大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为胰岛素阳性细胞的潜能

目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为胰岛素阳性细胞能力。方法:①实验于2004-09/2005-01在南京医科大学第一附属医院内分泌及代谢病研究室完成。选用清洁级雄性SD大鼠10只。②取大鼠骨髓,体外分离、培养骨髓间充质干细胞,流式细胞术检测CD45/CD90表达及细胞周期,明确骨髓间充质干细胞特性。③取第3代细胞,随机分为2组,低糖诱导组[先予体积分数0.1胎牛血清低糖Dulbecco改良的Eagle培养液(5.6mmol/L葡萄糖)]或高糖诱导组[高糖Dulbecco改良的Eagle培养液(25mmol/L葡萄糖)]培养14d,换予体积分数0.05胎牛血清低糖Dulbecco改良的Eagle培养液或高糖Dulbecco改良的Eagle培养液+尼克酰胺(10mmol/L)培养7d,再加Exendin-4(10nmol/L)诱导培养7d。④采用反转录聚合酶链反应法检测胰腺-十二指肠同源盒基因1、胰岛素原和胰岛素基因的表达,激光共聚焦显微镜观察胰岛素蛋白的表达,流式细胞术检测胰岛素阳性细胞数和平均荧光强度,电镜观察诱导后细胞的超微结构。⑤组间计量资料比较采用方差分析。结果:①骨髓间充质干细胞贴壁生长,呈长梭形。流式细胞术检测显示,CD90阳性率为(96.3±1.3)%,CD45阳性率为(0.3±0.4)%,细胞周期静止期-DNA合成前期占(76.8±4.8)%,DNA合成后期-有丝分裂期(11.3±3.7)%,DNA合成期(11.9±5.7)%。②骨髓间充质干细胞诱导培养过程中,细胞形成团簇状分布,少数聚集成团,直径80～200μm,半悬浮于培养瓶中。电镜观察此类细胞胞浆内有较多分泌颗粒。③低糖诱导组和高糖诱导组均表达胰腺-十二指肠同源盒基因1、胰岛素原和胰岛素基因。④流式细胞术检测显示低糖诱导组和高糖诱导组胰岛素阳性细胞数和平均荧光强度均明显高于骨髓间充质干细胞诱导前[(21.9±11.1)%,(19.8±7.8)%,(1.4±1.2)%;21.0±7.6,22.5±14.5,8.7±3.5,P<0.05]。结论:大鼠骨髓间充质干细胞在体外可以诱导分化为胰岛素阳性细胞。     

人脐血间充质细胞体外分离培养方法及培养基特性

目的：采用不同的培养基分离培养融合状态的间充质细胞，以筛选一种较好的体外培养人脐血问充质细胞的方法。 方法：实验于2003-11／2004-10在郑州大学医学院干细胞中心完成。选择郑州大学医学院第三附属医院产科足月妊娠健康产妇的脐血用于实验（产妇均签署知情同意书），随机分为4组：低糖DMEM（Dulbecco改良的Eagle培养基）组、高糖DMEM组、低糖DMEM＋干细胞因子组、Msencuh TM（一种特殊成分的液体培养基，与其添加物配合使用可促进间充质干细胞分化为脂肪细胞）组。待新生儿娩出后，立即断脐，消毒母侧脐带断端，60mL无菌注射针穿刺脐静脉取血，立即导入肝素抗凝的无菌采血袋内。取新鲜采集的脐带血，用1．077g／cm^3的淋巴细胞分层液，密度梯度离心法分离脐血单个核细胞，将脐血单个核细胞接种于37℃、体积分数为0．05的CO2培养箱内培养，倒置显微镜观察细胞数量和形态的变化。 结果：①各组间充质细胞培养24h后贴壁细胞数和细胞存活率的比较：Msencult TM组、低糖DMEM＋干细胞因子组的贴壁细胞数明显多于高糖DMEM组、低糖DMEM组[（40．5&;#177;9．7），（31．5&;#177;4．2），（14．0&;#177;1．4），（7．5&;#177;1．6）个，P〈0．05]，细胞存活率亦明显高于高糖DMEM组、低糖DMEM组[（97．1&;#177;0．9），（95．3&;#177;2．6），（84．1&;#177;1．9），（81.2&;#177;1．1）％，P〈0．051。②各组间充质细胞在不同培养时间下生长状态的比较：培养第3，7，10，14天Msencuh TM组、低糖DMEM＋干细胞因子组细胞增殖的速度均快于高糖DMEM组、低糖DMEM组（P〈0．05），且Msencult TM组细胞克隆数最多[（1&;#177;1．22），（0.83&;#177;0．75），（0．2&;#177;0．4），0个，P〈0．05]。 结论：采用低糖DMEM＋干细胞因子与单纯Mesencult TM培养基培养的细胞生长旺盛，但由于干细胞因子用量较大，价格昂贵，因此低糖DMEM联合应用干细胞因子的方法并不十分适用。而Mesencuh TM为酸性培养基，有利于脐血细胞的生长，并可形成克隆，为脐血间充质细胞的成功培养创造了条件，是一种适合脐血间充质细胞生长的培养基。     

