高血压与冠心病患者血浆中TFPI和D-D的变化及临床意义

目的探讨50例高血压与50例冠心病患者血浆组织因子途径抑制物（TFPI）、D-二聚体（D-D）的变化及临床意义。方法TFPI抗原（TFPI—Ag）采用双夹心ELISA抗原测定法，D-D用免疫比浊法检测。结果50例高血压组的TFPI抗原含量（13．56±4．31）ng／mL，50例冠心病组TFPI抗原含量（15．32±3．25）ng／mL，均比健康对照组（10．00±4．80）ng／mL高，两者比较差异均有统计学意义（P〈0．01，P〈0．01）。50例高血压组的D-D为（1．39±0．25）mg／L，50例冠心病组的D-D为（1．78±0．16）mg／L，均比健康对照组（0．25±0．13）mg／L高，两者比较差异均有统计学意义（P〈0．01，P〈0．01）。结论检测高血压和冠心病患者血浆TFPI、D-D含量，对早期诊断和防止血栓形成具有重要意义。     

丹参酮ⅡA对心肌细胞肥大及凋亡的影响

目的：在原代培养的新生大鼠心肌细胞上，观察丹参酮ⅡA对血管紧张紊Ⅱ诱导的心肌细胞肥大、凋亡的影响。 方法：实验于2005-06／2005-09在华中科技大学同济医学院急诊科实验室完成。实验选用Wistar乳鼠12只。胰酶消化，差数贴壁法体外分离培养大鼠心肌细胞。于心肌细胞培养的第4天，换无血清的DMEM培养基，再培养1d，随机分为4组加入不同的干预因素：对照组，血管紧张素Ⅱ（1&;#215;10^-4mol／L）＋丹参酮ⅡA（1&;#215;10^-5mol／L），丹参酮ⅡA（1&;#215;10^-5mol／L），血管紧张素Ⅱ（1&;#215;10^-6mol／L）。采用相差显微镜测量细胞大小，测定心肌细胞^3H-亮氨酸掺入作为心肌细胞肥大的指标；用流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率，用逆转录聚合酶链式反应检测心肌细胞凋亡基因FasmRNA的表达。 结果：①血管紧张素Ⅱ作用7d，血管紧张素Ⅱ组心肌细胞直径明显大于对照组[（29．2&;#177;3．1），（19．9&;#177;1．8）μm；t=4．244，P〈0．01]；丹参酮ⅡA抑制血管紧张紊Ⅱ介导的心肌细胞直径增大，与血管紧张素Ⅱ组相比差异有显著性[（21．3&;#177;2．7）μm，t=3．046，P〈0．05]。②血管紧张素Ⅱ作用24h后，血管紧张素Ⅱ组心肌细胞合成速率较对照组明显增加[（1951&;#177;141）。（1123&;#177;121）min；t=7．067，P〈0．01]；丹参酮ⅡA对心肌细胞蛋白质合成没有影响，但能抑制血管紧张素Ⅱ刺激的心肌蛋白质合成速率的增加[（1198&;#177;123），（1951&;#177;141）min^-1；t=6．378，〈0．01]。（3）血管紧张素Ⅱ作用48h后，心肌细胞凋亡率血管紧张素Ⅱ组较对照组明显增加[（35．4&;#177;2．6）％。（17．7&;#177;1．5）％；t=9．653，P〈0．01]；丹参酮ⅡA能抑制血管紧张紊Ⅱ刺激的心肌凋亡率的增加[（23．2&;#177;2．4）％，t=5，456，P〈0．01]。④在培养液中加入血管紧张素Ⅱ作用12h后，心肌细胞FasmRNA表达较对照组明显增加[（0．890&;#177;0．104），（0.291&;#177;0．043）；t=9，112，P〈0.01]，预先加入丹参酮ⅡA作用30min，可阻断血管紧张素Ⅱ的作用[（0．358&;#177;0．063），（0．890&;#177;0．104）；t=7．123，P〈0．01]。 结论：丹参酮ⅡA可以抑制由于血管紧张索Ⅱ诱导的心肌细胞直径、心肌蛋白质合成速率及凋亡率的增加。降低凋亡基因FasmRNA的表达。     

