吴茱萸碱抑制胃癌SGC-7901细胞生长及诱导凋亡作用的研究

目的观察吴茱萸碱对胃癌SGC-7901细胞凋亡的生长抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别用0.5、1.0、1.5μmol/L吴茱萸碱及吴茱萸碱＋20μmol/L胱天蛋白酶抑制剂（Z-VAD-FMK）作用于SGC-7901细胞12、24和36 h。四唑盐（MTT）比色法观察吴茱萸碱对SGC-7901细胞增殖活性的影响。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）双染细胞,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡的情况。结果吴茱萸碱能抑制SGC-7901细胞增殖,MTT结果显示具有时间和剂量的依赖性;流式细胞仪结果显示吴茱萸碱可诱导SGC-7901细胞凋亡,且随剂量和时间的增加作用增强;Z-VAD-FMK可部分抑制吴茱萸碱诱导该细胞的凋亡作用。结论吴茱萸碱能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,且在加入Z-VAD-FMK后吴茱萸碱仍可诱导其凋亡,但作用减弱。该研究结果提示吴茱萸碱诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡除胱天蛋白酶途径外,还存在其他的诱导凋亡途径。     

吴茱萸碱抑制胃癌SGC-7901细胞生长及诱导凋亡作用的研究

目的观察吴茱萸碱对胃癌SGC-7901细胞凋亡的生长抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别用0.5、1.0、1.5μmol/L吴茱萸碱及吴茱萸碱+20μmol/L胱天蛋白酶抑制剂(Z-VAD-FMK)作用于SGC-7901细胞12、24和36 h。四唑盐(MTT)比色法观察吴茱萸碱对SGC-7901细胞增殖活性的影响。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染细胞,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡的情况。结果吴茱萸碱能抑制SGC-7901细胞增殖,MTT结果显示具有时间和剂量的依赖性;流式细胞仪结果显示吴茱萸碱可诱导SGC-7901细胞凋亡,且随剂量和时间的增加作用增强;Z-VAD-FMK可部分抑制吴茱萸碱诱导该细胞的凋亡作用。结论吴茱萸碱能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,且在加入Z-VAD-FMK后吴茱萸碱仍可诱导其凋亡,但作用减弱。该研究结果提示吴茱萸碱诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡除胱天蛋白酶途径外,还存在其他的诱导凋亡途径。     

负载抗原DC-CIK细胞对NDV修饰抗原胃癌细胞杀伤作用

目的探讨负载SGC-7901细胞抗原的DC-CIK细胞对新城疫病毒（NDV）修饰SGC-7901细胞的杀伤作用,探索胃癌新的治疗方法。方法取健康成人外周血分离单个核细胞,用于诱导培养树突状细胞（DC）及细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）。用反复冻融法制备胃癌细胞抗原,用于致敏DC细胞。然后分以下4组进行试验：CIK组、DC-CIK组、CIK＋NDV组、DC-CIK＋NDV组,同时设单独的靶细胞对照（SGC-7901）和效应细胞对照（CIK、NDV、DC-CIK）。并与化疗药（氟尿嘧啶、顺铂）对SGC-7901细胞的杀伤作用进行比较。结果用NDV修饰抗原后,无论是CIK细胞还是DC-CIK细胞对SGC-7901细胞的杀伤率均增高。其中负载胃癌细胞抗原的DC-CIK细胞杀伤率最高,效靶比为20∶1时,达到83.4%。化疗药物作用48 h时的疗效也不如单纯CIK细胞作用24 h的疗效。结论负载SGC-7901细胞抗原的DC-CIK细胞对经NDV修饰抗原的SGC-7901细胞的杀伤效果最佳。胃癌的生物治疗效果优于普通化疗。     