鼠骨髓间充质干细胞对缺氧-复氧神经元修复的体外实验

目的：观察在体外培养条件下骨髓间充质干细胞对缺氧-复氧新生大鼠大脑皮质神经元活性的影响。方法：实验于2005—01／2006—12在兰州大学第一医院中心实验室完成。健康Wistar大鼠成鼠5只，健康新生Wistar大鼠20只，无菌条件下分离、培养、传代Wistar大鼠骨髓间充质干细胞，细胞融合达90％时更换培养基培养24h，收集细胞培养液即为骨髓间充质干细胞条件培养基；无菌条件下培养新生Wistar大鼠大脑皮质神经元，第8天随机分为正常对照组、缺氧组、间充质干细胞条件培养基处理组，即用骨髓间充质干细胞条件培养基进行缺氧神经元的修复。分别于缺氧0h、缺氧6h、复氧24h用噻唑蓝盐比色法测定吸光度值和BeckMan全自动生化仪测定培养液乳酸脱氢酶漏出量，分别检测各组神经元的活性和细胞损伤后修复的程度。结果：各实验组均全部进入结果分析。①各组神经元的活性：鼠大脑皮质神经元缺氧6h及复氧24h后缺氧组噻唑蓝明显低于正常对照组，骨髓间充质干细胞条件培养基处理组复氧24h后噻唑蓝高于缺氧组（缺氧6h：缺氧组0.42&;#177;0.14，正常对照组0．81&;#177;0.12；复氧24h：缺氧组0.35&;#177;0.15，正常对照组0.82&;#177;0．21，骨髓间充质干细胞条件培养基处理组0.74&;#177;0．25，P〈0．01或0.001）。②各组细胞损伤后修复的程度：缺氧6h和复氧24h后，缺氧组乳酸脱氢酶漏出量比正常对照组明显增多，骨髓间充质干细胞条件培养基处理组比缺氧组明显减少[缺氧6h：缺氧组（790．16&;#177;34．51）nkat／L，对照组（340．07&;#177;25．17）nkat／L，骨髓间充质干细胞条件培养基处理组（570．11&;#177;53．18）nkat／L；复氧24h：缺氧组（1790．36&;#177;252．38）nkat／L，对照组（340．07&;#177;19．00）nkat／L，骨髓间充质干细胞条件培养基处理组（860．17&;#177;40．17）nkat／L，P〈0．001]。结论：在体外培养条件下骨髓间充质干细胞能增加缺氧神经元的细胞活性，促进缺氧神经元的修复。     

骨损伤刺激对骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的：观察骨损伤性刺激对骨髓间充质干细胞的影响，为体内诱导骨髓间充质干细胞增殖提供方法。方法：实验于2004-07／2005-03在南华大学附属第一医院临床研究所完成。选取健康SD大鼠18只，每组9只，随机分成两组，一组为观察组，进行一侧闭合性股骨横断性骨折损伤模型处理，另一组为对照组不作骨折损伤处理，两组大鼠同等条件下饲养2周，然后取出双侧股骨进行骨髓间充质干细胞提取，流式细胞仪检测含CD44一FrrC阳性而CD45一砌）E阴性的细胞的构成比（骨髓间充质干细胞具有表现为CD44阳性而及CD45阴性的特点，因此把通过流式细胞仪检测到的CD44-FTTC阳性同时CD45-RPE阴性的细胞认定为骨髓间充质干细胞，由此测得的该细胞数占总检测细胞数的比为骨髓间充质干细胞构成比），计算出两组骨髓间充质干细胞构成比均数。，结果：实验大鼠18只均进入结果分析。①观察组处理侧骨髓间充质干细胞构成比均数高于对照组处理侧（29．19&;#177;5．06，13．05&;#177;9．08，P〈0．01）。②观察组未处理侧股骨骨髓间充质干细胞构成比均数高于对照组未处理侧（22．90&;#177;5．44，14．12&;#177;8．98，P〈0．01）。⑨观察组处理侧股骨骨髓问充质干细胞构成比均数低于未处理侧（29．19&;#177;5．06，22．90&;#177;5．44，P〈0．05）。结论：骨损伤后骨髓间充质干细胞出现增殖，为骨折的愈合提供物质基础，提示骨损伤性刺激可作为活体内诱导骨髓间充质干细胞增殖的一种方法。     

