基于TLR4-NF-κB信号通路的槐果碱改善人支气管上皮细胞炎症和黏液高分泌的机制

目的 基于TLR4-NF-κB信号通路探讨槐果碱（SC）体外抗炎作用及其抗哮喘的潜在效应机制。方法 采用脂多糖（LPS）刺激人支气管上皮细胞NCI-H292诱导体外炎症模型，给予不同浓度SC进行治疗。采用MTT法筛选LPS和SC对NCI-H292细胞的安全浓度；设Control组、LPS组（10μg/mL LPS）、SC组（10μg/mL LPS+不同浓度SC）,ELISA法检测细胞中黏蛋白5AC(MUC5AC)的表达和上清液中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的分泌情况；RT-PCR法检测细胞中MUC5AC、IL-6、IL-8、髓样分化因子（MyD88）和核因子-κB(NF-κB p65)mRNA的表达；Western blot方法检测细胞中Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TRAF6)、磷酸化p38(p-p38)和磷酸化p65(p-p65)以及细胞核内NF-κB p65的蛋白表达。结果 MTT结果显示，LPS和SC分别在0～10μg/mL、0～40μg/mL浓度范围内对细胞活力无影响；ELISA结果表明，与Control组相比，LPS组细...     

COX2抑制剂对大鼠肺泡巨噬细胞生长及炎症反应的影响及机制研究

目的探讨环氧合酶2(COX2)抑制剂塞来昔布对肺泡巨噬细胞凋亡、炎症反应及吞噬能力的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测0. 1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L塞来昔布对大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383的细胞毒性,选择合适的塞来昔布浓度。将NR8383细胞随机分为3组,即对照组、LPS组和LPS+塞来昔布组。对照组:细胞培养板加等体积磷酸盐缓冲液(PBS); LPS处理组:细胞用终浓度为1μg/ml的脂多糖(LPS)处理; LPS+塞来昔布组:10μmol/L的塞来昔布处理细胞1 h后,加1μg/ml的LPS处理细胞24 h。流式细胞术检测细胞凋亡率; Western blotting检测NF-κBp65、IκBα、Bax和Bcl-2蛋白表达; qRT-PCR检测炎症因子TNF-αmRNA表达;激光共聚焦技术检测巨噬细胞的吞噬能力。结果 0. 1～10μmol/L塞来昔布处理对NR8383细胞无细胞毒性,20μmol/L塞来昔布处理可抑制NR8383细胞活力。LPS组与对照组比较,细胞凋亡率升高,NF-κBp65和Bax蛋白表达升高,IκBα和Bcl-2蛋白表达降低,TNF-αmRNA表达升高,细胞吞噬能力降低(P 0. 05),LPS+塞来昔布组与LPS组比较,细胞凋亡率降低,NF-κBp65和Bax蛋白表达降低,IκBα和Bcl-2蛋白表达升高,TNF-αmRNA表达降低,细胞吞噬能力升高(P 0. 05)。结论塞来昔布可通过下调NF-κB信号抑制LPS诱导的NR8383细胞凋亡及炎症反应,并维持吞噬功能,从而对肺损伤起保护作用。     

阿奇霉素对香烟烟雾凝集物刺激的巨噬细胞炎症调控的机制研究

目的探讨阿奇霉素对香烟烟雾凝集物(CSC)刺激的巨噬细胞炎症调控的机制。方法体外培养人单核细胞系THP-1细胞,以PMA诱导分化为巨噬细胞。正常对照组不予特殊干预,实验组予以CSC刺激,以及加用不同浓度的阿奇霉素(0. 05μmol/L、0. 5μmol/L、5μmol/L)作用于巨噬细胞。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液白介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度。各组细胞提取核蛋白,比色法检测各组细胞组蛋白去乙酰化酶(HDAC)的活性,Western blotting法检测各组细胞HDAC2、核因子κB(NF-κB) p65的表达。结果 CSC组与对照组比较,IL-8、TNF-α释放明显增加,HDAC活性和HDAC2的表达明显降低,NF-κB p65表达明显升高。与CSC组比较,阿奇霉素0. 5μmol/L、5μmol/L组IL-8、TNF-α浓度下降,HDAC活性和HDAC2表达升高,NF-κB p65表达降低。结论阿奇霉素可以抑制香烟烟雾刺激引起的巨噬细胞炎症因子释放,其中机制可能为上调HDAC2水平、抑制NF-κB通路,从而发挥抗炎作用。     