SYK基因激活对人胃癌SGC7901细胞株VEGF表达的影响

目的利用去甲基化酶5-氮-2’-脱氧胞苷（5-aza-CDR）对脾酪氨酸激酶（Syk）基因激活的作用,观察Syk基因的激活对人胃癌SGC-7901细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,从而研究Syk基因的激活对人胃癌SGC-7901细胞生长和转移的影响。方法检测用5-aza-CDR处理后的人胃癌SGC7901细胞株的生长情况、SYK基因的表达水平及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达水平,与未接触5-aza-CDR的对照组进行对比。结果经5-aza-CDR处理过的人胃癌SGC-7901细胞株的生长明显受抑;该细胞株SYK基因的表达水平较对照组明显升高,血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达水平较对照组明显减弱（P〈0.05）。结论 Syk基因的表达能够抑制人胃癌SGC-7901细胞株生长,抑制该细胞株VEGF的表达。血管内皮生长因子（VEGF）的表达抑制可能是SYK基因的激活,从而抑制该细胞株的生长和转移的机制之一。     

薯蓣皂苷元对人胃癌SGC-7901细胞体外作用的研究

目的探讨薯蓣皂苷元对人胃癌SGC-7901细胞株的增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法采用MTT比色法检测不同浓度薯蓣皂苷元对SGC-7901细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术检测薯蓣皂苷元对SGC-7901细胞凋亡的影响。结果 MTT结果显示,薯蓣皂苷元体外可抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,并呈时间-剂量依赖性,作用244、8、72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为62.90、31.83和18.21μg.mL-1;流式细胞检测表明,8、163、2、64μg.mL-1的薯蓣皂苷元分别作用SGC-7901细胞122、43、6 h,对细胞周期没有明显影响,但能明显诱导SGC-7901细胞发生凋亡,同样具有显著的时间-剂量依赖性。结论薯蓣皂苷元具有抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖、诱导其凋亡的作用,但对SGC-7901细胞周期没有明显影响。     

新城疫病毒对胃癌细胞抗原修饰作用的研究

目的研究新城疫病毒（NDV）的抗原修饰作用在抗原致敏树突细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）共培养NDV体外杀伤胃癌（SGC-7901）细胞中所发挥的影响。方法从正常人外周血单个核细胞诱导DC、CIK细胞,用胃癌细胞SGC-7901抗原致敏DC。致敏DC与CIK共培养,制备经胃癌抗原致敏的DC诱导CIK细胞（抗原-DC—CIK）。MTT法检测抗原-DC-CIK对经与未经NDV作用的SGC-7901细胞的杀伤效应,并观察阻断靶细胞表面非主要组织相容性复合体（MHC）后靶细胞杀伤效应的变化。结果效靶比为20：1时,联合应用NDV前后,抗原-DC—CIK对胃癌细胞SGC-7901杀伤活性分别为（69．3±1．5）％和（89．0±1．4）％,差异有显著意义（t=24．49,P〈0．01）;阻断靶细胞MHC分子后,抗原-DC—CIK对经与未经NDV作用的SGC-7901细胞杀伤活性分别降低了30．8%和21．1％,与NDV修饰胃癌抗原的作用直接相关的特异性杀伤细胞对胃癌的杀伤效力约为9．7％。结论抗原-DC—CIK并NDV是一种有效的抗胃癌生物治疗方式,NDV可对胃癌细胞抗原进行修饰,从而增强肿瘤细胞的抗原免疫反应性。     

