血管紧张素-Ⅱ对血管内皮细胞游离钙离子浓度的影响及阿托伐他汀的保护作用

目的:观察血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)对血管内皮细胞(VEC)游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响及阿托伐他汀的保护作用。方法:将血管内皮细胞分为空白对照组(仅给予细胞培养液)、Ang-Ⅱ组(细胞培养液中加入Ang-Ⅱ,使其终浓度为10-7mol/L)、Ang-Ⅱ+小剂量阿托伐他汀组(在单纯Ang-Ⅱ组的基础上加入阿托伐他汀,使阿托伐他汀的终浓度为0.1μmol/L)、Ang-Ⅱ+大剂量阿托伐他汀组(在单纯Ang-Ⅱ组的基础上加入阿托伐他汀,使阿托伐他汀的终浓度为1μmol/L)。用激光共聚焦显微镜测量各组细胞的[Ca2+]i。结果:(1)Ang-Ⅱ组的[Ca2+]i显著高于空白对照组(P<0.01);(2)Ang-Ⅱ+阿托伐他汀组的[Ca2+]i显著低于Ang-Ⅱ组(P<0.01)。(3)Ang-Ⅱ+大剂量阿托伐他汀组的[Ca2+]i低于Ang-Ⅱ+小剂量阿托伐他汀组(P<0.05)。结论:Ang-Ⅱ可引起细胞内[Ca2+]i的显著增加,阿托伐他汀对Ang-Ⅱ所致的[Ca2+]i增加具有保护作用,且这一作用呈剂量依赖性。     

丹参酮ⅡA对主动脉内皮细胞功能损伤的保护机制

目的通过观察猪主动脉内皮细胞在血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)作用后,丹参酮ⅡA对血管内皮细胞分泌一氧化氮(NO)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白、mRNA表达和细胞内游离钙离子([Ca2 ]i)浓度的变化,探讨丹参酮ⅡA对血管内皮细胞的保护作用。方法采用硝酸还原法、免疫组织化学法、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和激光共聚焦扫描显像系统,分别检测NO水平、eNOS蛋白和mRNA表达,以及细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)水平的变化。结果①随着AngⅡ浓度的增加、作用时间的延长,内皮细胞NO的产生及eNOS的基因表达呈顺序下降(P<0.01),表现出剂量、时间依赖性的负性作用。②丹参酮ⅡA可抑制AngⅡ对内皮细胞分泌NO及eNOS表达的负性作用(P<0.01),但尚不能恢复到空白对照组水平(P<0.05)。在丹参酮ⅡA作用1、6h,A组的抑制效应明显强于B组(P<0.05);随着作用时间延长至24h,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。③AngⅡ可引起主动脉内皮细胞[Ca2 ]i显著升高(P<0.01),丹参酮ⅡA可部分抑制AngⅡ诱导的内皮细胞[Ca2 ]i升高(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA通过增加血管内皮细胞eNOS基因表达及细胞分泌NO水平和降低内皮细胞[Ca2 ]i水平来发挥对血管内皮细胞的保护作用。     

β-淀粉样蛋白对大鼠脑细胞内钙的影响

目的观察大鼠脑细胞内钙浓度([Ca2 ]i)的变化及βAP1-42(β-amyloidproteinfragment1-42)对[Ca2 ]i的影响。方法以Fura/AM为荧光指示剂,采用荧光分光光度计测定急性分离的大鼠脑细胞[Ca2 ]i。结果静息状态大鼠脑[Ca2 ]为304±35mmol.L-1,高钾去极化则使细胞内钙明显增加,βAP对高钾去极化下[Ca2 ]i的增加有明显增强作用(P<0.01)结论βAP在某些情况下能使动物脑细胞内钙更明显超载。     

口山酮抑制ox-LDL诱导的内皮细胞组织因子表达及机制研究

【目的】研究口山酮化合物去甲基雏菊叶龙胆酮(DMB)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮细胞组织因子(TF)表达的影响及机制。【方法】培养人脐静脉内皮细胞,加入ox-LDL(0.2mg/mL)孵育24h诱导TF表达,一期凝固法和反转录PCR分别检测TF的活性和mRNA表达,用荧光试剂H2DCF-DA检测细胞内活性氧(ROS)的水平,EMSA检测核因子(NF)-κB活性。【结果】孵育ox-LDL(0.2mg/mL)24h能显著增加内皮细胞TF的活性和上调其mRNA表达,同时增加细胞内ROS生成和激活NF-κB。在加入ox-LDL前1h分别加入1、3或10μmol/LDMB能呈浓度依赖性地抑制ox-LDL诱导的TF活性和mRNA水平的增加。而且,DMB能显著降低ox-LDL诱导的细胞内ROS的生成增加和NF-κB的激活。【结论】DMB能抑制ox-LDL诱导的内皮细胞TF表达,其作用与抑制细胞内ROS生成和NF-κB激活有关。     

