论:LY294002可诱导Tca8113细胞凋亡,其作用机制与抑制PI3K/Akt信号通路的效应分子p-Akt的活化有关。     

4，5，7-三羟基异黄酮和阿霉素诱导人舌癌细胞株Tea8113凋亡的研究

目的观察4,5,7-三羟基异黄酮（Genistein）和阿霉素（ADM）单用和联用对诱导体外培养的人舌癌细胞株rrca8113凋亡的影响。方法以体外培养的人舌癌细胞株Tca8113为实验模型,Genistein与ADM联合作用于癌细胞,倒置相差显微镜下观察药物处理后癌细胞的细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝比色法分析药物对癌细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期分布。结果Genistein和ADM两者单用对癌细胞均有生长抑制作用,且随剂量升高抑制趋势增强（P〈0．05）。两药联用对癌细胞的抑制作用优于两者的单纯相加（Q〉1）。联合用药使肿瘤细胞S期延长,G2／G1值缩小,凋亡率明显升高（P〈0．05）。结论Genistein与ADM联用对Tca8113细胞具有协同抑制作用,其作用机理可能是联合用药促使肿瘤细胞S期延长,G2／G1值缩小,提高了ADM的诱导凋亡效应。     

加热联合黄体酮对人舌癌耐药细胞株Tca8113/BLM耐药性的影响

目的:研究加热(hyperthermia, HT)联合黄体酮(progresterone, Prog)对人舌癌细胞Tca8113和耐药细胞Tca8113/BLM耐药性的影响.方法:采用MTT法检测加热41 ℃ 1 h后联合Prog对人舌癌亲本细胞Tca8113和耐药细胞Tca8113/BLM化疗药物的敏感性;流式细胞仪(FCM)检测细胞内阿霉素(ADM)浓度聚积以及细胞膜上P-gp和MRP的表达.结果:与黄体酮作用细胞相比,加热41 ℃ 1 h联合2 μmol/L Prog作用细胞后,Tca8113和Tca8113/BLM细胞的IC_50显著下降(P<0.01),且各组之间均有显著差异(P<0.01),ADM浓度聚积在2 种细胞中明显增加(P<0.01),细胞膜上的P-gp 和MPR荧光强度显著下降(P<0.01).结论:加热联合Prog能协同增加细胞内药物浓度的聚积,显著提高细胞对化疗药物BLM的敏感性,其二者协同作用与降低细胞膜上的P-gp和MRP的表达有关.     

nm23-H1提高舌癌细胞Tca8113对顺铂化疗敏感性可能机制的研究

目的研究nm23-H1提高顺铂化疗敏感性的可能机制。方法实验分为nm23-H1转染组和未转染组,用MTT法检测顺铂对舌癌细胞的杀伤率;流式细胞仪检测细胞凋亡变化;用流式细胞仪检测线粒体结合罗丹明荧光强度,检测线粒体膜电位的变化;等离子质谱仪检测细胞内铂离子浓度变化。结果nm23-H1过表达可以明显提高顺铂对舌癌细胞的杀伤率,使细胞凋亡增强,线粒体膜电位降低,提高细胞内铂离子浓度。这种作用可以被哇巴因（Na+/K+-ATP酶的抑制剂）抑制。结论nm23-H1可提高顺铂对舌癌细胞化疗的敏感性,其可能机制是nm23-H1降低线粒体膜电位,铂离子进入细胞内增加,导致细胞凋亡或坏死。     

银杏酸对口腔鳞癌多药耐药的影响

目的以卡铂（CBP）和平阳霉素（PYM）为诱导物,构建耐药细胞株Tca8113/CBP和Tca8113/PYM,再通过银杏酸（GAs）与化疗药物联用探讨银杏酸对耐药细胞多药耐药（MDR）的影响。方法免疫组织化学检测P-糖蛋白（P-gp）的表达,MTT法确定耐药细胞的耐药指数;不同质量浓度的GAs作用于耐药细胞及亲本细胞,通过MTT法检测对它们的增殖抑制效应,确定GAs的无细胞毒性质量浓度并观察GAs对耐药细胞的逆转作用;GAs与耐药细胞联用诱导细胞一段时间后,再次通过MTT法检测其耐药指数。结果免疫组织化学结果显示,耐药细胞的P-gp阳性表达率明显高于亲本细胞,MTT法确定GAs的无细胞毒性质量浓度为10 μg·mL-1;GAs对Tca8113/CBP和Tca8113/PYM细胞的逆转倍数分别是2.94和2.43,与GAs联用前Tca8113/CBP和Tca8113/PYM细胞的耐药指数分别是3.24和11.9,联用后的耐药指数分别是2.18和4.43。结论本实验成功诱导出了耐药细胞株Tca8113/CBP和Tca8113/PYM,并将银杏酸与化疗药物联用,进一步证实了两者的共用能够增强对Tca8113/CBP和Tca8113/PYM细胞的增殖抑制作用,无细胞毒质量浓度的GAs对Tca8113/CBP和Tca8113/PYM细胞的耐药性有部分逆转作用,且共用一段时间后耐药细胞的MDR水平有所下降。