血浆TAT、PAI-1增高是高血压、糖尿病患者并发血管病变的危险因素

目的探讨凝血酶．抗凝血酶复合物（TAT），纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）在2型糖尿病（T2DM）并发微血管病变前后、高血压胆囊炎病变发生进展中的临床意义。方法用ELISA法检测了T2DM和T2DM微血管并发症各22例，胆囊炎和高血压合并胆囊炎各30例，健康对照30例的TAT、tPA、PAI-1。结果T2DM微血管并发症组TAT（285±130）ng／L，PAI-1（56、5±13）μg／L和高血压合并胆囊炎组TAT（298±45）ng／L，PAI-1（47.2±8.0）μg／L显著高于对照组TAT（201±85）ng／L，PAI-1（31.2±4．5）μg／L（P〈0．05，P〈0．01；P均〈0．05），T2DM组和T2DM微血管并发症组tPA均高于对照组（P〈0.05，P〈0．01）。结论PAI-1和TAT显著增高是T2DM、高血压患者发生心脑血管疾病潜在的危险因素，监测血浆PAI-1和TAT水平对判断二者是否存在血管内皮损伤，改善高凝状态，预防微血管及心脑血管并发症有重要意义。     

老年慢性心力衰竭患者基质金属蛋白酶-1和层粘连蛋白水平变化的临床意义

目的 心肌细胞外基质变化是引起慢性心力衰竭左室扩大及心脏重构的主要因素之一，基质重构引起心肌纤维化和进行性心室扩大，更加重心力衰竭。本文讨论基质金属蛋白酶-1（Martix metal oproteinases，mmP-1）和层粘连蛋白（LN）在慢性心衰中的临床意义。方法 共检测冠心病心衰17例，其他原因心衰18例，男性30例，女性5例，基质金属蛋白酶测定用ELISA法，试剂由美国Orionodiagostica公司提供。结果 心衰二组患者与对照组比较均有显著差异（P〈0．01），分别为（1．60±9．8）ng／ml，（182±11．6）ng/ml，VS（119．4±10．2）ng／ml；粘连接蛋白为（74．6±6．0）mg／L，（82．7±6．4）mg/L VS（49．5±10．3）mg/L。慢性心衰患者急性发作治疗前mmP-1为（174．6±4．6）ng／ml VS治疗后（165．1±3．2）ng／ml（P〈0．05）；LN治疗前（80．2±10．7）mg/L；治疗后（71．3±5．6）mg／L。结论测定基质金属蛋白酶（mmP-1）、LN水平可以了解心衰患者心脏重构的程度，同时对患者重构的情况和病情作客观评价，对患者治疗和评估预后有一定意义。     

肝细胞生长因子的血清浓度与胃癌进展的相关性

目的：检测胃癌患者血清中肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）水平，分析血清HGF水平与胃癌临床病理特征之间的关系，探讨胃癌患者血清中HGF表达的临床意义。方法：用酶联免疫吸附夹心法在术前检测80例胃癌患者血清HGF水平。结果：胃癌患者血清HGF水平（2．94±2．67ng·mL^-1）明显高于正常对照组（1．02±0．31ng·mL^-1）（P=0．002）；分层分析发现，随着疾病进展，血清HGF水平逐渐升高（Ⅰ期2．19±2．12ng·mL^-1，Ⅱ期2．53±2．38ng·mK^-1，Ⅲ期3．92±3．45ng·mL^-1，Ⅳ期4．13±3．71ng·mL^-1），Ⅲ期、Ⅳ期分别与Ⅰ期进行比较，均有显著差异（P〈0．05），有淋巴结及肝脏转移者的血清HGF水平升高更为明显，P值分别等于0．016和0．009。结论：胃癌患者血清HGF水平明显高于正常对照组，而且血清HGF的表达水平与胃癌进展呈正相关，血清HGF可以作为反映胃癌生物学行为和判断预后的有效指标。     

