日本进行HCV、HBV和HIV病毒核酸筛查的现状

日本红十字会输血部对自愿献血者血液的细胞成份以及做血浆蛋白分离的血浆，在预筛后与发出前。第一次在全国范围用核酸扩增检测（NAT）方法检测血液中的乙型肝炎病毒（HBV），丙型肝炎病毒（HCV）和人类免疫缺陷病毒（HIV-1），使用多重NAT试剂对血液和血液制品，包括存活时间短的血小板检测，可节省检测时间，费用和人力，在2000年2月1日-2001年4月30日期间，采用50份血样品混合筛查。从血液和血液成分中查出112份HBV阳性，25份HCV阳性和4份HIV-1阳性。     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgM抗体的研究

目的 建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgM抗体的方法。方法 采用胶体金标记鼠抗人IgM单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中甲、戊型肝炎的特异性抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg、HEAg)、抗体(羊抗鼠IgM)结合形成肉眼可见的红色线条。结果 自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份，各单项指标IgM—抗HAV、IgM-抗HEV两法总符合率依次为97．9％、98．4％，检测灵敏度可达2ng／ml。结论 用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性抗体的GICA试条的制备条件已基本建立；其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备。     

标准物质在乙型和丙型肝炎病毒核酸检测标准化中的重要性

病毒核酸是HBV和HCV感染诊断和治疗监测的重要标志物，病毒核酸标准物质是不同实验室间检测结果可比性、试剂溯源性、测量程序的评价和质量控制的物质基础。无生物传染危险性且稳定的标准物质的研究是HBV和HCV核酸检测标准物质的发展方向。     

100名个体献血者血液中庚型肝炎病毒RT-PCR检测结果

１００名个体献血者血液中庚型肝炎病毒ＲＴ－ＰＣＲ检测结果１０００８８北京市红十字血液中心任芙蓉李慧赵海燕北京医科大学人民医院肝病研究所王宇庚型肝炎病毒（ＨＧＶ或ＧＢＶ－Ｃ）是近年来发现的一种新型肝炎病毒［１、２］，国内外对ＨＧＶ及庚型肝炎（ＨＧ）的研...     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgG抗体的研究

[目的]探索并建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgG抗体的方法。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记鼠抗人IgG单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中甲、戊型肝炎的特异性IgG抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg、HEAg)、抗体(羊抗鼠IgG)结合形成肉眼可见的红色线条。[结果]自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份，各单项指标抗-HAV IgG、抗-HEV IgG两法总符合率分别为98．9％、98．9％，检测灵敏度可达1ng／ml。[结论]用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性IgG抗体的GICA试条的制备条件已基本建立；其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便、快捷，无需特殊仪器设备，有广泛的应用价值。     

TthDNA聚合酶在丙型肝炎病毒RNA检测中的应用

用ＴｔｈＤＮＡ聚合酶行逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增丙型肝炎病毒（ＨＶＣ）５′端非编码序列，对２６２例肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ测定，结果ＨＣＶＲＮＡ阳性者５３例，阳性率２０．２％，凡阳性者用酶联免疫吸附法测其抗ＨＣＶＩｇＧ，其中３０例测到抗ＨＣＶ，阳性重叠率５６％（３０／５３）；ＨＣＶ ＲＮＡ阳性中的１５例同时用成髓细胞瘤病毒酶行传统逆转录－套式聚合酶链反应检测对照，１４例阳性，符合率     

应用核酸检测献血者乙型肝炎病毒的效果分析

选取采用两种酶联免疫法吸附试剂检测无偿献血标本的乙肝表面抗原(HBs Ag)均呈阴性的79050份进行核酸检测,核酸检测结果呈阳性的标本进行乙肝"二对半"检测。此外,选取HBs Ag单试剂阳性标本19份、双试剂阳性标本20份,进行核酸检测。HBs Ag双试剂检测均呈阴性的79050份标本,核酸检测呈阳性12份,检出率为0.015%,其中乙肝"二对半"检测全阴性3份,HBs Ab单独阳性1份,HBc Ab阳性8份;HBs Ag单试剂阳性19份标本,核酸检测呈阴性18份,阳性1份;HBs Ag双试剂阳性20份标本,核酸检测呈现阳性18份,阴性2份。应用核酸检测献血者乙型肝炎病毒有较高的敏感性,能有效降低隐匿性乙型肝炎病毒的输血传染、缩短HBs Ag检测的窗口期,一定程度上弥补了ELISA的局限性;另从HBs Ag单试剂阳性标本19份,核酸检测呈现阴性18份,阳性者的1份;HBs Ag双试剂阳性20份标本,核酸检测呈阳性18份,阴性2份的结果可以看出,使用HBV核酸检测方法和ELISA方法检测HBs Ag对无偿献血者进行血液筛查,均存在单一方法或单试剂漏检情况,因此不能相互取代,使用两种方法共同对无偿献血者进行血液筛查,相互补充,能够进一步提高血液的安全性。     