短链脂肪酸通过抑制白细胞介素17A和NF-κB信号通路减轻γδT细胞介导的炎症反应

目的 探究短链脂肪酸减轻γδT细胞介导炎症反应的作用机制。方法 使用一定浓度的短链脂肪酸干预大鼠肠道来源的γδT细胞,CCK-8检测短链脂肪酸对γδT活性的影响,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测白细胞介素17A(IL-17A)因子含量,实时荧光定量（RT-q PCR）检测IL-17A因子的表达水平,流式细胞仪分析IL-17+γδT细胞的比例,Western blot研究γδT细胞IL-17A和核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响。结果 CCK-8结果提示乙酸钠的浓度≤0.5 mmol/L,丙酸钠、丁酸钠和混合短链脂肪酸的浓度≤0.25 mmol/L对γδT细胞的增殖无抑制作用（P> 0.05）;ELISA和RT-q PCR结果显示,丙酸钠、丁酸钠及混合短链脂肪酸处理的γδT细胞IL-17A的含量较Control组均显著降低。流式细胞检测结果示IL-17+γδT细胞的比例在丙酸钠、丁酸钠、混合短链脂肪酸及TSA干预下均明显下降（P <0.001）;Western blot检测发现丙酸钠、丁酸钠和混合短链脂肪酸可抑制IL-17A、IKK的表达及NF-κB磷酸化水平（P ...     

调控A20对NF-κB表达及Jurkat细胞的影响

目的:探讨在急性T淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药Jurkat细胞株中,调控A20对NF-κB表达以及Jurkat细胞生物学特性的影响。方法:CCRF CEM和Jurkat细胞中分别加入100、10、1、0.1、0.01和0.001μmol/L地塞米松(DEX),培养24、48和72 h,应用CCK-8检测细胞增殖抑制的变化。构建A20质粒,设计并合成A20-siRNA,分别通过脂质体转染Jurkat细胞,CCK-8检测不同浓度DEX处理组、不同浓度DEX联合A20质粒和A20-siRNA处理组的Jurkat细胞增殖率。应用RT-qPCR检测NF-κB的m RNA表达水平,Western bolt检测蛋白表达水平,采用流式细胞术检测Jurkat细胞凋亡。结果:不同浓度地塞米松(DEX)对CCRF CEM细胞生长的抑制作用呈显著的时间依赖性(r=0.984,P0.05)和浓度依赖性(r=0.966,P0.05);CCRF CEM细胞在24 h时,IC50接近1μmol/L,Jurkat细胞在1μmol/L和10μmol/L开始出现较大差异。由于1μmol/L DEX处理的Jurkat细胞增殖率无明显变化,故选取1μmol/L DEX处理的Jurkat细胞为对照组。检测显示A20质粒转染联合不同浓度DEX处理组细胞增殖率较DEX组及A20-siRNA联合DEX组低(P0.05)。A20质粒转染Jurkat细胞后,NF-κB的mRNA及蛋白表达明显低于对照组(P0.05),细胞凋亡率较对照组明显增高(P0.05);A20-siRNA转染Jurkat细胞后,NF-κB的mRNA及蛋白表达水平明显高于对照组(P0.05),A20-siRNA组细胞的凋亡率与对照组无明显改变(P0.05)。结论:Jurkat细胞对DEX耐药,A20过表达联合DEX可增加对DEX耐药细胞的敏感性,降低Jurkat细胞增殖率;下调Jurkat细胞中NF-κB的表达水平,促进Jurkat细胞的凋亡。     

