急性白血病患者细胞周期蛋白B1表达的临床意义

目的　探讨细胞周期蛋白B1(cyclinB1)在白血病发生、发展中的作用及对成人急性白血病 (AL)预后的判断价值。方法　对 85例成人AL初治患者 ,并对其中 4 7例达到缓解及 18例复发的患者、10例持续完全缓解 (CCR)期的AL患者采用流式细胞术检测cyclinB1、p2 1cip1蛋白表达水平和细胞周期分布 ;采用半定量RT PCR检测cyclinB1、p2 1cip1、增殖细胞核抗原 (PCNA)mRNA水平。结果　 85例初治AL患者全周期或G1/S期cyclinB1蛋白表达水平明显高于正常对照 (P <0 .0 0 1) ;缓解患者cy clinB1蛋白表达与正常对照组比较差异无统计学意义 (P =0 .2 1) ,复发患者cyclinB1蛋白表达高于正常对照 (P <0 .0 5 ) ,但低于AL初治组 (P <0 .0 1) ,CCR组cyclinB1与正常对照组比较差异无显著性 (P=0 .6 94 ) ;初治AL患者的cyclinB1表达率高于正常对照组 (P <0 .0 0 1) ;cyclinB1蛋白高表达者均有G1期异常高表达 ;cyclinB1与p2 1的蛋白表达呈负相关 ;cyclinB1蛋白表达与其mRNA水平呈正相关 ;cy clinB1表达与细胞增殖指数 (PI)及PCNA表达水平呈正相关 ;cyclinB1表达水平高的患者有较高的治疗缓解率 (P <0 .0 1) ,但有较高的复发率 (P <0 .0 1) ,cyclinB1高表达者有较高的生存率。结论　cyclinB1在成人AL患者中有过度表达和周期分布 ,其     

P27^kip1与细胞周期蛋白G在急性白血病中的表达及相关性研究

为了探讨P27^kip1与细胞周期蛋白G（cyclin G）在急性白血病患者中的表达及其相关性,采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测89例急性白血病患者和10例正常人白细胞的P27^kip1与cyclin G mRNA水平,采用Wes—tern blot检测39例急性白血病患者和10例正常人白细胞的P27^kip1与cyclinG蛋白表达水平。结果显示：急性白血病初治／复发组的cyclin G mRNA与蛋白表达水平均明显高于缓解组和正常对照组（P〈0．05或P〈0．01）;缓解组与正常对照组之间无显著差异（P〉0．05）。急性白血病初治／复发组的P27^kip1 mRNA水平与缓解组和正常对照组比较均无明显差异（P〉0．05）。而急性白血病缓解组和正常对照组的P27^kip1的蛋白表达水平高于初治／复发组（P〈0．05）,缓解组与正常对照组之间无显著差异（P〉0．05）。P27却。与cyclin G的表达呈低度负相关。结论：P27螂。与cyclin G在白血病患者中有异常表达,与白血病的发生发展有一定联系;P27^kip1的低表达与cyclin G的异常高表达可能是白血病预后不良的因素之一。     

成人急性白血病患者细胞周期蛋白A基因表达与耐药的关系

目的 探讨细胞周期蛋白A（cyclin A)基因在成人急性白血病（AL）患者中的表达以及与耐药的关系。方法 采用半定量RT－PCR技术对32例多药耐药和32例化疗敏感的AL患者和20名正常人进行细胞周期蛋白A、mdr1、TopoⅡα、bcl-2 mRNA水平的测定。结果 耐药组患者细胞周期蛋白A及TopoⅡα mRNA的表达水平均明显低于敏感组患者（P＜0．01），20名正常人在同一实验条件下未检出细胞周期蛋白A mRNA的表达；耐药组患者mdrl及bcl-2 mRNA表达水平均明显高于敏感组（P＜0．01）；64例AL患者中，细胞周期蛋白A与TopoⅡα表达水平呈高度的正相关（r=0.794,P=0.000)；细胞周期蛋白A与TopoⅡα同时阳性低表达的10例AL患者全部耐药；经Binary逻辑回归分析显示细胞周期蛋白A与耐药显著相关。结论 细胞周期蛋白A可能会成为判断AL患者预后的新指标，联合TopoⅡα检测对判断AL耐药有意义。     