血管紧张素-(1-7) 对高血压大鼠血管紧张素Ⅱ及其受体的影响

目的观察血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对二肾一夹(2K1C)高血压大鼠血浆及肾组织血管紧张素Ⅱ及其受体的影响.方法采用微渗泵植入技术,建立Ang-(1-7)对高血压大鼠干预模型,放免法测定血浆及肾组织血管紧张素Ⅱ(AⅡ)浓度,RT-PCR检测肾组织内血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1)和2型受体(AT2)mRNA水平.结果 Ang-(1-7)减轻2K1C高血压大鼠肾脏病理损害,Ang-(1-7)对血浆及肾组织AⅡ浓度无显著影响,对肾组织内AT2受体表达无显著影响,减少肾组织内AT1受体表达.结论 Ang-(1-7) 对2K1C高血压大鼠肾损害具有保护作用,其机制之一是通过减少肾组织内AT1受体而实现.     

肝纤维化形成过程中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4与血管紧张素Ⅱ/血管紧张素-(1-7)比值的动态变化

目的研究肝纤维化形成过程中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)4m RNA表达与血管紧张素(Ang)Ⅱ/Ang-(1-7)比值的动态变化及其相互间的关系,探讨其在肝纤维化发病中的意义。方法制备四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠模型,共8周。肝组织行常规HE及Masson染色,观察病理改变;双抗体夹心ABC-ELISA法分别测定肝匀浆AngⅡ、Ang-(1-7)浓度,计算其比值;RT-PCR检测肝组织NOX4 m RNA的表达量,所有数据采用SPSS 17.0统计软件进行分析。结果随着肝纤维化的形成及加重,模型组大鼠2、4、6、8周NOX4 m RNA相对表达量分别为6.53±0.89、5.49±1.24、14.49±2.39、31.78±3.96,均较正常对照组(2.03±0.31)升高(均P<0.05);同时,模型组大鼠AngⅡ/Ang-(1-7)比值逐渐增大(依次为0.65±0.06、0.66±0.07、0.79±0.07、0.82±0.04),均较对照组(0.59±0.04)增大,差异有统计学意义(均P<0.05),NOX4与AngⅡ/Ang-(1-7)比值的变化呈正相关(r=0.901,P<0.05)。结论在肝纤维化形成过程中,NOX4的表达进行性升高,同时AngⅡ/Ang-(1-7)比值逐渐增大,提示上述变化可能参与了肝纤维化的发生。     

血管紧张素-(1-7)对乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对心肌细胞缺血再灌注损伤(I/R)的影响及其可能机制。方法:提取乳鼠原代细胞,按缺氧4 h后再灌注2 h的条件建立I/R模型。提前20 min加入10-8、10-7、10-6、10-5mmol/l的Ang-(1-7)作为预处理,并随机分为对照组、I/R组、Ang-(1-7)组、替米沙坦组、血管紧张素Ⅱ组、Ang-(1-7)+替米沙坦组及Ang-(1-7)+血管紧张素Ⅱ组,使用CCK-8法检测心肌细胞存活率。结果:10-5mmol/L浓度的Ang-(1-7)的预处理能让细胞存活率提高到77.65%。与I/R组相比,Ang-(1-7)组、Ang-(1-7)+替米沙坦组及Ang-(1-7)+血管紧张素Ⅱ组心肌细胞存活率均显著提高,但各组间均无明显差异。结论 :Ang-(1-7)减少心肌细胞在I/R中的损伤,但该保护机制与血管紧张素受体Ⅱ无关。     

