非小细胞肺癌组织中miR-30a和CD73的表达水平与预后相关性分析

目的　探究微小核糖核酸（ micro RNA, miR）-30a,胞外 -5’核苷酸酶（ ecto-5’-nucleotidase, CD73）在非小细胞肺癌（ non-small cell lung cancer,NSCLC）组织中的表达及其预后相关性。方法　选取 2015年 8月～ 2019年 12月于榆林市第一医院术后病理检查证实为 NSCLC患者癌组织 120例为研究组, 50例正常癌旁组织（距离癌组织 5cm以上）为对照组,采用实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）技术检测组织标本中 miR-30a相对表达量,免疫组织化学法检测 CD73的表达情况,分析 miR-30a,CD73表达水平与 NSCLC患者临床病理参数及生存时间之间的关系,多因素 COX回归分析影响 NSCLC患者预后的危险因素。结果　miR-30a在 NSCLC癌组织中的表达水平（ 1.17±0.21）明显低于正常癌旁组织（ 1.62±0.48）,差异有统计学意义（ t=8.521,P=0.000）;CD73在 NSCLC癌组织及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为 63.33%（76/120）和 32.00%（16/50）,差异有统计学意义（ χ2=13.955,P=0.000）;miR-30a高表达组 NSCLC患者一年累积生存率（ 86.89%）明显高于低表达组（ 59.32%）（Log Rank χ2=11.652,P=0.000）;CD73高表达组 NSCLC患者一年累积生存率（ 58.82%）明显低于低表达组（ 92.31%）（Log Rank χ2=16.894,P=0.000）;多因素 COX回归分析,结果显示分化程度低（ HR=1.677,95%CI:1.092～ 2.576）,发生淋巴结转移（HR=1.574,95%CI: 1.043～ 2.376）,miR-30a低表达（ HR=1.479,95%CI:1.027～ 2.130）,CD73高表达（ HR=1.501,95%CI:1.059～ 2.128）是影响 NSCLC患者预后不良的危险因素。结论　NSCLC癌组织中, miR-30a表达下调, CD73表达上调,二者水平异常表达可能与 NSCLC的发生发展有关,低 miR-30a和高 CD73与患者预后不良有关。     

喉鳞癌组织中 miR-1225-5p 和 CDC14B 蛋白水平表达与临床病理特征及预后的关系

目的　探究喉鳞癌组织中 miR-1225-5p 基因和细胞分裂周期蛋白 14B（CDC14B）蛋白表达与临床病理特征及预后的关系。方法　选取 2012 年 1 月 ~2015 年 6 月在延安市人民医院行手术切除的 67 例喉鳞癌患者癌组织及其对应癌旁正常组织进行实验。采用 qRT-PCR 法检测癌组织及癌旁正常组织中 miR-1225-5p mRNA 表达；采用 SP 免疫组化染色法检测癌组织及癌旁正常组织中 CDC14B 蛋白表达；探究 miR-1225-5p 及 CDC14B 与临床病理特征及预后的关系。结果　喉鳞癌组织中 miR-1225-5p mRNA 表达水平显著低于癌旁正常组织（1.7±0.5 vs 5.9±1.6），差异具有统计学意义（t=20.508，P<0.001）；CDC14B 蛋白阳性表达率显著高于癌旁正常组织（76.1% vs 37.3%），差异具有统计学意义（χ 2 =20.550，P<0.001）。miR-1225-5p mRNA 不同表达在喉鳞癌患者分化程度（χ 2 =3.824，P=0.000）、T 分期（χ 2 =1.859，P=0.034）、TNM 分期（χ 2 =3.597，P=0.000）及是否淋巴结转移（χ 2 =2.191，P=0.016）之间的差异均具有统计学意义。CDC14B 蛋白不同表达在喉鳞癌患者肿瘤直径（χ 2 =5.060，P=0.025）、分化程度（χ 2 =6.125，P=0.013）、T 分期（χ 2 =10.129，P=0.001）、TNM 分期（χ 2 =8.114，P=0.014）及是否淋巴结转移（χ 2 =4.273，P=0.038）之间的差异均具有统计学意义。miR-1225-5p 低表达、CDC14B 阳性患者术后 5 年总生存率低于 miR-1225-5p 高表达、CDC14B 阴性患者（Log-rank P=0.046，0.023）。结论　喉鳞癌组织中 miR-1225-5p 低表达、CDC14B 阳性表达与喉鳞癌恶性程度及预后密切相关，可作为喉鳞癌潜在的肿瘤标志物及治疗靶点     

