实时荧光定量PCR技术检测患儿手足口病病原体

目的采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术检测患儿手足口病原体,以了解本地该病病毒流行特征,为防治手足口病提供病原学诊断依据。方法收集手足口病疑似病例65例（按年龄组分为小于3岁组39例,3~6岁组26例）患儿的咽拭子、疱疹液,用FQ-PCR技术检测标本中肠道病毒通用型（EV）、肠道病毒71型（EV71）及柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）,并与ELISA法进行比较。结果 65例手足口病患儿疑似组FQ-PCR检出EV阳性51例,阳性率为78.5%,其中小于3岁34例,3~6岁阳性17例,小于3岁组EV检出率明显高于3~6岁组（P〈0.05）;EV71阳性45例,COXA16阳性16例;咽拭子标本阳性率为72.3%（47/65）;疱疹液标本阳性率为81.25%（13/16）;ELISA法检测EV阳性29例,阳性率为44.6%（29/65）,CoxA16阳性22例,阳性率为33.8%（22/65）。结论采用FQ-PCR技术进行手足口病病原体检测有助于早期、快速的对手足口病做出病原学诊断。2012年安康地区手足口病病原体以EV71为主,CoxA16次之。     

248例手足口病病原体检测结果分析

目的：对2012年3～6月珠海市妇幼保健院248例手足口病病例进行病原体检测和分析。方法收集临床诊断为手足口病病例的标本248份,先用通用引物实时荧光PCR扩增肠道病毒作为初筛手段,然后分别使用EV71和CoxA16型特异性引物对初筛阳性标本进行分类检测并结合临床资料进行综合分析。结果在上述标本中检出肠道病毒215例（阳性率为86．7％）,其中EV71阳性病例为89例,CoxA16阳性病例为48例,分别占肠道病毒阳性病例的41．4％（89／215）、22．3％（48／215）。3岁以下儿童感染率为87．9％（189／215）,重症病例EV71阳性检出率为73．9％（17／23）。EV71和CoxA16阳性检出率与儿童患者的性别无关（P＞0．05）。结论儿童感染手足口病病原体以EV71为主,CoxA16次之,前者易致儿童重症手足口病。3岁以下儿童是该病的高危人群。     

血清淀粉样蛋白A等炎症标志物在不同分型手足口病患儿鉴别诊断中的意义

目的探讨血清淀粉样蛋白A(SAA)、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)等炎症标志物检测在不同分型手足口病患儿鉴别诊断中的意义。方法回顾江西省儿童医院住院部2017年1月-2018年5月确诊为手足口病的患儿,应用实时荧光定量PCR法检测患者咽拭子肠道病毒类型,筛选肠道病毒(EV)通用阳性患儿分为肠道病毒71型(EV71)组191例、A组柯萨柯病毒16型(CA16)组226例和其他肠道病毒组210例,检测并分析各组患儿SAA、PCT、CRP的浓度水平差异,绘制ROC曲线进一步讨论各炎症标志物在鉴别EV71感染手足口病的诊断价值。结果 EV71组患儿SAA和CRP表达水平均低于CA16组,PCT水平显著高于CA16组,差异有统计学意义(P0.05);EV71组患儿SAA、CRP水平显著低于其他肠道病毒组,差异有统计学意义(P0.05);EV16组SAA和CRP水平显著低于其他肠道病毒组,差异有统计学意义(P0.05)。CRP、SAA及联合诊断的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.711、0.857、0.868,SAA单独鉴别EV71与非EV71肠病毒感染手足口病的临界值(Cut off值)为56.3 mg/L。结论血清SAA和CRP可用于鉴别诊断EV71、CA16及其他肠道病毒感染的小儿手足口病;血清SAA在EV71感染手足口病的鉴别诊断价值要优于CRP。     

实时荧光定量PCR检测儿童手足口病肠道病毒EV71

手足口病(HFMD)是因某些不同血清学肠道病毒感染而引起的一种常见急性传染病,患者多为5岁以下的儿童.其传染性强,可致爆发性流行.HFMD本身是一种良性病,发病后临床经过顺利,数日后自愈,不致威胁生命,无后遗症[1-3].     