体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞

背景：自体软骨细胞来源困难是束缚软骨细胞移植和软骨工程学发展的主要问题之一。骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能，在不同诱导条件下，骨髓间充质干细胞能分化形成多种组织细胞，如软骨细胞、成骨细胞、成肌细胞及神经细胞等。胰岛素样生长因子-Ⅰ是一种对肢体和软骨的形成及发育起重要调控作用的生长因子。 目的：观察胰岛素样生长因子-Ⅰ和软骨细胞培养液是否能在体外诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化。 设计：开放性实验。 单位：中山大学附属第二医院骨科和医学研究中心。 材料：实验于2003-03／11在中山大学附属第二医院医学研究中心完成。人骨髓间充质干细胞取自因健康原因需终止妊娠的4～6月龄水囊引产的胚胎。 方法：采用Percoll分离液分离培养人胚骨髓间充质干细胞，体外扩增，用流式细胞仪测定骨髓间充质干细胞的CD44，CD71，CD34, CD45表达；在第4代骨髓间充质干细胞的培养基中加入100μg／L胰岛素样生长因子-Ⅰ和软骨细胞培养液，采用倒置显微镜观察、Ⅱ型胶原免疫组织化学、细胞内蛋白多糖含量测定等方法判断诱导细胞的形态变化和表达软骨基质的能力。 主要观察指标：通过检测细胞CD34，CD44，CD45的表达，进行骨髓间充质干细胞表型鉴定。通过观测诱导后细胞Ⅱ型胶原免疫组织化学及细胞分泌蛋白多糖能力的变化判断其是否向软骨细胞分化。 结果：①倒置显微镜观察结果：体外培养的骨髓间充质干细胞呈现成纤维细胞形态。②骨髓间充质干细胞表面抗原鉴定：流式细胞仪结果显示细胞均一性较好，第4代骨髓间充质干细胞阳性表达CD44，阴性表达CD34，CD45，说明分离获得的细胞符合骨髓间充质干细胞的特点：③光镜下观察骨髓间充质干细胞诱导为软骨细胞的形态变化：加入软骨细胞条件培养液和胰岛素样生长因子-Ⅰ共培养，在培养过程中见骨髓间充质干细胞逐渐变圆，15d后可见部分细胞呈短梭形或多角形．突起短，呈现软骨细胞的特征。④Ⅱ型胶原免疫组织化学染色：胰岛素样生长因子组细胞在培养后第15天约72．5%的细胞可见棕黄色的颗粒分布于胞浆内，呈弱阳性或较强阳性。对照组骨髓间充质干细胞第15天的Ⅱ型胶原免疫组织化学为阴性。⑤蛋白多糖含量测定：胰岛素样生长因子-Ⅰ和软骨细胞培养液共培养组培养15d后，细胞内蛋白多糖含量为[8．92&;#177;0．91）μg／L，高于单纯骨髓间充质干细胞培养组Ⅰ（2．56&;#177;0．26）μg／L，P〈0．05]，但低于软骨细胞组[（13．69&;#177;1．51）μg／L，P〈0．05]。 结论：胰岛素样生长因子-Ⅰ和软骨细胞培养液能诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化。     