CD28/CTLA-4共刺激分子在再生障碍性贫血免疫发病机制中的作用

目的 研究CD28、CTLA-4在再生障碍性贫血（AA）免疫发病机制中的可能作用。方法 以流式细胞术分别分析23例发病期AA、10例恢复期AA患者和15名正常人骨髓细胞中CD3^＋CD4^＋T细胞上CD28、CTLA-4表达率，Th1、Th2细胞比例，评价CD28、CTLA4表达与Th1／Th2、中性粒细胞绝对值（ANC）之间的关系。结果 ①正常对照组CD3^＋CD4^＋T细胞上CD28、cTLA4表达率及CD28^＋／CTLA-4^＋比值分别为（31．40±10．83）％、（2．45±1．30）％、17．02±13．44，AA患者发病期分别为（39．84±10．89）％、（1．43±0．67）％、43．04±37．61，AA患者恢复期分别为（22．00±9．08）％、（3．46±2．26）％、10．49±7．80；与正常对照组比较，AA患者发病期CD28显著升高（P〈0．05），CTLA-4显著下降（P=〈0．01），CD28^＋／CTLA4^＋比值相应地亦显著升高（P〈0．05），而恢复期上述数值与正常对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。②正常对照组Th1、Th2细胞、Th1／Th2比值分别为（4．21±2．11）％、（1．99±1．27）％、2．46±1．28，AA发病期为（11．13±4．96）％、（2．46±1．65）％、5．20±1．98，恢复期分别为（5．39±4．29）％、（2．53±2．41）％、2．87±1．43；与正常对照组比较，AA发病期Th1增高，Th1、Th2平衡向Thl偏移（P值均〈0．01），恢复期与正常对照组比较，差异无统计学意义。③AA患者CD28^＋／cTLA4^＋比值与Thl／Th2比值呈正相关（P〈0．05），ANC与CD3^＋CD4^＋CD28^＋T细胞数呈负相关（P〈0．01），与CD3^＋CD4^＋CTLA-4^＋T细胞数呈正相关（P〈0．01）。结论 ①AA发病期患者骨髓CD4^＋T细胞表面共刺激分子表达异常，CD28升高，而CTLA-4下降，AA患者骨髓T细胞处于“预激活”状态；②CD28／CTLA-4比值与Th1／T12．比值呈正相关提示：CD28、CTLA-4表达失衡可引起Th细胞格局偏移，Th1型细胞增多。③ANC和CD28、CTLA-4间相关分析进一步说明CD28、CTLA-4与AA的发生、发展有关。     

哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子及其受体的表达

目的探讨胸腺活化调节趋化因子（TARC）及其受体CCR4在哮喘小鼠气道炎症中的作用。方法清洁级健康雄性Balb／c小鼠20只随机分成两组，分别为对照组、哮喘组。以卵清白蛋白（OVA）致敏和激发建立小鼠哮喘模型。末次激发24h后留取血液、支气管肺泡灌洗液（BALF）及肺组织。BALF行细胞计数及分类；应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定BALF和血清中TARC和白介素（IL）-4蛋白的浓度；光镜观察肺组织病理变化；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定肺组织中TARCmRNA、CCR4mRNA的表达；采用免疫组织化学法测定肺组织中TARC蛋白的表达。结果哮喘组BALF和血清中TARC的浓度[分别为（458．36±114．98）pg／ml、（145．56±28．38）pg／ml]均显著高于对照组[分别为（5．06±2．38）pg／ml、（73．79±29．27）pg／ml]（P〈0．01）；哮喘组BALF和血清中IL-4浓度[分别为（35．46±12．47）pg／ml、（3．82±1．12）pg／ml]均显著高于对照组[分别为（3．83±1．57）pg／ml、（0．88±0．33）pg／ml]（P〈0．01）；肺组织中TARCmRNA及其受体CCR4mRNA的表达，哮喘组[分别为（1．12±0．08）、（0．91±0．13）]显著高于对照组[分别为（0．53±0．12）、（0．62±0．10）]（P〈0．01）；免疫组化显示TARC蛋白主要表达于支气管上皮细胞，哮喘组表达量（0．103±0．015）显著高于对照组（0．045±0．007）（P〈0．01）。结论TARC及其受体CCR4在哮喘小鼠肺组织中表达增加，参与哮喘气道炎症的发病过程，气道上皮细胞是TARC重要的来源细胞。     

