平喘固本合剂对哮喘小鼠气道急性炎症的影响

目的 探讨平喘固本合剂对哮喘小鼠气道急性炎症的影响及可能的机制。方法 健康雌性昆明小鼠40只,随机分为空白对照组（A组）、哮喘模型组（B组）、平喘固本合剂治疗组（C组）。用卵清清蛋白致敏建立哮喘小鼠气道急性炎症模型,各组分别给予相应药物治疗10 d。对各组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞进行分类与计数,苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织的病理变化,同时应用ELISA法测定BALF中白细胞介素4（IL-4）、干扰素γ（IFN-γ）水平的变化。结果 与A组比较,B组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞明显增多（F=85.70-127.69,P＜0.05）,哮喘模型制作成功;C组细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞较B组均明显减少,但较A组升高,差异有显著性（q=2.15-10.08,P＜0.05）。与A组比较,B组中IL-4含量、IL-4/IFN-γ明显升高,IFN-γ明显降低,差异有统计学意义（F=186.17-378.06,q=17.02-21.46,P＜0.05）;与B组比较,C组IL-4、IL-4/IFN-γ降低,IFN-γ升高,差异有显著性（q=4.80-7.18,P＜0.05）。HE染色显示,C组炎症细胞浸润、平滑肌肥厚及肺组织黏膜水肿等炎症表现较B组明显减轻。 结论 平喘固本合剂对急性哮喘小鼠气道炎症有明显的抑制作用,其作用机制可能与其抑制IL-4的表达、抑制炎性细胞聚积及促进IFN-γ的表达有关。     

血必净注射液对卵蛋白致敏小鼠气道MUC5AC及Th1／Th2细胞因子表达的影响

目的研究血必净注射液对卵蛋白（OVA）致敏小鼠气道MUC5AC及Th1/Th2细胞因子表达的影响,探讨干预气道黏液高分泌的机制。方法卵蛋白腹腔注射致敏小鼠,32只小鼠随机分组为：对照组、哮喘组、地塞米松治疗组和血必净治疗组,每组8只,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠肺泡灌洗液（BALF）中IL-4、IFN-γ的水平变化,实时RT-PCR检测小鼠肺组织MUC5AC mRNA表达变化。结果 （1）与对照组小鼠气道MUC5A mRNA表达（0.377±0.021）相比,哮喘组（1.103±0.087）明显增多（P〈0.01）;地塞米松治疗组（0.403±0.038）及血必净治疗组（0.437±0.031）小鼠气道MUC5A mRNA表达较哮喘组明显降低（P〈0.01）;（2）与对照组小鼠BALF表达IL-4[（22.812±1.978）ng/L]及IFN-γ[（101.232±9.664）ng/L]比较,哮喘组BALF表达IL-4[（87.234±6.901）ng/L]水平升高（P〈0.01）,而IFN-γ表达[（47.231±3.887）ng/L]明显降低（P〈0.01）;与哮喘组比较,地塞米松治疗组（[36.289±3.012）ng/L]及血必净治疗组IL-4水平[（38.112±2.761）ng/L]均显著降低（P〈0.01）;结论血必净注射液降低IL-4和MUC5AC的表达,提示在抑制气道黏液高分泌及控制哮喘方面具有意义。     