血管紧张素-（1—7）对自发性高血压大鼠去外膜颈动脉内膜增生的影响

目的 研究血管紧张素-（1—7）[Ang-（1—7）]对自发性高血压大鼠（SHR）一侧颈动脉外膜去除后血管内膜增生的影响。方法 24只13周龄雄性SHR去除右侧颈动脉外膜后，随机分为3组（每组8只）：SHR对照组、Ang-（1—7）组和Ang779[Ang-（1—7）拮抗剂]组；8只同周龄雄性WKY大鼠作为正常血压对照组（WKY组）。机械和化学方法去除大鼠右侧颈动脉外膜，左侧作假手术对照。采用微渗泵植入技术经颈静脉给药2周，鼠尾袖法测量尾动脉收缩压（SBP），放免法测定血浆及双侧颈动脉血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）浓度。取双侧颈动脉制成光镜标本，病理图象分析系统测定颈动脉管腔横截面积（LA）、内弹力层围绕面积（IELA）、外弹力层围绕面积（EELA），评价内膜和中膜增生状况。免疫组织化学方法测定双侧颈动脉血管紧张素1（AT1）受体蛋白、蛋白激酶C-ζ（PKC-ζ）和胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）蛋白表达。结果 （1）SHR各组SBP于给药前无显著差异（P〉0．05），给药2周后，Ang-（1—7）组SBP较Ang779组和SHR对照组显著下降（均P〈0．01）。（2）SHR对照组和Ang779组去外膜侧颈动脉内膜增生较未去外膜侧有显著性差异（均P〈0．01），Ang-（1—7）组未去外膜侧和去外膜侧内膜增生较SHR对照组和Ang779组明显改善（均P〈0．01）。（3）与未去外膜侧比较，去外膜侧颈动脉AngⅡ浓度显著增高（P〈0．01），（4）SHR对照组和Ang779组去外膜侧颈动脉AT1受体蛋白表达显著高于未去外膜侧（均P〈0．01），Ang-（1—7）组未去外膜侧和去外膜侧颈动脉AT1受体蛋白表达明显低于SHR对照组和Ang779组（均P〈0．01）。（5）SHR对照组和Ang779组去外膜侧颈动脉PKC-ζ和ERK1／2蛋白表达较未去外膜侧显著增高（均P〈0．01），Ang-（1—7）组未去外膜侧和去外膜侧颈动脉PKC-ζ和ERK1／2蛋白表达较SHR对照组和Ang779组显著减少（均P〈0．01）。结论Ang-（1—7）可显著抑制SHR去外膜后颈动脉的内膜增生；这一作用可能是其通过下调颈动脉AT1受体和减少PKC-ζ及ERK1／2蛋白表达而实现的。     

Na+/H+交换器-1抑制诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的可能机制

背景肺动脉平滑肌细胞( pulmonary artery smooth muscle cells,PASMC)的增殖在缺氧肺动脉高压肺血管重构中起重要作用.解放军第三军医大学附属新桥医院全军呼吸研究所在前期实验中通过构建 Na+ /H+交换器- 1( sodium/proton exchanger isoform-1, Na+ /H+ exchanger isoform-1, Na+ /H+ antiporter isoform-1, NHE-1)特异性核酶基因逆转录病毒载体,转染入体外培养的大鼠 PASMC内表达,发现 NHE-1抑制可诱导细胞内酸化而抑制 PASMC增殖,并促进其凋亡.但这种促凋亡作用是通过什么途径来完成,尚不清楚.目的探讨 Bcl-2、 Bax蛋白表达在 NHE-1抑制而诱导大鼠 PASMC凋亡中的作用.设计分组对照实验.地点和材料实验在解放军第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所完成.转染表达 NHE-1特异性核酶基因的体外培养大鼠 PASMC( PRZ细胞)、转染 PLXSN空载体的大鼠 PASMC( PX细胞)、未处理大鼠 PASMC细胞( PA细胞)为前期实验所制备.干预已构建 NHE-1特异性核酶基因逆转录病毒载体,转染入体外培养的大鼠 PASMC内表达,同时转染 pLXSN空载体入另一组大鼠 PASMC内,后者与未转染的大鼠 PASMC细胞为对照组.用荧光指示剂( Fura-2/AM)测定法检测转染 NHE-1特异性核酶基因的大鼠 PASMC内 Ca2+( [Ca2+ ]i)变化; RT-PCR方法检测细胞内 Bcl-2和 Bax mRNA表达变化,免疫组化法检测细胞内 Bcl-2和 Bax蛋白表达变化.主要观察指标①转染 NHE-1特异性核酶基因的大鼠 PASMC内 Ca2+( [Ca2+ ]i)变化.②细胞内 Bcl-2和 Bax mRNA表达变化.③细胞内 Bcl-2和 Bax蛋白表达变化.结果转染 NHE-1特异性核酶基因后,大鼠 PASMC内 [Ca2+ ]i显著升高,细胞内 [Ca2+ ]i在 PA细胞 [(95.94± 6.39) nmol/L]与 PX细胞 [(98.08± 7.37) nmol/L]之间差异无显著性意义( P 》0.05),而 PRZ细胞 [(198.08± 16.59) nmol/L]显著高于 PA细胞及 PX细胞 , 差异有显著性意义( P《 0.001).Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低( PA细胞、 PX细胞、 PRZ细胞的平均积分光密度分别为 2.21± 0.18, 2.09± 0.30, 1.45± 0.20), Bax mRNA和蛋白表达显著增加( PA细胞、 PX细胞、 PRZ细胞的 ABax/Aβ-actin分别为 0.17± 0.02, 0.23± 0.06, 0.59± 0.08).结论 NHE-1抑制诱导的 PASMC凋亡与 [Ca2+ ]i增加、 Bcl-2表达降低及 Bax表达增加有关.     