甲状腺乳头状癌组织中galecti-3 与miR-375 水平表达意义及相关性研究

目的 探索甲状腺乳头状癌组织中半乳糖凝集素（galectin）-3 与微小RNA（micro RNA,miRNA）-375 水平表达意义及相关性。方法 选取2014 年5 月～ 2018 年9 月于张家口市第一医院普通外科接受手术治疗的87 例甲状腺乳头状癌患者作为研究对象,收集其甲状腺癌组织及对应的癌旁组织标本。通过实时荧光定量反应（real timepolymerase chain reaction,RT-PCR）检测galectin-3 和miR-375 在各个组织中的表达情况,分析二者的表达关系及其与临床病理特征的相关性。此外,采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测入院时患者血清galectin-3 水平,采用RT-PCR 法检测血清miR-375 水平,通过Kaplan-Meier 生存曲线评估血清galectin-3 与miR-375 表达对甲状腺乳头状癌病人预后的影响。结果 与癌旁组织相比,galectin-3 在甲状腺乳头状癌中表达上调（1.77 ± 0.48 vs 0.57 ± 0.16）,差异有统计学意义（t=22.122,P ＜ 0.001）;而miR-375 在癌组织中的表达水平下调（1.34 ± 0.39 vs 2.12 ± 0.62）,差异有统计学意义（t=9.933,P ＜ 0.05）。galectin-3 表达与肿瘤大小、包膜侵犯、血管浸润、淋巴结转移有关（χ2=9.936~20.028,均P ＜ 0.05）;miR-375 表达与肿瘤大小、血管浸润有关（χ2=12.590,6.403,均P ＜ 0.05）。血清galectin-3 与miR-375 表达水平呈负相关（r=-0.487,P<0.001）。血清galectin-3 高表达者三年总体生存期（overall survival,OS）低于低表达者（71.7％ vs 93.3％）,差异有统计学意义（Log-rank=7.493,P=0.001）;miR-375 高表达患者的三年OS 高于低表达者（93.3％ vs 73.9％）,差异有统计学意义（Log-rank=7.021,P=0.001）。结论 galectin-3 在甲状腺乳头状癌组织中表达升高,miR-375 在甲状腺乳头状癌组织中表达降低,二者共同参与甲状腺乳头状癌的发生发展,对预后具有一定影响。     

miR-135b在卵巢上皮癌中的表达及意义

目的探讨卵巢上皮性癌组织miR-135b表达水平及与临床特征的关系。方法行卵巢上皮性癌切除术患者83例为观察组,因子宫肌瘤或子宫内膜癌行子宫全切+卵巢切除手术患者40例为对照组,实时荧光定量PCR法检测2组手术切除卵巢组织miR-135b表达水平,并比较观察组不同临床特征间miR-135b表达差异。结果观察组卵巢组织miR-135b相对表达量(1.93±0.13)高于对照组(1.27±0.11)(P0.05);观察组FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、中低分化、有淋巴结转移患者miR-135b相对表达量(2.06±0.14、2.10±0.11、2.13±0.14)均高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、高分化、无淋巴结转移患者(1.84±0.13、1.87±0.09、1.79±0.12)(P0.05),不同年龄、组织学类型、肿瘤直径患者miR-135b相对表达量比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论卵巢上皮性癌组织中miR-135b表达升高,其水平与肿瘤临床分期、侵袭及转移有关。     

食管癌中miR-203和miR-21的表达水平及临床意义

目的探讨食管癌组织中miR-203和miR-21的表达水平及其临床意义。方法收集2011年9月至2013年9月该院病理科47例食管癌患者的肿瘤组织标本及相应癌旁正常组织标本,采用荧光定量聚合酶链反应检测两种组织中miR-203、miR-21的表达,分析miR-203、miR-21表达与食管癌组织病理特征及患者预后的关系。结果食管癌组织中miR-203表达水平为0.35±0.21,明显低于癌旁正常组织的0.87±0.14,miR-21表达水平为1.37±0.23,明显高于癌旁正常组织的0.79±0.17,差异均有统计学意义(P0.05);miR-203表达与食管癌临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移密切相关(t/F=5.629、15.021、3.159,P=0.000、0.000、0.003),而与食管癌患者年龄、性别、肿瘤部位无明显相关性(t=0.321、0.776、0.498,P=0.750、0.442、0.621);miR-21表达与食管癌患者临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移密切相关(t/F=4.201、41.646、5.109,P=0.000、0.000、0.000),而与食管癌患者年龄、性别、肿瘤部位无明显相关性(t=0.732、1.436、0.597,P=0.468、0.158、0.553)。miR-203高表达组生存率明显高于miR-203低表达组,差异有统计学意义(P0.05);miR-21低表达组生存率明显高于miR-21高表达组,差异有统计学意义(P0.05)。Spearman秩和检验结果显示,食管癌组织中miR-203与miR-21表达呈明显负相关(r=-0.564,P0.05)。结论 miR-203在食管癌组织中明显低表达,miR-21为明显高表达,二者有望成为食管癌早期诊断及预后判断的有效标志物。     

宫颈癌癌组织中miR-365、miR-135a-5p及STAT3的表达水平及意义

目的探讨宫颈癌癌组织中miR-365、miR-135a-5p及STAT3的表达水平及意义。方法选取2016年6月-2018年7月在医院行宫颈癌手术切除的存档蜡块和癌旁正常组织(距病变部位5cm处,且证实为无癌浸润)石蜡标本各90例作为研究对象。采用免疫组化法检测宫颈癌组织中STAT3的表达,实时定量荧光聚合酶链反应(qPCR)检测mi R-365、miR-135a-5p表达水平,分析miR-365、miR-135a-5p及STAT3与宫颈癌患者临床病理参数及预后的关系。结果 miR-365在宫颈癌组织中的相对表达量低于癌旁组织,miR-135a-5p的相对表达量、STAT3的阳性表达率均高于癌旁组织(P0.05)。FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、合并淋巴结转移、高分化、直径≥5cm的宫颈癌组织中miR-365相对表达量分别高于FIGO分期I～II期、未合并淋巴结转移、低分化、直径5cm的宫颈癌组织(P0.05);FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、合并淋巴结转移的宫颈癌组织中miR-135a-5p相对表达量分别高于FIGO分期I～II期、未合并淋巴结转移的癌组织(P0.05)。宫颈癌组织中miR-135a-5p的表达与STAT3呈显著正相关(r=0.388,P0.05)。90例宫颈癌患者2年总生存率为66.67%(60/90),ROC曲线分析显示miR-365、miR-135a-5p及STAT3的曲线下面积(AUC)分别为0.855、0.735、0.549。结论 miR-365、miR-135a-5p的表达水平均与临床分期、淋巴结转移相关,miR-365还与肿瘤大小、分化程度有关,miR-135a-5p的表达与STAT3具有显著相关性;其中miR-365、miR-135a-5p对患者预后的预测价值较高。     