5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞的特点及可行性

背景：骨髓干细胞移植成功的定性指标是标记移植的细胞至组织器官后存活并发挥了正常的功能。目前细胞学研究方面采用的标记方法有酶联标记、氚胸腺嘧啶核苷标记、荧光标记和5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记等。目的：观察5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞的特点。设计：单一样本观察。单位：华北煤炭医学院附属医院心胸外科。材料：实验于2003-07／2004-12在华北煤炭医学院中心实验室完成。取月龄3个月的日本大耳白兔6只，雌雄不限，体质量（3．00&;#177;0．25）kg。方法：①利用密度为1073g／L的Percoll分离骨髓的单核细胞，以含体积分数为0．1的胎牛血清的低糖Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基培养与扩增间充质干细胞，纯度可达95％左右。②用5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞24，48，72，96h后的检测标记率（标记组）；阴性对照为未经5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞；空白对照为以磷酸盐缓冲液或正常鼠血清替代一抗。主要观察指标：①3组各检测200个细胞，并在不同时间点观察。②5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记的骨髓间充质干细胞免疫组织化学染色结果及细胞计数结果：结果：①标记组均见5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞，5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性反应物位于细胞核，呈棕色、颗粒状或弥漫性分布：对照组未见阳性细胞。②标记组24，48，72，96h5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性细胞的数目分别为48&;#177;2，100&;#177;4，173&;#177;2，178&;#177;3．随着标记时间的延长，标记率逐渐增高，标记72h后标记率在85％以上。③阴性对照和空白对照组各时间点均为0。结论：①用5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞的最佳时间是72h。②标记后检测的敏感性好．在低倍镜中亦可见．适合于大块组织的定量研究。③结果表明5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞是可行的。     

静脉移植骨髓间充质干细胞改善心肌病心力衰竭大鼠的心功能

目的：经静脉移植骨髓间充质干细胞至阿霉素诱导的心力衰竭大鼠体内，观察骨髓间充质干细胞对心功能的影响及其在体内的存活情况。 方法：实验于2004—03／2005—11在福建省高血压研究所完成。①分离纯化近交系F344大鼠骨髓间充质干细胞进行体外培养，采用流式细胞仪检测其表面标记CD34，CD44和CD90。②10只正常大鼠作为正常对照组。32只大鼠腹腔注射阿霉素（15mg／kg）建立心肌病心力衰竭模型，然后随机分为细胞移植组16只，以5-溴-2’脱氧尿苷标记第2代骨髓间充质干细胞，经股静脉移植；移植对照组16只，移植等量DMEM培养基。③细胞移植后4周，多导生理记录仪测量3组大鼠的心功能，心脏组织切片行免疫组织化学染色，观察移植细胞在受体大鼠体内的存活情况。 结果：实验中细胞移植组有4只大鼠，移植对照组有7只死亡，进入结果分析31只。①体外培养的第2代骨髓间充质干细胞均一表达CD44和CD90，不表达CD34。②心功能测定显示：细胞移植组大鼠的左室收缩压、左室内压最大上升速率和下降速率均比移植对照组明显升高[（101&;#177;7）比（76&;#177;6）mmHg，（4875&;#177;309）比（3644&;#177;380）mmHg／s，（5075&;#177;336），（3544&;#177;354）mmHg／s，P〈0．05]，而左室舒张末压明显降低[（15&;#177;1），（20&;#177;2）mmHg／s，P〈0．05]；移植对照组左室收缩压、左室内压最大上升速率和下降速率均比正常对照组明显下降（P〈0．05），而左室舒张末压明显升高（P〈0．05）。③免疫组织化学显示：细胞移植组大鼠的心脏组织切片上有5-溴-2’脱氧尿苷标记的移植细胞存活，并且表达心肌特异性抗原β-肌球蛋白重链；细胞移植组室间隔和左心室处血管数量均明显多于移植对照组[（9．0&;#177;1．3）比（6．5&;#177;1．9）血管数／高倍镜，（9．9&;#177;1．5）比（7．8&;#177;1．4）血管数／高倍镜，P〈0．05]。 结论①经静脉移植骨髓间充质干细胞可有效改善阿霉素诱导的心力衰竭大鼠心功能。②骨髓间充质干细胞可归巢至心脏，分化为心肌样细胞。     

骨髓间充质干细胞体外培养过程中雌雄激素受体的表达

目的：观察骨髓间充质干细胞体外培养中雌激素受体与雄激素受体的表达情况。 方法：实验于2004-03／2005-01在广州中医药大学免疫研究室内完成。从SD大鼠骨髓中分离培养间充质干细胞，流式细胞仪鉴定，免疫细胞化学方法检测雌激素受体与雄激素受体的表达情况。 结果：①流式细胞仪结果显示，各阳性细胞占总细胞数的比例分别为：CD34（0．34％），CD45（0．22％），CD11b（19．40％），CD80（0．44％）．CD86（1．79％）总体表达为阴性，CD29（98．24％），CD44（97．49％），CD166（97．28％）总体表达为阳性，且此结果显示细胞的纯度很高，显示此细胞为骨髓间充质干细胞。②部分间充质干细胞呈雌激素受体阳性、雄激素受体阳性。雌激素受体阳性细胞占总细胞比率约为（23．80&;#177;3．37）％，雄激素受体阳性细胞占总细胞比率约为（31．27&;#177;2．281％。 结论：雌雄激素可直接通过其受体作用于间充质干细胞。雌雄激素减少所致间充质干细胞的异常分化，可能是原发性骨质疏松的发病原因之一。     

