MicroRNA-9调控室管膜下区干细胞增殖在电针治疗局灶性脑缺血中的作用

目的探讨电针曲池、足三里穴是否是通过介导microRNA-9(mi R-9)调控缺血再灌注损伤大鼠室管膜下区神经干细胞增殖来发挥神经保护作用。方法 52只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(n=12)、模型组(n=12)、电针组(n=12)、电针+二甲基亚砜(DMSO)溶剂组(n=8)和电针+miR-9模拟物组(n=8)。制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)致局灶性脑缺血模型,电针+DMSO溶剂组和电针+miR-9模拟物组分别在造模前30 min侧脑室注射0.7%DMSO溶剂和mi R-9模拟物。术后第2天电针患侧曲池、足三里穴。造模后分别在第2天至第6天腹腔注射溴脱氧尿苷(BrdU);免疫荧光观察BrdU与巢蛋白(Nestin)共定位;RT-qPCR检测室管膜下区miR-9相对表达量。结果电针后7 d,电针组神经缺损功能评分明显低于模型组(t=9.600,P=0.006),脑梗死体积小于模型组(t=14.080,P=0.024)。电针组室管膜下区Nestin以及BrdU与Nestin共定位阳性细胞数量均增加,同时室管膜下区miR-9低表达(P0.05)。电针+miR-9模拟物组BrdU、Nestin阳性细胞数量以及BrdU与Nestin共定位的数量较电针+DMSO溶剂组减少。结论电针曲池、足三里穴可促进室管膜下区神经干细胞增殖,其作用可能通过下调miR-9表达。     

肝癌高表达转录本调控microRNA613促进肝癌细胞增殖的机制研究

目的:研究肝癌高表达转录本(highly up-regulated in liver cancer,HULC)调控微小RNA613(micro RNA613,mi R-613)促进肝癌细胞增殖的作用机制。方法 :1在Hep G2肝癌细胞株中,过量或抑制表达HULC,通过实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和荧光素酶报告基因系统检测mi R-613的表达量和活性,分析HULC与mi R-613之间的相互关系;2通过高通量表达芯片筛查mi R-613作用的靶基因,在Hep G2细胞株中应用化学合成的mi R-613模拟剂(mimic)和抑制剂(inhibitor),用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法分别检测靶基因和靶蛋白的表达情况;3HULC和mi R-613协同作用于肝癌细胞后,用流式细胞仪和软琼脂克隆形成试验观察肝癌细胞周期变化和克隆形成能力。结果:1在肝癌细胞中,HULC可调控mi R-613的表达,随着HULC表达量的增加,mi R-613表达和活性均降低;2Src基因是mi R-613作用的下游靶基因之一;3高表达HULC或抑制mi R-613表达可促进肝癌细胞周期改变和克隆形成。结论:肝癌细胞中HULC可调控mi R-613表达,通过Src基因相关的细胞信号转导途径,改变肝癌细胞的细胞周期等生物学特性。     

电针激活大脑中动脉闭塞大鼠miRNA调控NF-κB信号通路的机制研究

目的:探讨电针通过NF-κB信号通路治疗局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠所产生的抗炎作用的mi RNA调控机制。方法:将54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及电针组,以大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。利用Target Scan预测mi R-9a的靶基因,并用双荧光素酶报告载体验证。运用HE染色及TTC染色观察脑缺血后大鼠皮质炎症反应及梗死面积;应用蛋白免疫印迹法和实时PCR检测缺血侧皮质组织中NF-κB,TNF-α及mi R-9a的表达情况。结果:电针曲池、足三里穴可明显改善MCAO大鼠的神经功能缺损症状,降低脑梗死范围,炎症反应明显缓解。可以提高缺血侧皮质mi R-9a的表达(P0.05),降低炎症因子NF-κB,TNF-α的表达(P0.05)。结论:电针调控NF-κB信号通路,抑制炎症因子分泌,来实现对脑缺血的治疗作用的机制可能与促进mi R-9a的表达上调相关。     