白血病患者cyclin E2、CDK2的表达与复发的关系

目的 探讨急性白血病患者细胞周期蛋白E2 (cyclin E2)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的表达情况及预后意义.方法 急性白血病(AL)患者70例,包括新近诊断急性白血病患者41例、复发患者10例和完全缓解期患者19例.14例健康人为正常对照.应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测骨髓或外周血单个核细胞cyclin E2和CDK2 mRNA表达水平.结果 Cyclin E2和CDK2 mRNA在初治的AL患者阳性表达明显高于正常对照组(70.7％ vs 0％,P＜0.05),cyclin E2在完全缓解组中阳性率低于初治组(47.4％ vs 70.7％,P＜0.05),初治组CDK2阳性率高于正常对照组(78.0％ vs 28.6％,P＜0.05).cyclin E2 mRNA阳性表达患者完全缓解率低于阴性表达者(48.3％ vs 91.7％,x2 =5.016,P＜0.05).结论 Cyclin E2和CDK2可望成为急性白血病早期预后指标和复发判断指标.     

肌醇5'磷酸酶基因突变对K562细胞周期蛋白和Akt磷酸化的影响

目的 从分子水平探讨肌醇5'磷酸酶(SHIP)基因突变对人白血病细胞系K562细胞周期及其相关基因表达的影响.方法 应用携带野生型和突变型SHIP及绿色荧光蛋白的慢病毒及空载体慢病毒质粒转染K562细胞,通过流式细胞术检测K562/SHIP细胞转染效率、细胞增殖指数及细胞周期变化;MTT法检测细胞增殖活性改变,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测SHIP mRNA水平变化,Western blot检测各组K562细胞SHIP、细胞周期蛋白(cyclin)D1、p21WAF1/CIPI、P27KIP1蛋白表达水平及Akt磷酸化变化.结果 野生型SHIP基因能明显抑制K562细胞增殖,并产生明显的G0/G1期阻滞[G0/G1期细胞分别为(34.2±7.8)%和(0.7±8.3)%,P<0.01];但SHIP基因点突变并未影响K562细胞增殖及细胞周期改变[G0/G1期细胞分别为(33.4±4.2)%和(36.3±6.7)%,P>0.05].Western blot结果发现转染野生型SHIP基因后K562细胞Akt磷酸化和cyclin D1表达水平明显下降(P<0.01),p21WAF1/CIPI、p27KIP1表达增高,而突变型SHIP基因对Akt磷酸化水平和细胞周期蛋白表达几乎没有影响(P>0.05).结论 ①野生型SHIP基因通过下调K562细胞Akt磷酸化水平,进而抑制其下游cyclin D1表达,上调p21WAF1/CIPI和p27KIP1基因表达,导致细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制K562细胞增殖;②SHIP基因突变体(TTC→CTC,Phe→Leu)丧失了对K562细胞的增殖抑制作用,提示SHIP基因对K562细胞增殖的负调控作用有赖于其基因结构和功能正常.     

ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病细胞周期的调控作用

本研究探讨ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病（CML）细胞周期的调控作用。以RT-PCR、Western blot和FCM方法分别检测CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、p38、cyclin D2、cyclin E、p27的mRNA表达及蛋白表达（其中ERK和P38为磷酸化ERK和磷酸化P38）及细胞周期分布,并分析其相关关系。结果表明：CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、P38、cyclin D2、cyclin E的mRNA表达和蛋白表达增高,P27的表达降低,且cyclin D2蛋白表达与cyclin E、ERK和P38蛋白表达呈正相关（P〈0.01）,与P27蛋白表达呈负相关（P〈0.01）。G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,与对照组相比有显著性差异。结论：CML中P38、ERK mRNA表达和活性增加,激活下游的cyclin D2、cyclin E和P27等细胞周期调控因子,致使G0/G1期缩短,细胞快速通过G1/S转换点进入S期,加速细胞周期进程和细胞增殖,导致CML的发生。     