地黄多糖诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的效应

目的：探讨地黄多糖对骨髓问充质干细胞分化为神经细胞的诱导效应。方法：实验于2004-03／06在湖南省中医学院内科实验室进行，取1月龄SD大鼠1只，取股骨和胫骨，利用贴壁法分离纯化骨髓问充质干细胞。将骨髓间充质干细胞分为3组：地黄多糖组用地黄多糖诱导其向神经细胞分化，β-巯基乙醇组β-巯基乙醇诱导，对照组不做任何处理。光镜下观察细胞形态，采用免疫细胞化学方法鉴定神经细胞特异性抗原标志神经丝蛋白和神经胶质细胞特异性抗原胶质纤维酸性蛋白的表达。结果：地黄多糖组经地黄多糖诱导培养24h后细胞显示为典型的神经细胞样形态，神经丝蛋白阳性为(82．3&;#177;6．1)％，胶质纤维酸性蛋白阳性细胞为(10．5&;#177;2．1)％。β-巯基乙醇组的细胞神经丝蛋白及胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数较少，分别为(22．3&;#177;4．7)％，(42．3&;#177;5．3)％。对照组神经丝蛋白及胶质纤维酸性蛋白染色均为阴性：结论：地黄多糖具有诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的作用，其机制需探讨。     

骨髓干细胞不同移植途径对急性心肌梗死大鼠心功能的影响

目的：观察同种异体骨髓间充质干细胞经不同移植途径对急性心肌梗死大鼠心功能的影响，同时评价干细胞移植的有效性和安全性。 方法：实验于2004-05／2005-12在哈尔滨医科大学中心实验室完成。①Wistar雄性大鼠50只，采用随机数字表法分成千细胞移植组（n=30）和心肌梗死对照组（n=20）。移植组和对照组结扎左冠状动脉前降支造成急性心肌梗死模型。②冠脉结扎后7d，移植组经股静脉和心外膜分别注入骨髓间充质干细胞（含15&;#215;10^8细胞），对照组注入等量DMEM培养液。③分别于干细胞移植前、移植后1，2和4周行心脏超声检查，术后4周行血液动力学测定，观察心功能的变化。 结果：存活43只模型制作成功的大鼠，分为干细胞移植组25只，其中股静脉注射12只，心外膜注射13只；心肌梗死对照组18只。①心肌梗死后4周，移植组左心室射血分数、左心室短轴缩短率、左心室收缩末压和左心室压力最大上升速率比对照组明显提高（左心室射血分数，股静脉：（54．3&;#177;1．8）％比（42．4&;#177;1．9）％，心外膜：（55.2&;#177;1．7）％比（43．5&;#177;2．0）％；左心室短轴缩短率，股静脉：（45．0&;#177;1．1）％比（33．5&;#177;0．9）％，心外膜：（46．5&;#177;0．9）％对（32.8&;#177;0．7）％；左心室收缩末压，股静脉：（104．2&;#177;3．8）比（98．2&;#177;4．6）mmHg，心外膜：（105．4&;#177;2．3）比（102．3&;#177;3．6）mmHg；左心室压力最大上升速率，股静脉：（8290&;#177;811）比（6987&;#177;612）mmHg／s，心外膜：（8158&;#177;745）比（7015&;#177;740）mmHg／s：P〈0．01）。②左心室收缩末直径、左心室舒张末压、左室压力最大下降速率和左心室等容舒张时间常数均明显减小（P〈0．01）。③股静脉移植组和心外膜移植组对心功能的影响差异无显著意义（P〉0．05）。 结论：经静脉和心外膜两种途径移植骨髓间充质干细胞是安全可行的．二者均能有效地改善心功能，为急性心肌梗死的治疗提供一条行之有效的新途径。     

