实时荧光PCR技术在手足口病检查中的应用

目的采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)法检测手足口病患儿病原体。方法收集433例疑似手足口病患儿的粪便标本进行肠道病毒通用型、肠道病毒71型(EV-71)和柯萨奇病毒16型(CA-16)鉴别与分析。结果实时荧光PCR法检测433例患儿肛拭子标本使用通用型试剂盒检出366例阳性,其中66例为EV-71感染,151例为CA-16感染。结论 EV-71和CA-16肠道病毒是手足口病的主要病原体,该地区2011年以CA-16感染为主,实时荧光PCR技术对手足口病的病原诊断具有重要价值。     

实时荧光RT-PCR快速检测肠道病毒RNA及其临床意义

目的应用实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法快速检测肠道病毒RNA,为手足口病的早期诊断提供临床依据。方法采用实时荧光RT-PCR法检测手足口病患儿粪便、脑脊液中肠道病毒通用型、柯萨奇病毒A组16(CA16)和肠道病毒71型(EV71)RNA。结果 234份粪便标本中肠道病毒通用型阳性214例,检出率为91.45%;CA16阳性56例,阳性率为23.50%;EV71阳性87例,阳性率37.17%,其中有4例同时检出CA16和EV71。2份脑脊液标本中3种肠道病毒核酸结果均为阴性。结论实时荧光RT-PCR能对肠道病毒RNA进行快速检测,为手足口病的早期诊断提供诊断依据,并对手足口病患儿的病情分析、治疗及预后观察起到指导作用。     

广西壮族自治区南宁市50例非手足口病幼儿肠道病毒感染状况分析

目的了解肠道病毒在非手足口病幼儿中的感染情况,为预防控制手足口病在儿童中的流行提供依据。方法采用实时荧光定量PCR方法,对50例≤3岁儿童的肛拭子标本共50份进行肠道病毒、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CoxA16)核酸检测。结果共检出17份肠道病毒核酸阳性,阳性率为34%,均为其他肠道病毒。结论健康儿童中存在其他肠道病毒的隐性感染。开展手足口病流行病学和病原学研究,将有助于提出更好的预防和控制措施。     

2011年贵阳地区手足口病病原学检测结果分析

目的:了解贵阳地区2011年4-10月手足口病流行期间婴幼儿手足口病病原学分布情况及流行特征.方法:对2011年4-10月在我院住院期间临床诊断为手足口病病例采集肛拭子标本1 379份,运用荧光定量PCR法进行肠道通用型、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CoxA16)核酸检测.结果:肠道病毒通用型核酸、EV71和CoxA16核酸检出率分别为46.99％、5.80％、2.18％.手足口病发病以幼儿为主,在5岁以下儿童是疾病高发年龄段,4～6月为发病高峰期,肠道病毒阳性检出率男性高于女性;其他肠道病毒和EV71为主要病原,重症病例和非重症病例感染的主要病原体型别有差异.其他肠道病毒和CA16为轻症病例的主要病原,EV71则为重症病例的主要病原.结论:贵阳地区儿童手足口病的主要病原体是未知的其他肠道病毒和EV71,EV71更易引起重症病例的发生.     

2009-2010年江苏省徐州市儿童手足口病病原学检测分析

目的 了解江苏省徐州地区2009-2010年儿童手足口病流行的病原学特征。 方法 2009年3-8月和2010年1-12月共采集徐州儿童医院门诊、住院及常规监测的511例疑似手足口病(HFMD)儿童患者的咽拭、肛拭标本,提取病毒RNA,用实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法同时进行肠道病毒(EV),肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16(Cox A16)的特异性基因检测。 结果 511例疑似手足口病患儿的标本中,总肠道病毒阳性288例,占56.36％; 288个肠道病毒核酸阳性病例中,EV71核酸阳性202例,Cox A16核酸阳性55例,构成比分别为70.14%和19.10%。5岁儿童感染的肠道病毒有EV71型、Cox A16型及非EV71非Cox A16的其他肠道病毒感染,5岁儿童则只有EV71感染病例。 结论 2009-2010年徐州地区儿童手足口病患儿以1~3岁儿童为主,其主要病原是肠道病毒EV71型,其次是Cox A16型。     