1728例手足口病病原学检测结果分析及临床意义

目的：了解宜春市手足口病病原学特征，为手足口病的防控提供实验室依据。方法收集全市各区县所采集的手足口病标本及其流行病学资料，运用Real-Time PCR(PCR-荧光探针法)对所采集标本进行EV71、CA16型以及其它EV通用型的核酸检测。结果宜春市手足口病1728例患者中，检出阳性病例数共计1062例，阳性率为61.5%；EV71、CA16和EV通用型核酸阳性率分别为23.9%、15.2%、22.3%；在核酸检测阳性病例中，男性占63.3%，女性36.7%；阳性者年龄以1岁～3岁为主；重症病例的EV71、CA16和EV通用型核酸阳性率分别为55.0%、0.2%、10.0%。结论对手足口病原体的流行病学分析有助于做好手足口病的防控工作。     

实时荧光聚合酶链反应检测患儿手足口病病原体

目的采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测患儿手足口病病原体,为防治手足口病提供依据。方法收集手足口病疑似患儿189例(按年龄分为<3岁组113例、3～5岁组76例)及39例手足口病密切接触儿童的咽拭子、疱疹液,用FQ-PCR检测标本中的肠道病毒通用型(EV)、肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇病毒A组16型(CoxA16),并与酶联免疫吸附试验(ELISA)结果进行比对。结果 189例手足口病患儿疑似组FQ-PCR检测EV阳性141例,阳性率为74.6%,其中<3岁阳性91例、3～5岁阳性50例,3～5岁组EV检出率明显低于<3岁组(P<0.05);EV71阳性135例,CoxA16阳性65例;咽拭子标本阳性率为74.5%(120/161),疮疹液标本阳性率为82.1%(23/28);ELISA检测EV阳性76例(40.2%);39例手足口病密切接触者FQ-PCR检测EV阳性率为33.3%(13/39),ELISA检测阳性率为17.9%(7/39)。结论 FQ-PCR是一种特异性强、灵敏度高、检测较快速、效率高的方法,对检测手足口病病原体及进行相关流行病调研有重要价值。     

实时荧光PCR技术在手足口病检查中的应用

目的采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)法检测手足口病患儿病原体。方法收集433例疑似手足口病患儿的粪便标本进行肠道病毒通用型、肠道病毒71型(EV-71)和柯萨奇病毒16型(CA-16)鉴别与分析。结果实时荧光PCR法检测433例患儿肛拭子标本使用通用型试剂盒检出366例阳性,其中66例为EV-71感染,151例为CA-16感染。结论 EV-71和CA-16肠道病毒是手足口病的主要病原体,该地区2011年以CA-16感染为主,实时荧光PCR技术对手足口病的病原诊断具有重要价值。     

实时荧光定量PCR快速诊断肠道病毒71型感染

目的探寻快速准确早期诊断肠道病毒71型(human enterovirus 71,EV71)感染的方法。方法手足口病患儿871例,采用实时荧光定量PCR检测患儿咽拭子或疱液的EV71感染情况,实时荧光定量PCR检测EV71阳性患儿采用ELISA法检测血清EV71-IgM和EV71-IgG。结果871份标本中,RT-PCR检测EV71感染阳性率为17.91%,其中5月份检测阳性率(24.44%)最高,12月份检测阳性率(4.17%)最低;随机抽取64例RT-PCR检测阳性患儿外周血,EV71-IgM阳性率为51.56%,EV71-IgG阳性率为14.06%。结论 RT-PCR能快速准确诊断EV71早期感染。     

EV71-CA16肠道病毒荧光定量RT-PCR诊断试剂盒的研制

目的研制一种能同时检测EV71,CA16肠道病毒的二联实时荧光定量PCR检测试剂盒,主要用于EV71,CA16肠道病毒的快速检测和流行病学监测。方法设计特异度的EV71型、CA16型基因的引物和探针,优化实时荧光定量PCR检测体系,并研究产品的灵敏度、精密度、稳定性和检测线性范围;同时对2014年5月份收集的26份样品进行检测。结果试验得到了阳性重组质粒,线性范围在5*102 copies/μl～105 copies/μl,该范围内检测结果良好;优化后肠道病毒CA16上下游引物和探针浓度分别为0.48,0.24μmol/L,EV71上下游引物和探针浓度分别为0．40,0.20 μmol/L。敏感度达到500 copies/μl,重复性变异系数CV≤5％;该荧光定量PCR检测试剂盒稳定性强,在-20℃下可以保存一年,对EV71,CA16肠道病毒具有良好的特异度。用该方法检测20份临床阳性样品和6份阴性样品,阳性检出率为100％(20/20),阴性检出率为100％(6/6)。结论试验建立的EV71,CA16肠道病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法可用于EV71,CA16肠道病毒的临床诊断。     