miR-203调控NEDD9抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭及迁移作用机制研究

目的 :研究mi R-203抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞NEDD9蛋白的作用对细胞侵袭和迁移的影响。方法:mi R-203脂质体转染MDA-MB-231细胞,通过细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化;通过蛋白印迹检测mi R-203对NEDD9表达的调控作用,并用sensor reporter确定mi R-203的靶标位点;最后,通过细胞"拯救"实验研究相关蛋白表达量的变化,用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观察细胞片状伪足和黏着斑的改变,探究mi R-203对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力的调节机制。结果:细胞划痕实验和Transwell实验显示,mi R-203抑制了MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力;通过生物信息学网站预测mi R-203的靶基因是NEDD9;蛋白印迹和sensor reporter检测结果显示,mi R-203通过与NEDD9 3′-UTR结合,下调NEDD9;共转染si NEDD9和mi R-203的"拯救"实验后的细胞划痕实验、蛋白印迹和免疫荧光-激光共聚焦结果显示,mi R-203抑制NEDD9表达导致激活态Rac1-GTP减少,致使细胞运动状态改变,侵袭迁移能力减弱,而si NEDD9干涉作用能"拯救"mi R-203对MDA-MB-231细胞迁移能力的抑制。结论 :mi R-203通过降解NEDD9,下调激活的Rac1水平,导致乳腺癌细胞MDA-MB-231片状伪足和黏着斑的减少或消失,从而抑制细胞的侵袭及迁移。     

miR-29c通过Tiam1抑制人食管鳞状细胞癌侵袭和转移的研究

目的研究微小RNA(mi R)-29c通过靶向T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)基因对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞侵袭和迁移的影响。方法通过细胞划痕和transwell实验观察mi R-29c过表达的ESCC细胞侵袭迁移能力的变化;通过免疫印迹法和sensor reporter实验研究mi R-29c对Tiam1的调控作用和靶标位点;在细胞"拯救"实验中通过免疫印迹法检测相关蛋白表达量的变化以及用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观察细胞形态的改变,研究mi R-29c抑制ESCC细胞侵袭迁移的调节机制。结果细胞划痕实验和transwell实验显示mi R-29c能抑制ESCC细胞的侵袭迁移;通过生物信息学方法预测mi R-29c的靶基因是Tiam1;免疫印迹法和sensor reporter检测结果显示mi R-29c通过与Tiam1 3'-非翻译区(UTR)结合降解Tiam1;细胞功能"拯救"实验的细胞划痕、免疫印迹法和免疫荧光结果显示mi R-29c能抑制Tiam1的表达,导致激活态Rac1-三磷酸鸟苷(GTP)减少,致使细胞运动状态改变,迁移能力减弱;而人工合成的针对Tiam1的特异si RNA分子si Tiam1的干涉作用能"拯救"mi R-29C对ESCC细胞迁移能力的抑制。结论 mi R-29C通过降解Tiam1 m RNA,下调了Rac1的激活水平,导致细胞运动状态变化,从而抑制ESCC细胞的侵袭迁移。     

肾癌患者血清中miR-126的异常表达及其临床意义

目的:检测mi R-126在肾癌病人血清中的表达状况,同时研究mi R-126与肾癌患者临床病理特征之间的关联,为进一步的深入研究奠定基础。方法:收集35例新诊断肾癌患者术前血清样本,另外收集3 5例健康体检者血清样本作为对照,利用实时荧光定量P CR技术检测m i R-1 2 6在肾癌患者血清中的表达情况,利用SPSS19.0软件分析肾癌病人临床病理特征和mi R-126表达量两者之间的关系。结果:与对照组比较,肾癌组患者血清中mi R-126表达量明显低于健康体检组,差异具有统计学意义(P0.05),在35例肾癌血清样本中,出现31例mi R-126下调(88.57%),而4例则表现为上调(11.43%)。肾癌病人的性别、年龄、肾癌组织类型、肾肿瘤大小、TNM分期和肾癌患者血清中mi R-126表达量无相关性(P0.05)。结论:mi R-126在肾癌患者血清中低表达,提示其可能与肾癌的发生和发展相关。     

