蝮蛇毒中纤溶组分Ⅱ对血小板聚集的影响

目的：研究蝮蛇毒纤溶组分Ⅱ水争纤维蛋白质的作用方式以及对家兔血小板聚集的影响。方法：采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法检测纤溶组分Ⅱ水解纤维蛋白质的作用方式，用比浊法测定血小板聚集率。结果：纤溶组分Ⅱ能快速水解纤维蛋白原的Aα-链和Bβ-链，对γ-链无影响，50mg/LPRP、25dmg/LPRP和12.5mg/LPRP3个不同剂理的纤溶组分Ⅱ对家兔血小板聚集均有抑制作用。并存在一定的量效关系。结论：蝮蛇毒纤溶组分Ⅱ是一种α-纤维蛋白（原）酶，对ADP诱导的兔血小板聚集有抑制作用。     

熟蒜黄汁抗血小板聚集功能机制研究

本研究探讨熟蒜黄汁抗血小板聚集功能的机制。将熟蒜黄汁与正常人富血小板血浆（PRP）进行孵育,加入二磷酸腺苷（ADP）和胶原,观察熟蒜黄汁对人血小板聚集功能的影响。ADP和胶原激活血小板后用流式细胞仪分析熟蒜黄汁对活化血小板纤维蛋白原受体（Fib—R）和P-选择素（CD62P）表达水平及血小板纤维蛋白原结合量的影响。10只普通白兔随机分为2组,除正常饮食外,分别定量饲以生理盐水、熟蒜黄汁,观察饲养1、3、5以及8周后血小板聚集功能情况。结果表明,与对照组相比,熟蒜黄汁能显著抑制ADP和胶原诱导的人血小板聚集（P〈0．05）,它们的聚集抑制率分别为87．37％（ADP诱导下）和86．24％（胶原诱导下）;熟蒜黄汁不能抑制ADP和胶原诱导的活化血小板Fib—R和cD62P表达水平（P〉0．05）,但能够明显抑制血小板纤维蛋白原结合量（P〈0．05）。体内试验发现,熟蒜黄汁能够明显抑制ADP和胶原诱导下兔血小板聚集。结论：熟蒜黄汁能够在体内、外明显抑制血小板聚集,其机制主要是抑制了聚集通路的最后环节,即血小板与纤维蛋白原的结合,因此经常食用熟蒜黄汁能够有效预防心脑血管血栓性疾病的发生。     

西红柿汁体外抑制血小板聚集功能及其机制探讨

目的:观察西红柿汁在体外对血小板聚集、血小板活化标志物的表达及对血小板纤维蛋白原结合量的影响,初步探讨西红柿汁对血小板聚集功能的影响机制。方法:将不同浓度的西红柿汁与正常人富血小板血浆(PRP)孵育,加入5-腺苷二磷酸二钠盐(ADP)和胶原,观察西红柿汁对血小板聚集的影响。用ADP及胶原激活血小板,流式细胞仪(FCM)分析西红柿汁对活化血小板纤维蛋白原受体(Fib-R)和P-选择素(CD62P)的表达水平及血小板纤维蛋白原结合量的影响。结果:西红柿汁能够明显抑制由ADP、胶原诱导的血小板聚集,且随着西红柿汁浓度的增加,对血小板聚集的抑制率增高。西红柿汁不能抑制ADP、胶原诱导的血小板Fib-R、CD62P表达,但能显著抑制由ADP、胶原诱导的血小板与纤维蛋白原结合量。结论:西红柿汁在体外能够显著抑制血小板聚集,其抗血小板聚集的作用机制与阻碍纤维蛋白原与血小板Fib-R结合有关。西红柿汁具有潜在的抗血小板治疗前景。     