miR-9对SGC-7901胃癌细胞株侵袭能力的影响

目的探讨miR-9表达对SGC-7901胃癌细胞株侵袭力的影响及其可能的作用机制。 方法培养SGC-7901胃癌细胞株,分组转染miR-9阴性对照（miR-9 NC）、miR-9模拟物（miR-9 mimics）和miR-9抑制剂（miR-9 inhibitor）,上调或下调细胞中miR-9表达水平。采用Transwell实验评价胃癌细胞侵袭能力,应用SYBR Green荧光实时定量聚合酶链反应和Western blot实验检测SGC-7901细胞中MMP-2 mRNA和蛋白表达水平。对miR-9空白对照组、miR-9 mimics组和miR-9 inhibtor组miR-9的相对表达量、MMP-2 mRNA及蛋白相对表达量,Transwell侵袭实验SGC-7901细胞中侵袭细胞数量,多组间均数比较采用单因素方差分析。 结果与空白对照组SGC-7901细胞miR-9的相对表达量比较：转染miR-9 mimics组SGC-7901细胞miR-9的相对表达量明显上升,差异具有统计学意义［（1.002±0.083）vs（15.375±3.097）,P=0.012］;转染miR-9 inhibitor组SGC-7901细胞miR-9的相对表达量明显下降,差异具有统计学意义［（1.002±0.083）vs（0.279±0.039）,P=0.022］。与空白对照组SGC-7901细胞中侵袭细胞数量比较：转染miR-9 mimics组SGC-7901细胞中侵袭细胞数量明显减少,差异具有统计学意义［（72.0±2.2）vs（23.6±4.2）,P=0.026］;转染miR-9 inhibitor组SGC-7901细胞中侵袭细胞数量明显增加,差异具有统计学意义［（72.0±2.2）vs（102.4±7.6）,P=0.037］。与空白对照组SGC-7901细胞中MMP-2的mRNA及蛋白的相对表达量比较：miR-9 mimics组SGC-7901细胞中MMP-2的mRNA及蛋白相对表达量明显下降,差异具有统计学意义［（1.006±0.133）vs（0.371±0.132）,P=0.011;（0.573±0.063）vs（0.261±0.159）,P=0.024］;miR-9 inhibitor组SGC-7901细胞中MMP-2的mRNA及蛋白相对表达量明显上升,差异具有统计学意义［（1.006±0.133）vs（2.995±0.701）,P=0.015;（0.573±0.063）vs （0.708±0.079）,P=0.016］。 结论在SGC-7901胃癌细胞株中,miR-9可下调MMP-2的表达,抑制细胞的侵袭能力。     

三氧化二砷对低氧下人胃癌细胞SGC-7901生长活性及凋亡的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）在低氧条件下对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制及凋亡影响。方法用氯化钴（CoC l2）制作低氧模型,设常氧组、低氧组、低氧加药物组,分别取0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μmol/L五个不同浓度的As2O3作用于胃癌细胞,用细胞活力测定（MTT）法检测药物作用后的细胞活力,HOECHST33258染色试剂盒测细胞凋亡。结果①低氧加药物组As2O3对SGC-7901细胞生长有抑制作用,与常氧对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,并呈剂量-时间-效应关系。②低氧加药物组中,随着As2O3浓度的升高,胃癌细胞凋亡率也逐渐升高（P〈0.05）。结论低氧下As2O3对人胃癌细胞SGC-7901生长有抑制和诱导凋亡作用,这种作用可能是As2O3发挥抗肿瘤的生物学基础。     

斑贞1号联合氟尿嘧啶对胃癌细胞SGC-7901/ADR的细胞毒作用

目的探讨斑贞1号联合氟尿嘧啶（5-FU）对胃癌SGC-7901／ADR细胞的细胞毒作用。方法以SGC-7901／ADR细胞为靶细胞，分别设5-FU组、斑贞1号组、斑贞1号＋5-FU组，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察各药物组的细胞毒作用，光镜下动态拍照并用流式细胞仪测定各药物组细胞周期的变化。结果斑贞1号联合5-FU半数抑制浓度（IC50）分别由单独用药时的（7．85±0．03）mg／L、（13．00±0．13）mg／L降至（4．75±0．04）mg／L（P〈0．01）。对SGC-7901／ADR细胞毒作用斑贞1号＋5-FU〉斑贞1号〉5-FU。光镜下斑贞1号＋5-FU组细胞与单独用药组相比，细胞生长明显受到抑制，癌细胞体积变小，胞体全面皱缩。流式细胞仪检测斑贞1号＋5-FU组SGC-7901／ADR细胞明显阻滞在G0／G1期，进入S期细胞减少，抑制癌细胞DNA的合成（P〈0．05）。结论斑贞1号联合5-FU较单独用药对SGC-7901／ADR细胞具有明显的细胞毒作用。     

