类金刚石涂层瓣膜与犬血管内皮细胞的相容性

背景:脉冲激光法沉积的类金刚石薄膜与低温各向同性碳同为非晶体碳质材料,具有良好的物理特性和生物相容性,且制作简单,成为现阶段构建组织工程化瓣膜的可选材料。目的:观察原代培养犬静脉血管内皮细胞与脉冲激光法沉积类金刚石薄膜瓣膜的生物相容性。方法:分离培养杂种犬前肢静脉血管内皮细胞,与脉冲激光法沉积的类金刚石薄膜纳米涂层瓣膜共同培养,以单纯犬前肢静脉血管内皮细胞为对照。结果与结论:两组细胞一氧化氮分泌功能无差别。倒置显微镜观察类金刚石薄膜材料周边血管内皮细胞未见衰老和异常核分裂现象。扫描电镜见血管内皮细胞在类金刚石薄膜上黏附紧密,细胞伪足延伸,细胞间出现互相连接现象,有细胞相互融合成片,将材料表面基本覆盖。表明类金刚石薄膜纳米涂层瓣膜具有良好的细胞相容性。     

胶原包埋羟基磷灰石涂层人工机械瓣膜对犬血管内皮细胞的毒性

背景：前期实验利用脉冲激光沉积方法制作了胶原包埋羟基磷灰石涂层人工机械瓣膜。目的：进一步分析胶原包埋羟基磷灰石涂层人工机械瓣膜的组织相容性和毒性。方法：将传代的犬血管内皮细胞悬液接种在胶原包埋羟基磷灰石涂层人工机械瓣膜材料上,1组置于含体积分数5%CO2、37℃恒温培养箱内静态培养3周,另1组置于含体积分数5%CO2、37℃恒温培养箱动态旋转培养3周,扫描电子显微镜下观察细胞在材料上的附着情况。采用MTT法测定血管内皮细胞与胶原包埋羟基磷灰石涂层人工机械瓣膜材料复合培养的增殖能力。结果与结论：动态旋转培养中见人工机械瓣膜材料的表面有细胞附着,并且数目比静态培养多,细胞分布均匀,在培养第21天可见均匀细胞融合成片,将材料表面均匀覆盖;在静态培养中细胞成堆,分布不均匀。人工机械瓣膜材料对犬血管内皮细胞增殖无明显影响,细胞生长良好。表明胶原包埋羟基磷灰石涂层人工机械瓣膜材料对血管内皮细胞的增殖无明显影响,无明显毒性,具有良好的生物相容性。     

尾加压素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞释放一氧化氮和前列环素的影响

目的:观察不同浓度的尾加压素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞释放一氧化氮、前列环素,以及对一氧化氮合酶活性的影响,进而探讨尾加压素Ⅱ舒张血管的机制。方法:实验于2005-04/08在武汉大学人民医院老年病科实验室完成。根据所加入尾加压素Ⅱ的浓度不同(10-9～10-7mol/L),将体外培养的人脐静脉内皮细胞随机分为4组:空白对照组、10-9mol/L组、10-8mol/L组及10-7mol/L组。干预24h后,用化学比色法检测细胞培养上清液中NO2-,NO3-的水平及一氧化氮合酶的活性,用放射免疫法检测碘[125Ⅰ]-6-酮前列腺素F1α的水平。结果:①一氧化氮水平:后三组与空白对照组相比,NO2-,NO3-的含量呈浓度依赖性增加,其中10-7mol/L浓度组显著高于空白对照组(21.37±2.21,16.51±1.33,P<0.01)。②一氧化氮合酶活性:后三组与空白对照组相比,一氧化氮合酶呈浓度依赖性增加,其中10-7mol/L浓度组显著强于空白对照组(70.65±15.63,36.62±11.16,P<0.01)。③前列环素水平:后三组与空白对照组相比,6-酮前列腺素F1α含量呈浓度依赖性增加,其中10-7mol/L浓度组显著高于空白对照组(572.69±1.86,563.93±2.66,P<0.01)。结论:尾加压素Ⅱ能刺激人脐静脉内皮细胞释放一氧化氮及前列环素,提示尾加压素Ⅱ可能通过刺激一氧化氮和前列环素的产生而发挥舒张血管的作用。     