氯沙坦对自发性高血压大鼠血管内皮功能和超微结构的影响

目的 :探讨氯沙坦 (lostartan)对自发性高血压大鼠 (SHR)血压、血管内皮细胞功能、内皮细胞超微结构及淋巴细胞钙 [Ca2 ] i的影响。方法 :SHR共 2 8只 ,分成 3组 ,分别为 3月龄对照组 (SHR1) ,6月龄对照组 (SHR2 )和losartan治疗组 (SHR3 )。治疗组从 3月龄开始予losartan 2 0mg·kg-1·d-1治疗至 6月龄。治疗前后检测鼠尾收缩压、淋巴细胞胞浆游离钙 [Ca2 ] i、ET 1、NO ,并观察大鼠肠系膜动脉内皮细胞超微结构。结果 :losartan对SHR有显著降压作用。治疗前SHR的淋巴细胞钙 [Ca2 ] i、ET 1水平均显著性增加 ,NO水平显著下降 ,随鼠龄增大而加大。肠系膜动脉内皮细胞出现明显肿胀、变形 ,比表面均显著减少。经losartan治疗后 ,在降压的同时 ,淋巴细胞[Ca2 ] i、ET 1显著下降 ,NO显著上升 ,血管内皮细胞超微结构的损害得到明显逆转。结论 :细胞内钙在losartan改善高血压血管内皮功能失调作用中可能起着重要的信使作用     

5-4-3-2-1 Go! Standardizing Nutrition and Physical Activity-Related Counseling

Providers at an urban pediatric clinic lacked a standardized protocol for counseling parents and children when addressing the problem of obesity. Providers were trained to implement the 5-4-3-2-1 Go! evidence-based intervention. The electronic medical record was revised for documentation of counseling. Adherence to the protocol was monitored through observation and chart reviews. Providers found the protocol to standardize care and enhance the patient’s ability to set goals and develop plans for change. The rate with which providers recommended follow-up visits for this purpose increased significantly. 5-4-3-2-1 Go! was successfully used to standardize obesity-related follow-up visits.     

儿童疑似肺炎支原体感染者血清、支气管灌洗液、胸腔积液、脑脊液MP-Ab-IgM检测的结果分析

目的 分析肺炎支原体肺炎(MPP)患儿血清、支气管灌洗液、胸腔积液及脑脊液的肺炎支原体(MP)MP-Ab-IgM检测结果。方法 选取2013年3月～6月在首都医科大学附属北京儿童医院疑似MP感染的278例住院患儿的血清、支气管灌洗液、胸腔积液及脑脊液标本,采用颗粒凝集的方法检测MP-Ab-IgM。结果181例患儿(男孩104例,女孩77例)的不同标本中MP呈阳性反应。278例患儿均进行了血清标本检测,共检出阳性血清标本170例,总检出率为61.2%(170/278),144例同时进行了支气管灌洗液检测,检出阳性62例,检出率为43.1%(62/144); 19例同时进行了胸腔积液标本检测,检出阳性13例,检出率为68.4%(13/19); 15例同时进行了脑脊液标本检测,检出阳性1例,检出率为6.7%(1/15)。各年龄组间检出率分别为:6个月～1岁组29.0%(9/31),～3岁组51.0%(25/49),～5岁组56.1%(23/41),～16岁组79.0%(124/157),6个月～1岁组与其他年龄组比较差异有统计学意义(P<0.05); ～3岁与～5岁组间差异无统计学意义(P>0.05),而与～16岁组间差异有统计学意义(P<0.05)。在6个月～1岁,～3岁,～5岁,～16岁四个年龄组中,同一患儿检测的不同类型MP-Ab-IgM阳性标本,其对应结果为A:血清类(111例)7,21,13和70; B:血清-支气管灌洗液类(45例)0,2,5和38; C:血清+胸腔积液类(7例)0,1,2和4; D:血清+脑脊液(1例)0,0,0和1; E:血清+支气管灌洗液+胸腔积液类(6例)0,0,2和4; F:支气管灌洗液类(11)2,1,1和7。结论 MP感染多种多样,有低龄化趋势,且有逐年增多的趋势。不同年龄组间血清阳性检出率随年龄增长逐渐增加,婴幼儿阳性检出率明显升高,重症患儿多发于年龄较大的患儿。     