血小板miRNA的表达谱分析

目的:研究在体外常规储存1、3和5 d血小板微小RNA(mi RNA)的表达谱,探讨mi RNA在血小板储存期的变化。方法:留取来自无偿献血捐献者单采血小板20份,摇匀后等量混合,贮存于(22±2)℃恒温血小板振荡保存箱中。分别在d 1、3和5取样(分别命名为C_1、C_3和C_5),应用DNA纳米球(DNB)测序技术对血小板mi RNA组进行测序,采用每千百万碱基的转录本(TPM)算法标准化mi RNA的表达水平,组间mi RNA表达差异>2倍(P<0.001)认为表达差异具有统计学意义。采用实时荧光定量PCR方法验证mi RNA的表达。结果:通过DNB测序,分别获得C_1、C_3和C_5组688、730和679个表达的血小板mi RNA,聚类分析表明其表达谱发生明显变化。在C_1、C_3和C_5组中前20个高表达mi RNA的表达量约占各组mi RNA总表达量的4/5,各组前5位的mi RNA均为mi R-21-5p、mi R-26a-5p、mi R-199a-3p、mi R-126-3p和let-7f-5p。C_1、C_3和C_5组血小板高表达的55个mi RNA(>1000 TPM)组间表达模式高度相似,其差异无统计学意义(P>0.05)。通过对高表达mi RNA(>1000 TPM)在各组中的差异表达分析发现,与C_1组相比,C_3组共有6个mi RNA显著差异表达,其中表达上调的是mi R-146a-5p、mi R-379-5p和mi R-486-5p,表达下调的是mi R-652-3p、mi R-142-5p和mi R-7-5p;C_5组共有4个mi RNA显著差异表达,表达上调的是mi R-146a-5p和let-7b-5p,表达下调的是mi R-30d-5p和mi R-142-5p。对表达量为1-1000 TPM之间mi RNA差异表达分析发现,与C_1组相比,C_3组有133个显著差异表达的mi RNA,其中表达上调是99个,表达下调是34个;C_5组中有77个显著差异表达的mi RNA,其中表达上调是31个,表达下调是46个。检测的6个差异表达mi RNA的荧光定量PCR结果与测序结果基本一致。结论:通过对储存1、3和5 d血小板mi RNA组进行测序,发现随着血小板体外储存时间的延长,mi RNA表达谱发生明显改变。     

淫羊藿次苷Ⅱ通过miR-155/eNOS改善人阴茎海绵体血管内皮细胞功能的研究

目的探讨淫羊藿次苷Ⅱ(ICAⅡ)通过mi R-155/内皮型一氧化氮合酶(e NOS)通路改善糖尿病性人阴茎海绵体血管内皮细胞(HCECs)功能障碍的作用机制。方法经原代分离培养HCECs,随机分为三组:正常+BSA对照组(NC组),Age-BSA联合高糖糖尿病组(DM组),ICAⅡ治疗组(DM+ICAⅡ组,ICAⅡ0.1、1、10μmol/L)。Western blot检测e NOS、晚期糖基化终产物受体(RAGE)蛋白的表达;实时定量PCR检测e NOS及其潜在上游mi RNAs(mi R-155、mi R-543、mi R-31、mi R-429、mi R-200c、mi R-200b)的表达;DAF-FM DA荧光探针法和硝酸盐/亚硝酸盐还原法检测细胞一氧化氮含量;进一步mi R-155过表达慢病毒感染,观察ICAⅡ对HCECs中mi R-155、e NOS和一氧化氮表达的影响。结果 Age-BSA联合高糖刺激下,HCECs中e NOS和RAGE蛋白表达水平分别显著下调和上调;而不同浓度的ICAⅡ可逆转e NOS和RAGE蛋白的表达(P<0.05);且随着ICAⅡ浓度的提高其作用逐渐增强。当HCECs发生糖尿病性功能障碍时,可调控e NOS表达的潜在上游mi RNAs中mi R-155的表达变化最为明显(P<0.05)。且在ICAⅡ干预下,发现糖尿病性功能障碍HCECs中e NOS和一氧化氮的表达恢复上调与mi R-155表达受到抑制有关。进一步利用mi R-155过表达慢病毒感染HCECs后,发现mi R-155表达显著升高,而ICAⅡ可明显抑制其表达(P<0.05);相应地,HCECs过表达mi R-155后,观察到其下游e NOS及一氧化氮表达明显降低,而ICAⅡ干预可显著恢复其表达(P<0.05)。结论 mi R-155/e NOS通路可能在糖尿病性HCECs功能障碍的发生中发挥重要作用,而ICAⅡ可能通过调控mi R-155/e NOS信号通路而发挥改善糖尿病性内皮细胞功能的作用。     

