特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因siRNA表达载体构建及鉴定

目的:构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体及鉴定。方法:根据Genbank筛选甲状旁腺激素受体1基因3个阳性克隆及1个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至胰岛素-1细胞中,Westernblot观察甲状旁腺激素受体1基因表达,鉴定其转染效率。结果:菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确,并能成功转染到胰岛素-1细胞株中,Western blot筛选最佳抑制基因。结论:成功构建并筛选出特异性沉默大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体,为深入探讨大鼠甲状旁腺激素受体1基因的抗凋亡作用奠定了试验基础。     

DKK1真核表达质粒的构建及表达产物鉴定

目的构建人DKK1基因的真核表达质粒,表达、纯化、鉴定其表达产物。方法自宫颈癌组织提取癌细胞,抽提mRNA,RT-PCR获得人DKK1基因片断,构建重组质粒pCMV-HA2/DKK1,EcoRⅠ酶切、测序鉴定重组质粒;借助脂质体将载体瞬时转染入Free-Style293-F细胞(无血清培养)蛋白印迹法检测DKK1蛋白。结果 RT-PCR获得片断与预期结果相符,酶切鉴定、测序鉴定证实pCMV-HA2/DKK1重组质粒构建成功;DKK1蛋白分泌表达在Free-Style293-F细胞培养液中,WesternBlot鉴定表达产物为DKK1蛋白。结论成功构建了人DKK1的真核表达质粒,并对该基因的真核表达产物进行鉴定,为下一步的DKK1蛋白对肿瘤发生中的生物学活性研究奠定基础。     

致血流感染非O1群非O139群霍乱弧菌的鉴定及毒力基因检测

目的对襄阳市中心医院分离1株疑似霍乱弧菌进行鉴定及药物敏感性试验,并检测其主要毒力基因。方法利用MicroScan WalkAway 40鉴定仪进行生化鉴定及药物敏感性试验,玻片凝集法确定其血清型别,应用PCR及测序技术分析其16SrRNA基因;PCR检测其6个毒力基因。结果经鉴定,该株疑似霍乱菌株为非O1群非O139群霍乱弧菌,经16SrRNA分析与美国国家生物技术信息中心数据库中霍乱弧菌相似性达100%。药敏试验结果显示该菌对氨苄西林、氯霉素、甲氧苄啶-磺胺甲（口恶）唑、四环素均敏感,毒力基因检测rtxC和toxR阳性,tcpAET、ctxA、hlyA、tcpACL阴性。结论该株疑似霍乱弧菌为非O1群非O139群霍乱弧菌,其致病与rtxC、toxR毒力基因有关。     

一例类孟买血型的鉴定及基因分析

目的 鉴定一例类孟买血型并分析其分子生物学背景.方法 应用常规血型血清学方法鉴定其红细胞抗原及血清中的抗体,用吸收放散试验鉴定红细胞上弱表达的ABO抗原,应用凝集抑制试验鉴定唾液中的血型物质.应用分子生物学方法进行分析,对决定H抗原表达的FUT1基因和决定分泌液中H物质表达的FUT2基因进行扩增并测序.结果 该名患者血型为类盂买血型Ah-分泌型,其FUT1等位基因在880～882位缺失2个T,使得阅读框架发生移位;FUT2基因型为Se357 Se357.结论 类孟买血型罕见,本例类盂买型的FUT1基因编码区在880～882位置缺失2个T的移码突变,可以解释其H抗原缺失的原因,其FUT2基因型为正常野生型,与其分泌状态吻合.     

一例类孟买血型的鉴定及基因分析

目的 鉴定一例类孟买血型并分析其分子生物学背景.方法 应用常规血型血清学方法鉴定其红细胞抗原及血清中的抗体,用吸收放散试验鉴定红细胞上弱表达的ABO抗原,应用凝集抑制试验鉴定唾液中的血型物质.应用分子生物学方法进行分析,对决定H抗原表达的FUT1基因和决定分泌液中H物质表达的FUT2基因进行扩增并测序.结果 该名患者血型为类盂买血型Ah-分泌型,其FUT1等位基因在880～882位缺失2个T,使得阅读框架发生移位;FUT2基因型为Se357 Se357.结论 类孟买血型罕见,本例类盂买型的FUT1基因编码区在880～882位置缺失2个T的移码突变,可以解释其H抗原缺失的原因,其FUT2基因型为正常野生型,与其分泌状态吻合.     