上皮性卵巢癌组织CDCA7 表达水平及其与患者预后的相关性研究

目的 探讨上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）组织细胞分裂周期相关蛋白（cell division cycle associated protein 7,CDCA7）表达水平及其与患者预后的相关性。方法 收集 2010年 10月～2020年 10月河北省秦皇岛市第一医院收治的 90例 EOC患者癌组织标本和 50例癌旁组织标本,采用免疫组织化学法检测癌组织、癌旁组织标本 CDCA7阳性表达情况;采用实时荧光定量（qRT-PCR）法检测癌组织、癌旁组织标本 CDCA7 mRNA相对表达量。比较 EOC癌组织标本中 CDCA7表达情况与临床病理特征的关系; Kaplan-Meier法分析 EOC癌组织标本中 CDCA7表达情况与患者无进展生存期（progression-free survival,PFS）和生存率的相关性以及 COX风险比例回归分析影响预后的因素。结果 CDCA7蛋白在 EOC癌组织中阳性表达率为 78.33%,高于癌旁组织的 64.17%,差异有统计学意义（χ2=70.767,P=0.000）;CDCA7mRNA在癌组织中的相对表达量为 6.05±0.32,高于癌旁组织（1.08±0.06）,差异有统计学意义（t=108.600, P=0.000）;CDCA7高表达与 EOC患者病理分期、肿瘤浸润深度、病理分型、淋巴结转移、CA125水平和 HE4水平等临床特征有关（χ2= 3.947～8.420,均 P＜ 0.05）;Kaplan-Meier法生存分析, CDCA7低表达 EOC患者 PFS生存时间为 98.15±10.72个月,高于 CDCA7高表达患者（63.25±7.49个月）,差异有统计学意义（Log-Rank χ2=3.849,P=0.049）;CDCA7低表达患者 12个月的总生存率为 87.35%,高于 CDCA7高表达患者的 45.76%,差异有统计学意义（Log-Rank χ2=6.905,P=0.012）;COX比例风险回归, TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、并发淋巴结转移、CDCA7高表达为影响患者 12个月 PFS的独立危险因素（Wald χ2=4.858, 4.892, 5.025,P=0.028,0.028,0.026）。结论 CDCA7在 EOC患者癌组织中阳性表达率高于癌旁组织,CDCA7高表达是影响患者 12个月 PFS的独立危险因素,可作为 EOC患者不良预后评估的分子标志物。     

miR-1246在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

【目的】探讨miR-1246在结直肠癌组织中的相对表达量及其与结直肠癌临床病理特征的相关性。【方法】采用荧光定量PCR检测52例结直肠癌组织和相应癌旁组织中的miR-1246的相对表达量,分析其与结直肠癌临床特征的相关性。【结果】结直肠癌组织中的miR-1246的表达水平为3．937±1．461,明显高于癌旁组织1．000±0．000,其差异有统计学意义（t=3．497,P=0．001）;miR-1246的表达与结直肠癌的肿瘤浸润深度（P=0．009）,淋巴结转移（P=0．039）和TMN分期（P=0．010）明显相关。【结论】miR-1246在结直肠癌组织中高表达,其可能参与结直肠癌侵袭和转移的过程。     

非小细胞肺癌患者癌组织和血浆中microRNA-21的表达及意义

目的探讨microRNA-21(miRNA-21,miR-21)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌组织和血浆中的表达及临床意义。方法用荧光定量PCR检测100例NSCLC患者肺癌组织及癌旁组织miR-21的相对表达量,并检测100例NSCLC患者及100例健康人血浆miR-21的相对表达量,用t检验比较其表达水平的差异,用卡方检验分析肺癌组织miR-21表达量与各临床病理资料之间的关系,ROC曲线评价miR-21对NSCLC的诊断价值。结果 miR-21在肺癌组织的表达水平高于癌旁组织(t=10.154,P0.05),且在NSCLC患者血浆中的表达水平高于健康人(t=13.444,P0.05);肺癌组织中miR-21高表达患者肺癌复发转移率明显高于低表达患者(χ2=11.335,P0.05);生存分析显示,肺癌组织或血浆中miR-21高表达患者较低表达者生存期明显缩短(χ2为6.685和5.692,P0.05);ROC曲线表明,miR-21对NSCLC诊断价值中等。结论 miR-21在NSCLC患者癌组织及血浆中均有高表达,肺癌组织miR-21高表达与NSCLC复发转移具有密切关系,可作为NSCLC诊断及评价预后的指标。     