丙戊茶碱对趾部切口痛大鼠脊髓ERK1/2磷酸化的影响

目的:研究丙戊茶碱对趾部切口痛模型大鼠脊髓细胞外信号调节激酶1/2 (extracellular signalregulated kinase 1/2, ERK1/2)磷酸化的影响,探讨丙戊茶碱缓解术后急性痛觉过敏的分子机制。方法:雄性SD大鼠100只,随机分为4组(n=25):空白对照组(C组);切口痛模型组(IP组);生理盐水组(NS组);丙戊茶碱组(PPF组)。IP组、NS组和PPF组均制备趾部切口痛(incisional pain, IP)模型。NS组和PPF组分别于术前30 min鞘内注射生理盐水(10μl)和丙戊茶碱(10μg/10μl)。各组分别在术前、术后2、4、8、24、72 h测定机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold, MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency, TWL)。各组于术前、术后2、4、24、72 h行为学测定后随机留取大鼠L4-6节段脊髓,应用蛋白印迹法检测磷酸化ERK1/2 (phospho-ERK1/2, p-ERK1/2)表达水平。各组于术后p-ERK1/2表达量最高时,取大鼠脊髓应用免疫荧光法检测丙戊茶碱对ERK1/2磷酸化的影响,同时检测p-ERK1/2与脊髓神经元、星型胶质细胞和小胶质细胞标记物的共表达情况。结果:各组术前MWT、TWL及p-ERK1/2表达量差异无统计学意义。与C组比较,IP组术后各时间点MWT和TWL均明显降低(P <0.001),p-ERK1/2表达量在术后2 h (P <0.01)、4 h (P <0.001)、24 h (P <0.005)增加,术后72 h (P <0.01)减少;与IP组比较,NS组术后各时间点MWT、TWL及p-ERK1/2表达量差异无统计学意义;与IP组比较,PPF组术后各时间点MWT和TWL升高(P <0.01),术后2、4、24 h的p-ERK1/2表达量减少(P <0.01),术后72 h表达量差异无统计学意义;与NS组比较,PPF组术后各时间点MWT和TWL均升高(P <0.001),术后2、4、24 h的p-ERK1/2表达量减少(P <0.01),术后72 h表达量差异无统计学意义。免疫荧光结果显示,术后4 h的IP组大鼠脊髓p-ERK1/2在背角浅层的神经元、星型胶质细胞和小胶质细胞内均有表达。结论:丙戊茶碱缓解趾部切口痛模型大鼠术后急性痛觉过敏的作用可能与抑制脊髓背角ERK1/2磷酸化有关。     