RT—PCR单管法检测庚型肝炎病毒RNA

探讨建立了一种更简便，特异，灵敏的逆转录－巢式聚合酶链反应单管法检测庚型肝炎病毒ＨＧＶＲＮＡ，通过优化Ｍｇ＾２＋外引物浓度等实验参数，在一个Ｅｐｐｅｎｄｏｆ管中先后进行逆转录和巢式ＰＣＲ扩增等三步反应，３４２ｂｐ扩增终产物核苷酸序列采用直接测序法测定。本方法可检出１０＾４～１０＾５倍稀释的标准阳性血清，用ＲＴ－ＰＣＲ单管法与常规三步法比较检测了不同类型肝炎患者和职业献血员１７８份血清标志ＨＧＶＲＮ     

实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较

目的 评价应用国产试剂的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA中的临床应用。方法 基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR应用Roche公司Light Cycler仪器和国产达安试剂，PCR-酶联免疫吸附试验(ELISA)应用Roche公司COBAS Amplicor全自动内标法系统，用2种方法检测乙型肝炎患者血清中的HBV DNA，评价其灵敏度、精密度及相关性。结果 实时荧光定量PCR方法的灵敏度略低于PCR-ELISA全自动内标法，两者变异系数(CV)均较低，用2种方法检测临床标本，相关系数为0．890。结论 应用国产试剂配合Light Cycler仪器的实时荧光定量PCR具有较高的灵敏度和较好的重复性，并与PCR-ELISA全自动内标法有良好的相关性。     

应用逆转录套式PCR检测血清丙型肝炎病毒RNA

应用逆转录套式PCR检测了经ELISA检测抗－HCV的86份血清，抗－HCV阳性血清66份，用PCR检测有37份是阳性，阳性符合率为56．1％，抗－HCV阴性血清20份，用PCR检测有8份是阳性，两种方法检测结果总符合率为57．0％。单项ALT升高、HB、HC和血液病患者HCV、RNA阳性率分别为37．5％，55．6％，62．5％和53．8％。用PCR检出HCV－RNA时间早于抗－HCV阳转时间，而且敏感性高于后者，是一种早期、灵敏及特异的HCV感染诊断方法。检测HCV－RNA有助于发现抗－HCV阴性的急、慢性丙型肝炎，根据HCV－RNA的连续检测，结合抗－HCV的消长状态，可用于丙型肝炎的预后判断和干扰素等药物疗效评价指标。     

用鸭乙型肝炎病毒感染试验评价人乙型肝炎病毒灭活效果的研究

在所试剂量下，煮沸、戊二醛与二氯异氰尿酸钠均可使ＤＨＢＶ与ＨＨＢＶ形态及其ＤＮＡ－Ｐ破坏，使ＤＨＢＶ对雏鸭的感染性灭活；但除用二氯异氰尿酸钠处理外，均不能将其ＤＮＡ与表面抗原完全破坏。结果表明，用ＤＨＢＶ雏鸭感染法进行消毒试验，可间接，但较准确反映出对ＨＨＢＶ的灭活效果。本试验与其他标志物试验相比，较易推广。     