部分蔬菜抗血小板聚集功能及其作用机制的初步研究

目的对部分具有抗血小板聚集功能蔬菜的作用机制进行初步探讨。方法将不同种类的蔬菜汁（以西红柿汁作为阳性对照）分别与正常人富血小板血浆（PRP）孵育，加入血小板聚集诱导剂，观察各种蔬菜汁对血小板聚集的影响；用诱导剂激活血小板，流式细胞仪分析蔬菜汁对活化血小板纤维蛋白原受体（Fib-R）和P-选择素（CD62P）的表达水平及血小板纤维蛋白原结合量的影响；利用动物试验对血小板抑制作用进行体内验证，普通白兔随机分为5组，分别定量饲以生理盐水、熟西红柿汁、蒜黄汁、大白菜汁及菠菜汁，观察不同时间后血小板聚集情况。结果在花生四烯酸（AA）诱导下，未发现熟蔬菜汁有明显抑制体外人血小板聚集的作用，但在二磷酸腺苷（ADP）、胶原或肾上腺素诱导下，熟蒜黄汁、大白菜汁、菠菜汁能够明显抑制血小板聚集，并且随着蔬菜汁浓度的增加，对血小板聚集的抑制率增高。熟蒜黄汁、大白菜汁、菠菜汁不能抑制ADP、胶原或肾上腺素诱导的血小板Fib-R、CD62P表达，但能够显著抑制由ADP或胶原诱导的血小板与纤维蛋白原结合量。普通白兔在饲以熟大白菜汁、蒜黄汁、菠菜汁后，ADP诱导的兔血小板聚集率分别在第3、5、8周末时开始降低，熟大白菜汁喂养组血小板聚集的抑制率在第3、5、8周末分别为：45．7％、53．6％、48．5％，熟蒜黄汁喂养组分别为：10．7％、66．7％、46．3％，熟菠菜汁喂养组分别为：8．7％、21．0％、42．6％；饲以熟大白菜汁、蒜黄汁后，胶原诱导的兔血小板聚集率分别在第5、8周末时开始降低，熟大白菜汁喂养组血小板聚集的抑制率在第5、8周末分别为：54．9％、56．3％，熟蒜黄汁喂养组分别为：28．4％、86．7％。在8周内，熟西红柿汁对兔血小板未产生抗聚集作用。结论在ADP或胶原诱导下，熟蒜黄汁、大白菜汁及菠菜汁能明显抑制活化血小板与纤维蛋白原的结合，能够显著抑制血小板的聚集，具有潜在的预防或治疗血栓性疾病的前景。     

尖吻蝮蛇毒降压组分对血小板聚集及其胞浆游离钙浓度的影响

尖吻蝮蛇毒降压组分是从尖吻唤蛇毒中分离出来的具有扩张微小血管、降低血压作用的组分[1]。为了探讨其降压作用的机制，我们采用比浊法和Fura－2荧光测定法，探讨了其对人和兔血小板聚集及人血小板胞浆游离钙离子浓度的影响。材料和方法1材料降压组分（depressorcompoment，DPC）由本所提供；ADP、N，N一羟乙基哌嗪乙烷磺酸（HEPES）、刚跌美辛、前列腺素E；（PGE；）、Fura－2／AM、血小板活化因子（PAF）、钙离子载体人。ls，为Sigma公司产品；EG－TA为Fluka公司产品；TritonX－100为Room－Mass公司产品。2血小板聚集试验…     

血小板二磷酸腺苷受体研究的进展

血小板聚集在止血与血栓形成中具有关键的作用，多种物质都可以通过各自特异性受体引起血小板的活化与聚集。目前已发现了四十多种血小板受体，其中绝大多数的性质与结构都已阐明[1]。二磷酸腺着（ADP）是人们发现最早、也是体内最重要的诱导血小板聚集的物质。在体外实验中可观察到ADP诱导的两种血小板聚集类型。低剂量ADP引起较弱的、可逆性聚集，不伴有释放反应；高剂量ADP引起较强的、不可逆性聚集，同时有颗粒成分的释放。由于ADP易被磷酸酶破坏，目前还缺乏特异的ADP受体的配体及抗ADP受体单克隆抗体，血小板表面ADP受体数…     