不同剂量致敏原对小鼠过敏性哮喘模型特异性抗体和炎性细胞因子的影响

目的 观察不同剂量致敏原对小鼠过敏性哮喘模型血清特异性抗体IgE、IgG2a和白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-5（IL-5）、白细胞介素-12（IL-12）、γ-干扰素（IFN-γ）等炎性细胞因子的影响.方法 45只雌性BALB小鼠随机分为4组,空白对照组腹腔注射不含鸡卵蛋白（OVA）的PBS缓冲液,低、中、高剂量组分别注射含10、100、1 000 μg OVA的PBS缓冲液,第15 ～20天以雾化吸入OVA生理盐水激发致敏,制备过敏性哮喘模型.结果 各给药组均出现不同程度炎细胞浸润,低剂量组最为显著;低、中、高剂量组血清IgE、IL-4、IL-5水平呈递减趋势,组间差异显著（P＜0.01）,且均显著高于对照组（P＜0.01）;各实验组血清IgG2a、IL-12及IFN-γ水平呈递增趋势,组间差异显著（P＜0.01）,且与对照组差异显著（P＜0.05或P＜0.01）.结论 不同剂量的OVA可能影响小鼠过敏性哮喘模型所产生的细胞因子类型,低剂量OVA造模的效果最为显著,高剂量OVA可能导致小鼠发生免疫耐受.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对哮喘小鼠呼吸道变应性炎症作用的研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对尘螨卵清蛋白(OVA)致敏/激发小鼠呼吸道变应性炎症的作用。方法 C57BL/6小鼠以OVA致敏/激发,在其每日供水时加入EGCG;在最后一次激发24 h后,留取标本,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞计数和分类,测定BALF、血浆中细胞因子水平以及外周血和BALF中Foxp3+CD4+T细胞的比例。结果哮喘小鼠可见明显炎性细胞浸润,经EGCG治疗后肺部炎性细胞浸润显著减少;BALF中炎性细胞,特别是嗜酸性粒细胞计数较对照组明显升高(P<0.01);白细胞介素(IL)-4、IL-5水平较对照组明显升高(P<0.01),Foxp3+T细胞比例显著下降(P<0.01),Th1细胞因子干扰素-γ(IFNγ-)无显著变化,治疗组与模型组相比细胞计数、IL-4和IL-5水平、Foxp3+T细胞比例显著增加,与对照组相比无显著差异;IL-10水平显著升高。结论 EGCG可有效抑制哮喘模型小鼠呼吸道变应性炎症,其作用途径可能是通过诱导Foxp3+T细胞的产生和IL-10的分泌,进而抑制Th2型免疫反应,这提示EGCG也许可以应用于哮喘的辅助治疗。     

T细胞免疫球蛋白-黏蛋白-1对卵蛋白致敏小鼠气道MUC5AC及Th1/Th2细胞因子表达的影响

目的 研究T细胞免疫球蛋白-黏蛋白-1（TIM-1）对卵蛋白（OVA）致敏小鼠气道MUC5AC及Th1/Th2细胞因子表达的影响,探讨气道黏液高分泌的机制.方法 OVA腹腔注射致敏小鼠,随机分组为：正常对照组（A组）、哮喘组（B组）和哮喘＋ TIM-1抗体处理组（C组）,每组8只,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠肺泡灌洗液（BALD中IL-4、IFN-γ的水平变化,实时RT-PCR检测外周血单个核细胞（PBMCs） TIM-1 mRNA及气道MUC5AC mRNA表达.结果 （1）与A组小鼠外周血PBMCs表达TIM-1 mRNA（0.618±0.043）相比,B组（1.129±1.101）及C组（0.898±0.071）TIM-1 mRNA表达明显增多（P＜0.01）,且C组明显低于B组（P＜0.01）;（2）B组和C组小鼠BALF中IL-4表达分别为（67.123±3.341） ng/L和（44.217±2.201）ng/L,较A组[（23.211±2.142） ng/L]明显增多（P＜0.01）,且C组明显低于B组（P＜0.01）;B组及C组小鼠BALF表达IFN1分别为（53.475±4.776） ng/L和（87.116±5.611）ng/L,均低于A组[（124.624±9.292） ng/L] （P ＜0.01）,而C组与B组相比,有所增加（P＜0.01）;（3）B组（1.004±0.081）及C组（0.673±0.029）小鼠气道MUC5A mRNA表达与A组（0.314±0.027）相比,明显增加（P＜0.01）,且C组低于B组（P＜0.01）;（4）小鼠外周血PBMCs TIM-1 mRNA表达与IL-4、MUC5AC表达呈正相关,而与IFN-γ表达呈负相关.结论 抑制TIM-1表达可减少IL-4和MUC5AC的分泌,提高IFN-γ表达,提示在调节黏液高分泌及哮喘治疗中具有意义.     