手足口病患者柯萨奇病毒核酸检测结果分析

目的探讨手足口病患者柯萨奇病毒核酸检测的临床应用价值。方法利用实时荧光聚合酶链反应技术,以EV71/CA16基因组编码区的高度保守区为靶区域,设定特异性引物及荧光探针,通过一步法RT-PCR扩增对EV71RNA/CA16RNA进行检测。结果在428份患者标本中,EV71-RNA阳性136份,CA16-RNA阳性6份,其中有1例患者既是EV71-RNA咽拭子和肛拭子均阳性又是CA16-RNA咽拭子阳性。而有40例(80份标本)患者EV71-RNA咽拭子和肛拭子均阳性,46份EV71-RNA单独肛拭子阳性,10份EV71-RNA单独咽拭子阳性。在6份CA16-RNA阳性患者标本中,4份为肛拭子阳性,2份为咽拭子阳性。结论手足口病患者柯萨奇核酸检测对重症患者判断预后有重要的指导意义,对指导临床合理制订治疗方案有重要的参考价值,值得推广应用。     

荧光RT-PCR同步检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型方法的建立及应用

目的建立快速、灵敏、特异的肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的荧光PCR检测及分型方法。方法针对肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的特异性保守基因vp1基因分别设计一对引物和对应的探针,对荧光RT-PCR反应体系进行优化,验证方法的特异性、灵敏度和重复性,并对临床样品进行检测分析。结果该方法对肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的检测有高度特异性,与甲肝、腮腺炎、风疹、乙型脑炎等病毒均无交叉反应,检测灵敏度可达10拷贝/μl;43例患儿肛拭子标本中肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型检测率分别为37.21%(16/43)和13.95%(6/43)。结论荧光RT-PCR法分型检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的方法具有快速、便捷、特异、灵敏等特点,适用于肠道病毒的早期诊断。     

抚州市CoxA6的流行特征及病原核酸检测结果分析

目的了解抚州市手足口病新的病原构成及流行规律,为预防和控制手足口病提供科学依据。方法用Real-time PCR方法对2018年7月-2019年6月采集的抚州市各县区医疗单位送检的临床诊断手足口病例咽拭子样本696例,进行肠道病毒通用型(EV)、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16型(CoxA16)、柯萨奇病毒A6型(CoxA6)和柯萨奇病毒A10型(CoxA10)核酸检测。结果 696例咽拭子样本中,EV71阳性19例,CoxA16阳性157例,非EV71、非CoxA16型阳性220例,占总阳性的55.56%,Cox A6阳性138例,占非EV71、非CoxA16型阳性的62.73%,还有CoxA10阳性4例;CoxA6阳性病例在性别分布上差异有统计学意义(P0.05)。结论在我市CoxA6型成为非EV71、非CoxA16型手足口病的主要致病毒株,1～2岁儿童为此型病毒感染的高危人群,男孩感染率大于女孩,高发季节在9～11月份和4月份,区域分布明显。     

北京市顺义区2010～2011年手足口病病原学检测结果分析

目的 了解顺义区手足口病流行特征,为手足口病防控工作提供科学依据.方法 对2010～2011年顺义区346例临床诊断为手足口病患者的标本应用实时荧光定量RT-PCR法检测标本中的肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CVA16)、非EV71和CVA16的其他肠道病毒的特异性核酸.结果 346例手足口病患者标本中,肠道病毒阳性率为47.98%(166/346).病原谱构成以CVA16型为主,其构成比为50.00%(83/166),其次为EV71占29.52%(49/166),其他肠道病毒占20.48%(34/166).3种肠道病毒在每月中均有报告,4～7月为手足口病高发期,0～5岁为高风险年龄组.男性阳性率略高于女性,性别比为1.52∶1.散居的散发病例肠道病毒阳性检出率较高.结论 顺义区2010～2011年手足口病发病率较高,CVA16型是优势病毒型.每年春夏季节,应加强对流动人口聚居区5岁以下儿童的手足口病防控工作.     

2012年江西省南昌市手足口病病原学监测结果分析

目的 分析江西省南昌市2012年临床诊断为手足口病患者标本的病原学检测结果,为手足口病的临床诊治和防控提供实验室依据。方法 采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（real time RT-PCR）对2012年1-12月间1028例医院诊断为手足口病的患者标本核酸进行鉴定分型,并统计分析。结果 临床诊断为手足口病的患者标本1028 份中,632 份为肠道病毒通用阳性,总阳性率为61.48%,其中肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A组16型（Cox A16）、EV71 和 Cox A16 混合感染、其他肠道病毒阳性检出率分别为39.0%、10.21%、0.09%和12.16%。病原学检测阳性标本中男女性别比为1.8:1;发病年龄段主要集中在5岁以下儿童（94.36%）,尤其是 3 岁以下男童。结论 2012年南昌地区手足口病的主要病原体为EV71,且较2009-2011年有上升趋势。     