产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株检测及耐药性分析

目的了解我院送检标本中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌的检出率及耐药情况,指导临床医生合理有效地使用抗生素。方法用NCCLS推荐的确证试验对临床分离的198例革兰氏阴性杆菌进行ESBLs鉴定,抗生素敏感测定采用K-B琼脂扩散法。结果共检出产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株42株,总检出率21.4%;其中大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌的ESBLs检出率分别为20.6%、23.7%及16.7%。检出的产ESBLs细菌对所有青霉素类抗生素产生耐药,多数菌株对三代头孢类抗生素的耐药率>80%,对磺胺类、喹诺酮类抗生素的耐药率也在60%以上。氨基糖苷类对产ESBLs菌表现出较好的抗菌作用,亚胺培南对所有产ESBLs菌表现出最强抗菌作用。结论第三代头孢菌素和亚胺培南的大量应用是产生ESBLs菌的主要原因,亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素是产ESBLs菌株临床治疗有效的药物。     

1，5-脱水山梨醇的性质及其临床应用

1，5-脱水山梨醇（1，5-anhydro-D-glncitol；1，5-AC）是一种存在于人类血液中的正常化合物，由于其代谢稳定，在血液中波动范围小，可反映血糖短期的变化．具有空腹血糖、果糖胺和糖化血红蛋白所不具有的优点，在糖尿病诊断与治疗中具有很高的价值和意义。     

Effective teaching: The 20-20-10-10 model

Academic nurse educators in prelicensure registered nursing programs may find it challenging to create effective teaching and learning activities to promote student development of critical thinking skills that lead to safe clinical judgments. Many faculty are experienced clinicians who are experts in their fields of clinical practice but lack formal training in teaching and assessment of adult learners. This article describes a teaching framework called the 20-20-10-10 model that creates a dynamic, engaging environment and inspires students to seek active inquiry.     

L-吡咯烷酮酰-4-硝基苯胺的合成及其临床应用

[目的]制备L-吡咯烷酮酰-4-硝基苯胺，用吡咯烷酮芳胺酶（PYRase）法快速检出链球菌等病原菌。[方法]采用L-谷氨酸与水加热生成焦谷氨酸，再与对硝基苯胺反应制得L-吡咯烷酮酰-4-硝基苯胺；将其制成酶底物纸片，对底物浓度、最适pH、反应温度及时间进行了探讨，确定了实验的最佳条件。[结果]本法底物最佳浓度为2mg／ml，最适pH7．2，反应温度37℃，反应时间10min。以此条件用自制底物与进口品进行比较其效果完全一致。鉴定了标准菌株9株，临床分离菌株154株。正确率达100％。[结论]本法可代替常规检验方法提前2～3d报告结果，为链球菌等鉴定提供了一种快速、简便、准确的新方法。     

Platelet alloantigens HPA-1, -2, -3, -5 and -6b in Finns

SUMMARY. The human platelet alloantigens HPA-1, -2, -3, -5 and -6b in the Finnish population were determined using allele specific restriction analysis (PCR-ASRA) for HPA-1, -2, -3 and -5 and monoclonal antibody immobilized platelet antigen (MAIPA) assay for HPA-1, -3a, -5b and -6b. No discrepancies were observed between the results obtained with the PCR-method and those obtained serologically. The gene frequencies obtained from 200 unrelated Finns were 0.86 and 0.14 for HPA-1a and -1b, 0.91 and 0.09 for HPA-2a and -2b, 0.59 and 0.41 for HPA.3a and -3b and 0.95 and 0.05 for HPA-5a and -5b. The frequency of the HPA-5b allele (10%) is lower in Finns than in Central- or South-European populations (20–30%). The HPA-1, -2 and -3 frequencies did not deviate from those observed in other European populations. The rare HPA-6b antigen was observed in three of 127 individuals from south-eastern Finland (2.4%), which suggests that the frequency of this allele in Finland is higher than previously thought.