猫眼草提取物对胃癌细胞增殖的影响及其机制探讨

目的研究猫眼草提取物对不同胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BCG-823增殖的影响并探讨其可能的机制。方法不同胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BCG-823分别给予猫眼草提取物10．0、5．0、1.0、0．1mg／L培养48h,采用MTT法和台盼蓝染色法检测猫跟草提取物对不同胃癌细胞株增殖的影响。结果MTT法测定结果显示,猫眼草提取物各浓度组对AGS、SGC-7901、BCG-823细胞增殖均有明显抑制作用且具有良好的量效关系（P〈0．05）;台盼蓝法计数结果显示,给予猫眼草提取物后,活细胞数随培养时间的延长而减少,对胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BGC-823增殖的抑制具有良好的时效关系（P〈0．05）。结论猫眼草提取物对胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BCG-823增殖均具有明显的抑制作用,其抑制作用强度随给药浓度的增加和作用时间的延长而递增。     

藤蟾方抑制人胃癌细胞的生长及诱导其凋亡的实验研究

目的探讨中药复方藤蟾方在体外对人胃癌细胞SGC-7901的生长抑制及凋亡诱导作用.方法用MTT法及流式细胞仪分析法分析藤蟾方对人胃癌细胞SGC-7901细胞的抑制作用及诱导凋亡情况.结果 (1)藤蟾方在3.5μg/ml时显示对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用,并随浓度升高而增强,具有显著性差异(P＜0 01);(2)通过散点图可看出,随浓度的增加右下象限和右上象限出现高染现象,呈剂量依赖性.其中与空白组比较,低、中、高三剂量的凋亡率均有显著性差异(P＜0.01),中、高剂量的坏死率亦有差异(P＜0.01或P＜0.05).结论提示藤蟾方在体外能抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长,诱导细胞凋亡,这可能为藤蟾方抑制其生长的机理之一.     

荷包牡丹碱对人胃癌 SGC-7901细胞生长的作用及机制初探

目的探讨荷包牡丹碱对人胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用及其可能的机制。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,MTT法测定细胞增殖情况;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学变化;West-ern blot法检测Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达。结果 MTT法显示：不同浓度的荷包牡丹碱作用于胃癌SGC-7901细胞不同的时间之后,SGC-7901细胞呈现时间及浓度依赖性的生长抑制;流式细胞仪方法显示：荷包牡丹碱可以促进胃癌SGC-7901细胞的凋亡;行Hoechest33258染色可见细胞核出现固缩、边集,形成凋亡小体等凋亡现象;Western blot法检测显示：与对照组相比,药物作用后Bcl-2表达降低,Bax、Caspase-3表达升高, Bcl-2/Bax比例失调。结论荷包牡丹碱在体外对胃癌细胞的增殖与生长具有抑制作用,可促进其凋亡,其作用可能与Bcl-2/Bax降低导致Caspase-3活化有关。     

肿瘤微环境下HMSC分化为肿瘤相关成纤维细胞及其对肿瘤生长作用的观察

摘要：目的：鉴定人骨髓间充质干细胞（human bone marrow-derived mesenchymal stem cell,HMSC）在肿瘤微环境下分化为肿瘤相关成纤维细胞（tumor associated fibroblast,TAF）及对肿瘤生长作用的观察。 方法：用Transwell实验鉴定HMSC向人胃腺癌细胞株（SGC-7901）迁移的能力。对与人胃癌组织或SGC-7901培养上清液（TCM）长期共培养后的HMSC细胞,用免疫荧光染色检测肌动蛋白微丝(F-actin)的表达、免疫细胞化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）及波形蛋白（vimentin）的表达。用实时定量PCR法检测与胃癌组织及TCM共培养后的HMSC细胞中α-SMA表达水平。分别以SGC-7901细胞、SGC-7901细胞＋HMSC细胞、胃癌组织与HMSC共培养细胞＋SGC-7901细胞、TCM与HMSC共培养细胞＋SGC-7901细胞接种裸鼠,构建裸鼠致瘤模型,测定4组模型致瘤时间及瘤体大小。 结果：Transwell实验结果表明HMSC在肿瘤微环境诱导下具有向肿瘤迁移的能力,诱导后的HMSC细胞高表达TAF细胞表面特征蛋白F-actin、α-SMA及vimentin,实时定量PCR结果表明与胃癌组织及TCM共培养后的HMSC细胞α-SMA mRNA表达水平分别为(0.58±0.05)和(0.52±0.06),与对照组(0.35±0.04)相比明显增高（F=4.72,F=5.31,P均<0.05）。 裸鼠致瘤模型显示经肿瘤微环境诱导后的TAF可促进体内肿瘤生长。 结论：肿瘤微环境诱导下HMSC活化并可分化为TAF,并对肿瘤生长起到促进作用。     