蜂胶乔松素对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:观察蜂胶乔松素对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞的影响,探讨其对人脐静脉内皮细胞可能的保护作用。方法:实验于2006-03/10在泰山医学院生命科学研究所(省重点实验室)完成。①实验材料:取出生1h内新生儿脐带,患者知情同意。②实验分组及方法:培养人脐静脉内皮细胞,建立脂多糖损伤模型(以10mg/L的脂多糖培养液培养细胞12h),实验分为空白对照组(加等量D-Hank’s液)、脂多糖组(10mg/L)、乔松素组(加10mg/L脂多糖预孵育12h后,按50,100,200mg/L分别加入乔松素),各组设8个复孔,共同孵育24h。③实验评估:光镜下观察细胞形态,MTT法观察乔松素对人脐静脉内皮细胞活性的影响,ELISA方法检测培养上清中血管假血友病因子的含量,TUNEL检测细胞凋亡率。结果:①细胞形态:空白对照组细胞紧密贴壁,呈铺路石状生长。脂多糖组可见多数细胞呈圆形;乔松素组见上述细胞较脂多糖组明显减少。②乔松素对人脐静脉内皮细胞活性、凋亡及血管假血友病因子含量的影响:与对照组比较,脂多糖组能明显诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡(P<0.01),不同浓度乔松素组可改善内皮细胞形态,组织活性明显升高(P<0.05),同时抑制内皮细胞血管假血友病因子的释放(P<0.05),使脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡细胞数明显减少(P<0.05)。结论:乔松素能增强人脐静脉内皮细胞活性,抑制脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡,从而发挥可能的内皮细胞保护功能。     

三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1表达的影响水

背景:氧化低密度脂蛋白能诱导血管内皮细胞活化和黏附分子表达,在动脉粥样硬化形成早期起重要作用.三七总皂苷在心血管系统方面具有保护血管内皮细胞、显著改善动脉粥样硬化病变程度的药理作用.目的:验证三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白损伤内皮细胞后血管细胞黏附分子1的表达及与人单核细胞黏附的影响.设计、时间及地点:体外实验,分组对照,于2007-03/2008-05在北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部重点实验室完成.材料:原代人脐静脉内皮细胞为美国Cascade Biologics公司产品;三七总皂苷(血塞通冻干粉针)为黑龙江珍宝岛制药有限公司产品,成分为三七总皂苷,批号:20040207.方法:以培养原代人脐静脉内皮细胞作为靶细胞.用氧化型低密度脂蛋白造成人脐静脉内皮细胞损伤模型.将培养的人脐静脉内皮细胞分为5组:氧化型低密度脂蛋白组(100 mg/L)、氧化型低密度脂蛋白+三七总皂苷组(终浓度分别为200,100,50 mg/L)、正常对照组.主要观察指标:光镜下观察细胞形态变化,四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性;采用蛋白定量法检测人脐静脉内皮细胞与单核细胞的黏附率;用流式细胞仪测定人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分子1的蛋白表达.结果:氧化型低密度脂蛋白作用人脐静脉内皮细胞后12,24 h时,人脐静脉内皮细胞损伤明显,细胞活性显著降低,人单核细胞与人脐静脉内皮细胞的黏附率显著升高,人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分了1的蛋白表达水平也均明显升高,均明显高于正常对照组(P<0.05,P<0.01),而三七总皂苷能使氧化型低密度脂蛋白损伤的人脐静脉内皮细胞形态趋于正常,活性增强,并明显降低人单核细胞与人脐静脉内皮细胞的黏附率,以及显著降低血管细胞黏附分子1的蛋白的表达水平,与氧化型低密度脂蛋白组相比均有显著性差异(P<0.05,P<0.01),这种作用随着剂量的增加而增强.结论:三七总皂苷能通过下调血管细胞黏附分子1的表达抑制单核-血管内皮细胞黏附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,这可能是其治疗动脉硬化闭塞症的机制之一.     