淫羊藿次苷Ⅱ对糖尿病环境下人阴茎海绵体血管内皮细胞中miR-181c及其靶基因KLF6、KLF9、KLF10和KLF15的表达影响研究

目的检测淫羊藿次苷Ⅱ(ICAⅡ)对糖尿病环境下人阴茎海绵体血管内皮细胞(HCECs)中mi R-181c及其靶基因KLF6、KLF9、KLF10和KLF15的表达影响。方法经分离鉴定的原代HCECs,随机分为三组:正常+BSA组(NC组)、AGE-BSA+高糖组(DM组),ICAⅡ治疗组(DM+ICAⅡ组)。蛋白印迹实验检测e NOS和RAGE蛋白水平;实时定量PCR检测mi R-181c在模型中的表达差异;生物学信息网站预测mi R-181c的靶基因;实时定量PCR检测对应靶基因在模型中的变化;蛋白印迹实验验证靶基因KLF6、KLF9及KLF6下游TXNIP蛋白表达水平差异。结果与NC组相比,蛋白印迹实验的DM组在AGE-BSA联合高糖刺激下,e NOS蛋白表达水平明显降低,而RAGE蛋白表达水平明显升高,表明成功构建用于模拟体内的糖尿病模型;而ICAⅡ干预后能够有效恢复e NOS和RAGE蛋白表达(P<0.05)。与NC组相比,实时定量PCR检测结果发现糖尿病环境下mi R-181c表达水平明显降低,而ICAⅡ治疗后可显著提高其表达水平(P<0.05);mi R-181c的靶基因KLF6和KLF9在DM组明显升高(P<0.05),而KLF10和KLF15的m RNA水平无显著差异(P>0.05);ICAⅡ干预后有效降低其KLF6和KLF9的m RNA表达水平(P<0.05)。蛋白印迹实验结果进一步验证了KLF6和KLF9的蛋白水平变化,与上述的KLF6和KLF9的m RNA表达变化结果一致。另外,KLF6作用的下游TXNIP蛋白水平变化在模型下呈现和其一样的变化趋势。结论 AGE-BSA联合高糖刺激下mi R-181c及其靶基因的显著表达差异揭示其参与内皮细胞损伤的发生发展,而ICAⅡ能够有效逆转上述变化,为进一步研究ICAⅡ与mi R-181c信号通路具体的作用机制提供前期依据。     

慢性肾脏病患者Fractalkine/CX3CR1与颈动脉内膜-中层厚度的相关性

目的探讨慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者血清Fractalkine(FKN)及其受体CX3CR1与颈动脉内膜-中层厚度的相关性。方法 CKD 3～5期患者97例(CKD组)与非CKD患者50例(对照组),检测2组血清FKN浓度、CD4+T细胞CX3CR1阳性表达率,对CKD患者FKN/CX3CR1与颈动脉内膜-中层厚度的相关性进行多元线性回归分析。结果 CKD组血清FKN浓度及CD4+T细胞CX3CR1阳性率均明显高于对照组(P<0.05);校正了传统心血管混杂因素及估算肾小球滤过率后,年龄(β=0.289,P<0.01)及CD4+T细胞CX3CR1阳性率(β=0.194,P<0.01)仍与颈动脉内膜-中层厚度密切相关。结论 FKN/CX3CR1与动脉粥样硬化密切相关,有可能作为心血管预后的一个有效指标。     

背根神经节NF-κB/p65激活介导的CX3CL1上调在大鼠膝关节骨性关节炎痛觉过敏中的作用

摘要 目的：研究背根神经节中核转录因子-kappa B/p65（nuclear factor-kappa B/p65, NF-κB/p65）激活促进趋化因子CX3CL1（fractalkine）上调在膝关节骨性关节炎（knee osteoarthritis, KOA）诱导的痛觉过敏中的作用。 方法：采用体重为（220—250）g的成年雄性SD大鼠,随机地分为生理盐水对照组、KOA模型组、鞘内注射CX3CL1中和性抗体的KOA模型组和鞘内注射NF-κB活化抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC）的KOA模型组（n=12/组）。于造模前1天和造模后7、14、21、28天,采用Von Fray Hair检测大鼠术侧后爪的机械撤足阈值,采用Western Blot的方法检测各组大鼠背根神经节内的CX3CL1和磷酸化NF-κB/p65（p-p65）的表达情况。 结果：KOA模型组大鼠背根神经节内CX3CL1和p-p65的表达量较对照组明显增加,且表达增加趋势与机械痛阈的变化趋势相一致;与KOA模型组相比,鞘内注射CX3CL1中和性抗体缓解KOA引起的机械痛敏;此外,与模型组相比,在大鼠鞘内注射PDTC能够阻断KOA诱导的背根神经节CX3CL1表达上调,并缓解KOA引起的机械痛敏。 结论：背根神经节NF-κB/p65激活介导CX3CL1表达增加参与了KOA诱导的痛觉过敏。抑制背根神经节内NF-κB/p65的激活阻断KOA引起的CX3CL1的上调,从而缓解OA大鼠的痛觉过敏。     