2010-2013年中国南京地区无偿献血人群HBV、HCV、HIV感染情况分析

本研究在于了解中国南京地区无偿献血者HBV、HCV和HIV感染及分布情况,探讨本地区人群的传染病流行趋势,为献血宣传和招募工作提供指导意见.将2010.6.10-2013.6.9三年间南京地区无偿献血者199777人次的血液标本,采用ELISA法检测HBsAg、抗-HCV和抗-HIV,对三项阴性标本再采用NAT联合检测HBV-DNA、HCV-RNA和HIV-RNA,对检测结果进行统计分析,并将抗-HIV初筛反应性标本送南京市疾病预防控制中心确证.结果表明,3年中无偿献血者HBsAg、抗-HCV、抗-HIV感染率分别为0.45％,0.28％,0.11％;NAT呈反应性为0.07％;确证抗-HIV阳性32例,其中男性30例（6例为再次献血者）,女性2例;不确定3例,其中男性2例,女性1例.经统计学处理证实,初次献血者与重复献血者HBsAg、抗-HCV、抗-HIV检测不合格率差异有统计学意义.结论：2010.6.10-2013.6.9南京地区无偿献血人群中抗-HCV、抗-HIV阳性率呈逐年下降趋势,HBsAg、NAT检测不合格率随年龄段增加而增加;抗-HCV、抗-HIV检测不合格率随年龄段增加而降低,重复献血者检测不合格率远远低于初次献血者,抗-HIV检测女性酶免检测阳性率高于男性,但确认阳性率男性明显高于女性.因此应提高献血前的征询技巧,重视献血者的招募环节,重点加强初次献血者献血前的征询和评估,加强无偿献血知识的宣传,巩固和发展固定无偿献血者队伍,大力普及NAT检测技术应用于血液筛查,将有效地提高血液安全.     

人类免疫缺陷病毒重叠丙型肝炎病毒感染3例

近年来我们在对献血员血液检验时发现 3例人类免疫缺陷病毒抗体 (抗 ＨＩＶ)阳性献血者 ,他们均同时呈现丙型肝炎病毒抗体 (抗 ＨＣＶ)阳性 ,现将结果报告如下。一、献血员简介3名献血员系我县农民职业献血员 ,男性 ,年龄分别为36、5 0、5 5岁。有多年献血史 ,在“三统一”(统一采血、统一供血、统一管理 )前有流动输血史。二、试剂、仪器和方法ＨＩＶⅠ和Ⅱ型抗体试剂为上海科华生物制品有限公司和厦门新创科技有限公司生产的酶联免疫吸附试验试剂盒 ,抗 ＨＣＶ试剂盒是科华公司产品。酶标仪为ＤＧ30 0 2Ａ型 ,洗板机为ＤＧＭ Ⅱ型。所用…     

实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较

目的评价应用国产试剂的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA中的临床应用。方法基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR应用Roche公司LightCycler仪器和国产达安试剂,PCR酶联免疫吸附试验(ELISA)应用Roche公司COBASAmplicor全自动内标法系统,用2种方法检测乙型肝炎患者血清中的HBVDNA,评价其灵敏度、精密度及相关性。结果实时荧光定量PCR方法的灵敏度略低于PCR ELISA全自动内标法,两者变异系数(CV)均较低,用2种方法检测临床标本,相关系数为0.890。结论应用国产试剂配合LightCycler仪器的实时荧光定量PCR具有较高的灵敏度和较好的重复性,并与PCR ELISA全自动内标法有良好的相关性。     

青岛地区无偿献血者乙型肝炎病毒感染血清学和病毒特征分析

目的分析青岛地区无偿献血者乙型肝炎病毒感染的血清学及病毒学特征。方法采用常规的血清学试验和核酸扩增技术对本地区315 520份无偿献血者标本进行联合筛查,对HBsAg-/HBV DNA+标本进行高精度病毒载量检测和补充乙肝5项检测,采用PCR直接测序法获得标本中HBsAg编码基因即S基因序列,分析病毒基因型别及氨基酸变异情况。结果共筛查出HBV阳性标本604例(0.20%),其中HBsAg+/HBV DNA-307例(0.10%),HBsAg-/HBV DNA+138例(0.04%),HBsAg+/HBV DNA+157例(0.05%);138例HBsAg-/HBV DNA+中118例HBcAb(+)(85.5%),其中单独HBcAb(+)45例(32.61%),另外还有5例HBsAg(+)(3.62%);病毒载量测定64例定量阴性,74例定量阳性,其中42例HBV DNA<20 IU/mL,32例>20 IU/mL。138例HBsAg-/HBV DNA+标本中共有13例成功扩增和测序,有5例属于B型,8例属于C型,5例B型标本共发生17处氨基酸突变,未发现缺失或插入;8例C型标本共发生41处氨基酸突变,2处氨基酸缺失。结论 ELISA和核酸检测结合在很大程度上降低窗口期和OBI传播HBV的风险,提升血液安全;HBsAg-/HBV DNA+献血者HBcAb检出率高,病毒载量低,扩增和测序成功的为B型和C型,HBsAg氨基酸突变可能与OBI形成有关。