西安地区2011年儿童手足口病病原学分析

目的 对西安地区2011年手足口病病原学进行分析,为手足口病的临床诊断、治疗及防治提供科学依据.方法 采集2011年1月～6月555例(其中男性347例,女性208例,年龄范围8个月～6岁,平均年龄2.6岁)西安市儿童医院临床诊断为手足口病患儿咽拭子标本,采用实时荧光RT-PCR方法检测肠道病毒通用型(EV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16).结果 56例重症患者其中45例由肠道病毒71型(EV71)引起,占重症病例的80.4％(45/56),4例由柯萨奇病毒A组16型(CA16)引起,占重症病例的7.1％(4/56).肠道病毒71型(EV71)阳性率与柯萨奇病毒A组16型(CA16)阳性率差异有统计学显著性意义(x2=273.4,P＜0.0001).结论 西安地区2011年手足口病病原学以肠道病毒71型(EV71)为主,与2010年相比肠道病毒71型(EV71)感染有上升趋势,且高发于3岁以下儿童组,重症患者与2010年相同,主要由肠道病毒71型(EV71)引起.     

2010年西安地区手足口病病原血清型分析及隐性感染状况调查

目的 分析西安地区2010年引起手足口病(HFMD)的肠道病毒血清型和调查HFMD高发的6月、7月健康儿童携带肠道病毒核酸情况,为HFMD防治提供依据.方法 2010年4至9月,在西安市所属13个区县,每月采集临床诊断HFMD患儿的肛拭子标本,同时,在西安市儿童医院采集临床诊断为重症、危重症HFMD病例标本,以及采集高发的6月和7月健康儿童肛拭子标本进行病原学分析,研究西安地区2010年HFMD病原构成和健康儿童病原携带情况.结果 2010年西安地区共报告HFMD 23439例,病原EV71占24.81%、CA16占55.04%、非EV71和非CA16的其它肠道病毒占20.16%;EV71 7、8月所占比例增高;EV71占重症病例病原的75.71%;农村、城市健康儿童肠道病毒核酸阳性率分别为9.68%和3.51%.结论 2010年西安地区HFMD病例数较2009年增加,病原以CA16为主,重症病例主要由EV71引起,农村健康儿童携带肠道病毒与城市儿童差异无统计学意义.     

RT—PCR和FQ—PCR法在亳州地区手足口病检测中的应用

目的比较RT—PCR和FQ—PCR法在手足口病（HFMD）病原学检测中的差异,并探讨亳州地区EV71和CoxA16的流行特征。方法采集毫州地区2011年193例疑似HFMD患者不同种类的标本共252份。对其中的124份咽拭子样品,同时采用RT—PCR和FQ—PCR法进行EV71和CoxA16检测,并比较两种方法检测结果的差异。运用FQ—PCR法对所有标本进行检测,比较不同类型标本间结果的差异,并分析不同感染类型的阳性率。用FQ—PCR法检测咽拭子标本188份,分析不同类型HFMD感染者的季度分布。结果用FQ—PCR及RT—PCR法检测124份疑似HFMD患者的咽拭子标本,EV71的阳性率分别为68．55％（85／124）和63．71％（79／124）,CoxA16的阳性率分别为46．77％（58／124）和41．94%（52／124）。两种方法检测结果间的差异均有统计学意义（χ^2分别为95．385、101．908,P均,40．01）。用FQ—PCR法共检测252份标本,其中咽拭子、粪便、疱疹液和脑脊液的阳性率分别为75．00％（106／188）、81．13％（43／53）、6／7和1／4,不同类型标本之间阳性率的差异无统计学意义（χ^2=6．888,P〉0．05）。EV71单独感染、CoxA16单独感染及联合感染率分别为42．06％、9．92％和23．81％,其差异有统计学意义（χ^2=63．369,P〈0．05）。EV71单独感染季度间差异无统计学意义（χ^2=6．561,P〉0．05）,而CoxA16单独感染及联合感染的季度间差异均有统计学意义（CoxA16单独感染：χ^2=8．061,P〈0．05;联合感染：χ^2=24．898,P〈0．01）。结论FQ—PCR比RT-PCR法更适用于HFMD病原学检测,并且不受标本种类限制。EV71单独感染率最高,常年流行;联合感染次之,以夏秋季为主;CoxA16单独感染较少见,以秋冬季较多。     