木贼提取物对大鼠血小板聚集与血栓形成的影响

目的：研究木贼提取物对血小板聚集和血栓形成的影响．以期为脑卒中预防ntg药物干预提供实验基础。方法：实验于2004-06／07在锦州医学院药理学教研室完成。选用SD大鼠30只，以二磷酸腺苷(ADP)、胶原和凝血酶作诱导剂诱导血小板聚集，按比浊法用TYXN-96系列多功能智能血液凝集仪测定大鼠血小板聚集率；用血栓法测定大鼠血栓重量。结果：按1．0g／kg，3．0g／kg，10．0g／kg的木贼提取物给大鼠灌胃，均能抑制ADP、胶原和凝血酶诱导的大鼠血小板聚集，并能减轻血栓的重量。以上两种作用均呈现明显的剂量依赖性。结论：木贼提取物具有明显的抗血小板聚集及抗血栓形成的作用。     

木贼提取物对大鼠血小板聚集与血栓形成的影响

目的:研究木贼提取物对血小板聚集和血栓形成的影响,以期为脑卒中预防ntg药物干预提供实验基础。方法:实验于2004-06/07在锦州医学院药理学教研室完成。选用SD大鼠30只,以二磷酸腺苷(ADP)、胶原和凝血酶作诱导剂诱导血小板聚集,按比浊法用TYXN-96系列多功能智能血液凝集仪测定大鼠血小板聚集率;用血栓法测定大鼠血栓重量。结果:按1.0g/kg,3.0g/kg,10.0g/kg的木贼提取物给大鼠灌胃,均能抑制ADP、胶原和凝血酶诱导的大鼠血小板聚集,并能减轻血栓的重量。以上两种作用均呈现明显的剂量依赖性。结论:木贼提取物具有明显的抗血小板聚集及抗血栓形成的作用。     

湖北宜昌地区正常人血小板聚集功能的检测结果

为了解正常人血小板对诱导聚集剂的反应，本文对47例宜昌地区健康献血员血小板对二磷酸腺着（ADP）、胶原和血小板活化因子（PAF）三种诱聚剂进行了检测。材料和方法一、主要试剂血小板诱聚剂ADP、胶原、PAF由同济医科大学血液病研究所提供（NO．960404）。H、主要仪器XN-DZ型多功能凝血检测仪。三、测定参效率1分钟聚集率（M）和4分钟聚集率（M‘）即加入试剂后1m…或4mh血小板栗隼百分丰。最大用隼初时．优到身上聚集主（＊。）的时间。最大聚集率（Ma）：最大聚集百分丰。l波聚集速度血小板开始聚集后lmin内所上升的高度。四、…     

比浊法血小板聚集试验的影响因素研究

目的 在不同的实验条件下,观察影响比浊法血小板聚集试验的因素.方法 选择30例健康对照组和204例病例组,观察不同的血小板计数及诱导剂浓度对糖尿病患者餐前与餐后、采血后的检测时间、诱导剂的种类互补等不同试验条件下的血小板聚集率.结果 随着血小板计数的减少或增加,血小板聚集率相应的减少或增加;二磷酸腺苷(ADP)、胶原(COL)、花生四烯酸(AA)浓度增加,血小板最大聚集率增大,相应的阿司匹林抵抗(AR)或氯吡格雷抵抗(CR)的检出率增高;服用不同的抗血小板药物,糖尿病患者对以ADP、COL、AA为诱导剂测定的血小板聚集率,其影响不同;未空腹及检测时间超过3 h重复性较差;服药2周后,COL、AA诱导的血小板聚集率下降不明的患者,随着时间的延长,6个月后易重新出现CR.结论 血小板计数、诱导剂浓度、糖尿病疾病、空腹状态、检测时间与比浊法检测血小板聚集率相关,以ADP、COL、AA作诱导剂检测血小板聚集率较单一的ADP更全面、准确.     