葛根素对人脐静脉内皮细胞的促血管生成作用及机制的研究

目的 研究葛根素对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移、侵入和血管形成的影响,并探讨其机制。方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定葛根素对人脐静脉内皮细胞增殖的影响,细胞侵入试验检测葛根素对细胞侵入能力的影响,细胞迁移试验检测葛根素对细胞迁移能力的影响,管道形成试验检测葛根素对细胞血管形成能力的影响,蛋白质印迹法检测磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化一氧化氮合酶(p-eNOS)蛋白水平的表达变化。结果 葛根素明显促进了人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移、侵入和血管形成能力(P<0.05),并显著上调p-Akt和p-eNOS蛋白的表达(P<0.05)。结论 葛根素能够促进人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移、侵入和血管形成,上调p-Akt和p-eNOS蛋白的表达可能是其机制之一。     

二苯乙烯苷对人脐静脉血管内皮细胞缺氧复氧损伤的影响

背景:大量实验表明,中药何首乌有效活性成分二苯乙烯苷具有降血脂、抗动脉粥样硬化和保护心血管等作用.在许多病理过程中,活件氧可引起细胞脂质过氧化,引起细胞转运功能和酶的性质发生改变,丧失了对细胞离子的调节功能.目的:观察二苯乙烯苷对人脐静脉血管内皮细胞缺氧,复氧损伤是否具有保护作用.设计、时间及地点:以血管内皮细胞为观察对象的随机对照实验,于2006-04/10在九江学院医学院分子生物实验中心完成.材料:人脐静脉血管内皮细胞株.方法:采用人脐静脉血管内皮细胞建立缺氧复氧损伤模型,干预实验分为8组,每组重复6次.对照组为人脐静脉血管内皮细胞常氧条件下培养;缺氧复氧组为人脐静脉血管内皮细胞缺氧3 h后分别复氧2 h;10,5,2.5 ng/L二苯乙烯苷治疗组分别在缺氧复氧损伤前及缺氧复氧损伤后给予相应剂量的二苯乙烯苷;10,5,2.5 ng/L二苯乙烯苷预处理组分别在缺氧复氧损伤前给予相应剂量的二苯乙烯苷.主要观察指标:应用四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞活力;用UV-1206紫外光分析光度计检测乳酸脱氢酶、总抗氧化能力、丙二醛、超氧化物歧化酶及一氧化氮.结果:二苯乙烯苷能剂量依赖性的提高缺氧复氧血管内皮细胞的存活率,降低乳酸脱氢酶活性及丙二醛浓度,提高总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性及一氧化氮浓度(P<0.01),且治疗组比预处理组作用更明显(P<0.01).结论:二苯乙烯苷对血管内皮细胞缺氧复氧损伤具有明显的保护作用,而且其治疗作用优于预防作用.     

尾加压素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞释放一氧化氮和前列环素的影响

目的：观察不同浓度的尾加压素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞释放一氧化氮、前列环素，以及对一氧化氮合酶活性的影响，进而探讨尾加压素Ⅱ舒张血管的机制。 方法：实验于2005-04／08在武汉大学人民医院老年病科实验室完成。根据所加人尾加压素Ⅱ的浓度不同（10^-9 -10^-7 mol/L），将体外培养的人脐静脉内皮细胞随机分为4组：空白对照组、10^-9 mol/L组、10^-8 mol／L组及10^-7mol／L组。干预24h后，用化学比色法检测细胞培养上清液中NO2^-，NO3^-的水平及一氧化氮合酶的活性，用放射免疫法检测碘[125Ⅰ]6-酮前列腺素F1α的水平。 结果：①一氧化氮水平：后三组与空白对照组相比，NO2^-，NO3^-的含量呈浓度依赖性增加，其中10^-7 mol／L浓度组显著高于空白对照组（21．37&;#177;2．21，16．51&;#177;1．33，P〈0．01）。②一氧化氮合酶活性：后三组与空白对照组相比，一氧化氮合酶呈浓度依赖性增加，其中10^-7 mol／L浓度组显著强于空白对照组（70．65&;#177;15．63，36．62&;#177;11．16，P〈0．01）。③前列环素水平：后三组与空白对照组相比，6-酮前列腺素F1α含量呈浓度依赖性增加，其中10^-7 mol／L浓度组显著高于空白对照组（572．69&;#177;1．86，563．93&;#177;2．66．P〈0．01）。 结论：尾加压素Ⅱ能刺激人脐静脉内皮细胞释放一氧化氮及前列环素．提示尾加压素Ⅱ可能通过刺激一氧化氮和前列环素的产生而发挥舒张血管的作用。     