青蒿琥酯对人胃癌SGC-7901细胞生长的影响

目的:研究青蒿琥酯诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡作用及其可能机制.方法:应用流式细胞术(FCM)、透射电镜(TEM)等方法检测不同浓度下青蒿琥酯对人胃癌SGC-7901细胞生长的影响,并应用Western Blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达水平.结果:经青蒿琥酯处理后,人胃癌SGC-7901细胞凋亡率升高,并具有时间浓度依赖性(P＜0.05),癌细胞被阻滞于G0/G1期;电镜观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体;Western Blot法检测到凋亡相关基因Bcl-2表达减弱,Bax表达增强(P＜0.05).结论:青蒿琥酯能有效抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调凋亡相关基因Bcl-2、上调Bax表达有关.     

连翘提取物LQ-4对SGC-7901胃癌细胞体外促凋亡作用研究

目的观察连翘提取物LQ-4对SGC-7901胃癌细胞体外促凋亡作用,为LQ-4在抗肿瘤机制研究及应用提供理论依据。方法应用MTT法测定LQ-4对SGC-7901胃癌细胞增殖的抑制作用;采用AO-EB染色、透射电镜、流式细胞仪检测其促凋亡作用。结果 LQ-4对SGC-7901胃癌细胞体外增殖抑制呈明显的剂量时间依赖性,LQ-4处理细胞6、12、24h后的半数抑制浓度(IC50)分别为(73.27±3.19)μg/ml、(44.63±2.06)μg/ml、(35.99±2.43)μg/ml,各组间差异有统计学意义,F=15.25(P<0.01);AO-EB染色表明药物组细胞出现明显凋亡,阴性对照组细胞形态完好;透射电镜表明,SGC-7901胃癌细胞在LQ-4处理后出现典型凋亡细胞形态改变;FCM分析结果表明,SGC-7901胃癌细胞在LQ-4处理前后细胞凋亡率发生改变,其中溶媒对照组为(0.73±0.49)%,25、50、100μg/mlLQ-4作用组分别为(8.04±0.68)%、(18.45±0.83)%、(52.37±0.74)%,各组间差异有统计学意义,F=13.17(P<0.05)。结论连翘提取物LQ-...     

曲古抑菌素A对人胃腺癌SGC-7901细胞株增殖及其端粒酶hTERT—mRNA表达影响的研究

目的探讨不同浓度的曲古抑菌素A(trichostatin A，TSA)对人胃腺癌SGC-7901细胞增生及其端粒酶hTERT-mRNA表达的作用。方法不同浓度的TSA与人胃腺癌SGC-7901细胞株共培养，MTT检测细胞增生，RT—PCR法检测细胞端拉酶hTERTH-mRNA的表达，同时用相差显微镜动态观察细胞形态及生长方式上的改变。结果TSA呈时间剂量依赖性抑制胃癌细胞株SGC-7901的生长，同时它也能显著减少hTERT-mRNA的表达，呈剂量依赖关系。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA能抑制胃癌细胞株SGC-7901的hTERT-mRNA表达，进而抑制其生长，这可能是组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA抗肿瘤的另一机制。     