The highly specific platelet glycoprotein (GP) VI agonist trowaglerix impaired collagen-induced platelet aggregation ex vivo through matrix metalloproteinase-dependent GPVI shedding

Summary.  Background:  C-type lectin proteins (CLPs) have diverse targets including platelet GPIb, GPVI and integrin α₂β₁, and affect platelet function in a various way. In this study, we characterized a huge, heterodimeric venom protein, trowaglerix, which belongs to the CLP family. Methods:  We purified a potent platelet-aggregation inducer, trowaglerix, from the crude venom of Tropidolaemus wagleri . Biotinylated trowaglerix was used for binding assays, and immunoblotting was used to investigate the signal transduction involved. Results:  Two distinct subunits of trowaglerix with similar masses of around 16 kDa were eluted by high-performance liquid chromatography after reduction and alkylation. Trowaglerix induced platelet aggregation of washed human platelets and platelet-rich plasma (PRP) in a concentration-dependent manner. Biotinylated trowaglerix specifically bound to platelet membrane GPVI, but not to GPIb or α₂ integrin. Treatment with trowaglerix induced GPVI loss in human platelets in vitro and impaired the platelet aggregation of mouse PRP ex vivo in response to collagen but not in response to adenosine diphosphate (ADP). However, GM6001, a matrix metalloproteinase (MMP) inhibitor, inhibited trowaglerix-induced GPVI cleavage and restored the platelet responsiveness of PRP to collagen. Conclusions:  Trowaglerix activates platelets through specific binding to GPVI, leading to kinases-dependent exposure of functional α_IIbβ₃ and platelet aggregation, and also induces MMP-dependent GPVI shedding from platelets.     

腺苷对血小板体外激活的抑制作用

本研究的目的主要是研究腺苷对血小板的体外激活抑制作用,为血小板冻干前处理过程筛选血小板功能保护剂提供依据.采用流式细胞术（FCM）测定血小板膜表面CD62P和PAC-1的表达,应用APACT-2聚集仪测定瑞斯托菌素（restocetin）、凝血酶（thrombin）、二磷酸腺苷（ADP）和没食子酸（propyl gallate）诱导的血小板聚集率.研究结果表明,冻干预处理后血小板膜表面CD62P表达显著增加,腺苷浓度为0.75 mmoL/L时可抑制CD62P表达,且呈剂量效应;腺苷可抑制没食子酸诱导的血小板聚集反应,但对瑞斯托霉素诱导的血小板聚集无抑制作用,腺苷浓度≥1.0 mmol/L对凝血酶诱导的聚集有显著抑制作用.因此,腺苷可抑制体外处理导致的血小板激活,对瑞斯托霉素和凝血酶诱导血小板聚集反应无明显抑制.结论：腺苷可作为血小板体外激活抑制剂及冻干前处理的功能保护剂.     

蝮蛇毒蛋白C激活物的纯化与活性分析

目的探索从国产蝮蛇毒中分离纯化人血浆蛋白C激活物(PCA)的方法及其用于蛋白C的鉴定。方法以国产蝮蛇毒为原料,通过溶解、离心、透析,利用Q Sepharose Fast Flow离子交换层析和Superdex G75凝胶过滤法分离纯化PCA组份。通过SDS-PAGE观察PCA组份的分子量,用发色底物法和凝固法分别测定活化PC(APC)的酰胺酶活性和抗凝活性。结果经两步层析,从蝮蛇粗蛇毒中纯化出PCA组份,SDS-PAGE图谱显示在分子量51 kD左右呈现1条蛋白带;经生物学活性鉴定:该组份在体外能迅速将PC激活为APC,APC的酰胺酶活性(A405)最高约为Protac(唯一商品化的PC激活剂产品)作用的2.8倍,抗凝活性(秒值)最高约为Protac作用的1.4倍,比活性2.20 IU/mg;不同浓度组份激活PC的酰胺酶活性和抗凝活性均随组份浓度的增大而升高,有明显的量效关系。结论采用离子交换层析和凝胶过滤法,可以从国产蝮蛇粗蛇毒中分离纯化出PCA组份,该组份具有较强的激活PC的能力,其生物活性与浓度呈正相关。     

Synthetic selective inhibitors of coagulation factor Xa strongly inhibit thrombin generation without affecting initial thrombin forming time necessary for platelet activation in hemostasis.