西安地区2011年儿童手足口病病原学分析

目的 对西安地区2011年手足口病病原学进行分析,为手足口病的临床诊断、治疗及防治提供科学依据.方法 采集2011年1月～6月555例(其中男性347例,女性208例,年龄范围8个月～6岁,平均年龄2.6岁)西安市儿童医院临床诊断为手足口病患儿咽拭子标本,采用实时荧光RT-PCR方法检测肠道病毒通用型(EV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16).结果 56例重症患者其中45例由肠道病毒71型(EV71)引起,占重症病例的80.4％(45/56),4例由柯萨奇病毒A组16型(CA16)引起,占重症病例的7.1％(4/56).肠道病毒71型(EV71)阳性率与柯萨奇病毒A组16型(CA16)阳性率差异有统计学显著性意义(x2=273.4,P＜0.0001).结论 西安地区2011年手足口病病原学以肠道病毒71型(EV71)为主,与2010年相比肠道病毒71型(EV71)感染有上升趋势,且高发于3岁以下儿童组,重症患者与2010年相同,主要由肠道病毒71型(EV71)引起.     

实时荧光定量PCR在手足口病病原体检测中的应用

目的 应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测手足口病的病原体,并通过与病毒学培养法和ELISA法的比较,评价该法对诊断小儿手足口病感染的价值.方法 临床315例手足口病疑似患者和66例手足口病密切接触者的粪便、咽拭子、疱疹液和血清标本,分别采用肠道病毒通用型(EV)和肠道病毒71型(EV71)以及柯萨奇病毒A...     

手足口病病原的荧光PCR法检测及其临床特点——附20例分析

目的：采用荧光PCR法对手足口病患儿进行病原学检测,同时分析手足口病常见的,临床表现特点。方法：收集20例临床确诊手足口病患儿的临床资料,留取其血液和粪便标本,采用3种荧光PCR核酸检测试剂盒分别进行肠道病毒筛选和柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirusA．16,CVA．16）与肠道病毒71型（enterovirus71,EV71）的鉴别,对2种病毒所致的临床表现进行归纳比较。结果：使用3种试剂盒检测20例患儿血液标本均未检出病毒。粪便标本使用通用型试剂盒检出10例（＋）,其中4例为CVA．16感染,5例为EV71感染,发病3d内采集标本（＋）占8／10;EV71与CVA-16感染病例的临床表现相似,主要为发热、口腔溃疡和皮疹,仅2例EV71感染患儿有肺部口罗音,但预后良好,并无心脏和神经系统的严重并发症。结论：发病早期采集粪便用荧光PCR法检测有助于及时作出手足口病的病原学诊断,EV71感染的轻症患者预后良好。     

荧光定量RT—PCR检测手足口病病原及其临床分析

【目的】采用荧光定量RTPCR法检测手足口病患儿病原,并对手足口病临床特点分析。【方法】利用荧光定量PCR核酸检测试剂盒对,临床诊断手足口病的咽拭子、粪便标本32份进行总肠道病毒和EV71、CoxA16检测,并对所致的临床特点分析。【结果】在32份样本中,肠道病毒通用核酸阳性22份,肠道EV71病毒核酸阳性10份,其他肠道病毒核酸阳性12份,无CoxA16核酸阳性;EV71与其他肠道病毒的早期临床特点和辅助检查结果基本相同。【结论】荧光定量RT-PCR法可早期对手足口病的病原学诊断,不同病原早期临床特点和辅助检查结果基本相同。     

某地区2010年手足口病患者肠道病毒RNA实时荧光逆转录PCR检测结果分析

目的用实时荧光定量RT-PCR技术检测惠州市2010年手足口病患者肠道病毒RNA,了解手足口病病例肠道病毒的感染情况,为制定预防和控制肠道病毒感染策略提供依据。方法采集2010年1～12月本院送检的1712例手足口病患者的粪便、肛拭子、咽拭子和脑脊液等标本5849份,应用荧光RT-PCR技术检测样本中的肠道病毒(EV)、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CA16)。结果男性及女性EV、EV71和CA16感染率分别为68.15%、43.61%、5.56%和61.23%、37.03%、5.70%;共检出1123份EV阳性标本,705份EV71阳性标本,96份CA16阳性标本,阳性率分别为60.28%、33.35%和5.13%;4～6月和7～9月是手足口病发病高峰期,感染肠道病毒EV、EV71型、CA16型人数分别占所有肠道病毒EV、EV71、CA16型感染者的36.33%、49.50%、42.70%和42.56%、38.72%、40.63%;0～4岁的儿童是手足口病的高发人群,占所有患者的85.46%。结论惠州市2010年手足口病的病原以肠道病毒71型为主,夏秋季节是手足口病发病高峰期,0～4岁儿童是感染肠道病毒的高危人群。     