Wntl／β-catenin与食管鳞状细胞癌临床病理及预后的相关性研究

目的探究Wntl／β-catenin信号通路与食管鳞状细胞癌（ESCC）的临床病理及预后凶素的相关性。方法用实时定量PCR（RT-PCR）和免疫组织化学技术分析70例ESCC（包括癌组织与癌旁非癌组织）中Wntl／β-eatenin的表达情况,统计分析其与临床病理及预后的关系。结果癌组织中Wnt1 mRNA水平（1．9934±1．9888 vs 5．0．8863±0．6658,P=0．0000）和蛋白质水平（0．3830±0．0947 vs．0．2721±0．1474,P=0．0000）均较癌旁组织中显著高表达;WntlmRNA表达与病理分期和淋巴结转移及预后相关（P〈0．05）,但蛋白质水平未显示相关。癌组织中β-cateninmRNA水平（0．2854±0．1298w．0．8863±0．6658,P=0．0000）和蛋白质水平（0．2835±0．0844135．0．2352±0．0670,P=0．003）较癌旁组织中显著高表达,B—eateninmR—NA表达与病理分期、淋巴结转移及预后相关（P〈0．05）,但蛋白质水平并未显示相关。在蛋白质水平上,Wntl和β-catenin表达水平兀相关性。结论Wntl／β-catenin在ESCC组织中显著高表达。可能成为判断ESCC分期和预后的重要分子标记物。且Wntl／β-ateninmRNA表达水平与ESCC临床病理分期、淋巴结转移呈逆相关,mRNA的异常表达者预后不佳．但可能不是独立预后因素。     

miR-198 通过靶向ZEB2 调控EMT 过程抑制肝癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的 探讨微小核糖核酸-198（miR-198）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织细胞中的表达及其对癌细胞增殖、迁移的影响及其相关机制。方法 采用qRT-PCR 检测miR-198 在HCC 组织及细胞(HepG2,Hep3G,MHCC97H,Huh7) 中的表达情况;采用脂质体2000 向Huh7 细胞中单独转染miR-198 mimics,共转染miR-198 mimics 和pcDNA3.1-ZEB2;生物信息学网站预测miR-198 的潜在靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证;采用Western blot 检测E 盒结合锌指蛋白2（E-box binding zinc finger protein 2, ZEB2）及上皮-间质转化（epithelialmesenchymaltransformation, EMT）相关蛋白表达;CCK-8 法和细胞划痕实验检测Huh7 细胞增殖和迁移能力。结果 20 例HCC 组织中miR-198相对表达量（0.354±0.022）明显低于邻近正常组织（4.762±1.135）,差异有统计学意义（t=17.365,P＜ 0.001）。HCC细胞系HepG2（0.589±0.103）,Hep3G（0.495±0.086）,MHCC97H（0.558±0.056）和Huh7（0.362±0.045）中miR-198 相对表达量较正常肝细胞LO2（1.823±0.125）显著降低（t=17.159,18.466,17.590,20.315,均P ＜ 0.05）。miR-198 mimics 组细胞增殖（0.398±0.146 vs 0.691±0.213）和迁移能力（20.012±2.103 vs 84.032±6.512）较对照组明显降低（t=1.965,52.459,均P ＜ 0.001）。miR-198 mimics 组细胞中E-cadherin 表达较对照组明显升高,N-cadherin和Vimentin 表达较对照组明显降低（t=18.478,17.550,19.706,均P ＜ 0.01）。ZEB2 是miR-198 的靶基因,miR-198负调控ZEB2。20 例HCC 组织中ZEB2 相对表达量（3.621±1.143）明显高于邻近正常组织（ 0.736±0.030）,差异有统计学意义（t=11.284,P ＜ 0.001）,与miR-198 表达呈负相关（r=-0.702,P ＜ 0.05）。共转染过表达ZEB2 逆转了miR-198 mimics 对HCC 细胞增殖、迁移和EMT 的抑制作用。结论 miR-198 在HCC 组织和细胞中表达下调,miR-198 通过靶向负调控ZEB2 的表达抑制Huh7 细胞的增殖和迁移。     

胰腺癌组织CTTN 和miR-545-3p 表达水平及其与临床病理和预后的相关性研究

目的 探究胰腺癌组织中皮层肌动蛋白(cortical actin,CTTN)、微小核糖核酸(micro RNA, miR)-545-3p的表达情况及其与患者预后的相关性。方法 募集2016 年1 月～ 2018 年12 月南通大学附属医院行腹腔镜胰腺癌切除手术的胰腺癌患者138 例,采集胰腺癌组织和癌旁正常组织,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qRTPCR)检测CTTN mRNA 和miR-545-3p 表达,二者的相关性通过Pearson 法进行分析,分析CTTN mRNA 和miR-545-3p 表达与临床病理特征的关系,绘制Kapplan-Meier 生存曲线分析胰腺癌组织中CTTN mRNA 和miR-545-3p 表达与患者生存率的关系,经COX 回归对影响胰腺癌患者生存的危险因素进行分析。结果 与癌旁正常组织比较,胰腺癌组织中CTTN mRNA 表达上调(2.11±0.87 vs 1.02±0.46),miR-545-3p 表达下调(0.45±0.19 vs 0.97±0.42), 差异均有统计学意义(t=12.895,13.251,均P=0.000);胰腺癌组织中CTTN mRNA 和miR-545-3p 之间具有负相关性(r=-0.410,P ＜ 0.05);CTTN mRNA 和miR-545-3p 表达均与肿瘤分化程度、TNM 分期以及淋巴结转移有关(t=2.473 ～ 11.418,均P ＜ 0.05)。根据CTTN mRNA 和miR-545-3p 表达量的均值将所有患者依次分为CTTN mRNA 高表达组和CTTNmRNA 低表达组,miR-545-3p 高表达组和miR-545-3p 低表达组。生存曲线分析得出,CTTN mRNA 低表达组三年生存率高于CTTN mRNA 高表达组(24.62% vs 9.59%),miR-545-3p 高表达组三年生存率高于miR-545-3p 低表达组(25.37%vs 8.45%), 差异均有统计学意义(χ2=4.560,P=0.033;χ2=5.941,P=0.015)。存在淋巴结转移、高CTTN mRNA 表达、低miR-545-3p 表达是胰腺癌患者术后三年死亡的危险因素(Waldχ2=1.885, 1.562, 0.625,均P ＜ 0.05)。结论 胰腺癌组织中CTTN mRNA 高表达和miR-545-3p 低表达均与患者预后不良有关。     