DX-9065a and JTV-803, synthetic selective inhibitors of activated factor X (FXa), have recently been demonstrated as strongly effective antithrombotic agents in animal thrombosis models, yet with a low risk of bleeding. The aim of the present study was to elucidate these characteristics. Using a chromogenic assay with purified coagulation factors, 73.9% of thrombin generation was suppressed by the addition of DX-9065a (0.20 microm) and 75.7% by JTV-803 (0.18 microm). Inhibition by argatroban (0.19 microm) was less (36.0%) and initial thrombin forming time (T50), the time required to generate 50% thrombin activity in vitro, which is considered important for platelet aggregation in hemostasis, was significantly prolonged by argatroban. In contrast, DX-9065a and JTV-803 had no apparent influence on T50, suggesting that initial thrombin was formed immediately, as in the control. We also investigated platelet aggregation in defibrinated plasma induced by tissue factor, to clarify whether initial thrombin contributes to hemostasis. Aggregation was not affected by the addition of either FXa inhibitor, whereas it was significantly reduced by argatroban. Our results suggest that initial thrombin, which is formed despite the presence of a FXa inhibitor, can activate platelets. We concluded that DX-9065a and JTV-803 are able to inhibit thrombin generation significantly without affecting the formation of initial thrombin for platelet activation, which may contribute to hemostasis through the preservation of normal bleeding time.     

Inhibition of the activation of Hageman factor (factor XII) and of platelet aggregation by extracts of Brugia malayi microfilariae

In human filariasis, large numbers of blood-borne microfilariae circulate unimpeded through the blood stream. How intravascular filarial parasites avoid precipitating thrombosis has not been studied in detail. We hypothesized that extracts of Brugia malayi microfilariae would contain factors that inhibit activation of hemostatic mechanisms. Initial studies demonstrated an inhibitor specific for the intrinsic coagulation cascade. The addition of microfilarial extracts to human plasma prolonged the activated partial thromboplastin time in a dose-dependent fashion but did not prolong the prothrombin, thrombin, or Russell's viper venom times. Microfilarial extracts (0.1 mg/ml) completely inhibited activation of Hageman factor (factor XII, at 0.05 U/ml) as measured in an amidolytic assay. Hageman factor previously activated by ellagic acid (factor XIIa) retained full enzymatic activity in the presence of microfilarial extract (0.1 mg/ml). The presence of inhibitory activity in the culture medium of live parasites raises the possibility that microfilariae secrete an inhibitory protein into their local environment. Microfilarial extracts at a final concentration of 0.1 mg/ml also inhibited collagen- and adenosine diphosphate-induced platelet aggregation. Arachidonic acid-induced platelet aggregation was inhibited by microfilarial extracts at a final concentration of 0.6 mg/ml. These results suggest that microfilariae of Brugia malayi, a human filarial parasite, may avoid initiating thrombosis through inhibition of the intrinsic coagulation pathway and platelet aggregation.     