顺铂抑制IL-8诱导人卵巢癌SKOV-3细胞的迁移作用及相关机制的研究

目的 观察外源性人白细胞介素-8 （IL-8）对人卵巢癌SKOV-3细胞迁移的影响,及顺铂对它的干预作用,初步探讨顺铂抑制细胞迁移的机制.方法 顺铂处理SKOV-3细胞,MTT法确定顺铂使用的最佳作用浓度;Transwell法观察顺铂对IL-8诱导SKOV-3细胞迁移的干预作用;ELISA法检测顺铂分泌IL-8情况;Western blot法检测NF-κB蛋白表达水平.结果 MTT结果显示：与对照组相比,顺铂浓度为100μg/ml对细胞增殖有显著抑制作用（P＜0.05）.浓度区间在200～400μg/ml的顺铂对细胞的增殖也有抑制作用,该范围内对细胞的生长抑制率无统计学差异（P＞0.05）.浓度为100μg/ml的顺铂,分别作用于SKOV-3细胞24 h、48 h、72 h,各时间组比较无统计学差异（P＞0.05）.IL-8（100 ng/L）处理细胞后,SKOV-3细胞的迁移能力增强,顺铂（100 μg/ml）具有抑制IL-8诱导的SKOV-3细胞迁移的作用,随着浓度的增高,迁移的细胞数由241.67减少到155.99,差异有统计学意义（P＜0.05）.顺铂刺激细胞后,与空白对照组相比,NF-κB蛋白表达水平降低（64.04±4.6）.结论 IL-8具有促进人卵巢癌SKOV-3细胞迁移的作用,顺铂可能是通过NF-κB细胞信号通路对卵巢癌细胞的迁移起抑制作用.     

地塞米松对人外周血单核细胞核因子-κB活化和肿瘤坏死因子-α释放的影响

目的探讨地塞米松(dexamethasone,DXM)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人外周血单核细胞核因子(nuclear factor kappaB,NF-κB)活化和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)产生的影响。方法收集人外周血单核细胞接种于培养板后,分生理盐水对照组、LPS组、LPS DXM1μmol/L组、LPS DXM10μmol/L组。LPS诱导0、0.5、2、6、12、16h后留取细胞及细胞培养上清。采用免疫细胞化学染色法检测细胞NF-κBp65阳性表达率,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中TNF-α的含量。结果LPS诱导0.5h后NF-κB表达开始增加,2h达高峰。2h时TNF-α合成开始增加,6h达高峰。在2、6、12h时,LPS DXM1μmol/L组和10μmol/L组TNF-α含量均比LPS组各相应时间点低(P<0.05或0.01)。在0.5、2、6h时LPS DXM1μmol/L组NF-κB阳性表达率和在2、6h时LPS DXM10μmol/L组NF-κB阳性表达率均比LPS组低(P<0.05或0.01)。LPS DXM1μmol/L和10μmol/L组NF-κB阳性表达率和TNF-α含量在各时间点差异均无统计学意义。结论LPS在体外诱导人外周血单核细胞NF-κB的活化和TNF-α的产生;DXM通过抑制NF-κB的活化和TNF-α的释放而发挥抗炎作用,并且这种抑制效应可能不随剂量的增加而增强。     

全氟化碳通过下调TLR4/NF-κB信号通路抑制脂多糖刺激A549细胞分泌TNF-α的研究

目的探讨全氟化碳对内毒素诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549细胞)炎症因子TNF-α表达的影响及机制。方法人肺泡Ⅱ型上皮细胞,传代培养后,均分为3组:空白对照组(C组)、脂多糖(LPS)组、全氟化碳+LPS(P+LPS组),P+LPS组在给予LPS同时加入全氟化碳,LPS的终浓度为10μg/ml,全氟化碳的终浓度为12.5%,各组分别孵育30 min、2 h、4 h、12 h、24 h,结束后用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清中TNF-α的水平。结果 (1)Western blot结果显示,C组人肺泡Ⅱ型上皮细胞上有TLR4蛋白的表达,但表达量较低;LPS组人肺泡Ⅱ型上皮细胞在30 min、2 h、4 h、12 h、24 h点TLR4及NF-κB蛋白的表达量明显高于C组(P<0.05);与LPS组比较,P+LPS组人肺泡Ⅱ型上皮细胞30 min、2 h、4 h、12 h、24 h点TLR4及NF-κB蛋白表达明显下降(P<0.05),C组人肺泡Ⅱ型上皮细胞的TLR4及NF-κB蛋白表达量与P+LPS组相比,无明显差异(P>0.05)。(2)ELISA结果显示,与C组比较,LPS组人肺泡Ⅱ型上皮细胞30 min、2 h、4 h、12 h、24 h点TNF-α均明显升高(P<0.05)。P+LPS组人肺泡Ⅱ型上皮细胞30 min、2 h、4 h、12 h、24 h点TNF-α较LPS组均明显降低(P<0.05)。结论 (1)TLR4可能介导了LPS诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞的炎症反应。(2)全氟化碳减轻LPS诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞的炎症反应,可能与抑制细胞表面TLR4的信号活化,进一步抑制下游NF-κB的转导路径,从而降低TNF-α的产生有关。     