IL-17A诱导胃癌细胞SGC-7901分泌CXCL13机制研究

目的探讨白细胞介素17A(IL-17A)诱导胃癌细胞SGC-7901分泌CXCL13的分子机制。方法体外培养胃癌细胞SGC-7901,利用IL-17A刺激或预先加入信号通路抑制剂孵育后再进行IL-17A刺激。刺激后采用酶联免疫吸附法检测培养上清CXCL13水平。结果 SGC-7901细胞经IL-17A刺激后,CXCL13分泌水平显著增加(P0.05),且具有剂量和时间依赖性。信号转导与转录激活因子-3(STAT3)抑制剂预孵育,可显著抑制IL-17诱导SGC-7901细胞分泌CXCL13(P0.05),核因子κB(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶1/2(MEK1/2)、p38/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂则无显著抑制作用。结论 IL-17A可通过STAT3信号通路诱导胃癌细胞SGC-7901分泌CXCL13,从而发挥免疫调节作用。     

芦荟大黄素介导的光动力学作用对胃癌细胞的作用

目的探讨新型光敏剂芦荟大黄素介导的光动力学作用对人体胃癌细胞增殖和凋亡的影响。 方法体外培养人体胃癌细胞SGC-7901,不同浓度（0、0.1、1.0、10、20、30、40和50μΜ）芦荟大黄素处理胃癌细胞24h,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测胃癌细胞SGC-7901增殖率的变化;将芦荟大黄素（10μΜ）作用于胃癌细胞SGC-7901 6h后,不同能量的紫外线（波长430nm,连续输出方式,功率密度40mW/cm2）处理胃癌细胞,能量密度分别为0、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8和25.6J/cm2,采用MTT法检测胃癌细胞增殖率的变化;芦荟大黄素（10μΜ）作用于胃癌细胞SGC-7901 6h后,能量密度为12.8J/cm2的紫外线（波长430nm,连续输出方式,功率密度40mW/cm2）处理胃癌细胞,采用透射电镜法检测胃癌细胞超微结构的变化;采用TUNEL法检测凋亡细胞形态学的变化;采用流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡率的变化。 结果不同浓度芦荟大黄素作用于胃癌细胞24h,芦荟大黄素浓度低于10μΜ对胃癌细胞的作用差异无统计学意义（P&rt;0.05）,芦荟大黄素（10μΜ）介导的光动力作用对胃癌细胞的抑制作用呈能量依赖性,光照能量密度为3.2、6.4、12.8和25.6J/cm2与0J/cm2比较对胃癌细胞的抑制作用差异有统计学意义（P<0.05）;透射电镜下能观察到明显的凋亡小体;TUNEL法可观察到细胞核固缩、碎裂和凋亡小体;流式细胞仪检测到PDT组胃癌细胞的凋亡率明显高于空白对照组、单纯光照组和单纯药物组。 结论芦荟大黄素介导的光动力作用能有效的抑制胃癌细胞生长,其抑制胃癌细胞生长的机制与光动力作用所致的细胞凋亡有关系。     