厄贝沙坦对大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2／Bax蛋白表达的影响

目的：观察自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)心肌细胞凋亡和Bax／Bcl-2蛋白的表达；同时观察血管紧张素Ⅱ-1型受体(angiotensinⅡ1type recptor，AT1R)拮抗剂一厄贝沙坦对SHR大鼠心肌细胞凋亡和BcL-2／Bax蛋白表达的影响。方法：24只16周龄SHR大鼠(上海市高血压研究所提供，医动字02-37-1号)分为SHR治疗组[沙坦30mg／(kg&;#183;d)，20周|和SHR对照组，另选16周龄Wistar大鼠12只作为正常对照组。分别采用SP免疫组化法和末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法方法检测心肌细胞凋亡指数和BcL-2／Bax蛋白水平的表达，放射免疫法检测血浆和组织血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)。结果：SHR治疗组与正常对照组比较：收缩压明显增高[(243&;#177;13)和(151&;#177;11)mmHg，1mmHg=0．133kPa]，左心室质量与体质量比(left ventricular mass／body mass，LVW／BW)明显增加[(4．05&;#177;0．33)和(2．90&;#177;0．23)g／kg]；血浆和心肌组织ArgⅡ增高[血浆：(31．8&;#177;5．4)和(22．2&;#177;18．5)ng；心肌：(13．2&;#177;2．1)％和(8．3&;#177;1．2)％]；心肌细胞凋亡指数明显增加[(4．75&;#177;0．70)％和(2．84&;#177;0．60)％]；心肌细胞Bax蛋白的表达明显增强[(5．02&;#177;0．34)％和(2．85&;#177;0．29)％]，Bcl-2／Bax比率明显降低(0．65&;#177;0．13和1.05&;#177;0．18)，差异有显著性意义(P&;lt;0．05～0．01)；而Bcl-2蛋白的表达[(3．29&;#177;0．24)％和(2．95&;#177;0．29)％]差异无显著性意义。SHR治疗组与SHR对照组比较：收缩压明显回落，LVWI明显下降，心肌细胞凋亡指数明显减少，心肌细胞Bax蛋白的表达减弱，Bcl-2／Bax比率、血浆和心肌组织AngⅡ则高于SHR对照组[SHR对照组上述指标分别为(179&;#177;11)mmHg，(3．22&;#177;0．38)g／kg，2．73&;#177;0．60)％，(3．17&;#177;0．27)％，0．65&;#177;0．13，(31．8&;#177;5．4)ng／k(13．2&;#177;2．1)ng／L]，差异均有显著性意义(P&;lt;0．05～0．01)。SHR治疗组与正常对照组比较：心肌细胞凋亡指数、Bax,Bcl-2蛋白表达均无明显差别，血浆、心肌组织AngⅡ则明显高于正常对照组，差异均有显著性意义(P&;lt;0．05～0．01)。结论：成年SHR大鼠的左室心肌细胞凋亡活跃与Bax蛋白表达增强，致Bcl-2／Bax比率减低有关。其次还提示较长时间给予AT1R厄贝沙坦能有效抑制Bax的过度表达，增加Bcl-2／Bax比率，从而让心肌细胞凋亡恢复正常。AT1R-厄贝沙坦使心肌细胞凋亡恢复正常的作用可能与心肌局部肾素血管紧张素系统有关。     