缺血性脑卒中患者血清miR-155和PDCD4mRNA表达水平与颈动脉支架成形术后再狭窄的相关性研究

目的　了解缺血性脑卒中（cerebral ischemic stroke,CIS）患者血清微小RNA-155（microRNA-155,miR-155）、程序性细胞死亡因子4（programmed cell death factor 4,PDCD4）信使RNA（messenger RNA,mRNA）表达水平与颈动脉支架成形术（carotid artery stenting,CAS）后再狭窄的相关性。方法　选择2016 年2 月～ 2020 年7 月在凉山彝族自治州第二人民医院确诊的CIS 患者120 例作为CIS 组,同期选取健康体检者125 例为对照组。实时荧光定量PCR 法测定CIS 组术前和术后24 h,对照组体检时血清miR-155 和PDCD4 mRNA 表达水平;术后180 天对CIS 患者进行脑多普勒超声检查和颈动脉彩超检查,观察CIS 患者颈动脉狭窄程度、不稳定斑块数量、斑块长度及斑块厚度,测定患者血浆粘度、全血黏度、红细胞比容和纤维蛋白原水平;采用受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线分析血清miR-155 和PDCD4 mRNA 表达水平对CIS 患者行CAS 术后再狭窄的诊断价值。结果　与对照组相比,CIS 组术前血清miR-155 表达水平显著降低（0.31±0.06 vs 1.01±0.20）（q=45.189,P=0.000）,CIS 组术前（2.23±0.45 vs 1.03±0.20）和术后24 h（1.19±0.29 vs 1.03±0.20）血清PDCD4 mRNA 表达水平均显著升高（q=40.422,5.390,均P=0.000）,差异均有统计学意义;与CIS 组术前相比,CIS 组术后24 h 血清miR-155 表达水平显著升高（0.97±0.21 vs 0.31±0.06）（q=42.179,P=0.000）,血清PDCD4 mRNA 表达水平显著降低（1.19±0.23 vs2.23±0.45）（q=34.680,P=0.000）,差异均有统计学意义;与未狭窄组相比,再狭窄组颈动脉狭窄程度（21.31±5.33vs 9.11±2.52）、术后24 h 血清PDCD4 mRNA 表达水平（2.18±0.54 vs 1.06±0.26）、不稳定斑块数量（5.51±1.27 vs2.87±0.71）、斑块长度（7.60±1.90mm vs 3.16±0.79mm）、斑块厚度（4.60±1.15mm vs 2.84±0.71mm）、血浆黏度（15.03±3.85mPa·s vs 11.01±2.75mPa·s）、全血粘度(5.84±1.46mPa·s vs 3.71±0.92mPa·s）、红细胞比容（58.98%±17.74%vs 46.51%±11.62%）和纤维蛋白原（4.93±1.23g/L vs 3.01±0.75g/L）显著升高,差异均有统计学意义（t=4.277 ～ 17.874,均P<0.05）,术后24 h 血清miR-155 表达水平显著降低（0.36±0.09 vs 1.03±0.25）,差异有统计学意义（t=9.074,P=0.000）。ROC曲线结果表明,术后24 h血清miR-155和PDCD4 mRNA表达水平诊断CAS术后再狭窄的AUC分别为0.778（95% CI 为0.692~0.864）和0.838（95% CI 为0.749~0.926）。结论　血清miR-155 和PDCD4 mRNA 的异常表达与CIS病情及CAS 术后再狭窄联系密切,对CAS 术后再狭窄具有一定的诊断价值。     

miR-495 对食管癌细胞株Eca109 在不同放射剂量和顺铂浓度作用的影响及机制研究

目的 探讨微小核糖核酸(microRNA,miR) -495 对食管癌细胞株Eca109 在不同放射剂量和顺铂浓度作用下的影响及机制。方法 采用分次放疗递增法诱导建立放射抵抗型细胞株Eca109（Eca109-RAD）及分次顺铂递增法诱导建立顺铂耐药型细胞株Eca109（Eca109-DDP）,实时荧光定量聚合酶链反应 (qRT-PCR) 检测miR-495 在Eca109-RAD 及Eca109-DDP 细胞中的表达。Eca109-RAD 及Eca109-DDP 分为NC 组和miR-495 mimic 组,转染后qRT-PCR 检测各组细胞中miR-495 的表达,CCK8 检测不同放射剂量对Eca109-RAD 细胞和Eca109 细胞存活能力的影响,及不同浓度的顺铂对Eca109-DDP 细胞和Eca109 细胞存活能力的影响,NC 组和miR-495 mimic 组经放射及顺铂处理后,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,Western blot 检测各组细胞中凋亡相关蛋白caspase 3,Bax 和Bcl-2 蛋白的表达。结果 与Eca109 细胞（0.99±0.01）相比,Eca109-RAD 细胞中miR-495 的表达（0.48±0.03 ）及Eca109-DDP 细胞中miR-495的表达（0.52±0.05）均降低,差异有统计学意义(t=27.930,15.970, 均P=0.000)。与NC 组细胞相比,miR-495 mimic组Eca109-RAD 细胞中miR-495 的表达（4.82±0.48 vs 1.00±0.03）及Eca109-DDP 细胞中miR-495 的表达（5.68±0.54vs 1.00±0.01）均显著增加,差异有统计学意义(t=13.760,15.100, 均P=0.000)。与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞对放疗敏感度增加,差异均有统计学意义(t=6.780 ～ 18.860,P = 0.000 ～ 0.001);与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-DDP 细胞对顺铂敏感度增加,差异均有统计学意义(t=7.510 ～ 21.630,均P=0.000)。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞平板克隆形成能力（46.33±5.69 个vs 93.33±4.51 个）及Eca109-DDP（34.67±2.52 个vs 89.00±4.03 个）细胞平板克隆形成能力显著降低(t=11.210,19.800, 均P=0.000) 。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞凋亡率（25.66%±2.41% vs 8.39%±0.82%）及Eca109-DDP 细胞凋亡率（21.05%±5.37% vs 8.67%±1.15%）均显著增加(t=11.750,10.030,P=0.000,0.001)。经放射处理后,与NC 组相比,miR-495 mimic 组Eca109-RAD 细胞及Eca109-DDP 细胞中Bcl-2 蛋白表达均降低(t=4.650,7.450,P=0.006,0.001),Bax 和caspase 3 蛋白的表达均增加(t= 7.100 ～ 14.290, P=0.000 ～ 0.001)。结论 MiR-495 可能通过调控凋亡相关蛋白促进食管癌细胞放化疗敏感度。     