不同亚型穿心莲内酯抗血小板聚集作用的初步研究

目的研究穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯、新穿心莲内酯三种不同亚型的穿心莲提取物对二磷酸腺苷（ADP）诱导的血小板聚集的拮抗作用。方法采用醇提取法从穿心莲中提取不同类型的内酯,将其分别加入富含血小板的血浆中,然后用多功能血小板聚集仪测定ADP雳导的血小板聚集作用。结果三种内酯成分均具有抗ADP诱导的血小板凝集作用,以穿心莲内酯为最强,且具有剂量依赖性。结论穿心莲内酯具有较好的抗ADP诱导的血小板聚集作用,具有较好的临床应用前景。     

江浙蝮蛇毒纤溶酶的生化和药理性质特征

背景:蝰亚科、蝮亚科和眼镜蛇科等蛇毒中存在着一类能直接溶解纤维蛋白(原)的酶,称为纤维蛋白(原)溶酶(纤溶酶),可做为溶解在心肌梗死、中风等期间形成的血栓的抗栓药物。目的:分离纯化江浙蝮蛇毒纤溶酶,并分析其部分生物化学和药理性质。设计:对照观察实验。单位:广西医科大学蛇毒研究所。材料:实验于2003-07/2005-06在广西医科大学蛇毒研究所完成。昆明种小鼠,体质量18～25g,平均(20±2)g,鼠龄三四个月,由广西医科大学实验动物中心提供。蛇毒冻干粉由广西医科大学蛇毒研究所提供。方法:应用DEAESepharoseCL-6B阴离子交换柱和HiPrepSephacrylS100柱分离纯化纤溶酶,以高效液相色谱仪和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯度、相对分子质量,应用等电聚焦电泳测定等电点,然后测定氨基酸组分及部分药理性质。主要观察指标:纤溶酶相对分子质量、等电点和氨基酸组成,抑制剂对纤溶酶的作用,出血活性实验,纤溶酶对家兔体内抗凝活性的作用。结果:纳入30只鼠和12只兔全部进入结果分析。分离得到相对分子质量为59100,等电点为4.98,SDS-PAGE为一条带,高效液相色谱分析为单一峰的纤溶酶。该组分属于金属蛋白酶类。氨基酸组成分析表明它含较多的酸性氨基酸。有微弱的出血毒性。具有较强且持久的溶栓效果。结论:分离纯化得到了一种有微弱出血毒,具有较强抗凝活性的单一组分的酸性金属蛋白酶。     

丹七胶囊对血小板聚集功能影响的临床研究

目的通过研究丹七胶囊对血小板聚集功能的影响,探讨丹七胶囊影响血小板聚集功能的生理机制。方法32名健康志愿者随机均分为空白对照组和低剂量、高剂量和超高剂量组,3个剂量组连续口服丹七胶囊(空白对照组服用安慰剂)1周,每日3次,于服药1周后采集空腹静脉血,检测血常规、凝血常规、生化常规和血小板最大聚集率(MA),诱导剂分别为二磷酸腺苷(ADP)、肾上腺素(EPI)、花生四烯酸(AA)、瑞斯托霉素(RIS)。结果服药1周后,3个剂量组的血常规、凝血常规、生化常规指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。高剂量组和超高剂量组中ADP和EPI诱导的MA较空白对照组下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论丹七胶囊可降低ADP和EPI诱导的血小板聚集功能,其可能通过抑制血小板腺苷酸环化酶活性发挥其抗血小板作用。     

川芎嗪对血小板聚集三条激活途径的抑制及解聚作用的探讨

本文研究不同剂量川芎嗪对人血小板聚集ＡＤＰ、ＡＡ、ＦＡＦ三条激活途径的抑制作用及对已经聚集血小板的不同程度解聚作用；以期进一步探讨川芎嗪抗血小板作用及活血化瘀机理．结果表明，川芎嗪能显著地抑制三条激活途径，且随浓度的增加，其抑制作用呈现量效关系；同时观察到川芎嗪对由三种诱聚剂诱聚后的血小板具有不同程度程度的解聚作用，其中对ＡＤＰ诱聚途径尤为显著。提示川穹嗪抗血小板作用除了对ＴＸＡ２抑制机理外，可能还存在其它方面（钙离子拮抗作用等）的抑制因素．