叶酸对2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：观察长期补充叶酸对2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响并分析其作用机制. 方法：实验于2004—05／10在泰山医学院机能实验室完成。选择SPF级5周龄雄性Wistar大鼠62只，51只大鼠采用膳食诱导加小剂量链脲佐菌素制备2型糖尿病大鼠模型，并设立普通饲料饲养的大鼠11只为正常对照组。将2型糖尿病模型造模成功的37只大鼠随机数字表法分为模型对照组（12只）、小剂量叶酸组（12只）和大剂量叶酸组（13只）。补充叶酸11周后，剪尾采血分别检测血清一氧化氮（硝酸还原酶法）、超氧化物歧化酶（黄嘌呤氧化酶法）及丙二醛（硫代巴比妥酸法）水平；取心肌标本，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的地高辛标记的duTP缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡，采用免疫组织化学链霉亲和素-生物素复合物法检测心肌组织Bcl-2，Bax和Fas蛋白表达。 结果：纳入动物62只，造模成功37只，48只进入结果分析。①补充叶酸11周后，小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠血清一氧化氮水平较模型对照组有明显增高[分别为（28．77土6．71），（29．62土6．55），（22．95土5．22）μnol／L，P均〈0．05]，血清超氧化物歧化酶水平亦较模型对照组有明显增高[分别为（6．15土0．64），（5．97土0．56），（5．27&;#177;0．94）nkat／L，P〈0．01，0．05]，而血清丙二醛水平较模型对照组明显降低[分别为（11．24&;#177;3．52），（10．97&;#177;4．59），（18．95&;#177;4．59）nmol／L，P均〈0．01]。（2）模型对照组、小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞凋亡率均较正常对照组明显增加[分别为（8．28&;#177;1．06）％。（4．25&;#177;0．63）％，（2．27&;#177;0．86）％，（0．72&;#177;0．37）％，P均〈0．01]，小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞凋亡率均较模型对照组明显降低（P均〈0．01），大剂量叶酸组大鼠心肌细胞凋亡率又较小剂量叶酸组进一步降低（P〈0．05）。（3）模型对照组、小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bcl-2蛋白阳性表达的平均吸光度值（A）均较正常对照组明显增加（分别为230．15&;#177;4．50，236．24&;#177;7．75，241．58&;#177;5．83，224．51&;#177;3．01，P〈0．05或P〈0．01），小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bcl-2蛋白阳性表达的平均吸光度值均较模型对照组明显增加（分别为P〈0．05和P〈0．01），大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bel-2蛋白阳性表达的平均吸光度值又较小剂量叶酸组进一步增加（P〈0．05）；模型对照组、小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bax，Fas蛋白阳性表达的平均吸光度值均较正常对照组明显增加（分别为234．76&;#177;5．66,226．73&;#177;7．24,220．16&;#177;5．44，214．38&;#177;5．23；247．25&;#177;6．29，239．09土6．10，233-43&;#177;7-41，226．29&;#177;4．70，P〈0．01或P〈0．05），但小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bax蛋白阳性表达的平均吸光度值均较模型对照组明显降低（P均〈0．01），大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bax蛋白阳性表达的平均吸光度值又较小剂量叶酸组进一步降低（P〈0．05）。 结论：长期补充叶酸对2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡具有明显预防作用，它可明显上调心肌细胞凋亡抑制基因Bcl-2的蛋白表达并下调凋亡刺激基因Bax和Fas的蛋白表达；叶酸可能通过增加机体一氧化氮合成从而提高血清一氧化氮活性和提高机体抗氧化能力来预防2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的发生。     