miR-505-3p 对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响及机制研究

目的 检测胃癌组织及细胞中miR-505-3p 表达,并探究其对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响及潜在分子机制。方法 利用实时荧光定量PCR 实验（qRT-PCR）检测胃癌组织、癌旁正常组织及胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞中miR-505-3p 相对表达;构建miR-505-3p 过表达、c-MYC 过表达和敲低表达细胞系,通过CCK-8 法,克隆斑点形成实验、Transwell 侵袭/ 迁移实验检测miR-505-3p 和c-MYC 对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响;裸鼠皮下成瘤实验验证miR-505-3p 对裸鼠肿瘤生长的影响;双荧光素报告实验验证miR-505-3p 和c-MYC 的靶向关系,并探究其两者间的表达调控作用;Western blot 检测miR-505-3p 和c-MYC 对Wnt/β-catenin 通路关键蛋白表达的影响。结果 临床胃癌组织中miR-505-3p 表达水平较正常癌旁组织显著下调（0.92±0.37 vs 1.74±0.59）,差异有统计学意义（t=3.723,P ＜ 0.01）。胃癌细胞系MGC803（1.12±0.35）,AZ521（2.31±0.24）和HGC-27（2.28±0.43）中miR-505-3p 相对表达较人正常胃黏膜细胞系GES1（4.62±0.79）明显降低,差异有统计学意义（F=26.109,P ＜ 0.001）。miR-505-3p 过表达组细胞增殖（0.92±0.27）、克隆形成（51.67±21.75）、迁移（43.25±15.47 ）、侵袭（38.53±14.76）能力较NC组（1.85±0.34,128.36±36.42,100.08±2.12,100.12±1.94）明显降低,差异均有统计学意义（t=3.131 ～ 7.166,均P ＜ 0.05）;miR-505-3p 过表达抑制了裸鼠生长。c-MYC 是miR-505-3p 的靶基因,miR-505-3p 靶向负调控c-MYC。c-MYC 过表达组细胞增殖（2.72±0.68）、迁移（147.15±20.36）、侵袭（145.46±22.73）能力较NC 组（1.85±0.34,100.08±2.12,100.12±1.94）明显增高,差异均有统计学意义（t=2.455 ～ 4.456,均P ＜ 0.05）;c-MYC 过表达可逆转miR-505-3p 对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。miR-505-3p 过表达组Wnt（0.46±0.07 ）,β-catenin（0.50±0.05）蛋白相对表达水平明显低于NC 组（1.01±0.02,1.02±0.02）,差异均有统计学意义（t=8.139,7.342,均P ＜ 0.001）;过表达c-MYC 能够逆转miR-505-3p 对Wnt 和β-catenin 蛋白表达的抑制作用。结论 胃癌中miR-505-3p 显著低表达,其可通过靶向调控c-MYC 表达介导Wnt/β-catenin 信号通路激活进而发挥作用参与胃癌的发生发展过程。     