异泽兰黄素对肝癌细胞SK-HEP-1增殖、凋亡以及作用机制的影响

目的研究异泽兰黄素对肝癌细胞SK-HEP-1增殖、凋亡以及具体作用机制的影响。方法 CCK8法检测0、2. 5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmo/L、40μmol/L的异泽兰黄素对肝癌细胞SK-HEP-1增殖的影响。选择适宜浓度的异泽兰黄素与SK-HEP-1共同培养,Western blot检测Ki67的蛋白表达水平,RT-q PCR检测碱性磷酸酶(ALP)的mRNA表达水平,细胞流式术检测细胞凋亡情况。使用20μmo/L异泽兰黄素处理SK-HEP-1细胞0、24h、48 h、72 h后,Western blot检测不同情况下Casepase-3凋亡蛋白、Bcl-2抗凋亡蛋白以及细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白的表达水平,以此来探究异泽兰黄素对肝癌细胞的作用机制。结果通过CCK8和Western blot实验发现异泽兰黄素对肝癌细胞SK-HEP-1具有一定的损伤作用,且具有时间和浓度依赖性,说明异泽兰黄素能够抑制肝癌细胞的增殖; RT-q PCR结果显示,ALP的表达水平同异泽兰黄素处理时间呈正相关关系; Western blot检测结果表明异泽兰黄素能够抑制磷酸化ERK蛋白表达量。结论异泽兰黄素可通过抑制ERK通路抑制肝癌细胞SK-HEP-1增殖以及促进其凋亡。     

BRMS1通过下调NF-κB核转位抑制成纤维样滑膜细胞分泌IL-1β

目的探讨乳腺癌转移抑制蛋白1（BRMS1）对人类风湿性关节炎（RA）的成纤维样滑膜细胞（FLS）分泌IL-1β的影响和机制。方法分别取4例RA患者膝关节滑膜组织及1例正常人（normal）膝关节滑膜组织,采用组织贴壁法分离FLS。用慢病毒法过表达BRMS1蛋白。Western blot检测BRMS1蛋白及核蛋白NF-κB水平,Elisa法检测细胞培养基中IL-1β水平,免疫荧光检测NF-κB核转位。结果RA组FLS的BRMS1蛋白表达较N组明显下调,但NF-κB核转位明显增加、IL-1β分泌明显增加。RA组FLS过表达BRMS1后,FLS核蛋白中NF-κB表达明显减少、IL-1β分泌下降。LPS诱导的NF-κB核转位和IL-1β表达增加被过表达BRMS1明显抑制。结论BRMS1可以抑制NF-κB核转位,从而减少成纤维样滑膜细胞分泌IL-1β。      

苦参碱对人子宫内膜癌细胞增殖抑制的作用机制探究

目的探讨苦参碱对人子宫内膜癌细胞增殖的抑制作用及其机制。方法实验对象为人子宫内膜癌细胞株Ishikawa(常规培养),采用MTT法检测不同浓度苦参碱(0、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml、320μg/ml)作用24 h、48 h后对Ishikawa细胞增殖抑制率,采用流式细胞技术检测苦参碱对Ishikawa细胞周期的影响,采用Western Blot技术检测苦参碱对Ishikawa细胞血管内皮生长因子(VEGF)、核因子κB(NF-κB)p65蛋白表达的影响。结果随着苦参碱药物浓度的增加,对Ishikawa细胞增殖抑制率明显升高,呈一定的剂量依赖性;苦参碱作用24 h IC50为44.655μg/ml,苦参碱作用48h IC50为20.664μg/ml。Ishikawa细胞接受不同浓度苦参碱处理48 h后,G1期细胞百分比的增高情况明显,G2期以及S期细胞百分比降低(P0.05),且随着苦参碱药物浓度的增加,变化越显著(P0.05)。不同浓度苦参碱可有效抑制Ishikawa细胞VEGF、NF-κB p65蛋白表达(P0.05),且随着浓度的增高,Ishikawa细胞VEGF、NF-κB p65蛋白表达越低(P0.05)。结论苦参碱能够对人子宫内膜癌细胞产生明显的抑制,而且具有一定程度上的剂量依赖性,其可能具有将肿瘤细胞阻滞于G1期的作用机制,抑制VEGF、NF-κB p65蛋白表达。     