人工肝和肝移植术后的乙肝三系统定量观察

目的观察人工肝技术和肝移植手术对重症乙肝患者乙肝病毒标志物的影响。方法乙肝三系统定量采用时间分辨免疫荧光技术,乙肝病毒DNA定量采用实时荧光定量PCR法。结果28例实施人工肝技术的重型肝炎患者治疗前后的乙肝三系统定量和HBVDNA定量结果为：HBsAg171．19±32．10ng／mL,HBeAg0．03±0．029NCU／mL,抗-HBe3．97±4．61NCU／mL,抗-HBc5．98±3．31NCU／mL,HBVDNA（1．1×10^7）±（6．81×10^6）copy／mL和HBsAg168．14±39．40ng／mL,HBeAg0．02±0．023NCU／mL,抗-HBe3．95±4．34NCU／mL,抗-HBc6．41±3．13NCU／mL,HBVDNA（1．1×10^7）±（6．23×10^6）copy／mL。P值均大于0．05,差异无统计学意义。26例施行肝移植手术的患者治疗前后的乙肝三系统定量和HBVDNA定量结果分别为HBsAg144．65±77．00ng／mL,HBeAg0．02±0．028NCU／mL,抗-HBe4．32±6．43NCU／mL,抗-HBc6．04±4．88NCU／mL,HBV DNA（1．0×10^7）±（6．89×10^6）copy／mL和HBsAg6．54±3．32ng／mL,HBeAg0．02±0．016NCU／mL,抗-HBe4．79±6．44NCU／mL,抗-HBc5．97±4．64NCU／mL,HBV DNA（1．04×10^2）±（3．40×10^2）copy／mL。除抗-HBe和抗-HBc,P值大于0．05外,其他项目P值均小于0．05,差异有统计学意义。结论肝移植手术可有效清除乙肝患者体内的乙肝病毒,人工肝支持系统虽不能有效清除乙肝患者体内的乙肝病毒,但可改善重型肝炎患者体内严重紊乱的内环境,为肝移植手术创造合适的条件和机会,赢得宝贵时间。     

Factor Va - factor Xa interactions: molecular sites involved in enzyme:cofactor assembly

The generation of thrombin by the prothrombinase complex is a key event in coagulation. In this complex, the activated form of coagulation factor V (FVa) serves as an essential cofactor to factor Xa (FXa) in the activation of prothrombin to thrombin. The enzyme FXa is virtually ineffective in the absence of its cofactor. The assembly of FXa with its cofactor FVa on negatively charged phospholipid membranes enhances its catalytic efficiency by several orders of magnitude. The non-activated procofactor factor V (FV) circulates in plasma with a domain organization of A1-A2-B-A3-C1-C2 expressing little procoagulant activity. Upon activation through limited proteolysis by either thrombin or FXa, the B-domain dissociates from FVa. After activation, the procoagulant activity of FVa is greatly enhanced. This report provides insight into the interaction of FV and FXa and the molecular events important in enzyme:cofactor assembly of the FXa:FVa complex. Furthermore, light is shed on the molecular events associated with the activation process, i.e. the release of the B-domain and exposure of binding sites for FXa. The assembly of FVa and FXa was studied using a set of recombinant FV mutants. The interaction between FVa and FXa on phospholipid was investigated with a functional prothrombin activation assay as well as in a novel direct binding assay in the absence of prothrombin. We found that all three thrombin cleavages in FV contribute to increasing the FXa affinity and that the B-domain in intact FV has an inhibitory effect on the FV-FXa interaction, which is important in prohibiting premature coagulation.     