普罗布考和氟伐他汀对由Ox—LDL诱导的人单核细胞CX3CR1表达的影响

【目的】探讨氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）是否上调人单核细胞（THP-1）趋化因子Fractalkine受体CX3CR1的表达,及普罗布考、氟伐他汀干预对这种诱导表达的影响。【方法】用不同浓度的Ox-LDL刺激THP-1细胞及用不同浓度普罗布考、氟伐他汀和吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTc）预处理细胞后再用OxLDL刺激,分别用半定量RT～PCR方法检测CX3CR1以及NF-κBp65的rnRNA的表达,Western—blot测定CX3CR1、NF-KBp65的蛋白表达。【结果】①与对照组比较,Ox-LDL呈浓度依赖性诱导CX3CR1及NF-κBp65在mRNA水平及蛋白水平的表达。②普罗布考、氟伐他汀可以押制Ox-LDL诱导的上述袁达;联合用药组与单药组比较抑制Ox-LDL诱导的上述表达有显著性差异。③PDTC干预后,再用Ox-LDL刺激,与未用PDTC干预组（只用Ox-LDL刺激）比较,细胞核NF-κBp65蛋白水平明显下调（P〈0．01）,但CX3CR1mR—NA和蛋白及NF-κBp65mRNA的表达均无明显下调（P〉0．05）。【结论】Ox-LDL通过NF_KB以外信号途径上调人单核细胞THP-1表达CX3CR1;PDTC可以抑制NF—κB的活化,但是不能抑制Ox-LDL上调人单核细胞THP-1表达CX3CR1;普罗布考和氟伐他汀可以抑制NF-κB的活化,亦能抑制氧化低密度脂蛋白上调人单核细胞THP-1表达CX3CR1,这种抑制作用与普罗布考和氟伐他汀抑制NF-κB的活化无关。     

LINC00461靶向miR-519e-5p调控骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)LINC00461对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法:选取40例骨肉瘤患者的瘤组织及瘤旁组织,培养人成骨细胞hFOB 1.19,骨肉瘤细胞系Saos2、U2OS和HOS,用real-time RT-PCR检测LINC00461和微RNA-519e-5p(micro RNA-519e-5p,mi R-519e-5p)表达水平。将Saos2细胞分为NC组、si-LINC00461组、si-NC组、miR-519e-5p组(miR-519e-5p类似物)、miR-NC组、si-LINC00461+anti-miR-519e-5p组、si-LINC00461+anti-miR-NC组。蛋白质印迹法检测蛋白质表达;CCK-8检测细胞活性;克隆形成实验检测细胞克隆形成数;Transwell检测细胞迁移和侵袭数;双荧光素酶报告实验和RNA pull-down实验检测LINC00461和miR-519e-5p的靶向关系。结果:与瘤旁组织比较,骨肉瘤组织中LINC00461高表达,miR-519e-5p低表达(P<0.05)。与hFOB 1.19细胞比较,骨肉瘤细胞系Saos2、U2OS和HOS中LINC00461表达水平升高,miR-519e-5p表达水平降低(P<0.05)。低表达LI NC00461或过表达miR-519e-5p,Ki-67、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)2、MMP9蛋白表达水平,Saos2细胞活性,细胞克隆形成数及迁移侵袭数降低(P<0.05)。LINC00461靶向负调控mi R-519e-5p的表达。低表达miR-519e-5p可以逆转LINC00461低表达对Saos2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论:低表达LINC00461通过靶向上调miR-519e-5p抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。     