C反应蛋白激活单核细胞核因子-κB 及辛伐他汀干预

目的观察C反应蛋白(CRP)刺激人外周血单核细胞核因子-κB(NF-κB)活化及白细胞介素-6(IL-6)表达,予辛伐他汀干预,探讨CRP/NF-κB在动脉粥样硬化(AS)致病机制中的作用和辛伐他汀的抗AS效应.方法密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,免疫细胞化学观察CRP致单核细胞NF-κB p65活化的时间效应,ELISA法观察IL-6产生的时间-浓度效应,其峰值分别与辛伐他汀抑制剂组比较.结果CRP刺激单核细胞NF-κB活化呈时间依赖性,高峰在2 h,单核细胞表达IL-6呈时间与浓度依赖性,在24 h达高峰.辛伐他汀(1×10-8mol/L～1×10-6mol/L)呈剂量依赖性抑制NF-κB活化与IL-6表达.结论CRP激活正常人单核细胞NF-B信号途径,并诱导单核细胞产生IL-6,辛伐他汀抑制单核细胞NF-κB活性与IL-6表达,提示CRP/NF-κB信号途径在促进AS发病机制中起重要作用,辛伐他汀抑制NF-κB有可能减轻或抑制AS进展.     

C反应蛋白激活单核细胞核因子-кB及辛伐他汀干预

目的:观察C反应蛋白(CRP)刺激人外周血单核细胞核因子-κB(NF-κB)活化及白细胞介素-6(IL-6)表达,予辛伐他汀干预,探讨CRP/NF-κB在动脉粥样硬化(AS)致病机制中的作用和辛伐他汀的抗AS效应。方法:密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,免疫细胞化学观察CRP致单核细胞NF-κBp65活化的时间效应,ELISA法观察IL-6产生的时间-浓度效应,其峰值分别与辛伐他汀抑制剂组比较。结果:CRP刺激单核细胞NF-κB活化呈时间依赖性,高峰在2h,单核细胞表达IL-6呈时间与浓度依赖性,在24h达高峰。辛伐他汀(1×10-8mol/L～1×10-6mol/L)呈剂量依赖性抑制NF-κB活化与IL-6表达。结论:CRP激活正常人单核细胞NF-B信号途径,并诱导单核细胞产生IL-6,辛伐他汀抑制单核细胞NF-κB活性与IL-6表达,提示CRP/NF-κB信号途径在促进AS发病机制中起重要作用,辛伐他汀抑制NF-κB有可能减轻或抑制AS进展。     

姜黄素对脂多糖诱导人支气管上皮细胞 丝裂素活化蛋白激酶信号通路的影响

目的 探讨姜黄素对脂多糖(LPS)诱导人支气管上皮细胞三磷酸肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B (Akt)、外调节蛋白激酶(ERK)、核转录因子-κB(NF-κB)、不规则趋化因子(CX3CL1)表达的影响.方法 体外培养人支气管上皮细胞24 h后,用计算机生成的随机分配法表分为空白组(CK)、LPS(10 mg/L)组、PD组 (LPS+ ERK抑制剂PD98059,25μmol/L)、LY组(LPS+ PI3K/Akt抑制剂LY294002,20μmol/L)、PDTC组 (LPS+ NF-κB抑制剂PDTC,100μmol/L)、cur组(LPS+姜黄素,10μmol/L)6组.各组阻断剂预处理30 min后给予LPS刺激,加药后作用4 h,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测各组PI3K、Akt、ERK、NF-κB、CX3CL1表达,测定各条带吸光度(A)值.结果 与CK组比较,LPS组PI3K、Akt、ERK、NF-κB、CX3CL1表达均显著升高〔PI3K(A值):0.68±0.05比0.49±0.09,Akt(A值):0.54±0.03比0.30±0.06,ERK(A值):1.09±0.09比0.74±0.05、NF-κB(A值):1.87±0.15比0.57±0.30,CX3CL1(A值):0.62±0.12比0.34±0.00,均P<0.05〕.与LPS组比较,PD组、PDTC组PI3K、Akt、ERK、NF-κB、CX3CL1表达均明显下降〔PI3K(A值):0.37±0.06、0.38±0.16比0.68±0.05,Akt(A值):0.33±0.07、0.33±0.12比0.54±0.03,ERK(A值):0.67±0.05、0.82±0.26比1.09±0.09,NF-κB(A值):0.73±0.19、0.97±0.41比1.87±0.15,CX3CL1(A值):0.43±0.07、0.32±0.03比0.62±0.12,均P<0.05〕;cur组能明显抑制PI3K、Akt、ERK、NF-κB表达〔PI3K(A值):0.44±0.04比0.68±0.05, Akt(A 值):0.30±0.10 比 0.54±0.03,ERK(A 值):0.78±0.05 比 1.09±0.09,NF-κB(A 值):0.78±0.17 比1.87±0.15,均P<0.05〕.结论 人支气管上皮细胞存在LPS—ERK、NF-κB—CX3CL1信号通路,姜黄素可抑制LPS诱导人支气管上皮细胞后PI3K/Akt、ERK、NF-κB的表达.     