体细胞重编程为干细胞的方法研究与进展

背景：克隆人类胚胎会引起伦理问题,这使科学家寻找替代的方法来逆向分化细胞为多能/全能干细胞,这个过程称为重编程。重编程的新方法是研究者关注的焦点。目的：探讨重编程技术的研究现状,并对体细胞重编程为干细胞的各种方法做一综述。方法：应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1983年1月至2006年12月关于重编程的文章,在标题和摘要中以＂重编程,方法,体细胞,干细胞,分化＂或＂reprogramming,method,somatic cell,stem cell,differentiation＂为检索词进行检索。选择文章内容与重编程有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。最终选择17篇文献进行综述。结果与结论：一个多能干细胞重编程状态是细胞结构逐步重构,染色质表观遗传改变,转录表达和转录后调控的结果。靶细胞的重塑要求重编程有一个稳定的状态,最终可以被重新定向到特定的分化程序。有充分的证据表明,细胞鉴定可以被体外操作影响,重编程细胞的命运需要进一步体内检测。     

体细胞重编程为干细胞的方法研究与进展

背景:克隆人类胚胎会引起伦理问题,这使科学家寻找替代的方法来逆向分化细胞为多能/全能干细胞,这个过程称为重编程。重编程的新方法是研究者关注的焦点。目的:探讨重编程技术的研究现状,并对体细胞重编程为干细胞的各种方法做一综述。方法:应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1983年1月至2006年12月关于重编程的文章,在标题和摘要中以"重编程,方法,体细胞,干细胞,分化"或"reprogramming,method,somatic cell,stem cell,differentiation"为检索词进行检索。选择文章内容与重编程有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。最终选择17篇文献进行综述。结果与结论:一个多能干细胞重编程状态是细胞结构逐步重构,染色质表观遗传改变,转录表达和转录后调控的结果。靶细胞的重塑要求重编程有一个稳定的状态,最终可以被重新定向到特定的分化程序。有充分的证据表明,细胞鉴定可以被体外操作影响,重编程细胞的命运需要进一步体内检测。     

γδ+ T cells in Wilson's diseaseT cells in Wilson's disease

Little is currently known about the role of γδ^{+ +} T cells in disease pathogenesis. We have demonstrated elevated levels of γδ⁺ T cells in the peripheral blood and cerebrospinal fluid of patients with Wilson's disease compared with other neurological diseases. The percentage of of γδ⁺ T cells was between 20% and 50% in all patient groups: of γδ⁺ T cells in blood correlated with copper concentrations. The antigen reactivity of γδ^{+ +} T cells and how the antigens relate to the of γδ⁺ T cells found in WD remains unknown. It remains unclear whether there is a direct reason for the elevated of γδ⁺ T cells population found in WD. Immunohistochemistry of frozen autopsy material from brain and liver of WD patients could allow exact localization of γδ⁺ T cells and heat shock proteins in future studies.     

Requirement of dendritic cells and B cells in the clonal deletion of Mls-reactive T cells in the thymus

The present study was performed to identify cells responsible for the elimination of T cells reactive with minor lymphocyte-stimulating (Mls) antigens during T cell development. Experiments were carried out in a fetal thymus organ culture (FTOC) system. To examine the tolerance-inducing activity, various populations of cells from adult CBA/J (Mls-1a) mice were injected into deoxyguanosine (dGuo)-treated FTOC of C3H/He (Mls-1b) mice with a microinjector, and 2 d later, the thymus lobes were injected with fetal thymus cells from C3H/He mice as T cell precursors. After 14 d of cultivation, cells were harvested and assayed for the expression of the T cell receptor V beta 6 element. The absence or marked reduction of T cells expressing V beta 6 at high levels (V beta 6high) was regarded as indicating the deletion of Mls-1a-reactive T cells. T cell-depleted populations of thymic as well as splenic cells from CBA/J mice were able to induce clonal deletion. Further characterization of the effector cells was carried out by fractionating the spleen cells before injecting them into dGuo-FTOC. None of the dish-adherent population, dish-nonadherent population, or purified B cells alone were able to induce clonal deletion, whereas the addition of purified B cells to adherent cells restored tolerance inducibility. It was further shown that a combination of CBA/J B cells and C3H/He dendritic cells was effective in eliminating Mls-reactive clones. These results indicate that for the deletion of clones reactive with Mls antigens during T cell development in the thymus, both DC and B cells are required.     