雾化吸入BCG对哮喘小鼠气道炎性作用的影响

目的探讨卡介苗（BCG）雾化吸入对变应性哮喘的治疗作用及其与支气管肺泡灌洗液（BALF）中γ-干扰素（IFN-γ）的关系。方法昆明小鼠32只，随机分成三组，正常对照组，哮喘模型组及治疗组。治疗组又分为BCG治疗组和地塞米松治疗组。治疗组与哮喘模型组一起制作哮喘模型。观察小鼠气道壁炎症变化，并收集支气管肺泡灌洗液（BALF），测定BALF中细胞总数，嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数，用酶联免疫法测定BALF中IFN-γ的含量。结果哮喘模型组BALF中细胞总数和嗜酸细胞数显著高于正常对照组（P〈0．01），BALF中IFN-γ水平显著低于正常组（P〈0．01）；BCG治疗组、地塞米松治疗组BALF中细胞数、EOS细胞数显著低于哮喘组，而IFN-γ水平显著高于哮喘组（P〈0．01）。BCG治疗组各项指标与地塞米松治疗组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论雾化吸入BCG能明显抑制哮喘小鼠气道的炎性反应，吸入BCG对哮喘小鼠有治疗作用。     

变应性鼻炎患者3种血清的表达及其与IgE相关性分析

目的探讨变应性鼻炎患者血清白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素12（IL-12）、干扰素γ（IFN-γ）的表达及其与免疫球蛋白E（IgE）相关性。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定40例变应性鼻炎患者及20例健康人血清中IL-4、IL-12、IFN-γ及IgE水平,并对变应性鼻炎患者的IgE分别与IL-4、IL-12、IFN-γ作相关性分析。结果变应性鼻炎患者血清IL-4、IgE水平显著高于对照组（P〈0．01）,血清IL-12、IFN-γ水平显著低于对照组（P均〈0．01）。变应性鼻炎患者血清IgE水平与IL-4呈正相关（r=0．683）,与IL-12、IFN-γ呈负相关,相关系数分别为r=-0．721,r=-0．579。结论变应性鼻炎患者体内IgE升高与IL-4分泌过多及IL-12、IFN-γ分泌受抑制,即Th1／Th2细胞失衡有关。     

小鼠过敏性哮喘模型肺组织中Th9细胞相关因子的变化及意义

目的分析小鼠过敏性哮喘模型肺组织中各细胞因子表达水平的变化,探讨它们在过敏性支气管哮喘气道炎症中的调节机制。方法选取雌性BALB/c小鼠,复制小鼠过敏性哮喘模型,提取小鼠肺组织RNA,采用荧光定量PCR检测IL-9、IL-9R和PU.1 mRNA表达水平;收集支气管灌洗液,ELISA法检测灌洗液上清中各细胞因子(IL-4、INF-γ、IL-9和OVA特异IgE)的含量,并进一步分析这些分子间的相关关系。结果两组小鼠的Penh%随Mch剂量的增加都有升高的趋势,但是模型组小鼠上升的更快;与对照组相比,模型组小鼠BALF上清液中IL-4、IL-9、OVA特异抗体IgE水平显著升高(P0.05),INF-γ水平则显著下降(P0.05);模型组小鼠肺组织中IL-9、IL-9R及PU.1 m RNA相对表达水平与对照组相比均增高;除INF-γ与IL-9呈负相关关系,其他因子间均呈显著的正相关系。结论小鼠过敏性哮喘模型肺组织中Th9细胞相关因子(IL-9、IL-9R和PU.1)表达水平显著升高,可能在哮喘气道炎症进程中起到重要的免疫调节作用,是过敏性哮喘诊断与治疗的潜在靶点。     