p16和细胞周期蛋白D1蛋白在口腔鳞癌中的表达及其意义

目的　研究口腔鳞癌组织中p16及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达以及与临床生物学特性和细胞增殖的关系。方法　采用免疫组化方法检测49例原发性口腔鳞癌组织及20例正常口腔黏膜组织中p16及cyclin D1蛋白的表达水平，Ki-67作为细胞增殖活性的指标也被检测。结果　p16在口腔鳞癌中阳性表达率显著低于正常口腔黏膜组织(P<0.05)，cyclin D1蛋白和Ki-67在口腔鳞癌中阳性表达率显著高于正常口腔黏膜组织(P<0.05) ；cyclin D1蛋白过表达与临床分级及淋巴结转移有关(P值分别<0.05)，p16缺失表达与淋巴结转移有关(P<0.05)；p16负表达和cyclin D1过表达与细胞增殖评价因子Ki-67呈负相关(r=-0.598和-0.658, P<0.05)。结论　在鳞癌的发生发展过程中，p16的缺失表达和cyclinD1的过表达两者可能单独或共同参与。p16的缺失可能还与口腔鳞癌细胞的分化、转移及增值和预后有关。     

细胞周期蛋白G2 mRNA在急性白血病患者中的表达及临床意义

为了探讨急性白血病(AL)患者中细胞周期蛋白G2(cyclin G2)的mRNA表达及其临床意义,采用逆转录 聚合酶链反应(RT-PCR)法检测74例急性白血病患者及10例正常人骨髓细胞中的cyclin G2、G1和P53的mRNA 表达,对cyclin G2的阳性扩增产物进行序列分析。结果表明:①AL患者中cyclin G2的阳性率及mRNA表达水平 (52.7％,0.552±0.498)明显低于正常人(100％,1.953±0.675)(P<0.01)。②在初治的AL患者中,cyclin G2 阳性表达患者的完全缓解(CR)率高于阴性者(分别为69.2％和40％;P<0.05)。③耐药组AL患者cyclin G2的 阳性率(43.6％)明显低于敏感组(68.6％)(P<0.05)。④对初治28例CR的AL患者进行随访14.3个月(11- 18.5个月),11例cyclin G2低表达患者中有10例复发(90.9％),而17例cyclin G2高表达患者中有7例复发 (41.2％),两者之间有显著性差异(P<0.05)。结论:CyclinG2是影响AL患者CR的因素,其高表达可能是AL患 者良好预后的指标之一。     

Stathmin1在急性白血病中的表达及意义

本研究探讨stathmin1基因和蛋白在急性白血病初治、复发和缓解患者中的表达及其意义.应用FQ-PCR和Western blot检测25例正常人和76例急性白血病患者外周血细胞中stathmin1 mRNA和stathmin1蛋白的表达水平.结果显示,在正常人体内检测不出stathmin1蛋白表达,其mRNA在正常人体内则低水平表达.急性白血病初治患者stathmin1 mRNA表达高于正常人（P＜0.05）,急性白血病复发者stathmin1 mRNA表达显著高于初治者（P＜0.05）,急性髓系白血病与急性淋巴细胞白血病之间stathmin1 mRNA表达无显著差别（P＞0.05）.急性白血病初治患者stathmin1蛋白表达的阳性率为89％,stathmin1蛋白在急性白血病患者缓解后表达明显下降或不表达,急性白血病复发者stathmin1蛋白表达与初治者无显著差别（P＞0.05）,急性髓系白血病与急性淋巴细胞白血病之间stathmin1蛋白表达无显著差别（P＞0.05）.结论：stathmin1蛋白和mRNA在急性白血病初治及复发患者体内高表达,而在缓解后体内仍有弱表达的患者,具有一定的复发风险,因此stathmin1可能成为判断微残留白血病的一个新的生物学指标.     