一例类孟买血型的鉴定及基因分析

目的鉴定一例类孟买血型并分析其分子生物学背景。方法应用常规血型血清学方法鉴定其红细胞抗原及血清中的抗体,用吸收放散试验鉴定红细胞上弱表达的ABO抗原,应用凝集抑制试验鉴定唾液中的血型物质。应用分子生物学方法进行分析,对决定H抗原表达的FUT1基因和决定分泌液中H物质表达的FUT2基因进行扩增并测序。结果该名患者血型为类孟买血型A_h-分泌型,其FUT1等位基因在880～882位缺失2个T,使得阅读框架发生移位;FUT2基因型为Se~(357) Se~(357)。结论类孟买血型罕见,本例类孟买型的FUT1基因编码区在880～882位置缺失2个T的移码突变,可以解释其H抗原缺失的原因,其FUT2基因型为正常野生型,与其分泌状态吻合。     

抗人PCIA1单克隆抗体的制备及其生物特征的研究

目的:筛选制备抗人PCIA1的单克隆抗体,鉴定其生物学特征。方法:采用原核表达并纯化的PCIA1蛋白作为抗原,采用杂交瘤技术制备抗人PCIA1单克隆抗体的杂交瘤,用ELISA进行筛选和鉴定其亚类,并用细胞扒片免疫化学方法检测其反应性。结果:获得了32株分泌抗人PCIA1的McAb杂交瘤细胞,McAb-1A4的染色体呈双亲特点,该McAb与多种人肿瘤细胞株和正常肝细胞株有反应。结论:McAb-1A4可用于PCIA1的细胞内定位研究。     

罕见复合抗体抗-A_1Le~b的鉴定及其特征分析——附1例报告

目的探讨罕见复合抗体抗-A1Leb的鉴定方法并分析其特征。方法首先用试管法鉴定患者的ABO及Lewis血型,并做抗体筛选及鉴定;再将患者血清和多个随机献血者红细胞反应,初步判断抗体的特性;最后将患者血清与已知ABO亚型及Lewis血型的献血者红细胞反应,鉴定抗体的特异性。结果患者血型为A1,Le(a-b-);其血清与所有O型红细胞及Leb抗原阴性的红细胞均不反应,仅与Le(b+)的A1型红细胞反应,鉴定为抗-A1Leb。结论当遇到仅与部分A或B型红细胞反应而不与任何O型红细胞反应的不规则抗体时,应考虑该抗体可能是针对Lewis血型系统复合抗原的抗体。     

血清学和分子生物学鉴定罕见p血型

目的　鉴定 p血型。 方法　用 p表型细胞和抗 PP1 PK(-Tja)血清进行鉴定 ,并进行测序分析。结果和结论　先证者血型为 p ,血清中有罕见的抗 PP1 PK,家系调查提示其遗传方式为常染色体隐形遗传     

Ael_(02)B亚型1例

<正>1病例资料献血者,男,汉族,25岁,无特殊疾病。2008年10月来本站第1次无偿献血,其血型正反定型相符,鉴定为B型;2010年12月第2次无偿献血,其血型正反定型相符,鉴定为B型,2次采集血液均发往临床,未见退血记录。2011年10     

血清学与分子生物学技术鉴定产生抗-Dib抗体的Di(a+b-)血型1例

目的通过血清学实验和分子生物学技术鉴定出1例产生抗-Dib抗体的Di(a+b-)稀有血型。方法采用血清学方法对患者进行血型鉴定、直抗试验和不规则抗体筛查及鉴定试验,采用DNA测序方法鉴定患者的Diego血型基因。结果患者体内存在抗高频抗原抗体,分子水平确定其为Di(a+b-)稀有血型,因此其抗体为抗-Dib抗体。结论分子生物学鉴定血型基因有助于抗高频抗原抗体的鉴定。     