MiR-146b在白藜芦醇保护缺氧/复氧心肌细胞损伤中的作用及其机制

目的:探讨miR-146b在白藜芦醇保护缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)心肌细胞损伤中的作用及其机制。方法:将体外培养的心肌细胞分为正常组、H/R组、白藜芦醇组、白藜芦醇+antimiR-NC组和白藜芦醇+anti-miR-146b组。采用荧光定量PCR检测miR-146b的表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-1β,TNF-α和IL-6含量,MTT法检测细胞存活率,比色法检测LDH漏出率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测Bcl-2,caspase-3,NF-κB和TRAF6蛋白的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-146b和TRAF6的靶向关系。结果:与正常组相比,H/R组细胞中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著降低,而细胞上清液中IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率、细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与H/R组相比,白藜芦醇组中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著升高,而IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率、细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著降低(P<0.05);与白藜芦醇组相比,白藜芦醇+anti-miR-146b组中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著降低,而IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率,细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);而白藜芦醇+anti-miR-NC组与白藜芦醇组相比差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告基因和蛋白质印迹法证实TRAF6是miR-146b靶基因,且miR-146b可靶向调控其表达。结论:miR-146b抑制心肌细胞凋亡和炎症反应是白藜芦醇减轻H/R心肌细胞损伤的调控机制,其作用原理可能与靶向调控TRAF6有关。     

电针干预急性痛风性关节炎小鼠NLRP3表达及镇痛作用研究

目的：观察电针(electroacupuncture, EA)对急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis, AGA)模型小鼠机械痛超敏的干预作用，并研究电针对模型小鼠踝关节组织中炎性小体3 (NLRP3)通路的影响，探讨电针缓解AGA疼痛的相关机制。方法：将SPF级C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组(Control)、模型组(MSU)、模型+电针组(MSU+EA)、模型+电针+溶剂组(MSU+EA+Veh)、模型+电针+尼日利亚菌素组(MSU+EA+NG)，每组5只。MSU+EA+NG组于电针前半小时右踝关节局部注射尼日利亚菌素。采用游标卡尺测量小鼠患侧踝关节肿胀程度；von Frey法测定小鼠患侧足底50%机械刺激缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold, MWT);HE染色观察炎性细胞浸润；免疫印迹观察NLRP3信号通路(NLRP3、caspase-1、IL-1β)的蛋白表达。结果：与Control组相比，MSU组小鼠患侧踝关节明显肿胀，机械痛阈显著降低，NLRP3、caspase-1、IL-1β蛋白表达显著增高，HE...     

鞘内注射GDNF对神经病理性疼痛大鼠脊髓水平GAD65表达的影响

目的:研究神经病理性疼痛大鼠脊髓背角谷氨酸脱羧酶65(Glutamate decarboxylase65,GAD65)的表达变化及蛛网膜下腔注射胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对其表达的影响。方法:实验1:雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组)和坐骨神经结扎组(CCI组)。CCI组又分为术后1 d(D1)、3 d(D3)、7 d(D7)和14 d(D14)组。实验2:雄性SD大鼠随机分为:sham组、D14组、D14+GDNF组和D14+PBS组。两实验分别于实验前及CCI术后第1、3、7、14 d测定热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)及机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT),处死后取其L4~L5脊髓背角,采用Western blot方法测定GAD65蛋白表达情况。结果:与sham组相比,CCI组大鼠TWL及MWT均降低,GAD65表达水平于术后3 d开始降低,一直持续到术后14 d;与D14组和D14+PBS组相比,D14+GDNF组大鼠TWL及MWT均升高,GAD65表达水平升高。结论:神经病理性疼痛的发生机制可能和大鼠脊髓背角内GAD 65表达降低相关,而GDNF对其镇痛作用可能部分是通过增加脊髓GAD65的表达实现的。     