887例手足口病患儿血清抗体及白细胞计数结果分析

目的：了解我院手足口病患儿血清抗体及白细胞变化的情况。方法回顾性分析我院2013年10月至2014年2月887例手足口病患儿血清柯萨奇病毒A16型(CA16)、肠道病毒71型(EV71)抗体和白细胞检测结果。结果887例标本抗体总阳性率为58.9%,其中CA16和EV71两种抗体均阳性的占28.4%,CA16抗体阳性占53.1%,EV71抗体阳性占34.2%,两者存在显著性差异;病毒抗体阳性标本中白细胞增高(>10×109),占46.4%,抗体阳性白细胞增高(>20×109)39例,占16.1%,其中CA16和EV71两种抗体均阳性的有26例,占66.7%,且均为重症手足口病,两种抗体均阳性与单独一种抗体阳性引起的白细胞增高存在显著性差异。结论对于CA16和EV71两种抗体均阳性且白细胞增高(>20×109)的手足口病患者,应及时干预,防止病情向重症发展。     

手足口病病原的荧光PCR法检测及其临床特点——附20例分析

目的：采用荧光PCR法对手足口病患儿进行病原学检测,同时分析手足口病常见的,临床表现特点。方法：收集20例临床确诊手足口病患儿的临床资料,留取其血液和粪便标本,采用3种荧光PCR核酸检测试剂盒分别进行肠道病毒筛选和柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirusA．16,CVA．16）与肠道病毒71型（enterovirus71,EV71）的鉴别,对2种病毒所致的临床表现进行归纳比较。结果：使用3种试剂盒检测20例患儿血液标本均未检出病毒。粪便标本使用通用型试剂盒检出10例（＋）,其中4例为CVA．16感染,5例为EV71感染,发病3d内采集标本（＋）占8／10;EV71与CVA-16感染病例的临床表现相似,主要为发热、口腔溃疡和皮疹,仅2例EV71感染患儿有肺部口罗音,但预后良好,并无心脏和神经系统的严重并发症。结论：发病早期采集粪便用荧光PCR法检测有助于及时作出手足口病的病原学诊断,EV71感染的轻症患者预后良好。     

手足口病肠道病毒EV71和CoxA16感染的检测分析

手足口病(Hand-foot-mouth disease,HFMD)是由多种肠道病毒引起的常见传染病,以婴幼儿发病为主。大多数患者症状轻微,以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征。引起手足口病的病原体主要为肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CoxA16),其中EV71不仅引起HFMD,而     

荧光定量RT—PCR检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型

手足口病及相关临床综合征是危害儿童健康的重要疾病。自20世纪60年代逐渐明确其病原体以来,手足口病已在全世界范围内引起多次暴发或流行,累及地域广泛、人口众多。Cox．A4、A5、A9、A10、A16,Cox．B5和EV71型等多种肠道病毒均可引起手足口病,但EV71和Cox．A16是引起手足口病的主要的病原体,常相伴造成手足口病的暴发或流行。及时检测EV71和Cox．A16,为临床医生提供必要的实验诊断依据。用荧光定量RT-PCR进行检测了我院收治的儿童手足口病患者标本中EV71和Cox．A16。     

EV71型重症手足口病84例临床护理

对84例EV71型重症手足口病患儿给予精心护理,做好消毒隔离,密切观察患儿生命体征变化.结果84例患儿全部康复出院,治愈率100%.认为积极救治及精心护理可促进EV71型手足口病患儿康复.     

107例儿童手足口病临床及病原学分析

目的了解2009年手足口病流行期间患病儿童的病原类型,并探讨RT～PCR荧光探针法检测手足151病流行期间病毒的可行性。方法采用RT—PCR荧光探针法对107例手足口病患儿血标本进行检测。结果本组107例手足口病患儿以EV71病毒感染为主,占72．9％,CA16占27．1％;好发于4岁以下儿童,占72．9％;应用RT—PCR荧光探针法检出率高,可早期、快速检测手足口病病原体。结论2009年5～6月间本院收治的手足口病患儿以EV71病毒感染为主;好发年龄1～4岁。应用RT—PCR荧光探针法特异性强,可早期、快速、准确的检测出病原体,达到早发现、早治疗、早控制的目的,是手足口病流行期间大批量标本检测的首选方法。     

实时荧光PCR技术在手足口病检测中应用

目的:探讨实时荧光PCR技术检测手足口病肠道病毒的价值.方法:建立手足口病的实时荧光PCR检测技术平台,检测茂名地区手足口病患者243份标本中人肠道病毒通用型、柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型特异性核酸,再将标本送广东省疾病预防控制中心进行复检.结果:243份标本中肠道病毒通用型核酸阳性27份,柯萨奇A16核酸阳性16份,肠遘71型病毒核酸阳性17份,与广东省疾病预防控制中心复检结果一致,符合率100%.结论:实时荧光PCR检测技术平台具有特异性强、灵敏度高等优点,是一种手足口病肠道病毒的快速检测方法.