国内异常ABO血型的鉴定研究进展

及时准确的报告出ABO血型,是对临床挽救患者生命的安全保证。而在日常工作中常会遇到一些正反定型不相符的异常血型鉴定结果,现将其原因分析综述如下。1 ABO血型鉴定方法的优劣1.1玻片法在ABO血型鉴定错误率玻片法ABO血型鉴定是一项操作简单的测定方法,目前很多基层医院仍在使用。为减少错误,需制订简化、实用、规范化ABO血型鉴定程序。     

ITS基因测序分析对89株病原真菌鉴定的应用评价

摘要：目的：探讨内转录间隔区（ITS）基因扩增测序技术在病原真菌鉴定中应用价值。 方法：应用通用引物ITS1和ITS4对收集的89株真菌（包括酵母菌标准菌株6株,室间质评菌7株,临床分离的酵母样真菌42株和丝状真菌34株）进行PCR扩增和基因测序。测序成功的ITS序列在CBS数据库(http://www.cbs.knaw.nl/Collections)进行序列比对,结合Mycobank(http://cn.mycobank.org/)分类信息以获得其菌种鉴定信息。 结果：89株不同种类的真菌均成功扩增到ITS靶基因,经测序,89株真菌均获得扩增的全序列。序列比对结果显示,6株酵母菌标准株中,5株鉴定到种,1株鉴定到属;7株室间质评株中,1株酵母菌鉴定到种,6株丝状真菌中2株鉴定到种,1株鉴定到属,3株鉴定到复合群;42株临床分离的酵母样真菌中,39株鉴定到种,3株鉴定到属;34株临床分离的丝状真菌中,10株鉴定到种,18株鉴定到属,6株鉴定为复合群。 结论：通用引物ITS1和ITS4广谱性强。ITS基因序列扩增和测序分析可快速、有效鉴定临床疑难真菌,但仍存在数据分析过程烦琐和结果解释困难的问题。     

中国人组织因子途径抑制物-2基因的真核表达载体的构建

目的 构建组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）-pcDNA3．1的表达载体，为进一步研究其表达和蛋白功能奠定基础。方法 设计带有BamHⅠ和XhoⅠ的上、下游引物，从TFPI-2-pcDNA2．1克隆载体中扩增TFPI-2基因片段，PCR产物电泳、胶回收。将回收产物与BamHⅠ和XhoⅠ双酶切的pcDNA3．1表达载体连接，用酶切鉴定其长度和方向并正、反测序鉴定。结果 TFPL2成功插入pcDNA3．1表达载体，酶切鉴定其长度和方向均正确，测序结果也证实其正确的载人。结论 通过上述方法能成功构建TFPI-2-pcDNA3．1表达载体，为进-步研究其功能奠定基础。     

DNA微阵列芯片法与常规生化法在分枝杆菌菌种鉴定方面的比较

目的通过DNA微阵列芯片法进行分枝杆菌菌种鉴定与常规生化法进行比较,分析其特点,提高分枝杆菌菌种鉴定水平,更好的为临床服务。方法选择我院2010年1月至2013年3月从临床标本中分离培养后所得的结核分枝杆菌复合群12株（其中含1株牛型结核分枝杆菌）,非结核分枝杆菌3l株,分别用DNA微阵列芯片法和常规生化法进行鉴定。结果DNA微阵列芯片法进行分枝杆菌菌型鉴定与普通生化培养法鉴定结果符合率为100％,对常规生化法未定型的两株非结核分枝杆菌也分别定型为1株土分枝杆菌,1株耻垢分枝杆菌。结论DNA微阵列芯片法与常规生化法相比在分枝杆菌菌型鉴定中具有更快速、准确的特点,是分枝杆菌菌型鉴定的有利工具。     