人血浆凝血因子V双抗体夹心ELISA测定

目的 建立一种新的双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA），以测定人血浆凝血因子V（FV）抗原含量。方法 采用兔抗人FV抗体为包被抗体，FV单抗为检测抗体，首次对中国正常人（n=26)和一个遗传性FV缺乏家系的有关成员血浆中的FV抗原进行了检测。结果 所建方法线性范围广、特异性强、灵敏度高、重复性好，与FV活性测定有很好的相关性；正常人血浆FV抗原呈偏态分布；FV缺乏家系纯合子血浆FV抗原量只有正常人的2％，证实该家系为I型遗传性FV缺乏症。结论 该法是一种较好的FV蛋白定量测定法，可以对FV缺乏症进行辅助诊断和分型。     

遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症家系的凝血因子Ⅺ基因突变分析

Trp501Cys),5种无义突变(Trp501Stop、Arg479Stop、Trp228Stop、Gln263Stop和Trp383Stop),1种碱基缺失突变(1325t缺失).其中的Trp228Stop突变存在于7个家系中,可能为中国汉族人群中遗传性FⅪ缺陷症的突变热点.结论 所发现的13种FⅪ基因突变可能是导致中国汉族人遗传性FⅪ缺陷的分子发病机制.     

Standardization of assays of factor VIII and factor IX

Summary The development of international standards over the last 15–20 years has led to improved interlaboratory agreement on assays of factor VIII and factor IX. In the most recent international collaborative study, the coefficient of variation for one-stage assays (26 laboratories) was 5.6%. However, in quality assurance surveys, carried out in the UK and USA, agreement between laboratories is much less good, with coefficients of variation ranging from 30% to over 50%. Improvements in agreement between clinical laboratories could be obtained by increasing the amount of testing on each sample, especially the number of dilutions, and reducing the number of reagent systems used. A large number of laboratories now use immunodepleted plasmas instead of congenitally deficient plasmas as substrates for one-stage assays. These plasmas may give satisfactory assays, but many of them have not been thoroughly evaluated in comparison with congenitally deficient plasma. In assessment of potency of very high purity (VHP) factor VIII concentrates, some immunodepleted plasmas were found to give lower potencies than hemophilic plasma. This is partly due to the fact that VHP concentrates contain little or no von Willebrand factor (vWF), and most immunodepleted plasmas are also deficient in vWF. In recent collaborative studies, assays of VHP factor VIII concentrate were much more variable, both within and between laboratories, than assays of intermediate purity concentrates. Standardization of these new products will require careful attention to methodological detail. Presented at the ‘2nd International Symposium on Standardization and Quality Control of Coagulation Tests: Implications for the Clinical Laboratory’, Rome, September 28–29, 1989.     

Cryoprecipitate and factor VIII commercial concentrates:In vitro characteristics andin vivo compartmental analysis

Summary In vitro andin vivo characteristics of cryoprecipitates and three commercial factor VIII concentrates (Kryobulin, Hemofil and Koate) were comparatively studied. Factor VIII:C/VIII:Ag ratio was very low in all commercial concentrates without differences among them. Conversely, the decrease of factor VIIIR:WFRCof was proportional to the degree of purity. Factor VIII:C/VIIIR:WFRCof ratio was shown to be a reliable index of factor VIII complex denaturation. Crossed electroimmunoassay showed a faster migration of factor VIIIR:Ag only in commercial concentrates. Using a two-compartmental open model that accounts for endogenous synthesis of factor VIII:C, single-dose kinetics of factor VIII:C were studied in 23 patients with classic hemophilia. Good agreement between measured and fitted values of factor VIII:C plasma concentration was observed. β half-life was shorter in high purity concentrates and longer in intermediate purity concentrates and cryoprecipitates.     