丙戊酸钠对Kasumi-1细胞细胞周期的阻滞作用及其机制探讨

目的 研究组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸钠(VPA)对白血病细胞系Kasnmi-1细胞周期的影响并探讨其分子机制.方法 不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞不同时间,碘化丙锭染色流式细胞术分析细胞周期的变化.RT-PCR及Western blot方法 分析细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21 WAF1/CIP mRNA或蛋白水平变化.结果 ①VPA抑制Kasumi-1细胞的细胞周期,使其阻滞于G0/G1期.3 mmol/L VPA处理3 d,G0/G1期细胞由(50.7±2.8)%上升至(80.7±1.7)%.②以3 mmol/LVPA处理Kasumi-1细胞不同时间,与对照组比较,3 mmol/L VPA组cyclin D1 mRNA表达水平下调;以不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞3 d,结果 发现随着VPA药物浓度增加cyclin D1 mRNA表达水平降低,呈现剂量依赖性.③VPA诱导p21WAF1/CIP mRNA表达明显增加,呈现时间及剂量依赖性.不同浓度VPA处理细胞3 d时,随着用药浓度的增加,p21WF1/CIP蛋白相对表达水平增加,3 mmol/L VPA处理细胞2 d与0 d比较,p21 WAF1/CIP蛋白相对表达水平明显增加(2.498±0.240对0).结论 VPA可以通过对cyclin D1及周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21WAF1/CIP调节使Kasumi-1细胞周期阻滞于G0/G1期.     

性连锁凋亡抑制蛋白及其拮抗蛋白在急性白血病中的表达及意义

为了研究急性白血病(AL)性连锁凋亡抑制蛋白(X-linkedinhibitorofapoptosisproteins,XIAP)和XIAP相关因子1(XIAP-associatedfactor1,XAF1)的表达及其临床意义,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测116例AL患者和17名正常人骨髓单个核细胞中XIAP、XAF1、Smac和HtrA2mRNA的表达,并分析其与临床治疗效果的关系。结果表明初治AL患者XIAPmRNA表达水平(0.990±0.337)明显高于正常对照(0.395±0.148)(P<0·01);初治AL患者XAF1mRNA阳性率及表达水平(56.3%,0.246±0.267)明显低于正常对照(100%,0.964±0.387)(P<0.01);69例初治AL患者中高表达XIAP患者完全缓解率明显低于低表达患者(P<0.01);XAF1阳性表达患者完全缓解率明显高于阴性表达患者(P<0.01)。结论XIAP在AL中异常高表达,XAF1在AL中异常低表达,XIAP高表达及XAF1低表达或阴性可能是AL患者不良预后的指标。     

急性白血病患者DNA甲基转移酶基因的表达其及临床意义

为了探讨DNA甲基转移酶(DNMT)基因在成人急性白血病(AL)患者中的表达及其与临床预后之间的 关系,对72例AL患者和20例正常人的骨髓采用RT-PCR方法进行DNMT、p15INK4B、mdrl mRNA水平的检测;对 56例AL患者和14例正常人p15INK4B基因启动子区域CpG岛甲基化率,采用甲基化特异性PCR方法进行检测。结 果表明:AL患者组所有3种DNMT表达均明显高于对照组(P<0.01),改用细胞增殖核抗原(PCNA)为内对照, 差别仍有统计学意义。AL患者3种DNMT基因表达之间呈明显正相关,表现为协同的高表达;p15INK4B、mdrl与 DNMT表达呈明显负相关。DNMT因同时阳性患者组完全缓解(CR)率明显高于DNMT基因部分阳性或阴性 患者组(P<0.01)。p15INK4B基因在56例AL患者中,31例(55.4％)完全甲基化,12例(21.4％)部分甲基化,14例 正常人在同一条件下则无1例甲基化。结论:DNMT基因在成人AL患者有异常高表达,其可能通过促使抑癌基因 启动子区域过甲基化,而使其转录失活,从而导致白血病恶性克隆的形成。对于高表达DNMT的AL患者,可能对 化疗更敏感,提示DNMT基因高表达可能是临床预后较好的指标。     

急性白血病患者SHP-1与c-kit基因表达及其临床意义

为了探讨造血细胞磷酸酶（SHP—1）基因和原癌基因c—kit在急性白血病（AL）患者中的表达及其与AL的发生及预后的关系，应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测60例急性白血病患者及33名正常对照者单个核细胞的SHP-1、c-kit mRNA的表达。结果 显示：SHP—1在AML细胞中表达阳性率由高至低依次为缓解组、初治组、复发组，c—kit表达阳性率则相反，各组与正常对照组相比有显著性差异（P〈0.05），SHP-1在AML细胞中表达阳性率比ALL细胞高，有显著性差异（P〈0.05），c—kit在AML细胞中表达阳性率比ALL细胞中高，有显著性差异（P〈0.05）；SHP-1与c-kit表达成负相关（r=-0．502，P〈0．05）；30例初治AML患者SHP-1^＋与SHP-1^-的完全缓解率均有显著性差异（P〈0.05），c—kit^＋与c—kit^-的完全缓解率均有显著性差异（P〈0.05）。结论：SHP—1可能是一个潜在的抑癌基因，它负性调节c-kit基因而抑制肿瘤的发生，同时监测二者的表达可作为判断AL治疗转归的预测指标。     