hsa_circ_0006950 调控miR-124-3p/EZH2 轴促进胰腺癌细胞增殖与迁移的机制研究

目的　检测环状核糖核酸（circular RNA ,cicrRNA）hsa_circ_0006950 在胰腺癌（pancreatic cancer,PC）中的表达,探讨其对胰腺癌细胞增殖、迁移的影响及其潜在分子作用机制。方法　利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR) 检测hsa_circ_0006950 在胰腺癌组织及细胞中的相对表达水平;转染hsa_circ_0006950 干扰载体构建低表达细胞系,通过CCK-8实验、克隆斑点形成实验和Transwell 实验检测hsa_circ_0006950 对胰腺癌细胞增殖、克隆形成及迁移的影响;利用生物信息学网站预测hsa_circ_0006950 的miRNA 分子靶标及其调控网络（hsa_circ_0006950-miR-124-3p-EZH2）,双荧光素酶基因报告实验验证hsa_circ_0006950 和miR-124-3p,miR-124-3p 和EZH2 的靶向结合关系;转染过表达/ 干扰miR-124-3p 和过表达EZH2 细胞系,探究miR-124-3p 和EZH2 及hsa_circ_0006950 调控miR-124-3p/EZH2 轴对胰腺癌细胞克隆形成及迁移的影响。结果　胰腺癌组织中hsa_circ_0006950 表达明显高于癌旁正常组织（3.57±0.52 vs 1.01±0.03）,差异有统计学意义（t=21.980,P ＜ 0.001）。胰腺癌细胞PANC-1（7.51±0.62）,AsPC-1（5.26±0.45）,Capan-2（3.69±0.38）,SW1990（3.25±0.32）and BXPC-3（3.86±0.35）中hsa_circ_0006950 相对表达明显高于正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7（1.00±0.01）中的表达,差异有统计学意义（F=88.585,P ＜ 0.001）。与对照组相比,干扰hsa_circ_0006950 表达组细胞增殖能力（0.79±0.17 vs 1.83±0.42）,克隆形成率（51.42%±5.84% vs 78.76%±13.65%）和迁移数目（104.64±24.73 vs 218.21±31.57）明显降低,差异均有统计学意义（t=3.976,3.190,4.905,P=0.016,0.033,0.008）。miR-124-3p 是hsa_circ_0006950 的下游靶基因,EZH2 是miR-124-3p 的直接靶标。hsa_circ_0006950 靶向负调控miR-124-3p,miR-124-3p 靶向负调控EZH2。与对照组相比,过表达miR-124-3p 组PC 细胞增殖（0.21±0.16 vs1.75±0.47）,克隆形成率（47.85%±4.13% vs 81.54%±2.33%）和细胞迁移数目（118.74±24.65 vs 202.36±31.45）明显降低,差异均有统计学意义（t=5.378, 14.317, 3.390, 均P ＜ 0.001）;共转染过表达EZH2 后,miR-124-3p 对细胞增殖、克隆形成率及迁移能力的抑制作用被逆转。在干扰hsa_circ_0006950 组细胞中同时下调miR-124-3p 或过表达EZH2 后,hsa_circ_0006950 对细胞克隆形成及迁移的抑制作用被逆转恢复。结论　胰腺癌中hsa_circ_0006950 显著高表达,抑制其表达可以抑制胰腺癌细胞的增殖及迁移;hsa_circ_0006950 可能通过靶向下调miR-124-3p 表达,进而上调EZH2 表达来发挥作用,参与胰腺癌的发生发展。     

miR-203a-3p 靶向GLS1 调控HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的　探究微小核糖核酸（microRNAs, miRNA, miR）-203a-3p 对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其潜在分子机制。方法　采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRTPCR）检测HCC 细胞、人正常肝细胞以及临床HCC 组织中miR-203a-3p 相对表达;采用细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell 实验分别检测miR-203a-3p 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;生物信息学网站预测miR-203a-3p 的潜在靶基因（GLS1）,双荧光素酶实验进行验证;探究HCC 细胞对谷氨酰胺的依赖性及抑制谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1) 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 表达。结果　HCC 癌组织中miR-203a-3p（0.32±0.07）表达明显低于癌旁正常组织（1.02±0.03）,差异有统计学意义（t ＝ 41.105,P ＜ 0.001）;HCC 细胞HepG2（0.34±0.05）,HCCLM3（0.58±0.06）,Huh7（0.43±0.05）,Hep3B（0.29±0.04）中miR-203a-3p 相对表达水平明显低于人正常肝细胞LO2（1.01±0.02）中miR-203a-3p 表达,差异有统计学意义（F ＝ 119.080,P ＜ 0.001）。与Blank 组相比,miR-203a-3p 过表达组HCC细胞增殖（0.61±0.05 vs 1.24±0.06）, 迁移率（21.43%±2.01% vs 60.22%±3.14%） 及侵袭能力（76.54±13.56 vs221.06±16.54）均明显降低,差异有统计学意义（t ＝ 14.849,13.900,10.562,均P ＜ 0.001）。GLS1 是miR-203a-3p的靶基因,miR-203a-3p 靶向负调控GLS1 表达。HCC 细胞中GLS1 高表达呈现高酶活性,HCC 细胞对谷氨酰胺存在明显依赖性。GLS1 抑制组α-KG,谷氨酸水平均较Blank 组和siRNA-NC 组明显降低,差异有统计学意义（F ＝ 64.754,35.627,均P ＜ 0.001）。GLS1 抑制组细胞增殖（0.59±0.04）、迁移率（30.15%±1.02%）和侵袭能力（69.59±15.74）较Blank 组明显降低（1.29±0.07,59.67%±1.45%,202.14±13.52）,差异均有统计学意义（t ＝ 16.499,16.278,11.215,均P ＜ 0.001）。miR-203a-3p 过表达和GLS1 表达抑制明显抑制了Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 的表达,差异均有统计学意义（t ＝ 11.129 ～ 28.213,均P ＜ 0.001）。转染GLS1 可逆转miR-203a-3p 对HCC 细胞生物学行为及Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白表达的抑制作用。结论　HCC 中miR-203a-3p 显著低表达,其过表达能够抑制HCC 细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与GLS1 调控谷氨酰胺代谢及miR-203a-3p 靶向GLS1调控Wnt/β-catenin 信号通路活性有关。     