遗传性凝血因子X缺陷症三例及其分子发病机制研究

目的 对3个遗传性FX缺陷症家系进行临床表型和基因型研究,并探讨其分子发病机制.方法 对3例先证者进行止凝血筛查,检测APTT和PT;利用凝固法和ELISA检测FX∶C和FX∶Ag.采用交叉纠正试验排除血浆中FX抑制物的存在,采用凝血酶生成试验检测3例先证者及健康对照者血浆中凝血酶的生成.采用蛋白印迹半定量方法检测血浆中FX抗原浓度和相对分子质量大小.对FX基因采用直接测序进行基因诊断.构建突变型表达质粒,瞬时转染293T细胞,分别测定转染细胞裂解液及培养上清液中FX∶Ag,测定上清液中FX∶C,实验重复3次.结果 先证者1的APTT和PT均明显延长,分别为113.4 s和62.3 s,交叉纠正试验被纠正,血浆中几乎没有凝血酶的生成.先证者2的APTT和PT分别为56.5 s和28.7 s,交叉纠正试验也被纠正,血浆中凝血酶生成为1 101.5 nmol·min.先证者3的APTT和PT分别为117.3 s和44.3 s,交叉纠正试验被纠正,凝血酶生成为782.5 nmol·min.先证者1的FX∶C和FX∶Ag分别为1.4%和3.6%,基因诊断结果显示,FX基因存在纯合突变Ser425→Pro,该突变体外表达显示能够在细胞中正常合成,但分泌障碍;先证者2的FX∶C和FX∶Ag分别为2.2%和5.5%,FX基因存在双杂合突变Ala-29→Pro和Phe324→Leu,Ala-29→Pro突变导致FX表达量在细胞裂解液和培养上清液中均明显减少,分别为野生型质粒的(41.32±5.21)%和(6.30±1.84)%,而Phe324→Leu突变在细胞中几乎不影响FX的合成;先证者3的FX∶C和FX∶Ag分别为2.2%和35%,FX基因存在双杂合突变Ala235→Thr和Arg347→Cys,这2种突变使FX在细胞裂解液中与野生型蛋白表达量相似,而细胞上清液中较野生型蛋白明显减低,分别为野生型的(23.03±1.92)%和(42.51±2.07)%.结论 本研究发现了5种新的FX基因突变;其中Ser425Pro、Phe324Leu、Ala235 Thr和Arg347Cys突变不影响FX突变蛋白的合成,而Ala-29Pro突变则导致FX突变蛋白合成减少,伴分泌障碍.     

一种新的遗传性凝血因子ⅩⅢ缺乏症ⅩⅢA亚基mRNA大片段缺失的鉴定

目的 分析1个遗传性凝血因子ⅩⅢ缺乏症家系白细胞表达的凝血因子ⅩⅢA亚基mRNA.方法 采用RT-PCR、半定量RT-PCR、克隆和测序方法 分析遗传性凝血因子ⅩⅢ缺乏症家系先证者及其亲属外周血单个核细胞的凝血因子ⅩⅢA亚基mRNA;用SWISS-MODEL分析凝血因子ⅩⅢA亚基基因突变对蛋白质结构和功能的影响.结果 ①先证者凝血因子ⅩⅢA亚基mRNA存在第11到第279个密码子大片段缺失(DelCD11-279),该缺失为阅读框内缺失,编码1条464个氨基酸截短的凝血因子ⅩⅢA亚基;先证者的凝血因子ⅩⅢA亚基mRNA表达量明显减少;②三维结构分析显示DelCD11-279的凝血因子ⅩⅢA亚基mRNA所编码1条464个氨基酸截短的凝血因子ⅩⅢA亚基蛋白缺乏部分活性肽、β-夹层区和部分催化中心区,不能形成正常的催化中心,缺乏转谷氨酰胺酶活性.结论 凝血因子ⅩⅢA亚基mRNA DelCD11-279与遗传性凝血因子ⅩⅢ缺乏相关,该家系患者凝血因子ⅩⅢA亚基基因表达水平降低是导致凝血因子Ⅻ缺乏的原因之一.     

圆形电子线遮线器的制作及应用

使用高强度泡沫塑料，切割出遮线器的模型，然后使用低熔铅点灌出，并测出其总散射输出因子。举例如何应用。材料与方法：高强度泡沫塑料，低熔点铅合金。