白藜芦醇对哮喘小鼠气道炎症干预作用的研究

目的探讨白藜芦醇对哮喘小鼠模型中气道炎症及相关细胞因子水平的影响。方法雾化吸入卵蛋白(OVA)-氢氧化铝[Al(OH)3]建立小鼠哮喘模型,雌性SPF级BALB/c小鼠18只,分为白藜芦醇组、阳性对照组和阴性对照组各6只。阿尔新蓝/过碘酸雪夫染色,观察黏液分泌情况,免疫组化检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)、核因子кB(NF-кB)水平,ELISA检测血清白介素4(IL-4),γ干扰素(IFN-γ)和免疫球蛋白E(IgE)含量,瑞氏染色计数支气管肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞。结果阳性对照组嗜酸粒细胞升高、黏液分泌增加,MMP-9及NF-кB蛋白表达,IL-4水平及IgE含量均明显增高(P<0.05);IFN-γ水平下降(P<0.05)。白藜芦醇组与阳性对照组比较,嗜酸粒细胞计数稍升高,MMP-9、NF-кB蛋白表达均降低,IL-4水平和IgE含量均降低;IFN-γ水平升高(P<0.05)。与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论白藜芦醇干预可降低气道炎症,改变哮喘相关细胞因子水平。     

白细胞介素-13与干扰素-γ在异位性皮炎患者血清中的表达及意义

【目的】探讨白细胞介素-13（IL-13）与干扰素-γ（IFN-γ）水平在异位性皮炎（atopic dermatitis,AD）患者血清中的表达及意义。【方法】采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测48例AD患者（观察组）治疗前和42例健康体检者（对照组）外周血中IL-13和IFN-γ水平并比较,采用糖皮质激素对AD患者进行治疗,检测治疗后3个月、6个月时IL-13、IFN-γ及其特异性IgE水平,并分析IgE水平与IL-13、IFN～7水平的相关性。【结果】观察组治疗前IL-13水平为（42．37±6．13）pg／mL,显著高于对照组（15．71±2．32）pg／mL,观察组IFN-γ水平为（45．59±7．07）pg／mL,显著低于对照组（73．14±5．28）pg／mL,其差异均有统计学意义（P〈0．05）。观察组糖皮质激素治疗3个月后IL-13水平明显低于治疗前（P〈0．05）,IFN-γ高于治疗前（P〈0．05）,而6个月时这两个指标与3个月时比较差异无统计学意义（P〉0．05）。治疗前后IL-13、IFN-γ水平变化均与IgE成明显的相关性（P〈0．05）。【结论】AD患者外周血中IL-13较健康者显著增高,而IFN-γ显著降低,且两种指标与特异性IgE水平呈明显相关,推测其IL-13、IFN-γ变化可能与AD发病机制有关。     

昆布多糖对急性哮喘小鼠气道炎症及重塑影响的研究

目的 观察昆布多糖对卵清蛋白(OVA)致敏激发哮喘小鼠气道炎症及重塑的影响.方法 将32只昆明系小鼠被随机分为模型组、激素吸入组、昆布多糖组和对照组4组,每组8只.经OVA致敏激发制模成功后,模型组用生理盐水0.3 ml灌胃干预,激素吸入组雾化吸入布地奈德混悬液0.4 ml(200 μg)+生理盐水3.6 ml干预,昆布多糖组采用昆布多糖50 mg/kg灌胃干预,均每日1次.对照组采用生理盐水代替OVA致敏激发和灌胃干预.各组动物于42 d后麻醉,行右肺支气管肺泡灌洗留取灌洗液(BALF),并取右肺组织进行病理学观察.在光镜下计数BALF中细胞总数及分类;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF中γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平;肺组织病理学改变程度在苏木素-伊红(HE)染色后于光镜下进行评价;肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的表达采用免疫组化法检测.结果 与模型组比较,昆布多糖组及激素吸入组BALF中细胞总数及分类计数、IL-4、肺组织病理学评分均显著降低,IFN-γ显著升高(P均<0.01);激素吸入组MMP-9、TIMP-1及昆布多糖组TIMP-1均显著下降(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,昆布多糖组各指标差异仍有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与昆布多糖组比较,激素吸入组细胞总数及分类计数、IFN-γ、病理学评分、MMP-9、TIMP-1差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 昆布多糖在一定程度上能抑制急性哮喘小鼠的气道炎症,减轻气道重塑的发生,可能是一种新的治疗哮喘的辅助药物.     