内皮型一氧化氮合酶与血管结构及功能的相关性

目的：应用内部核糖体进入位点构建携带内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子的双基因表达载体，研究外源性基因内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在人脐静脉内皮细胞ECV304中的转染表达，探讨内皮型一氧化氮合酶与血管结构及功能的相关性。方法：实验于2003-12／2004-12在南京鼓楼医院科研部完成。将Phcmvspla—enos中内皮型一氧化氮合酶基因和PcDNA—vegf中血管内皮生长因子基因定向克隆到真核表达载体PcDNA—ires中，构建重组质粒PcDNA—enos—ires-lvegf，经酶切，聚合酶链反应扩增和部分DNA测序分析证实后，转染人脐静脉内皮细胞，硝酸还原酶法检测转染后细胞中一氧化氮和一氧化氮合酶活性，免疫组化和荧光双标记及western blotting检测转染后细胞蛋白水平的表达，Trizol提取总RNA，反转录一聚合酶链反应测定转染后细胞mRNA水平的表达。结果：成功构建携带内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子的双基因表达载体PcDNA-enos-ires-vegf,双基因内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在人脐静脉内皮细胞基因组中获得整合及表达。重组基因PcDNA-enos-ires-vegf组与对照组PcDNA-enos在一氧化氮含量和一氧化氮合成酶活性的表达差异无显著性意义。PcDNA-enos-ires-vegf转染细胞后转染效率为30％-40％。结论：双基因表达载体PcDNA-enos-ires-vegf的成功构建和双基因内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在人脐静脉内皮细胞基因组中表达为研究内皮型一氧化氮合酶在血管结构与功能上所起上所起的作用奠定了基础。     

外加直流电场对内皮细胞增殖与迁徙的影响

背景:已有研究证明,电刺激可以引起内皮细胞的增殖、趋阴迁徙,同时伴随细胞分泌物释放的增加,从而调节血管张力和血管平滑肌细胞的生长,介导血管收缩和舒张.目的:观察外加直流电场对人脐静脉内皮细胞HY926增殖和迁徙的影响.方法:MTT法检测在外加电压3,5, 8,10 V作用12 h后人脐静脉内皮HY926细胞的增殖情况.并选择内皮细胞增殖最佳的外加电压5 V,在5 V外加电压作用10 h内追踪人脐静脉内皮HY926细胞的运动轨迹,包括细胞的平均累计移行距离和平均移行速率,细胞的平均最终位移大小及其方向,以及所有单个细胞每小时的平均追踪sine值.结果与结论:在外加电压3,5,8,10 V下作用12 h,人脐静脉内皮细胞生长均受到不同程度的抑制,但在外加电压5 V,电场强度163.46 mV/cm时内皮细胞增殖情况最好.在该生理电场下培养72 h,发现细胞生长贴壁生长、增殖正常,初步说明该生物反应器的细胞相容性良好,并且随时间的延长,内皮细胞的平均移行速率呈下降趋势.在5 V外加电压作用10 h后,内皮细胞整体明显持续朝向阴极方向迁徙.提示外加直流电场对人脐静脉内皮细胞增殖有显著的抑制作用,并且可诱导细胞定向向阴极迁徙.     

Effect of endothelin-1 on intracellular glutathione and lipid peroxide availability and on the secretion of vasoactive substances by human umbilical vein endothelial cells

BACKGROUND: The major pathophysiologic changes observed in preeclampsia suggest that endothelial cell dysfunction plays an important role in this disorder. The pathway mediating endothelial cell layer dysfunction is unknown. The concentration of endothelin-1 (ET-1), a potent mammalian vasoconstrictor peptide produced by the vascular endothelium, has been observed to be significantly increased in preeclampsia. In this study, we determined the in vitro effect of endothelin-1 on glutathione and lipid peroxide levels and on the secretion of vasoactive substances by human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). METHODS: Human umbilical vein endothelial cells were incubated for 24 h in the presence of different concentrations of ET-1 (0-1000 pmol L(-1)), which were shown in an earlier experiment to have no effects on vitality and proliferation rate of HUVECs. The levels of glutathione (GSH) and lipid peroxides (LPO) were measured in endothelial cell lysates. For the measurement of vasoactive substances, levels of nitric oxide (NO), prostacyclin (PGI2) and thromboxane A2 (TXA2) were measured in endothelial cell supernatants. RESULTS: At lower concentrations (5-50 pmol L(-1)), ET-1 increases the intracellular content of LPO, stimulates the secretion of TXA2, but inhibits the secretion of PGI2 in endothelial cells compared with control cells. At higher concentrations (100-1000 pmol L(-1)), ET-1 increases the intracellular content of GSH, but results in a decrease of LPO, and increase of PGI2, back to control levels. ET-1 has no effect on NO secretion. CONCLUSION: These findings demonstrate that at concentrations corresponding to values in plasma from preeclamptic women, ET-1 induces oxidative stress and results in altered secretion of vasoactive substances in human endothelial cells. We conclude that ET-1 may participate in the pathway leading to endothelial cell dysfunction seen in preeclampsia.     