二氢丹参酮Ⅰ对白血病THP1细胞的增殖抑制作用及其机制探讨

目的探讨二氢丹参酮I对白血病THP1细胞的增殖抑制作用,并探讨其作用机制。方法将不同浓度的二氢丹参酮Ⅰ与THP1细胞共孵24、48及72 h,分别采用CCK8法、Annexin V/PI双染法检测其对THP1细胞的增殖抑制与促凋亡作用;采用Western blot法检测NF-κB、MAPK及PI3K细胞信号通路的蛋白表达。结果二氢丹参酮I与THP1细胞共孵24、48及72 h,其IC50值分别为6.2、4.3及4.1μmol/L。浓度为5μmol/L的二氢丹参酮Ⅰ与THP1细胞共孵24 h后,G0/G1期细胞比率均显著增加(P0.01)。二氢丹参酮Ⅰ可使NF-κB、PI3K信号通路的蛋白表达下调,对MAPK信号通路的蛋白表达无显著影响。结论二氢丹参酮Ⅰ对THP1细胞具有增殖抑制作用并呈浓度及时间依赖性,其通过阻滞THP1细胞周期而促凋亡;其发挥抗肿瘤作用的机制可能与抑制NF-κB、PI3K细胞信号通路的蛋白表达有关。     

轮状病毒感染合并惊厥患儿外周血核转录因子-κB及相关炎性因子表达

目的探讨轮状病毒感染合并惊厥患儿外周血核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、外周血白细胞介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和IL-1β表达情况及其临床意义。方法 104例轮状病毒感染合并惊厥患儿为观察组,32例轮状病毒感染无惊厥患儿为对照组,2组采用Western blot法检测外周血白细胞NF-κB P65蛋白表达水平,采用反转录-PCR法检测IL-6、TNF-α和IL-1βmRNA表达水平,采用ELISA法检测血清IL-6、TNF-α和IL-1β水平。结果观察组患儿外周血白细胞IL-6mRNA(8.06±1.25)、TNF-αmRNA(12.13±3.73)、IL-1βmRNA(3.97±1.35)及白细胞细胞核NF-κB P65表达水平(1.21±0.42)明显高于对照组(1.15±0.65、2.64±1.06、0.93±0.34、0.41±0.13)(P0.05),白细胞细胞质NF-κB P65蛋白表达水平(0.25±0.10)明显低于对照组(1.87±0.32)(P0.05);观察组患儿血清IL-6[(228.31±54.40)μg/L]、TNF-α[(236.14±36.78)μg/L]和IL-1β[(618.17±30.42)μg/L]水平明显高于对照组[(69.12±12.15)、(57.87±15.43)、(148.14±29.04)μg/L](P0.05)。结论轮状病毒感染合并惊厥可诱发患儿外周血白细胞胞质内NF-κB P65核转位及IL-6、TNF-α和IL-1β等炎性因子表达,对判断病情进展、指导临床治疗有一定意义。     

NF-κB抑制剂PDTC对急性白血病细胞HL-60增殖与凋亡的影响

目的:探讨核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)对急性白血病细胞HL-60增殖与凋亡的影响。方法:用PDTC 0、25、50、100μmol/L处理HL-60细胞24、48、72 h,CCK-8实验检测细胞增殖抑制率,Hoechst染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、细胞周期蛋白D1 (cyclinD1)、活化型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (cleaved caspase 3)、cleaved caspase 8及NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:25、50、100μmol/L PDTC处理HL-60细胞24、48、72 h后,同一时间点下随着PDTC浓度升高,细胞增殖抑制率越高(r=0.924,P 0.01),在同一PDTC浓度下,随着时间推移,细胞增殖抑制率增高(r=0.952,P 0.01)。在25、50、100μmol/L PDTC处理HL-60细胞48 h后,与对照组比较,PDTC能显著提高HL-60细胞凋亡率,并使细胞周期阻滞在G1期(P 0.01); PDTC能显著下调HL-60细胞BCL-2,cyclinD1、p-NF-κB p65表达(P 0.05),上调BAX、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 8表达(P 0.01); 50、100μmol/L PDTC能显著下调HL-60细胞p-NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)表达(P 0.01)。结论:PDTC能显著抑制急性白血病细胞HL-60的增殖,并诱导细胞凋亡。     