360例手足口病毒核酸检测结果分析

目的了解四川省内江地区手足口病毒流行情况,为该病的预防提供依据。方法采用实时荧光探针聚合酶链反应(RT-PCR)对360例咽拭子标本进行肠道病毒通用型(EV-U)、新型肠道埃可病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)检测。结果检出EV-U阳性病例297例,阳性率82.5%,EV71阳性病例218例,阳性率60.5%,Cox A16阳性病例70例,阳性率19.4%。结论 2010年6月20日至2011年12月30日期间该地区流行的手足口病病原体以EV71为主。     

2010年广东省深圳市首例手足口病死亡病例的病原学研究

目的 对广东省深圳市2010年首例临床诊断为手足口病死亡患儿的粪便和咽拭子标本进行病原体型别鉴定,从而追踪其病原的可能来源。 方法 先用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)方法检测病毒核酸,再用细胞培养方法从粪便和咽拭子标本中分离病毒,并将分离到的毒株提取核酸后,用普通RT-PCR方法分别扩增肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)的VP1区全长基因并进行序列测定,序列测定结果与不同国家和地区的肠道病毒株A、B、C基因型代表株进行同源性比较和进化树分析。 结果 该病例的2份标本均为EV71核酸阳性,Cox A16核酸阴性;毒株基因经过核苷酸和氨基酸同源性分析,确定该病例病原体为EV71 C4亚型。 结论 2010年深圳市首例手足口病死亡病例的病原体为EV71的C4亚型。     

手足口病1073例病原检测分析

目的分析手足口病低龄儿童病例的肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CA16）的感染状况。方法采集手足口病（HFMD）疑似病例咽拭子标本,采用实时荧光定量PCR方法检测患者EV71和CA16感染情况,并分析患者性别、年龄分布情况。结果收集到1 073例HFMD儿童疑似病例的咽拭子标本和临床资料,EV71男女总的阳性检出率为46.04%,CA16男女总的阳性检出率为9.04%。结论本次北京地区HFMD疫情的主要病原体包括EV71和CA16,EV71感染率高于CA16,分析结果可为HFMD防治提供参考。     

韶关市1190例手足口病病原体检测结果分析

目的分析韶关地区手足口病病原体分布情况。方法收集2011年1月～12月的1190例手足口病患者的咽拭子,采用实时荧光PCR方法检测肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CoxAl6）。结果在1190份标本中病毒核酸阳性率为11．51％（137／1190）,其中Ev71占60．58％（83／137）,CoxAl6占39．42％（54／137）;6月份高发,占29．08％（346／1190）;男女比例为1．64：1,且0～4岁的患儿占93．11％。结论韶关地区2011年手足口病病原体以Ev71为主,6月份高发,主要分布在0-4岁,男性多于女性,实时荧光PCR可用于手足口病病原体的检测,对手足口病的诊疗和防控具有重兽膏义。     

2013-2016年柳州市手足口病病原监测结果分析

目的 掌握柳州市2013-2016年手足口病病原学流行特征及病原谱变化情况,为制定柳州市手足口病预防控制措施提供科学依据.方法 收集柳州市2013-2016年医院和县级疾病预防控制中心送检的手足口病病例咽拭子、肛拭子及疱疹液标本,应用实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR) 技术对标本中的肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16 型(CoxA16)及非EV71和CoxA16的其他肠道病毒(EV)进行核酸检测.结果 2013-2016年共收集临床诊断手足口病病例标本3 503份,实验室确诊EV阳性标本2 720份;2013-2016年柳州市每年手足口病主要病原体均有变化,除EV71和CoxA16外,还存在着较高比例的EV;手足口病发病有明显季节性,主要集中在每年3-9月;5岁以下儿童为主要发病的人群,其中1～3岁儿童发病最多,男性发病例数高于女性;EV71为引起重症及死亡手足口病的主要病原体,死亡病例未见CoxA16.结论 EV是引起柳州市2013-2016年手足口病流行的主要病原体,但每年病原谱在不断变化,EV71是引起重症及死亡手足口病的主要病原体.