Type 2 alveolar cells are stem cells in adult lung

Gas exchange in the lung occurs within alveoli, air-filled sacs composed of type 2 and type 1 epithelial cells (AEC2s and AEC1s), capillaries, and various resident mesenchymal cells. Here, we use a combination of in vivo clonal lineage analysis, different injury/repair systems, and in vitro culture of purified cell populations to obtain new information about the contribution of AEC2s to alveolar maintenance and repair. Genetic lineage-tracing experiments showed that surfactant protein C–positive (SFTPC-positive) AEC2s self renew and differentiate over about a year, consistent with the population containing long-term alveolar stem cells. Moreover, if many AEC2s were specifically ablated, high-resolution imaging of intact lungs showed that individual survivors undergo rapid clonal expansion and daughter cell dispersal. Individual lineage-labeled AEC2s placed into 3D culture gave rise to self-renewing “alveolospheres,” which contained both AEC2s and cells expressing multiple AEC1 markers, including HOPX, a new marker for AEC1s. Growth and differentiation of the alveolospheres occurred most readily when cocultured with primary PDGFRα⁺ lung stromal cells. This population included lipofibroblasts that normally reside close to AEC2s and may therefore contribute to a stem cell niche in the murine lung. Results suggest that a similar dynamic exists between AEC2s and mesenchymal cells in the human lung.     

Generation of self-macrophage-toxic non-T cells in the MHC-homozygous F1 spleen cells co-cultured with parental cells: possible involvements of host cells in impaired immunity in GVH disease

Simplified-in vitro system was developed to examine the contribution of host's cells in graft-versus-host (GVH)-disease-associated immunodeficiencies. In analogy with major histocompatibility complex (MHC)-matched GVH-reaction, (BALB/c x DBA/2)F1 (H-2d) hybrid spleen cells were co-cultured with irradiated BALB/c (H-2d) spleen cells, so that cellular activities to be generated are ascribable to F1 cells. In vitro development of anti-allo-specific cytotoxic T cells of the F1 origin was dramatically suppressed by coexistence of the irradiated parental cells and by the addition of F1 cells precultured once with the parental cells, suggesting the generation of suppressor cells in the F1 (host) cells activated by the parental cells. Thus generated suppressor cells are Thy.1-, weakly or nonadherent and radiosensitive. Interestingly, in the same reactions there also developed Thy.1- cytotoxic cells for autologous macrophage targets. An involvement in immunodeficiencies in GVH disease of the host-derived cytotoxic and/or immunosuppressive, non-T cells was discussed.     

人脐血细胞分化为神经细胞的体内实验研究

目的：人脐血富含干细胞和前体细胞，本文检索了人脐血治疗中枢神经系统疾病的体内实验研究状况、脐血细胞穿过血脑屏障的机制，并对其临床应用前景进行展望。资料来源：应用计算机检索PUBMED 1997-01／2005—10期间的相关文章，检索词为“Human umbilical cord blood cells，nerve cell”，并限定文章语言种类为English。同时计算机检索万方数据库2000-01／2005—10期间的相关文章，检索词为”脐血细胞，神经细胞”，并限定文章语言种类为中文。资料选择：对资料进行初审，并查看每篇文献后的引文。纳入标准：文章所述内容应与人脐血细胞的研究相关。排除标准：重复研究或Meta分析类文章。资料提炼：共收集到230篇相关文献，52篇文献符合纳入标准，排除的178篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的52篇文献中，36篇涉及人脐血治疗中枢神经系统疾病的体内实验研究状况，11篇涉及脐血细胞穿过血脑屏障的机制，5篇涉及人脐血细胞存在的问题与展望。资料综合：脐血富含干细胞和前体细胞，静脉注射人脐血细胞可进入脑内分化为神经干细胞、神经元和星形胶质细胞，提高脑和外周血神经营养因子水平，促进神经功能恢复。脑损伤后，病变组织表达趋化蛋白和黏附分子并释放多种化学物质及一系列生物活性因子，促使脐血中的骨髓间充质细胞、单个核细胞和造血细胞穿过损伤的血脑屏障进入脑内，向病灶迁移通过促进病灶周围的血管再生从而促进神经再生。脐血静脉移植为治疗神经退行性疾病提供了广阔的前景，脐血来源的干细胞可能将成为组织工程中的种子细胞，将对神经系统的细胞治疗和基因治疗起到极大地推动作用。结论：静脉注射人脐血细胞可进入脑内并分化为神经细胞，对神经功能缺损有改善作用，为脐血移植治疗神经系统疾病提供了新思路。