microRNA-301在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的 分析miR-301在胰腺癌组织中的表达,探讨其在胰腺癌侵袭转移中的意义.方法 用FQ-PCR方法从细胞水平检测5种胰腺癌细胞系(PANC-1、PaCa-2、AsPC-1、Hs-766T、BxPC-3)中miR-301的表达;进一步用免疫组织化学方法从组织水平检测胰腺癌组织芯片(含60份胰腺癌组织、10份癌旁组织和10份正常胰腺组织)中miR-301的表达;在证实miR-301高表达后,进一步研究其在胰腺癌侵袭转移中的临床意义,用100 nmol/L miR-301抑制剂(anti-miR-301)或阴性对照(Anti-miR~(TM) Negative Control#1)处理对数生长的胰腺癌细胞系PANC-1、PaCa-2,用WB检测胰腺癌细胞系中侵袭转移相关分子COX-2、MMP-2的表达,并用Transwell技术检测胰腺癌细胞的侵袭转移能力.结果 FQ-PCR检测结果显示,在5种胰腺癌细胞系PANC-1、PaCa-2、AsPC-1、Hs-766T、BxPC-3中miR-301的相对表达量分别为33.09±4.21、30.76±3.18、47.57±3.56、20.20±1.21、76.75±13.51;而正常胰腺细胞中为1.00±0.08;5种胰腺癌细胞系分别与正常胰腺细胞相比,差异有统计学意义(t值分别为8.86、9.53、6.39、6.77、11.18,P均<0.01).免疫组织化学结果亦显示,胰腺癌组织、癌旁组织及正常胰腺组织中miR-301的相对表达量分别为0.88±0.09、0.22±0.04、0.14±0.05;胰腺癌组织分别与癌旁组织及正常胰腺组织相比,差异有统计学意义(t值分别为15.1、10.6,P均<0.01);正常胰腺组织与癌旁组织相比,差异无统计学意义(t=1.32,P=0.22).用miR-301抑制剂抑制胰腺癌细胞系PANC-1、PaCa-2中miR-301的表达后,WB检测结果显示,侵袭转移相关分子COX-2、MMP-2的表达下调;细胞侵袭转移能力试验结果显示,miR-301抑制剂处理后跨膜转移的细胞数分别为PANC-1(587±27)个、PaCa-2(363±13)个,而阴性对照处理后跨膜转移的细胞数为:PANC-1(1 091±15)个、PaCa-2(737±44)个;miR-301抑制剂处理与阴性对照处理相比,细胞侵袭转移能力亦显著下降(t值分别为7.89、7.56,P均<0.01).结论 胰腺癌细胞系和组织中miR-301高表达;且与胰腺癌的侵袭转移密切相关,抑制miR-301的表达能够有效抑制胰腺癌细胞的侵袭转移,miR-301有望成为抗胰腺癌侵袭转移治疗的新分子靶标和胰腺癌早期诊断的新分子标志.     

m6A甲基转移酶METTL3介导miR-127调控非小细胞肺癌细胞系自噬的机制研究

目的　分析N6 甲基腺苷（m6A）甲基转移酶 3（methyltransferase-like 3, METTL3）和miR-127 在非小细胞肺癌（non small cell lung cancer cells, NSCLC）细胞系中的表达及其相关性,并探究METTL3 介导miR-127 调控非小细胞肺癌自噬的作用机制。方法　采用qRT-PCR 法检测正常肺上皮细胞BEAS-2B 与非小细胞肺癌细胞HCC827,A549 和H460 中METTL3 和miR-127 的表达水平;通过Linked Domics 数据库筛选出肺癌中与miR-127 共表达的基因,并分析METTL3 和miR-127 之间的相关性;选择H460 细胞传代培养至对数生长期后,将浓度接近的细胞随机分为三组,分别转染METTL3-siR,NC-siR 及Control,验证转染后H460 细胞中METTL3 和miR-127 表达;通过吖啶橙染色,Lyso-Tracker Red 染色观察METTL3 对细胞自噬的影响;利用Western blot 检测PTEN,AKT,mTOR,ULK1,Beclin-1等自噬相关蛋白的表达。结果　非小细胞肺癌细胞HCC827,A549,H460 中METTL3 相对表达分别为1.35±0.17,1.54±0.11 和1.78±0.21,明显高于正常肺上皮细胞BEAS-2B 中表达水平（0.91±0.11）,差异有统计学意义(F=34.037,P=0.002)。非小细胞肺癌细胞HCC827,A549,H460 中miR-127 相对表达分别为1.56±0.21,1.85±0.19 和2.11±0.25,较正常肺上皮细胞BEAS-2B 中表达（1.02±0.20）亦显著升高,差异有统计学意义（F=28.152,P=0.005）。肺癌中METTL3 与miR-127 共同表达呈正相关性（r=0.452,P ＜ 0.001）。METTL3-siR 组细胞中METTL3 表达水平（0.61±0.15）较Control 组（1.71±0.28） 和NC-siR 组（1.65±0.19） 显著降低, 差异有统计学意义（F=78.357,P ＜ 0.001）。METTL3-siR 组细胞中miR-127 表达水平（0.48±0.15）较Control 组（2.02±0.33）和NC-siR 组（1.97±0.25）亦显著下降,差异有统计学意义（F=105.216,P ＜ 0.001）;吖啶橙和Lyso-Tracker Red 染色分别观察到METTL3-siR 组细胞酸性自噬小泡增多,自噬溶酶体数量也明显增加。与Control 组和NC-siR 组相比,METTL3-siR 组细胞中PTEN,ULK1,Beclin1 蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义（F=62.420~175.615,均P<0.001）;p-AKT 和p-mTOR 表达水平显著下降,差异均有统计学意义（F=148.781,87.147,均P<0.001）。结论　METTL3 和miR-127 在非小细胞肺癌细胞系中均呈高表达,且它们之间呈正相关性,沉默METTL3 基因可以抑制miR-127 表达,促进非小细胞肺癌H460 细胞发生自噬,其调控机制可能与PTEN/AKT/mTOR 通路有关。