siRNA沉默FOXO3a对三氧化二砷抑制内皮细胞增殖的影响

背景：课题组前期已证实As2O3可以促进乳腺癌细胞中FOXO3a因子的表达,并抑制肿瘤细胞中血管内皮生长因子的表达,但As2O3对血管内皮细胞增殖的影响,以及对血管内皮细胞中FOXO3a、血管内皮生长因子的影响尚未证实。目的：观察siRNA沉默FOXO3a对As2O3抑制人脐静脉内皮细胞增殖及血管生成的影响。方法：实验分为4组：①As2O3组：待人脐静脉内皮细胞贴壁,在含4μmol/LAs2O3的RPMI-1640培养基中培养。②control siRNA组：转染无关序列control siRNA后,细胞在含4μmol/LAs2O3的RPMI-1640培养基中培养。③FOXO3a siRNA组：转染FOXO3a siRNA后,细胞在含4μmol/LAs2O3的RPMI-1640培养基中培养。④对照组：与实验药物等体积PBS作为对照,细胞在完全培养基条件下培养。应用CCK-8方法检测细胞增殖情况,采用免疫细胞化学方法观察人脐静脉内皮细胞中FOXO3a、血管内皮生长因子蛋白的表达情况。结果与结论：与对照组相比,FOXO3a siRNA明显减弱了As2O3抑制人脐静脉内皮细胞增殖的作用,As2O3促进人脐静脉内皮细胞中FOXO3a蛋白的表达并抑制血管内皮生长因子蛋白的表达,FOXO3a siRNA处理后明显抑制FOXO3a蛋白表达且增加血管内皮生长因子蛋白表达。结果提示FOXO3a可能成为As2O3抑制肿瘤细胞增殖及血管生成治疗的重要靶点。     

血管内皮生长因子与促血管生成素1对大鼠血管内皮细胞的作用

背景:血管内皮生长因子、促血管生成素1是血管形成过程中始动并且使之持续的重要因子,研究其对血管内皮细胞的作用具有重要的意义.目的:观察血管内皮生长因子与促血管生成素1对培养血管内皮细胞迁移与增殖能力的影响,并探讨其在血管生成方面的作用机制.方法:在大鼠脐静脉内皮细胞内单独或联合加入血管内皮生长因子、促血管生成素1后,划痕实验和MTT检测对细胞迁移与增殖的影响,观察内皮细胞形态、活性、迁移能力.结果与结论:划痕实验显示单独血管内皮生长因子作用时,与空白对照组细胞迁移无明显差异,单独促血管生成素1作用时,不仅不能增加细胞的迁移作用,反较空白对照组有所减弱,当血管内皮生长因子与促血管生成素1联合作用时,细胞迁移较空白对照组明显增强;MTT实验结果表明:单纯加入血管内皮生长因子或促血管生成素1,均不能起到有效促进内皮细胞增殖的作用;联合应用血管内皮生长因子及促血管生成素1可有效促进增殖.结果可见当血管内皮生长因子与促血管生成素1联合应用时,才能有效促内皮细胞迁移与增殖,发挥促血管生成作用.     

醒脑静抑制重组人肿瘤坏死因子介导的人脐静脉内皮细胞增殖

背景:前期研究将传统名方"安宫牛黄丸"经提取精制而成的新型水溶性静脉注射液醒脑静注射液应用于临床治疗冠心病并取得很好的疗效,但其具体机制未完全明确.目的:观察醒脑静对重组人肿瘤坏死因子介导的人脐静脉内皮细胞增殖的影响,探讨醒脑静抑制血管内皮细胞损伤增生的应用价值.方法:取3~5代人脐静脉内皮细胞,在培养基中添加10 μg/L重组人肿瘤坏死因子α诱导增殖,醒脑静组加入不同浓度的醒脑静干预,阳性对照组添加氟伐他汀,并设立单纯细胞培养的空白对照组.结果与结论:倒置相差显微镜下可见不同浓度的醒脑静均可使人脐静脉内皮细胞呈现胞浆收缩,贴壁细胞减少,坏死细胞增多.醒脑静组的细胞增殖率低于肿瘤坏死因子α组(P < 0.05),且呈剂量及作用时间依赖关系.证实醒脑静能有效抑制重组人肿瘤坏死因子α介导的人脐静脉内皮细胞增殖.     