rDNA-ITS序列分析对临床少见丝状真菌鉴定作用的评估

目的评价内转录间隔区（ITS）的多态性序列分析（rDNA-ITS序列分析）对临床少见丝状真菌的鉴定作用,以形态学鉴定方法加以补充验证。方法将3株待检真菌通过聚合酶链反应（PCR）扩增和基因测序方法分析rDNA-ITS序列,从GenBank获取相似序列,使用BLAST工具对rDNA-ITS序列进行对比分析,利用GenBank中的系统发育软件自动生成系统,构建系统发育树,根据系统发育树并结合对比指标确定距离与同源性均有较大鉴定意义的对比序列,并与真菌ITS1、ITS2、26S rDNA D1/D2片段的序列分析结果及形态学鉴定结果进行比较。结果 2株菌株能通过rDNA-ITS序列分析的方法鉴定到种,另1株由于相似序列较多,需要形态学方法加以配合鉴定。rDNA-ITS序列分析相对真菌ITS1、ITS2、26S rDNA D1/D2片段有更好的真菌鉴定作用。结论相对于传统形态学方法,利用rDNA-ITS序列分析鉴定丝状真菌不受检验人员经验水平影响,较为客观,同时由于其包含的信息量相对丰富,因此,较其他靶序列具有更好的真菌鉴定作用。但该方法也存在一定局限,因此,仍需结合形态学方法进行鉴定。     

应用CRISPR/Cas9基因编辑系统对HEK293细胞系TSC1基因稳定敲除效果的实验鉴定

目的　利用成簇规律间隔短回文重复序列/ 成簇规律间隔短回文重复序列相关蛋白（clustered regularly interspacedshort palindromic repeat/CRISPR-associated protein,CRISPR/Cas9）基因编辑系统在HEK293 细胞系中对TSC1 基因稳定敲除,并对其敲除效果进行鉴定。方法　根据TSC1 基因的序列设计sgRNA,将sgRNA 克隆到载体lentilCRISPRv2 上,将连接产物转化至Stbl3 感受态细胞,对菌液进行测序鉴定。将鉴定成功的lentiCRISPRV2-sgTSC1 质粒转染至HEK293细胞,加入嘌呤霉素进行筛选,挑选单细胞克隆进行PCR 鉴定,选取条带单一的细胞株用Western blot 鉴定TSC1 基因的表达。结果　成功构建lentiCRISPRV2-sgTSC1-1/2 重组质粒,并利用该质粒完成对TCS1 基因的定点切割,Westernblot 结果显示细胞中无TSC1 表达。结论　用CRISPR/Cas9 系统成功构建TSC1 基因敲除的稳定细胞株,为后续实验奠定了基础。     

综合鉴定培养基在肠杆菌科细菌鉴定中的应用

在肠杆菌科细菌鉴定中 ,克氏双糖管已沿用了多年 ,由于其生化反应项目较少 ,在细菌鉴定中只能起到粗筛作用 ,为了减少肠杆菌科细菌鉴定的环节 ,缩短患者候检时间 ,我科采用了综合鉴定培养基 (又称多糖管 ) ,通过临床标本分离到的 94 5株菌株生化反应观察 ,认为该培养基可同时观察葡萄糖、乳糖、甘露醇的产酸与产气、硫化氢、动力及尿素的分解 ,根据以上生化结果 ,结合血清学凝集试验 ,具有快速筛选肠道致病菌的优点 ,对非发酵菌结合氧化酶试验亦能初步作出鉴别 ,现将其配制及反应结果报告如下 :1　材料和方法1 .1　培养基　 1底层成分 :蛋白…     

医疗纠纷的鉴定与卫生行政部门的处理程序

1 医疗纠纷的鉴定 1.1 鉴定机构及其性质和任务在我国,医疗事故或医疗纠纷在某些情况下需要由法定人员组成的机构通过调查研究、讨论分析、判定性质,从而作出科学的、客观的结论,这一过程称为医疗事故技术鉴定.其组织机构称为医疗事故技术鉴定委员会.该鉴定委员会是根据国务院行政法规组织并经同级人民政府确认的医疗事故技术鉴定机构.目前,其鉴定结果是行政机构和司法部门处理医疗纠纷和医疗事故的依据.     

抗-Tj~a致ABO血型正反定型不一致1例

目的在日常血型鉴定工作中发现1例罕见的p表型标本,对该例标本进行正确的血型鉴定。方法采用ABO正反定型试验、直接抗球蛋白试验、抗体鉴定试验等血型血清学检测方法,分析血型正反定型不一致的原因。结果通过血型血清学分析发现,献血者血型为罕见的p表型,其血清中存在的抗-Tja(抗-PP1Pk)干扰了血型鉴定。结论对血型正反定型不一致的结果有必要进一步确认并加以解决。个体血型的正确鉴定对确保临床用血安全有着重要意义。