鞘内注射GDNF对神经病理性疼痛大鼠脊髓水平p-Shc表达的影响

目的:探讨神经病理性疼痛大鼠脊髓背角水平p-Shc的表达变化及鞘内注射胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对其表达的影响。方法:实验1:雄性SD大鼠随机分为假手术(sham)组和CCI组。CCI组又分为术后1 d组(D1组)、3 d组(D3组)、7 d组(D7组)和14 d组(D14组),分别于术后1、3、7、14 d测定热缩足潜伏期(thermal withdraw latency,TWL)和机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)后处死并取其脊髓背角,采用Western blot方法测定Shc/p-Shc蛋白表达情况。实验2:雄性SD大鼠分为sham组、D14组、D14+PBS组、D14+GDNF组。与实验1相同的时间点测定TWL和MWT,并于第14 d处死并取其L4~5脊髓背角,采用Western blot方法检测Shc/p-Shc的表达变化。结果:与sham组相比,CCI组大鼠TWL和MWT明显降低(P<0.01);与D14组和D14+PBS组相比,D14+GDNF组大鼠TWL和MWT明显升高(P<0.01)。CCI组脊髓背角内p-Shc表达水平于术后3 d开始升高(P<0.05),一直持续到术后14 d(P<0.01);D14+GDNF组p-Shc表达水平较D14组和D14+PBS组显著下降(P<0.05)。结论:大鼠脊髓背角内接头蛋白Shc可能参与了神经病理性疼痛的发生,鞘内注射GDNF减轻神经病理性疼痛可能与降低脊髓背角Shc的磷酸化水平有关。     

CX3CL1和CX3CR1与动脉粥样硬化性心脏病损伤机制的研究现状

趋化因子Fractalkine(CX3CL1)及其特异性受体CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)、CX3CL1-CX3CR1轴均参与了动脉粥样硬化的形成和发展,并改变了斑块成分和斑块的稳定性。CX3CR1 V249I和CX3CR1 T280M与冠状动脉损伤相关。在动脉粥样硬化斑块中,CX3CL1、CX3CR1通过血管平滑肌细胞(VSMC)和单核细胞/巨噬细胞进行表达,VSMC和单核细胞间相互作用需通过CX3CL1-CX3CR1轴,这种相互作用调节了单核细胞的生存及分化。抵抗素可能通过一系列涉及核因子-κB(NF-κB)、活化蛋白-1(AP-1)、信号转导和转录激活因子(STAT)1/STAT3的机制使CX3CL1和CX3CR1表达上调,进而产生平滑肌细胞的促炎性状态。在不稳定性冠心病及冠状动脉严重病变患者中,血清CX3CL1水平明显升高;血清CX3CR1在冠状动脉狭窄性疾病患者中明显升高,但与冠状动脉狭窄程度无相关性。通过CX3CL1/CX3CR1的相关研究,可揭示某些炎性介质在动脉粥样硬化性心脏病中的潜在机制和致病作用,从而为临床治疗策略及干预药物的研究提供依据及方向。     

miR-218靶向Bmi-1抑制急性早幼粒细胞白血病细胞增殖的研究

目的:研究miR-218通过靶向调控Bmi-1抑制急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞增殖的分子机制。方法:选取HL-60细胞株,分别转染miR-218及RNA阴性对照序列。实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-218的表达水平;MTT检测转染miR-218对HL-60细胞增殖能力的影响;流式细胞仪检测并评价转染miR-218对HL-60细胞凋亡的影响;Western blot检测miR-218对肿瘤细胞Bmi-1表达的调节; Spearman相关分析法分析mi R-218及Bmi-1表达的相关性;荧光素酶实验验证miR-218与Bmi-1的靶向关系。结果:MTT实验表明,高表达miR-218可明显抑制HL-60细胞的体外增殖能力;流式细胞术结果表明,转染mi R-218后G1和G2期细胞增加,S期细胞减少;Western blot结果显示,转染miR-218后HL-60细胞中Bmi-1蛋白水平显著降低(P0.05);Spearman相关分析显示,HL-60细胞miR-218 mRNA水平与Bmi-1蛋白含量呈负相关(r=-0.326,P0.01);荧光酶实验证实,miR-218可直接靶向Bmi-1。结论:miR-218可抑制APL细胞增殖、转移及侵袭,这可能与下调Bmi-1有关。