血管内皮生长因子与促血管生成素1对大鼠血管内皮细胞的作用

背景：血管内皮生长因子、促血管生成素1是血管形成过程中始动并且使之持续的重要因子,研究其对血管内皮细胞的作用具有重要的意义。目的：观察血管内皮生长因子与促血管生成素1对培养血管内皮细胞迁移与增殖能力的影响,并探讨其在血管生成方面的作用机制。方法：在大鼠脐静脉内皮细胞内单独或联合加入血管内皮生长因子、促血管生成素1后,划痕实验和MTT检测对细胞迁移与增殖的影响,观察内皮细胞形态、活性、迁移能力。结果与结论：划痕实验显示单独血管内皮生长因子作用时,与空白对照组细胞迁移无明显差异,单独促血管生成素1作用时,不仅不能增加细胞的迁移作用,反较空白对照组有所减弱,当血管内皮生长因子与促血管生成素1联合作用时,细胞迁移较空白对照组明显增强;MTT实验结果表明：单纯加入血管内皮生长因子或促血管生成素1,均不能起到有效促进内皮细胞增殖的作用;联合应用血管内皮生长因子及促血管生成素1可有效促进增殖。结果可见当血管内皮生长因子与促血管生成素1联合应用时,才能有效促内皮细胞迁移与增殖,发挥促血管生成作用。     

干细胞因子对内皮细胞增殖、迁移、管状形成能力的影响及对CD133+细胞的趋化效应

目的 探讨干细胞因子(SCF)对脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移、管状形成能力的影响,以及对CD133+细胞的趋化效应.方法 应用MTT及CCK-8增殖分析法检测HUVEC在不同细胞因子[空白试剂、SCF、血管内皮生长因子(VEGF)、抗人SCF、人IgG]条件下增殖能力的差异性;采用细胞划痕法与Matrigel体外三维成型法分别检测内皮细胞的增殖、迁移和管状形成能力;并应用Transwell技术检测不同细胞因子诱导的CD133+细胞体外趋化效应.结果 MTT及CCK-8增殖分析结果显示SCF无HUVEC增殖刺激活性;SCF可显著提升HUVEC迁移能力;SCF呈剂量依赖性增强HUVEC 管状形成能力,在适宜浓度SCF(100 ng/ml)作用下,HUVEC完整小管形成数量[(30.0 ±3.4)/105HUVEC]显著高于空白试剂组[(5.0±2.6)/105HUVEC,P<0.01];SCF可高效诱导CDl33+细胞体外趋化,SCF组[(118.0±6.5)/104CD133+细胞]Transwell小室跨膜迁移细胞数显著高于空白试剂组[(47.0±4.7)/104CDl33+细胞,P<0.01].结论 SCF可显著增强HUVEC的迁移及管状形成能力,并有效诱导CD133+细胞体外趋化,提示SCF/c-kit信号转导在内皮细胞及其祖细胞的血管新生与血管发生过程中可能发挥重要作用.

Abstract：

Objective To explore the effects of stem cell factor (SCF) on proliferation, transmigration, capillary tube formation of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and on the chemotaxis of CD133+ cells. Methods In the presence of blank control, SCF, vascular endothelial growth factor ( VEGF) , anti-human SCF (anti-SCF) or human IgG, the difference in proliferation capacity of HUVEC was analyzed by MTT and CCK-8 methods, and wound scratch assay and three-diamensional in vitro Matrigel assay were used for transmigration and capillary tube formation of HUVEC, respectively. In addition, the chemotaxis of CD133 + cells sorted from human umbilical cord blood by flow cytometry was investigated by Transwell migration assay. Results SCF didn't improve the proliferative capacity of HUVEC, but significantly enhanced the transmigration capacity, and increased capillary tube formation in a dose-dependent manner.The number of intact tubules [(30.0 ±3.4)/105 HUVEC] formed by HUVECs in the presence of the optimal concentration of SCF (100 ng/ml) was remarkably higher than that in blank control group [(5.0 ±2.6)/105HUVEC,P <0.01]. SCF also significantly induced a chemotactic response of CD 133+ cells, the transmembrane migration cell number into Transwell lower chamber was significantly higher in SCF group [(118.0 ±6.5)/104 CD133+ cells] than in blank control group [(47. 0 ±4. 7)/104 CD133 + cells,P <0.01]. Conclusions SCF significantly promotes the transmigration and capillary tube formation of HUVEC, and induces a chemotactic response of CD133 + cells. SCF/c-kit signaling possibly plays a critical role in regulating angiogenesis of vascular endothelial cells and vasculogenesis of endothelial progenitor cells.     