血管内皮生长因子与不同类型急性白血病的关系及其意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在不同类型和不同病期急性白血病(AL)患者发病过程中的作用及其意义。方法采用半定量RTPCR方法检测69例AL患者骨髓单个核细胞(MNC)VEGFmRNA表达,ELISA法检测培养上清MNCVEGF的含量,MTT比色法检测骨髓MNC培养上清对人脐静脉内皮细胞株huECV304细胞增殖的影响。结果骨髓MNCVEGF相对中位表达量(VEGF与βactin相对灰度比值),初发未治组(0.86)高于缓解组(0.41)和正常对照组(0.39)(P值均<0.01),复发组(1.02)与初发未治组之间差异无统计学意义(P>0.05);初发未治急性髓系白血病(AML)组(1.03)高于急性淋巴细胞白血病(ALL)组(0.61)(P<0.05)。初发未治AL组骨髓MNC72h培养上清液VEGF水平为91.48ng/L,高于缓解组(31.91ng/L)和正常对照组(28.71ng/L)(P值均<0.01);AML组(173.49ng/L)高于ALL组(32.76ng/L)(P<0.01)。AML患者骨髓MNC72h培养上清可促进huECV304细胞增殖,明显高于条件上清加VEGF抗体阻断组(P<0.01);而ALL患者骨髓MNC培养上清液对huECV304细胞增殖的影响与单抗阻滞组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论AML患者MNCVEGFmRNA表达强度和分泌水平高于ALL患者;参与ALL和AML血管新生反应的调控因子可能不同。     

细胞周期蛋白A在儿童急性白血病患者中的表达及意义

目的 探讨细胞周期蛋白A(Cyclin A)在儿童急性白血病患者中的表达及临床意义.方法 应用Western blot方法检测47例初诊急性白血病(AL)患儿和33例非血液系统恶性疾病患儿(对照组)骨髓单个核细胞Cyclin A的表达.结果 47例AL患儿Cyclin A表达水平(0.38±0.20)显著高于对照组(0.03±0.15)(P<0.01);急性淋巴细胞白血病(ALL)高危组(HR-ALL)患儿Cyclin A表达水平(0.62±0.38)高于ALL标危组(SR-ALL)(0.33±0.33)(P<0.05);33例外周血WBC≥50 × 109/L患儿组和14例外周血WBC<50×109/L患儿组Cyclin A的表达水平分别为0.64±0.36和0.39±0.38,差异有统计学意义(P<0.05);Cyclin A表达阳性的18例患儿中8例完全缓解(CR),CR率44.4%,较阴性患儿CR率(100%)低(P<0.01).结论 Cyelin A参与儿童急性白血病的发生、发展.     

急性白血病病人骨髓细胞BAALC基因表达及意义

目的通过检测脑和急性白血病胞质（BAALC）mRNA在急性白血病（AL）病人表达,探讨其与AL病情进展及预后关系。方法应用逆转录聚合酶链反应技术,检测20例急性髓系白血病（AML）、8例急性淋巴细胞白血病（ALL）及11例特发性血小板减少性紫癜（ITP）、缺铁性贫血（IDA）等非恶性血液病病人（对照组）骨髓单个核细胞BAALC mRNA表达水平。结果初治组AL病人BAALC mRNA表达水平较对照组显著升高（F=8.59,q=5.62,P〈0.05）;经治疗获完全缓解后,与初治组比较,其表达水平显著下降,两组比较差异有显著性（q=3.99,P〈0.05）。BAALC mRNA表达水平与AL病人外周血白细胞计数及骨髓原始细胞比例无明显相关性（P〉0.05）。结论 BAALC mRNA表达与AL疾病进展及预后密切相关,可作为AL预后判断的有意义指标。