重组鼠白细胞介素-12腺病毒载体对哮喘小鼠模型IL-4、IFN-γ表达的影响

目的探讨重组鼠白细胞介素-12(IL-12)基因的腺病毒载体(AdCMVIL-12)对小鼠支气管哮喘模型IL-4、IFN-γ表达的影响。方法雌性BALB/c小鼠50只,按数字随机表法分为5组,每组10只:哮喘模型组、AdCMVIL-12组、AdCMVLacZ组、激素治疗组和正常对照组。并于第20天分别鼻内吸入50μL生理盐水和5×108 PFU AdC-MVIL-12。第28天收集各组小鼠的支气管肺泡灌洗液(BALF),检测IL-4、IFN-γ的变化,RT-PCR方法检测各组肺组织中IL-4、IFN-γmRNA的表达水平。结果哮喘模型组与对照组、AdCMVIL-12组相比较,BALF中的IL-4表达水平明显升高,而IFN-γ在AdCMVIL-12组中的表达水平显著上升。RT-PCR结果显示,哮喘模型组小鼠肺组织IL-4mRNA的表达与AdCMVIL-12组、激素治疗组及正常对照组相比较明显升高;而IFN-γmRNA的表达水平明显下降。结论 AdCMVIL-12对哮喘小鼠的气道及肺组织内的IL-4表达有明显的抑制作用,其机制可能与AdCMVIL-12阻断IL-4的表达,调节Th1/Th2类细胞因子的平衡有关。     

异位性皮炎患者血清白细胞介素-13与干扰素-γ水平变化及意义

目的观察异位性皮炎(AD)患者外周血白细胞介素-13(IL-13)与干扰素-γ(IFN-γ)的变化,探讨IL-13和IFN-γ在AD发病机制中的可能作用。方法收集AD患者20例,设立健康对照组20例。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定AD患者和健康对照组外周血IL-13和IFN-γ的水平。结果与健康对照组比较,AD患者IL-13水平显著增高,IFN-γ水平则明显降低。结论 IL-13/IFN-γ失衡可能是AD的发病机制之一。     

特应性皮炎小鼠模型建立方法的研究

目的通过外用2,4-二硝基氟苯（DNFB）丙酮／橄榄油溶液致敏与激发BALB／c小鼠,探索特应性皮炎（atopic dermatitis,AD）模型的建立方法。方法将16只小鼠随机分为模型组及对照组各8只。实验第1天和第2天在模型组和对照组小鼠背部脱毛区分别涂搽一次DNFB丙酮／橄榄油溶液及丙酮／橄榄油,第7天开始每隔2天涂搽一次,共涂搽10次。观察小鼠皮肤的生理和病理改变。结果外用DNFB致敏与激发小鼠完成后,小鼠搔抓频率增加,小鼠皮肤可见慢性皮损改变,镜下可见慢性炎细胞浸润,ELISA血清检查发现Ign、IL-4及IFN-γ在血清中高表达。结论外用DNFB致敏与激发BALB／c小鼠产生的皮肤生理和病理改变与AD患者一致,可作为研究AD的发病机理及探索其治疗手段的有效的动物模型。     

FasL基因和屋尘螨过敏原基因共表达质粒DNA疫苗对屋尘螨致敏/激发小鼠气道炎症的作用

目的:观察FasL基因和屋尘螨过敏原Derp2基因共表达质粒的DNA疫苗(DNA-FasL-Derp2)对屋尘螨致敏/激发小鼠气道炎症的作用。方法:DNA-FasL-Derp2肌注接种屋尘螨致敏/激发C57BL/6小鼠,再次激发后处死小鼠。观察肺组织病理变化,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数和分类计数,以及IL-5、IFN-γ水平。并与仅编码Derp2基因的DNA疫苗(DNA-Derp2)比较。结果:接种DNA-FasL-Derp2和DNA-Derp2均能显著减轻屋尘螨致敏/激发小鼠气道炎症,减少BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞比例,降低BALF中IL-5水平,以DNA-FasL-Derp2更显著。结论:DNA-FasL-Derp2可有效抑制屋尘螨致敏/激发小鼠气道炎症,而且比DNA-Derp2更有效。