Intracellular glutathione and lipid peroxide availability and the secretion of vasoactive substances by human umbilical vein endothelial cells after incubation with TNF-alpha

BACKGROUND: The major pathophysiologic changes observed in preeclampsia suggest that endothelial cell dysfunction plays an important role in this disorder. The pathway mediating to endothelial cell dysfunction is unknown, however, the pathogenesis of preeclampsia is thought to be related to increased oxidative stress and increased vasoconstriction. The concentration of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), a cytokine produced by macrophages and many other cell types, has been observed to be significantly increased in preeclampsia. It has been hypothesized that TNF-alpha overproduction by the placenta may then may produce an increase in plasma levels and subsequent endothelial dysfunction in preeclampsia. This study investigated the effect of TNF-alpha on glutathione and lipid peroxide levels and on the secretion of vasoactive substances by human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). METHODS: Human umbilical vein endothelial cells were incubated for 24 h in the presence of different concentrations of TNF-alpha (0-1000 pg mL-1) that were shown in an earlier experiment to have no effects on the vitality and proliferation rate of HUVECs. The levels of reduced glutathione (GSH) and lipid peroxides (LPOs), assessed by malondialdehyde and 4-hydroxyalkenal, were measured in endothelial cell lysates. For the measurement of vasoactive substances, levels of prostacyclin (PGI2), determined by 6-keto-prostaglandin F1a, thromboxane A2 (TXA2), measured by thromboxane B2, endothelin-1 (ET-1), and nitric oxide (NO), measured by total nitrite, were assessed in endothelial cell supernatants. RESULTS: At lower concentrations (10-100 pg mL-1), TNF-alpha increases the intracellular content of LPO and GSH, stimulates the secretion of ET-1 and TXA2, but inhibits the secretion of PGI2 in endothelial cells compared with control cells. At concentration of 1000 pg mL-1, TNF-alpha increases the secretion of PGI2 and TXA2, but it decreases the ET-1 concentration. TNF-alpha has no effect on NO secretion. CONCLUSION: These findings demonstrate that at concentrations corresponding to values in plasma from preeclamptic women, TNF-alpha induces oxidative stress and results in altered secretion of vasoactive substances in favour of vasoconstrictors in human endothelial cells. We conclude that TNF-alpha may participate in the pathway leading to endothelial cell dysfunction seen in preeclampsia.     

醒脑静抑制重组人肿瘤坏死因子介导的人脐静脉内皮细胞增殖

背景：前期研究将传统名方＂安宫牛黄丸＂经提取精制而成的新型水溶性静脉注射液醒脑静注射液应用于临床治疗冠心病并取得很好的疗效,但其具体机制未完全明确。目的：观察醒脑静对重组人肿瘤坏死因子介导的人脐静脉内皮细胞增殖的影响,探讨醒脑静抑制血管内皮细胞损伤增生的应用价值。方法：取3~5代人脐静脉内皮细胞,在培养基中添加10μg/L重组人肿瘤坏死因子α诱导增殖,醒脑静组加入不同浓度的醒脑静干预,阳性对照组添加氟伐他汀,并设立单纯细胞培养的空白对照组。结果与结论：倒置相差显微镜下可见不同浓度的醒脑静均可使人脐静脉内皮细胞呈现胞浆收缩,贴壁细胞减少,坏死细胞增多。醒脑静组的细胞增殖率低于肿瘤坏死因子α组（P〈0.05）,且呈剂量及作用时间依赖关系。证实醒脑静能有效抑制重组人肿瘤坏死因子α介导的人脐静脉内皮细胞增殖。