姜黄素对CD34~+人急性髓系白血病细胞增殖抑制作用及机制探讨

目的:探讨姜黄素对CD34+人急性髓系白血病细胞株KG1a和Kasumi-1增殖抑制作用及其机制。方法:以不同浓度姜黄素(0、20、40、80μmol/L)处理KG1a和Kasumi-1细胞48 h,采用台盼蓝染色计数法检测细胞活率,Western blot法测定姜黄素对细胞NF-κB P65核蛋白表达影响,免疫荧光检测姜黄素对细胞NF-κB P65核蛋白移位影响。结果:姜黄素可显著抑制KG1a和Kasumi-1细胞生长,随着姜黄素浓度的增加,细胞数量逐渐下降。姜黄素可下调KG1a和Kasumi-1细胞P65核蛋白表达,抑制NF-κB P65核移位,使NF-κB处于失活状态。结论:姜黄素可抑制KG1a和Kasumi-1细胞增殖,其机制可能与姜黄素抑制NF-κB P65核蛋白表达有关。     

CC16对LPS诱导人肺泡上皮细胞炎症的保护机制研究

目的：研究CC16在人肺泡上皮细胞中的抗炎作用及调节机制。方法：Western Blot及Real Time PCR检测CC16过表达和敲除以及人工重组CC16（rhCC16）对LPS诱导的炎性因子IL-1、TNF-α、IL-10表达的影响;MTT检测细胞存活率验证rhCC16对人肺泡上皮细胞的保护作用;利用RNA干扰阻断NF-κB通路后,Western Blot及Real Time PCR检测rhCC16对炎性因子IL-1、TNF-α、IL-10表达的影响。结果：内源的CC16和rhCC16均能抑制LPS诱导IL-1、TNF-α的表达,促进IL-10的表达;rhCC16可保护人肺泡上皮细胞免遭炎症反应的破坏;阻断NF-κB通路后,rhCC16的抗炎作用减弱。结论：CC16可以抑制LPS诱导的炎症反应,保护人肺泡上皮细胞免遭炎性因子的破坏。     

肠三叶因子介导PI3K/Akt信号通路保护胃黏膜上皮细胞紧密连接

目的：探讨肠三叶因子对胃黏膜上皮细胞紧密连接的保护作用,并研究PI3K/Akt信号通路在其中的作用机制。方法：体外培养GES-1细胞,分别设正常对照组,LPS组,ITF组,LPS＋ITF组,LPS＋ITF＋LY294002组,ITF＋LY294002组。正常对照组：正常培养;LPS组：加入浓度为10mg/L的LPS;ITF组：加入浓度为100μg/L的ITF;LPS＋ITF组：加入浓度为10mg/L的LPS,同时加入100μg/L的ITF;LPS＋ITF＋LY294002组：加入浓度为10mg/L的LPS、100μg/L的ITF,同时加入PI3K/Akt信号通路的抑制剂LY294002（15μM）;ITF＋LY294002组：加入100μg/L的ITF,同时加入15μM的LY294002。培养48h,采用Western blot检测ITF对PI3K/Akt信号通路的作用,采用免疫荧光和Western blot检测细胞紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的变化情况。结果：Western blot检测结果说明,与对照组相比,ITF提高了pAkt蛋白的表达水平,而LY294002抑制了ITF激活的pAkt蛋白的表达,说明ITF可以通过激活PI3K/Akt信号通路来调控GES-1细胞的生理活动。免疫荧光和Western blot结果显示LPS导致GES-1细胞的紧密连接遭到破坏,降低紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达水平,而ITF可以通过激活PI3K/Akt信号通路来保护GES-1细胞的紧密连接的完整性。结论：ITF保护胃黏膜上皮细胞紧密连接的完整性,提高紧密连接蛋白的表达水平,其发挥作用的主要分子机制是通过激活PI3K/Akt信号通路来实现的。