羊栖菜多糖体外抗肿瘤的作用及其机制

背景：药物治疗是肿瘤治疗的主要手段之一，近年来从天然植物中寻找低毒抗癌活性成分的研究广受重视。其中，多糖类成分通过调节机体免疫而发挥抗癌作用的机制已经得到公认，但从诱导细胞凋亡等多个角度探讨多糖的抗癌机制将为癌症治疗提供新的理论依据。目的：观察羊栖菜多糖对不同组织肿瘤的抑制作用及其对肿瘤治疗的组织特异性，并从细胞凋亡角度探讨其作用机制。设计：以6种不同的肿瘤细胞为观察对象的体外平行对照实验及动态测定实验。单位：哈尔滨商业大学药物研究所博士后科研工作站。材料：实验于2002-11／2003-10在哈尔滨医科大学药理研究室完成。药物选用羊栖菜多糖，5-氟尿嘧啶；细胞株选用处于对数生长期的人肝癌Bel-7405、人宫颈癌克隆cc-801、人乳腺癌MCF-7、人直肠癌COLO-205，人胃癌SGC-7901、人食管癌Eca-109。方法：采用四甲基偶氮唑盐法和集落形成实验法观察羊栖菜多糖的体外抗肿瘤作用：采用流式细胞仪观察羊栖菜多糖对肿瘤细胞周期及细胞凋亡的影响；采用Fluo-3／AM探针标记，激光共聚焦技术观测细胞内Ca^2＋浓度。主要观察指标：羊栖菜多糖对6种细胞的对细胞抑制50％的药物浓度和集落形成率；对SGC-7901细胞的凋亡率测定，细胞周期分析及细胞内Ca^2＋浓度含量测定。结果：①羊栖菜多糖的体外抗肿瘤作用：羊栖菜多糖对6种人胃癌细胞株均有一定的抑制作用，而尤以对人胃癌（SGC-7901）和直肠癌（COLO-205）效果最为明显。②羊栖菜多糖对SGC-7901人胃癌细胞周期及细胞凋亡的影响：通过对给药后4，8，12，24，485个时间段细胞凋亡的观察，发现羊栖菜多糖组各时问段G0／G1期细胞都多于空白对照组，羊栖菜多糖给药12h后，凋亡指数较相应时间段空白对照组明显升高（12．17&;#177;0．88，1．43&;#177;0．32；20．33&;#177;0．69，1．56&;#177;0．67；18．77&;#177;0．68，1．55&;#177;0．46。P〈0．01）。（爹羊栖菜多糖对SGC-7901细胞内Ca^2＋浓度的影响：给药前SGC-7901细胞内Ca^2＋浓度处于一个相对恒定的浓度。给药后Ca^2＋浓度迅速升高然后又降低，加入CaCl2后Ca^2＋浓度又升高。结论：羊栖菜多糖对人胃癌细胞和直肠癌细胞效果较好，这一作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡达到的。羊栖菜多糖可阻滞SGC-7901人胃癌细胞内G0／G1期进入S期，升高细胞凋亡指数。羊栖菜多糖能通过引起肿瘤细胞内钙库Ca^2＋的释放而升高肿瘤细胞内Ca^2＋浓度，从而达到诱导肿瘤细胞凋亡而抗肿瘤的作用。     

RNA干扰MBP-1基因对胃癌细胞SGC-7901增殖影响

目的：探讨 MBP-1（c-myc promter binding protein 1,MBP-1）基因表达沉默对胃癌细胞株 SGC-7901细胞增殖影响。方法实验分3组：空白对照组（未转染胃癌细胞）、阴性对照组（转染错义序列）和干扰组（转染 MBP-1 shRNA）。设计2条针对MBP-1基因的小干扰 RNA 片段及1条阴性对照 siRNA,并构建入 pSIREN-retroQ 质粒。将构建的重组 pSIREN-retroQ 质粒通过 Lipofectamine 2000脂质体转染胃癌 SGC-7901细胞,嘌呤霉素筛选稳转株细胞。Real time PCR 和 Western blot 分别检测MBP-1表达。MTT 法对 MBP-1干扰后 SGC-7901细胞增殖进行检测。结果通过 PCR 扩增阳性克隆及测序,说明已成功构建MBP-1干扰及对照重组 pSIREN-retroQ 质粒。通过 Lipofectamine 2000脂质体将重组质粒转染胃癌 SGC-7901细胞,并通过嘌呤霉素筛选2周,说明已成功构建 MBP-1干扰及对照 SGC-7901稳转株细胞。Real time PCR 检测,干扰组 MBP-1 mRNA 相对表达量与空白对照组相比显著下调（P ＜0.05）。Western blot 检测 MBP-1蛋白表达,干扰组 MBP-1表达量与空白对照组相比也都显著下调。MTT 法检测结果表明,MBP-1干扰组细胞在48、72、96和120 h 增殖能力比空白对照组都有显著的升高（P ＜0.05）。结论下调 MBP-1基因表达能明显促进胃癌细胞 SGC-7901的增殖,从而为胃癌基因治疗提供了新靶点。